專利名稱：一種從發(fā)酵菌體中提取核糖核酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種從發(fā)酵菌體中提取核糖核酸的方法。
背景技術(shù)：
核糖核酸(RNA)具有末梢血管的擴張作用，有增加血色素濃度、增加紅白血球數(shù)量的作用，維持機體免疫功能、抗氧化、提高機體蛋白質(zhì)和鐵的利用率的功效，因此，RNA提取技術(shù)研究越來越受到人們的關(guān)注。發(fā)酵エ序一般會產(chǎn)生大量的發(fā)酵菌體，而從發(fā)酵菌體中提取RNA是擴大發(fā)酵副產(chǎn)值的重要部分。目前從發(fā)酵菌體中提取RNA的方法需要將含有菌體的發(fā)酵殘渣經(jīng)過洗滌、離心、 脫雜或脫苦、真空干燥等預(yù)處理工序后配成一定濃度的懸濁液然后進行提取。其中，提取的方法主要為稀堿法或濃鹽法。稀堿法是使用稀堿使發(fā)酵殘渣中的菌體細胞裂解，然后用酸中和，離心分離后的上清液用こ醇沉淀或調(diào)pH值利用等電點沉淀得到核糖核酸。這種方法提取時間長，一般需要18h左右；提取需要在110-120°C的高溫下進行，RNA在此條件下不穩(wěn)定，容易分解；因此，提取得到的核糖核酸純度低且色澤較深。濃鹽法是利用高濃度的鹽改變細胞膜的透性，使RNA釋放出來，離心分離后的上清液用こ醇沉淀或調(diào)PH值利用等電點沉淀得到核糖核酸。這種方法提取時要消耗大量的鹽，成本較高，因此通常重復(fù)利用鹽，但是，如果將鹽反復(fù)利用，對提取的核糖核酸純度影響不大，但對提取率的影響較大，會降低提取率，而影響提取的收益。此外，采用上述現(xiàn)有技術(shù)的方法在原料預(yù)處理時還會消耗大量的エ藝水，從而增加廢水的排放量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了克服采用現(xiàn)有技術(shù)的方法提取得到的RNA的提取率低、提取得到的RNA的純度低、色澤較深的缺陷，而提供ー種新的從發(fā)酵菌體中提取核糖核酸的方法。本發(fā)明的發(fā)明人在研究中意外發(fā)現(xiàn)，將含有菌體的發(fā)酵殘渣制成懸濁液后，與中性鹽溶液接觸，在一定PH值和一定溫度下浸提，可使RNA從菌體細胞中充分釋放出來，提取得到的核糖核酸的純度較高、色澤較淺，RNA的提取率較高，且耗鹽量低、條件溫和，且不需對含有菌體的發(fā)酵殘渣進行預(yù)處理，從而簡化了エ藝。因此，為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種提取核糖核酸的方法，其特征在于，所述方法包括(I)將發(fā)酵菌體制備成懸濁液；(2)將步驟(I)所得懸濁液與中性鹽溶液接觸，以對菌體中的核糖核酸進行浸堤，所述浸提的方法包括在PH值為6. 5-8. 5，溫度為70-110°C的條件下，將接觸后的混合物靜置；
(3)將步驟(2)得到的浸提產(chǎn)物進行固液分離，并將得到的上清液進行等電點沉淀，并分離得到沉淀核糖核酸。優(yōu)選地，所述方法還包括在將步驟(2)得到的浸提產(chǎn)物進行固液分離之前，將所述浸提產(chǎn)物進行酶水解，以除去浸提產(chǎn)物中的蛋白質(zhì)。優(yōu)選地，所述方法還包括對步驟(3)得到的沉淀核糖核酸進行醇洗。本發(fā)明提供的提取核糖核酸的方法，提取得到的核糖核酸的純度高、提取率高、色澤淺；省去了對含有菌體的發(fā)酵殘渣進行預(yù)處理的復(fù)雜エ序，減少了廢水的排放量，減輕了環(huán)保壓力，降低了成本；相對于濃鹽法，大大降低了鹽的用量，進ー步節(jié)省了成本。本發(fā)明方法可廣泛應(yīng)用于エ業(yè)生產(chǎn)。本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點將在隨后的具體實施方式
部分予以詳細說明。
具體實施例方式以下對本發(fā)明的具體實施方式
進行詳細說明。應(yīng)當理解的是，此處所描述的具體實施方式
僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用干限制本發(fā)明。本發(fā)明提供了ー種從發(fā)酵菌體中提取核糖核酸的方法，該方法包括(I)將發(fā)酵菌體制備成懸濁液；(2)將步驟(I)所得懸濁液與中性鹽溶液接觸，以對菌體中的核糖核酸進行浸堤，浸提的方法包括在PH值為6. 5-8. 5，溫度為70-110°C的條件下，將接觸后的混合物靜置；(3)將步驟(2)得到的浸提產(chǎn)物進行固液分離，并將得到的上清液進行等電點沉淀，分離得到沉淀核糖核酸。本發(fā)明中，所述發(fā)酵菌體可以為各種用于發(fā)酵的菌體，通常為菌體殘渣，對于固體發(fā)酵來說，例如酒精發(fā)酵，是指從發(fā)酵產(chǎn)物中蒸餾出酒精后剰余的菌體殘渣；對于液體發(fā)酵來說，例如賴氨酸發(fā)酵以及谷氨酸發(fā)酵，是指將發(fā)酵產(chǎn)物進行固液分離后所得的固相，即菌體殘渣。本發(fā)明中，對于發(fā)酵菌體無特殊要求，可以是采用本領(lǐng)域常規(guī)方法得到的菌體殘渣，例如可以是谷氨酸發(fā)酵菌體殘渣、賴氨酸發(fā)酵菌體殘渣和酒精發(fā)酵菌體殘渣中的ー種或多種，優(yōu)選酒精發(fā)酵菌體殘渣。本發(fā)明中，所述懸濁液的固含量的可選擇范圍較寬，為了更加利于RNA的提取，優(yōu)選情況下，以懸池液中的菌體計，懸池液的固含量優(yōu)選為5-15g/100mL,即以懸池液中的菌體計，將發(fā)酵菌體配制成5-15g/100mL的懸濁液；以懸濁液中的菌體計，懸濁液的固含量進ー步優(yōu)選為6-12g/100mL，即以懸濁液中的菌體計，將發(fā)酵菌體配制成6_12g/100mL的懸濁液。根據(jù)本發(fā)明，盡管懸濁液與中性鹽溶液接觸，在pH值為6. 5-8. 5，溫度為70_110°C條件下靜置，即可使菌體中的RNA釋放出來，但優(yōu)選情況下，在pH值為7-8，溫度為80-100°C的條件下，可使菌體中的RNA更容易地釋放出來，從而進一步提高RNA的提取率。本發(fā)明中，中性鹽的用量只要保證菌體中的RNA釋放出來即可，優(yōu)選情況下，相對于懸濁液中的Ig菌體，與懸濁液接觸的中性鹽的用量優(yōu)選為O. 72-1. 20g，進ー步優(yōu)選為O. 8-1. Ogo中性鹽溶液的濃度優(yōu)選為5-12重量％，進ー步優(yōu)選為6-10重量％。本發(fā)明對于中性鹽的種類無特殊要求，只要在上述pH值和溫度條件下能使菌體中的RNA釋放出來即可，例如可以為NaCl、KCl、CaCl2和MgCl2中的ー種或多種，優(yōu)選為NaCl。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，為了使懸濁液與中性鹽更好地接觸，可以采用邊攪拌邊向懸濁液中加入中性鹽溶液的方式，直至二者混合均勻。本發(fā)明中，對于靜置的時間無具體要求，只要使菌體中的RNA釋放出來即可，例如可以靜置l_4h，優(yōu)選2-3h。本發(fā)明中，將步驟(2)得到的浸提產(chǎn)物進行固液分離，對于固液分離的方法無特殊要求，可以采用本領(lǐng)域常用的固液分離方法，例如沉降、過濾、離心分離等，優(yōu)選離心分離。對于離心分離的轉(zhuǎn)速和時間無特殊要求，只要達到固液分離的目的即可，例如轉(zhuǎn)速可以為3000-4500rpm/min，優(yōu)選為 3800-4200rpm/min，時間可以為 10_30min，優(yōu)選為 15_25min。本發(fā)明中，等電點沉淀的條件包括pH值為2. 0-2. 5，溫度為0-10°C，時間為O. 25-1. Oh。進行等電點沉淀并分離得到沉淀核糖核酸，分離的方法與前文所述固液分離相 同，在此不再贅述。沉淀核糖核酸是指進行等電點沉淀得到的沉淀，由于沉淀中主要成分為核糖核酸，因此，稱為沉淀核糖核酸。采用前文所述方法，即可實現(xiàn)本發(fā)明的目的，即提取核糖核酸純度高、提取率高、色澤淺，但為了進ー步提高提取核糖核酸純度、提取率，并進一歩降低色澤，本發(fā)明方法優(yōu)選還包括在將步驟(2)得到的浸提產(chǎn)物進行固液分離之前，將浸提產(chǎn)物進行酶水解，以除去浸提產(chǎn)物中的蛋白質(zhì)。本發(fā)明中，酶水解的方法即本領(lǐng)域常用的包括在酶水解條件下將浸提產(chǎn)物與蛋白酶接觸。對于本發(fā)明中的酶水解條件，本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)過大量實驗發(fā)現(xiàn)，在包括PH值為
