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一種基于代謝參數(shù)our補糖發(fā)酵生產(chǎn)阿維菌素工藝的制作方法

文檔序號:574108閱讀:335來源:國知局

專利名稱::一種基于代謝參數(shù)our補糖發(fā)酵生產(chǎn)阿維菌素工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
:本發(fā)明屬于生物發(fā)酵
技術(shù)領(lǐng)域
,具體涉及一種基于代謝參數(shù)OUR補糖發(fā)酵生產(chǎn)阿維菌素工藝。
背景技術(shù)
:阿維菌素是一種神經(jīng)毒劑,其機理是作用于昆蟲神經(jīng)元突觸或神經(jīng)肌肉突觸的GABA受體,干擾昆蟲體內(nèi)神經(jīng)末梢的信息傳遞,即激發(fā)神經(jīng)末梢放出神經(jīng)傳遞抑制劑Y-氨基丁酸(GABA),促使GABA門控的氯離子通道延長開放,對氯離子通道具有激活作用,大量氯離子涌入造成神經(jīng)膜電位超級化,致使神經(jīng)膜處于抑制狀態(tài),從而阻斷神經(jīng)末梢與肌肉的聯(lián)系,使昆蟲麻痹、拒食、死亡。因其作用機制獨特,所以與常用的藥劑無交互抗性。除GABA受體控制的氯化物通道外,阿維菌素還能影響其他配位體控制的氯化物通道,如依維菌素(阿維菌素衍生物)可以誘導(dǎo)無GABA神經(jīng)支配的蝗蟲肌纖維的膜傳導(dǎo)的不可逆增加。阿維鏈霉菌在發(fā)酵過程中隨著代謝的進行,營養(yǎng)物質(zhì)不斷消耗,各種副產(chǎn)物逐漸積累。在發(fā)酵中后期,由于供給菌體的營養(yǎng)物質(zhì)不斷減少,最終表現(xiàn)效價增長緩慢,菌體代謝差,OUR(攝氧率)和CER(C02稀釋率)都有不同程度的下降趨勢。從菌形上看主要表現(xiàn)菌團松散老化、并出現(xiàn)空泡和自溶等現(xiàn)象。在生化指標上,主要表現(xiàn)可利用的還原糖低(小于1%),氨基氮含量升高,pH回升等特點。產(chǎn)生這些現(xiàn)象最為重要的一個原因就是由于供給菌體代謝的能源不足導(dǎo)致。因此,要提高阿維菌素的發(fā)酵水平,現(xiàn)有技術(shù)主要通過補糖。進行補糖目的主要是(1)補糖可增加菌體代謝活力(0UR、CER表現(xiàn)明顯增加),延遲菌體衰老,延長發(fā)酵周期,提高了生產(chǎn)階段的利用率,即有效生產(chǎn)期增加。(2)補糖可適當維持或增加發(fā)酵體積從而增加發(fā)酵總億。(3)補糖工藝優(yōu)化后可提高同期效價,更能直接提高生產(chǎn)水平。(4)補糖可優(yōu)化生產(chǎn)工藝以降低單位總億成本。目前阿維菌素發(fā)酵采取補糖的工藝方法報道并不多,這些方法雖然在一定程度上對提升阿維菌素的效價有積極的影響。然而,目前因生產(chǎn)原料價格的上漲,使得生產(chǎn)阿維菌素的成本居高不下,勢必再次影響生產(chǎn)阿維菌素的積極性。補料實驗過程中,需要根據(jù)發(fā)酵過程指標來確定補料的速率和用量,若反饋指標不明顯或根據(jù)補料時間和速率與菌體發(fā)生沖突,將給發(fā)酵結(jié)果帶來嚴重的不利后果。
發(fā)明內(nèi)容針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題,本發(fā)明通過在阿維鏈霉菌發(fā)酵過程中基于代謝參數(shù)OUR的值來進行補糖操作,設(shè)計提供一種提高阿維菌素效價的發(fā)酵的技術(shù)方案。所述的一種基于代謝參數(shù)OUR補糖發(fā)酵生產(chǎn)阿維菌素工藝,.