專利名稱：高純度核糖核酸的制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種エ業(yè)化生產(chǎn)核糖核酸的方法，特別涉及一種高純度核糖核酸的制備エ藝。
背景技術(shù)：
核糖核酸是酶解法生產(chǎn)5' —核苷酸的重要エ業(yè)原料，近年來(lái)ー些研究表明，核糖核酸及其降解物之核苷酸主要生理功能是廣泛參與人體的能量代謝、蛋白質(zhì)合成，具有提高各種酶的活性、活化細(xì)胞功能、促進(jìn)抗體形成、增強(qiáng)免疫功能的作用。對(duì)嬰幼兒來(lái)說(shuō)，核酸及核苷酸可促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育，是與“神經(jīng)生長(zhǎng)因子”或且可以作為神經(jīng)生長(zhǎng)物質(zhì)利用的營(yíng)養(yǎng)成分，促進(jìn)鐵質(zhì)吸收及影響脂質(zhì)代謝，改變腸道菌·叢及提供腸道粘膜完整所需的營(yíng)養(yǎng)，達(dá)到提升免疫功能的效果。根據(jù)有關(guān)規(guī)定，嬰幼兒奶粉中添加的核苷酸必須是由核糖核酸經(jīng)酶解法生產(chǎn)得到的。核苷酸廣泛應(yīng)用于食品及調(diào)味品作為添加剤、以及藥品、化妝品等，而高純度的核糖核酸對(duì)酶解法生產(chǎn)核苷酸的有關(guān)鍵性的影響，高純度核糖核酸的需求量巨大。從微生物菌體中提取核糖核酸是經(jīng)濟(jì)安全的，提取方法有多種，如濃鹽提取法、稀堿提取法、苯酚法、十二烷基磺酸法、細(xì)胞破碎均質(zhì)法等等。目前エ業(yè)化生產(chǎn)通常采用濃鹽法和稀堿法。濃鹽法存在廢水含鹽份過(guò)高，產(chǎn)生的廢水難以處理，環(huán)境污染嚴(yán)重；稀堿法提取的核糖核酸提取液里存在著大量的糖類、肽類雜質(zhì)，難以分離，產(chǎn)品純度低；而其它方法則成本太高?，F(xiàn)有的化學(xué)方法提取方法，制備得到的核糖核酸的純度普遍不高，一般在80%左右，核糖核酸的總提取率一般不超過(guò)50%，在提取、純化的過(guò)程中會(huì)損失大量的核糖核酸。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種高純度核糖核酸的制備エ藝。本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是
一種核糖核酸的制備エ藝，包括如下步驟
1)在酵母漿料中加入堿液，使酵母破壁，得到破壁酵母液；
2)將破壁酵母液離心，得到核糖核酸粗溶液；
3)在核糖核酸粗溶液中加入復(fù)合酶，進(jìn)行酶解，將酶解液過(guò)濾，取濾液；
4)調(diào)節(jié)濾液的pH使核糖核酸析出，收集析出的核糖核酸并洗滌，干燥，得到高純度核糖核酸；
其中，復(fù)合酶由1000 10000U的￠-葡聚糖酶、5000 20000U的淀粉酶和50000 200000U的蛋白酶配合而成。優(yōu)選的，加入堿液使酵母漿料的pH為10. 5 11. 5，使酵母破壁。優(yōu)選的，加入堿液后，在15 45°C下進(jìn)行破壁處理；在酵母破壁后，中和其中殘留的堿液，得到破壁酵母液。
優(yōu)選的，蛋白酶為木瓜蛋白酶。優(yōu)選的，進(jìn)行酶解處理的時(shí)候，在核糖核酸粗溶液中加入螯合劑；螯合劑優(yōu)選為EDTA-Na2。優(yōu)選的，螯合劑的加入量為每升核糖核酸粗溶液中加入I 5g。酶解的溫度為21 57°C，優(yōu)選為37 50で。本發(fā)明的有益效果是
本發(fā)明エ藝，制備得到的核糖核酸純度可達(dá)90%以上，與現(xiàn)有的通用方法相比，其純度提高了近10個(gè)百分點(diǎn)；
本發(fā)明エ藝，核糖核酸的總收率可高達(dá)60%，提取效率大大提高；·