6.5-8. 5，溫度為30-50°C，時間為l_4h的條件下，將浸提產(chǎn)物與蛋白酶接觸，可以使浸提產(chǎn)物中的蛋白充分水解。為了使浸提產(chǎn)物中的蛋白進ー步充分水解，PH值優(yōu)選為7. 0-8. 0，溫度優(yōu)選為35-45°C，時間優(yōu)選為2-3h。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在酶水解后還應(yīng)該進行滅酶的步驟，對于滅酶的方法無特殊要求，可以采用本領(lǐng)域常規(guī)采用的方法，例如可以在 80-110°C下水浴 10-15min。本發(fā)明中，酶水解時，相對于懸濁液中的Ig菌體，蛋白酶的用量優(yōu)選為30-60U，進一歩優(yōu)選為45-55U。酶水解所采用的蛋白酶可以采用本領(lǐng)域常用的各種蛋白酶，優(yōu)選為堿性蛋白酶和/或中性蛋白酶，其中，堿性蛋白酶例如枯草桿菌堿性蛋白酶，中性蛋白酶例如枯草桿菌中性蛋白酶；進ー步優(yōu)選為中性蛋白酶。本發(fā)明中，酶活力単位的定義為在40°C，ρΗ7· 5條件下，I分鐘水解酪素產(chǎn)生Iug酪氨酸所需的酶量為ー個酶活力単位，即IU。為了進一步提高得到的核糖核酸的純度，本發(fā)明方法優(yōu)選還包括對步驟(3)得到的沉淀核糖核酸進行醇洗。對于醇洗的方法無特殊要求，可以采用本領(lǐng)域常用的各種方法，對于醇的種類和用量也無特殊要求，可以采用本領(lǐng)域常用的種類和用量，例如采用無水こ醇對沉淀核糖核酸進行醇洗，無水こ醇的用量為沉淀核糖核酸體積的2-4倍。以上詳細描述了本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，但是，本發(fā)明并不限于上述實施方式中的具體細節(jié)，在本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思范圍內(nèi)，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進行多種簡單變型，這些簡單變型均屬于本發(fā)明的保護范圍。另外需要說明的是，在上述具體實施方式
中所描述的各個具體技術(shù)特征，在不矛盾的情況下，可以通過任何合適的方式進行組合，為了避免不必要的重復(fù)，本發(fā)明對各種可能的組合方式不再另行說明。
此外，本發(fā)明的各種不同的實施方式之間也可以進行任意組合，只要其不違背本發(fā)明的思想，其同樣應(yīng)當視為本發(fā)明所公開的內(nèi)容。
實施例以下的實施例將對本發(fā)明作進ー步的說明，但并不因此限制本發(fā)明。在下述實施例和對比例中各實施例和對比例均采用同一罐批的酒精發(fā)酵殘渣(RNA含量為5重量％)。
RNA純度計算(I)純核糖核酸溶液的A260/A280比值為2，由于蛋白質(zhì)的最大吸收峰在波長280nm處，樣品中若還有蛋白質(zhì)的雜質(zhì)，則A260/A280比值要下降，因此，核糖核酸樣品的純度通?？梢杂肁260/A280比值來表示，即RNA純度％= (A260/A280)/2 X 100%。RNA的提取率提取獲得的核糖核酸的重量占發(fā)酵菌體重量的百分比。實施例I本實施例用于說明本發(fā)明提供的從發(fā)酵菌體中提取核糖核酸的方法。稱取酒精發(fā)酵菌體殘渣lOOOg，將酒精發(fā)酵菌體殘渣制備成懸濁液，以懸濁液中的菌體計，懸濁液的固含量為10g/100mL，向懸濁液中加入濃度為8重量％的NaCl溶液以對菌體中的核糖核酸進行浸提，相對于懸濁液中的Ig菌體，NaCl的加入量為0. 8g，邊加入邊攪拌直至混合均勻，浸提的條件為pH值為7.5，溫度為90で，靜置2. 5h，得到浸提產(chǎn)物。然后在PH值為7. 