其特征在于包括以下工藝步驟(1)將除蟲鏈霉菌移種至250ml搖瓶中進行一級種子培養(yǎng);(2)將步驟(1)得到的種子液移種至15L種子罐中進行二級種子培養(yǎng);(3)將步驟(2)得到的種子液移種至50L發(fā)酵罐進行發(fā)酵培養(yǎng),發(fā)酵過程中實時測定發(fā)酵尾氣OUR值,根據(jù)OUR值變化進行補糖操作。所述的一種基于代謝參數(shù)OUR補糖發(fā)酵生產(chǎn)阿維菌素工藝,其特征在于步驟(1)中一級種子培養(yǎng)條件為在溫度28"C,搖床轉(zhuǎn)速250轉(zhuǎn)/分鐘下,培養(yǎng)30-40小時,搖瓶中的一級種子培養(yǎng)基含有:玉米淀粉28-32g/L、玉米漿3-7g/L、酵母膏13-17g/L、KH2P042-6g/L和蒸餾水,并調(diào)PH為7.0-7.2,優(yōu)選為玉米淀粉29-31g/L、玉米漿4-6g/L、酵母膏14-16g/L、KH2P043_5g/L和蒸餾水。所述的一種基于代謝參數(shù)OUR補糖發(fā)酵生產(chǎn)阿維菌素工藝,其特征在于步驟(2)中二級種子培養(yǎng)條件為在溫度28°C,轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)/分鐘,壓力0.05MPa,通風比為0.5vvm下,培養(yǎng)36-48小時,種子罐中二級種子培養(yǎng)基含有玉米淀粉28-32g/L、玉米漿3-7g/L、酵母膏13-17g/L、KH2P042-6g/L和蒸餾水,并調(diào)PH為7.0-7.2,優(yōu)選為玉米淀粉29-31g/L、玉米漿4-6g/L、酵母膏14-16g/L、KH2P043-5g/L和蒸餾水。所述的一種基于代謝參數(shù)OUR補糖發(fā)酵生產(chǎn)阿維菌素工藝,其特征在于步驟(3)中發(fā)酵培養(yǎng)條件為在溫度28。C下,培養(yǎng)13天,發(fā)酵罐中發(fā)酵培養(yǎng)基含有玉米淀粉110-130g/L、酵母粉13-17g/L、豆粕粉3-7g/L、花生餅粉3-7g/L、KH2P043-7g/L和蒸餾水,并調(diào)pH為7.0-7.2,優(yōu)選為玉米淀粉115-125g/L、酵母粉14-16g/L、豆粕粉4-6g/L、花生餅粉4-6g/L、KH2P044-6g/L和蒸餾水。所述的一種基于代謝參數(shù)OUR補糖發(fā)酵生產(chǎn)阿維菌素工藝,其特征在于步驟(3)中采用流加補糖方式進行補糖操作。所述的一種基于代謝參數(shù)OUR補糖發(fā)酵生產(chǎn)阿維菌素工藝,其特征在于步驟(3)中發(fā)酵130-150小時后,即OUR值開始出現(xiàn)下降時,開始進行補糖操作,補糖操作采用重量濃度為15-45%的葡萄糖溶液,補糖速度為7-27ml/h,使OUR值控制在9-14mmol/Lh。所述的一種基于代謝參數(shù)OUR補糖發(fā)酵生產(chǎn)阿維菌素工藝,其特征在于步6驟(3)中發(fā)酵144小時后進行補糖操作,補糖采用濃度為20-40%的葡萄糖溶液,在發(fā)酵144-168小時,補糖速度為7-13ml/h,169-193小時,補糖速度為10-17ml/h,194-218小時,補糖速度為10-30ml/h,219-243小時,補糖速度為7-27ml/h,使OUR值控制在10-13鵬ol/Lh。所述的一種基于代謝參數(shù)OUR補糖發(fā)酵生產(chǎn)阿維菌素工藝,其特征在于在發(fā)酵144-168小時,補糖速度為8-12ml/h,169-193小時,補糖速度為10-16ml/h,194-218小時,補糖速度為12-30ml/h,219-243小時,補糖速度為8-24ml/h。本發(fā)明的一種基于代謝參數(shù)OUR補糖發(fā)酵生產(chǎn)阿維菌素工藝,設(shè)計合理,降低了生產(chǎn)成本,在發(fā)酵過程中有效的延緩了菌體的衰老,提高阿維菌素的效價20%左右,從而有效的利用原料獲得高產(chǎn)。