本發(fā)明エ藝，提取條件較為溫和，能耗低，基本不會(huì)產(chǎn)生難以處理的廢棄物，對(duì)環(huán)境的污染基本沒(méi)有，或極少對(duì)環(huán)境造成污染。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)ー步說(shuō)明本發(fā)明。實(shí)施例I
1)在固含量為10%的酵母漿中加入Na2CO3溶液，調(diào)節(jié)酵母漿的pH為10.8，20°C抽取破壁2. 5小時(shí)，加入鹽酸中和剩余的堿，得到破壁酵母液；
2)將破壁酵母液離心，去除菌體，得到核糖核酸粗溶液；
3)在核糖核酸粗溶液加入復(fù)合酶，使各酶的終濃度分別為P—葡聚糖酶1000U/し淀粉酶5000U/L、木瓜蛋白酶50000U/L，同時(shí)每升溶液中加入螯合劑EDTA-Na2 Ig,在420C ± I°C，反應(yīng)3小時(shí)，冷卻至10°C，硅藻土過(guò)濾，收集濾液；
4)調(diào)節(jié)濾液的pH使核糖核酸析出，收集析出的核糖核酸,用95%(v/v)的こ醇洗漆，干燥得到高純度核糖核酸粉末。將檢測(cè)計(jì)算，得到的核糖核酸粉末純度為91. 3%，核糖核酸的總收率為63. 5%。實(shí)施例2
1)在固含量為10%的酵母漿中加入Na2CO3溶液，調(diào)節(jié)酵母漿的pH為10.5，15°C抽取破壁3小時(shí)，加入鹽酸中和剰余的堿，得到破壁酵母液；
2)將破壁酵母液離心，去除菌體，得到核糖核酸粗溶液；
3)在核糖核酸粗溶液加入復(fù)合酶，使各酶的終濃度分別為d—葡聚糖酶4000U/し淀粉酶10000U/L木瓜蛋白酶100000U/L，同時(shí)每升溶液中加入螯合劑EDTA-Na2 lg，在370C ± I°C，反應(yīng)2. 5小時(shí)，冷卻至10°C，硅藻土過(guò)濾，收集濾液；
4)調(diào)節(jié)濾液的pH使核糖核酸析出，收集析出的核糖核酸,用95%(v/v)的こ醇洗漆，干燥得到高純度核糖核酸粉末。將檢測(cè)計(jì)算，得到的核糖核酸粉末純度為91. 5%，核糖核酸的總收率為62. 3%。實(shí)施例3
1)在固含量為10%的酵母漿中加入Na2CO3溶液，調(diào)節(jié)酵母漿的pH為11，30°C抽取破壁2. 5小時(shí)，加入鹽酸中和剰余的堿，得到破壁酵母液；
2)將破壁酵母液離心，去除菌體，得到核糖核酸粗溶液；
3)在核糖核酸粗溶液加入復(fù)合酶，使各酶的終濃度分別為P—葡聚糖酶7000U/し淀粉酶15000U/L、木瓜蛋白酶130000U/L，同時(shí)每升溶液中加入螯合劑EDTA-Na2 lg，在470C ± I°C，反應(yīng)2小時(shí)，冷卻至10°C，硅藻土過(guò)濾，收集濾液；
4)調(diào)節(jié)濾液的pH使核糖核酸析出，收集析出的核糖核酸,用95% (v/v)的こ醇洗漆，干燥得到高純度核糖核酸粉末。將檢測(cè)計(jì)算，得到的核糖核酸粉末純度為91. 6%，核糖核酸的總收率為61. 2%。實(shí)施例4
1)在固含量為10%的酵母漿中加入Na2CO3溶液，調(diào)節(jié)酵母漿的pH為11.5，40°C抽取破壁2小時(shí)，加入鹽酸中和剰余的堿，得到破壁酵母液；
2)將破壁酵母液離心，去除菌體，得到核糖核酸粗溶液；
3)在核糖核酸粗溶液加入復(fù)合酶，使各酶的終濃度分別為P —葡聚糖酶10000U/·し淀粉酶15000U/L、木瓜蛋白酶150000U/L，同時(shí)每升溶液中加入螯合劑EDTA-Na2 3g，在420C ±1°C，反應(yīng)I. 5小時(shí)，冷卻至10°C，硅藻土過(guò)濾，收集濾液；
4)調(diào)節(jié)濾液的pH使核糖核酸析出，收集析出的核糖核酸,用95%(v/v)的こ醇洗漆，干燥得到高純度核糖核酸粉末。將檢測(cè)計(jì)算，得到的核糖核酸粉末純度為91. 9%，核糖核酸的總收率為60. 8%。實(shí)施例5
1)在固含量為10%的酵母漿中加入Na2CO3溶液，調(diào)節(jié)酵母漿的pH為11.2，45°C抽取破壁I. 5小時(shí)，加入鹽酸中和剩余的堿，得到破壁酵母液；
2)將破壁酵母液離心，去除菌體，得到核糖核酸粗溶液；