5下，向得到的浸提產(chǎn)物中加入枯草桿菌中性蛋白酶(購于湖北康寶泰精細化エ有限公司，型號ZC-7，酶活カ為1500000U/g，下同)，相對于懸濁液中的Ig菌體，蛋白酶的加入量為50U，在40°C下水浴2. 5h，然后升溫至90°C，水浴12min，然后以4000rpm/min離心分離20min，取上清液，用鹽酸調(diào)pH值2. 5，在5°C下靜置0. 75h進行等電點沉淀，分離得到沉淀核糖核酸，將沉淀核糖核酸用無水こ醇反復(fù)清洗2-3次，無水こ醇的體積為沉淀核糖核酸體積的3倍。清洗后測定并計算核糖核酸純度、提取率、記錄沉淀顔色，結(jié)果見表I。實施例2本實施例用于說明本發(fā)明提供的從發(fā)酵菌體中提取核糖核酸的方法。稱取酒精發(fā)酵菌體殘渣600g，將酒精發(fā)酵菌體殘渣制備成懸濁液，以懸濁液中的菌體計，懸濁液的固含量為6g/100mL，向懸濁液中加入濃度為6重量％的NaCl溶液以對菌體中的核糖核酸進行浸提，相對于懸濁液中的Ig菌體，NaCl的加入量為I. 0g，邊加入邊攪拌直至混合均勻，浸提的條件為pH值為7，溫度為80°C，靜置2h，得到浸提產(chǎn)物。然后在pH值為7下，向得到的浸提產(chǎn)物中加入枯草桿菌中性蛋白酶，相對于懸濁液中的Ig菌體，蛋白酶的加入量為45U，在35°C下水浴2h，然后升溫至80°C，水浴15min，然后以3800rpm/min離心分離25min，取上清液，用鹽酸調(diào)pH值2. 0，在0°C下靜置0. 25h進行等電點沉淀，分離得到沉淀核糖核酸，將沉淀核糖核酸用無水こ醇反復(fù)清洗2-3次，無水こ醇的體積為沉淀核糖核酸體積的2倍。清洗后測定并計算核糖核酸純度、提取率、記錄沉淀顔色，結(jié)果見表I。實施例3本實施例用于說明本發(fā)明提供的從發(fā)酵菌體中提取核糖核酸的方法。稱取酒精發(fā)酵菌體殘渣1200g，將酒精發(fā)酵菌體殘渣制備成懸濁液，以懸濁液中的菌體計，懸濁液的固含量為12g/100mL，向懸濁液中加入濃度為10重量％的NaCl溶液以對菌體中的核糖核酸進行浸提，相對于懸濁液中的Ig菌體，NaCl的加入量為0. 9g，邊加入邊攪拌直至混合均勻，浸提的條件為pH值為8，溫度為100°C，靜置3h，得到浸提產(chǎn)物。然后在pH值為8下，向得到的浸提產(chǎn)物中加入枯草桿菌中性蛋白酶，相對于懸濁液中的Ig菌體，蛋白酶的加入量為55U，在45°C下水浴3h，然后升溫至110°C，水浴lOmin，然后以4200rpm/min離心分離15min，取上清液，用鹽酸調(diào)pH值2. 5，在10°C下靜置Ih進行等電點沉淀，分離得到沉淀核糖核酸，將沉淀核糖核酸用無水こ醇反復(fù)清洗2-3次，無水こ醇的體積為沉淀物體積的4倍。清洗后測定并計算核糖核酸純度、提取率、記錄沉淀顔色，結(jié)果見表I。實施例4按照實施例I的方法提取核糖核酸，不同的是，以懸濁液中的菌體計，懸濁液的固含量為15g/100mL。清洗后測定并計算核糖核酸純度、提取率、記錄沉淀顔色，結(jié)果見表I。實施例5按照實施例I的方法提取核糖核酸，不同的是，相對于懸濁液中的Ig菌體，NaCl的加入量為I. 2。清洗后測定并計算核糖核酸純度、提取率、記錄沉淀顔色，結(jié)果見表I。 實施例6按照實施例I的方法提取核糖核酸，不同的是，浸提的pH值為6. 5。清洗后測定并計算核糖核酸純度、提取率、記錄沉淀顔色，結(jié)果見表I。實施例7按照實施例I的方法提取核糖核酸，不同的是，浸提的溫度為70°C。清洗后測定并計算核糖核酸純度、提取率、記錄沉淀顔色，結(jié)果見表I。實施例8按照實施例I的方法提取核糖核酸，不同的是，浸提靜置的時間為lh。清洗后測定并計算核糖核酸純度、提取率、記錄沉淀顔色，結(jié)果見表I。實施例9按照實施例I的方法提取核糖核酸，不同的是，相對于懸濁液中的Ig菌體，蛋白酶的用量為30U。清洗后測定并計算核糖核酸純度、提取率、記錄沉淀顔色，結(jié)果見表I。實施例10按照實施例I的方法提取核糖核酸，不同的是，酶水解的溫度為40°C。清洗后測定并計算核糖核酸純度、提取率、記錄沉淀顔色，結(jié)果見表I。實施例11按照實施例I的方法提取核糖核酸，不同的是，酶水解的時間為lh。