圖l50L發(fā)酵過程總糖、還原糖等發(fā)酵過程參數(shù)的變化規(guī)律;圖2補糖速率與菌體衰老程度及阿維菌素效價之間的關(guān)系圖;圖3三種補糖方式補糖操作比較;圖4常規(guī)發(fā)酵過程中的OUR參數(shù)變化規(guī)律;圖5以O(shè)UR為依據(jù)發(fā)酵補糖過程中與不補糖的批次進行了比較圖;圖6以O(shè)UR為補糖策略在2噸中試罐上的發(fā)酵放大驗證結(jié)果。具體實施例方式以下通過實施例與實驗例來進一步說明本發(fā)明,發(fā)明中種子罐及發(fā)酵罐由上海國強生化工程裝備有限公司生產(chǎn),尾氣分析儀為PS6000型生物尾氣分析系統(tǒng)分析〔重慶哈特曼測量儀器有限公司),發(fā)明中OUR為菌體攝氧率,CER為二氧化碳(C02)釋放率,RQ為呼吸商,RQ=CER/0UR。配制斜面培養(yǎng)基酵母膏0.1%、麥芽糖O.1%、胰蛋白胨0.2%、瓊脂粉2%、葡萄糖2%、余量為蒸餾水,并調(diào)pH至7.2,并進行滅菌。-配制種子培養(yǎng)基(包括一級和二級種子培養(yǎng)基)玉米淀粉28g/L、玉米漿3g/L、酵母膏13g/L、KH2P042g/L,用蒸餾水配置,并調(diào)PH為7.0,并進行滅菌,優(yōu)選為.'玉米淀粉^g/L、玉米漿5g/L、酵母膏l(xiāng)Sg/L、KH2P044g/L,用蒸餾水配置,并調(diào)PH為7.1,并進行滅菌。配制發(fā)酵培養(yǎng)基玉米淀粉110g/L、酵母粉13g/L、豆粕粉3g/L、花生餅粉3g/L、KH2P043g/L,用蒸餾水配置,并調(diào)PH為7.0,并進行滅菌,優(yōu)選為玉米淀粉120g/L、酵母粉15g/L、豆粕粉5g/L、花生餅粉5g/L、KH2P045g/L,用蒸餾水配置,并調(diào)PH為7.1。實施例1:(1)用接種針刮取斜面培養(yǎng)基上的除蟲鏈霉菌菌苔,接種到搖瓶種子培養(yǎng)基(一級種子培養(yǎng)基),在溫度28"C、搖床轉(zhuǎn)速250r/min條件下培養(yǎng)35小時;(2)步驟(1)得到的種子液移種至二級種子培養(yǎng)基(15L罐,滅菌后大概8升種子培養(yǎng)基),接種量為3-5ml,在溫度28°C,轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)/分鐘,壓力0.05MPa,通風比為.5vvm下,培養(yǎng)36小時;(3)將步驟(2)得到的二級種子移種至發(fā)酵罐(50L)進行發(fā)酵培養(yǎng),移種量為發(fā)酵罐中發(fā)酵培養(yǎng)基的8%-10%,即50L罐,滅菌后發(fā)酵培養(yǎng)基約為33L,移好后大概為36升,發(fā)酵溫度為28'C,發(fā)酵過程中實時監(jiān)測發(fā)酵過程尾氣中的0服值,在發(fā)酵到144小時后,即OUR出現(xiàn)即將下降但不明顯的情況下,根據(jù)OUR值進行梯度流加補糖,補糖采用濃度為20%的葡萄糖溶液,補糖速度控制在12-24ml/h,具體為發(fā)酵時間144一168小時,補糖速度12ml/h;發(fā)酵時間169—193小時,補糖速度16ml/h;發(fā)酵時間194—218小時,補糖速度20ral/h;發(fā)酵時間219-243小時,補糖速度24ml/h,最后使發(fā)酵液中OUR值控制在11咖ol/Lh,243小時后繼續(xù)發(fā)酵至放罐;(4)發(fā)酵13天后,進行效價測定。經(jīng)分析阿維菌素效價為4832u/ml,不補糖的發(fā)酵效價為4056u/ml,效價提高了19.13%。實施例2:補糖采用濃度為30%的葡萄糖溶液,補糖速度采用發(fā)酵144一168小時補糖速度為8ml/h;169—193小時,補糖速度為13ml/h;194—218小時,補糖速度為16ml/h,219—243小時,補糖速度為12ml/h。