3)在核糖核酸粗溶液加入復(fù)合酶，使各酶的終濃度分別為P —葡聚糖酶10000U/し淀粉酶20000U/L、木瓜蛋白酶200000U/L，同時(shí)每升溶液中加入螯合劑EDTA-Na2 5g，在500C ±1°C，反應(yīng)I小時(shí)，冷卻至10°C，硅藻土過(guò)濾，收集濾液；
4)調(diào)節(jié)濾液的pH使核糖核酸析出，收集析出的核糖核酸,用95%(v/v)的こ醇洗漆，干燥得到高純度核糖核酸粉末。將檢測(cè)計(jì)算，得到的核糖核酸粉末純度為92. 3%，核糖核酸的總收率為60. 4%。
權(quán)利要求
1.一種核糖核酸的制備エ藝，包括如下步驟 1)在酵母漿料中加入堿液，使酵母破壁，得到破壁酵母液； 2)將破壁酵母液離心，得到核糖核酸粗溶液； 3)在核糖核酸粗溶液中加入復(fù)合酶，進(jìn)行酶解，將酶解液過(guò)濾，取濾液； 4)調(diào)節(jié)濾液的pH使核糖核酸析出，收集析出的核糖核酸并洗滌，干燥，得到高純度核糖核酸； 其中，復(fù)合酶由1000 10000U的￠-葡聚糖酶、5000 20000U的淀粉酶和50000 .200000U的蛋白酶配合而成。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的エ藝，其特征在于加入堿液使酵母漿料的PH為10.5 .11. 5，使酵母破壁。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的エ藝，其特征在于加入堿液后，在15 45°C下進(jìn)行破壁處理。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的エ藝，其特征在于在酵母破壁后，中和其中殘留的堿液，得到破壁酵母液。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的エ藝，其特征在于蛋白酶為木瓜蛋白酶。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的エ藝，其特征在于進(jìn)行酶解處理的時(shí)候，在核糖核酸粗溶液中加入螯合剤。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的エ藝，其特征在于螯合劑為EDTA-Na2。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的エ藝，其特征在于螯合劑的加入量為每升核糖核酸粗溶液中加入I 5g。
9.根據(jù)權(quán)利要求I或6所述的エ藝，其特征在于酶解的溫度為21 57°C。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的エ藝，其特征在干酶解的溫度為37 50で。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種高純度核糖核酸的制備工藝，通過(guò)在酵母漿料中加入堿液，使酵母破壁，然后離心得到核糖核酸粗溶液，加入復(fù)合酶進(jìn)行酶解后，將酶解液過(guò)濾，調(diào)節(jié)濾液的pH使核糖核酸析出，洗滌、干燥，得到高純度核糖核酸。本發(fā)明工藝制備的核糖核酸純度可達(dá)90%以上，與現(xiàn)有的方法相比，其純度提高了近10個(gè)百分點(diǎn)；核糖核酸的總收率可高達(dá)60%，提取效率大大提高；且提取條件較為溫和，能耗低，基本不會(huì)產(chǎn)生難以處理的廢棄物，對(duì)環(huán)境的污染基本沒(méi)有，或極少對(duì)環(huán)境造成污染。
文檔編號(hào)C07H21/02GK102838646SQ201210293970
公開(kāi)日2012年12月26日 申請(qǐng)日期2012年8月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月17日
發(fā)明者聶振泰, 盧超凡 申請(qǐng)人:江門(mén)市天成生物科技有限公司