清洗后測定并計算核糖核酸純度、提取率、記錄沉淀顔色，結(jié)果見表I。實施例12按照實施例I的方法提取核糖核酸，不同的是，不進行酶水解的步驟。清洗后測定并計算核糖核酸純度、提取率、記錄沉淀顔色，結(jié)果見表I。實施例13按照實施例I的方法提取核糖核酸，不同的是，進行酒精發(fā)酵菌體殘渣的預(yù)處理エ序?qū)OOOg的酒精發(fā)酵菌體殘渣用膠帶機洗水2-3次，水的用量為2L，洗后過篩除雜，再以3500rpm/min離心分離IOmin沉淀發(fā)酵菌體,取沉淀加入O. lmol/L碳酸氫鈉溶液4L,攪拌均勻，離心后再用膠帶機洗水2-3次，水的用量為2L，然后在105°C下真空干燥至恒重，得到干發(fā)酵菌體。
將干發(fā)酵菌體制備成懸濁液，以懸濁液中的菌體計，懸濁液的固含量為10g/100mL。清洗后測定并計算核糖核酸純度、提取率、記錄沉淀顔色，結(jié)果見表I。對比例I本對比例為稀堿法提取核糖核酸。將IOOOg的酒精發(fā)酵菌體殘渣用膠帶機洗水2-3次，水的用量為2L，洗后過篩除雜，再以3500rpm/min離心分離IOmin沉淀發(fā)酵菌體,取沉淀加入O. lmol/L碳酸氫鈉溶液4L，攪拌均勻，離心后再用膠帶機洗水2-3次，水的用量為2L，然后在105°C下真空干燥至恒重，得到干發(fā)酵菌體。將干發(fā)酵菌體制備成懸濁液，以懸濁液中的菌體計，懸濁液的固含量為10g/100mL，調(diào)節(jié)懸濁液的pH值為9. O后迅速升溫至120°C，然后迅速降溫至37°C并保溫18h，然后以4000rpm/min離心分離20min，取上清液，用鹽酸調(diào)pH值2. 5，在5 °C下靜置 0. 75h進行等電點沉淀，分離得到沉淀核糖核酸，將沉淀核糖核酸用無水こ醇反復(fù)清洗2-3 次，無水こ醇的體積為沉淀體積的3倍，清洗后測定并計算核糖核酸純度、提取率、記錄沉淀顔色，結(jié)果見表I。對比例2本對比例為濃鹽法提取核糖核酸。將IOOOg的酒精發(fā)酵菌體殘渣用膠帶機洗水2-3次，水的用量為2L，洗后過篩除雜，再以3500rpm/min離心分離IOmin沉淀發(fā)酵菌體,取沉淀加入0. lmol/L碳酸氫鈉溶液4L，攪拌均勻，離心后再用膠帶機洗水2-3次，水的用量為2L，然后在105°C下真空干燥至恒重，得到干發(fā)酵菌體。將干發(fā)酵菌體制備成懸濁液，以懸濁液中的菌體計，懸濁液的固含量為10g/100mL,向懸濁液中加入濃度為8重量％的NaCl溶液以對菌體中的核糖核酸進行浸提，相對于懸濁液中的Ig菌體，NaCl的加入量為2. 5g，邊加入邊攪拌直至混合均勻，然后調(diào)pH值為4. 5并迅速升溫至110°C保溫2. 5h,然后迅速冷卻至10°C,然后以4000rpm/min離心分離20min，取上清液，用鹽酸調(diào)pH值2. 5，在5°C下靜置0. 75h進行等電點沉淀，分離得到沉淀核糖核酸，將沉淀核糖核酸用無水こ醇反復(fù)清洗2-3次，無水こ醇的體積為沉淀核糖核酸體積的3倍。清洗后測定并計算核糖核酸純度、提取率、記錄沉淀顔色，結(jié)果見表I。表I
權(quán)利要求
1.一種從發(fā)酵菌體中提取核糖核酸的方法，其特征在于，所述方法包括 (1)將發(fā)酵菌體制備成懸濁液； (2)將步驟(I)所得懸濁液與中性鹽溶液接觸，以對菌體中的核糖核酸進行浸提，所述浸提的方法包括在PH值為6. 5-8. 5，溫度為70-110°C的條件下，將接觸后的混合物靜置； (3)將步驟(2)得到的浸提產(chǎn)物進行固液分離，并將得到的上清液進行等電點沉淀，分離得到沉淀核糖核酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中，步驟(I)中，以所述懸濁液中的菌體計，將所述發(fā)酵菌體配制成5-15g/100mL的懸池液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中，步驟(I)中，以所述懸濁液中的菌體計，將所述發(fā)酵菌體配制成6-12g/100mL的懸池液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項所述的方法，其中，所述發(fā)酵菌體選自谷氨酸發(fā)酵菌體殘渣、賴氨酸發(fā)酵菌體殘渣和酒精發(fā)酵菌體殘渣中的一種或多種。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中，步驟(2)中，相對于懸濁液中的Ig菌體，所述中性鹽的用量為O. 72-1. 2g ;所述中性鹽溶液的濃度為5-12重量％ ;所述中性鹽選自NaCl、KCl、CaCl2和MgCl2中的一種或多種。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中，步驟(2)中，浸提的條件包括pH值為7-8，溫度為80-100°C，靜置時間為l_4h。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中，步驟(3)中等電點沉淀的條件包括pH值為2.0-2. 5，溫度為 0-10°C，時間為 O. 25-1. Oh。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任意一項所述的方法，其中，所述方法還包括在將步驟(2)得到的浸提產(chǎn)物進行固液分離之前，將所述浸提產(chǎn)物進行酶水解，以除去浸提產(chǎn)物中的蛋白質(zhì)。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述酶水解的方法包括在酶水解條件下將浸提產(chǎn)物與蛋白酶接觸，所述酶水解條件包括PH值為6. 5-8. 5，溫度為30-50°C，時間為l_4h。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中，所述酶水解條件包括pH值為7.0-8.0，溫度為35-45°C，時間為 2-3h。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中，相對于懸濁液中的Ig菌體，蛋白酶的用量為30-60U。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中，相對于懸濁液中的Ig菌體，蛋白酶的用量為45-55U。
13.根據(jù)權(quán)利要求9-12中任意一項所述的方法，其中，所述蛋白酶為堿性蛋白酶和/或中性蛋白酶；所述堿性蛋白酶為枯草桿菌堿性蛋白酶，所述中性蛋白酶為枯草桿菌中性蛋白酶。
14.根據(jù)權(quán)利要求1-13中任意一項所述的方法，其中，所述方法還包括對步驟(3)得到的沉淀核糖核酸進行醇洗。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中，采用無水乙醇對沉淀核糖核酸進行醇洗，所述無水乙醇的用量為沉淀核糖核酸體積的2-4倍。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種提取核糖核酸的方法，該方法包括(1)將發(fā)酵菌體制備成懸濁液；(2)將步驟(1)所得懸濁液與中性鹽溶液接觸，以對菌體中的核糖核酸進行浸提，所述浸提的方法包括在pH值為6.5-8.5，溫度為70-110℃條件下，將接觸后的混合物靜置；(3)將步驟(2)得到的浸提產(chǎn)物進行固液分離，并將得到的上清液進行等電點沉淀，分離得到沉淀核糖核酸。本發(fā)明提供的提取核糖核酸的方法，得到的核糖核酸的純度高、提取率高、色澤淺；可以省去預(yù)處理工序，減少了廢水的排放量，減輕了環(huán)保壓力，降低了成本；相對于濃鹽法，大大降低了鹽的用量，進一步節(jié)省了成本。本發(fā)明的方法可廣泛應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)。
文檔編號C07H1/06GK102732509SQ201210250088
公開日2012年10月17日 申請日期2012年7月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月19日
發(fā)明者周勇, 徐麗紅, 熊結(jié)青, 榮玉鳳, 陳影 申請人:中糧生物化學(xué)(安徽)股份有限公司