其他工藝條件和步驟均與實施例1相同,最后得到的阿維菌素效價為4766u/ml,不補糖的發(fā)酵效價為4056u/ml,效價提高了17.50%。實施例3:補糖采用濃度為40%的葡萄糖溶液,補糖速度采用發(fā)酵144一168小時補糖速度為8ml/h;169—193小時,補糖速度為10ml/h;194—218小時,補糖速度為12ml/h,219—243小時,補糖速度為8ml/h。其他工藝條件和步驟均與實施例1相同,最后得到的阿維菌素效價為4936u/ml,不補糖的發(fā)酵效價為4056u/ml,效價提高了21.70%。實施例4:補糖采用濃度為10%的葡萄糖溶液,補糖速度采用發(fā)酵144一168小時補糖速度為7ml/h;169—193小時,補糖速度為17ml/h;194—218小時,補糖速度為24ml/h,219—243小時,補糖速度為27ml/h。其他工藝條件和步驟均與實施例1相同,最后得到的阿維菌素效價為4936u/ml,不補糖的發(fā)酵效價為4056u/ml,效價提高了21.70%。實施例5:補糖采用濃度為30%的葡萄糖溶液,補糖速度采用發(fā)酵144一168小時補糖速度為13ml/h;169—193小時,補糖速度為15ml/h;194—218小時,補糖速度為10ml/h,219—243小時,補糖速度為7ml/h。其他工藝條件和步驟均與實施例1相同,最后得到的阿維菌素效價為4901u/ml,不補糖的發(fā)酵效價為4056u/ml,效價提高了20.83%。實驗例1.150L發(fā)酵過程總糖、還原糖等發(fā)酵過程參數(shù)的變化規(guī)律如圖1:圖1在實驗中為補糖試驗提供了參考依據(jù),即沒有補糖的生化指標是如何變化的,與補糖后的實驗有何差別。在一定程度上可提供補糖時機、發(fā)酵過程是否正常,pH等在發(fā)酵過程中的變化規(guī)律等,是后面進行一系列實驗的基礎(chǔ)。圖2為補糖速率與菌體衰老程度及阿維菌素效價之間的關(guān)系圖。從圖2中可以得出補糖的時機。1.250L發(fā)酵中試補糖方式的確定發(fā)酵補料理論上有多種,實驗過程中我們選擇了以下三種補料方式進行了研究根據(jù)總糖每天的消耗速率,補入相應(yīng)的消耗糖。'(1)間歇一次性補料方式分3次補入,補入一次隔一天。(2)勻速流加補料方式以勻速方式補加葡萄糖液。'(3)梯度流加補料方式分3個梯度,補料速率梯度增加為起始速率三分之一。對該3種補料方式進行補糖操作,其結(jié)果如下表從表l中可看出,以發(fā)酵6天為補糖時機,發(fā)酵周期290h,不論采取哪種補料方式,最終阿維菌素效價均有一定程度的提高,其中梯度流加效果最好,阿維菌素效價達4937ug/ml,比對照提高了20.41°/。。10<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>1.350L發(fā)酵幾種補糖策略比較分析在補糖方式為梯度流加的實驗基礎(chǔ)上,我們主要分析了以下三種補糖策略為進行比較,三種補糖方式均選擇在144h進行補糖操作。結(jié)果見圖3(1)根據(jù)總糖與還原糖消耗速率的補糖策略(2)根據(jù)過程pH的補糖策略(3)根據(jù)代謝參數(shù)OUR的補糖策略從發(fā)酵結(jié)果來看,阿維菌素發(fā)酵在中后期進行適當?shù)难a糖均能起到提高效價、增加總億和降低生產(chǎn)成本的效果。從圖3可知道,在144h補糖后,最終采用第三種補糖方式,即根據(jù)代謝參數(shù)OUR的補糖策略效果最好,效價可達4976u/ml,相對對照效價4058u/ml提高了22.62%。1.4規(guī)模50L罐上采用以O(shè)UR為指標進行梯度流加補糖發(fā)酵過程參數(shù)的變化規(guī)律及產(chǎn)量大幅度提高試驗1.4.15QL罐常規(guī)發(fā)酵過程中OUR參數(shù)變化規(guī)律在采用OUR補糖策略前,對常規(guī)發(fā)酵過程中的OUR參數(shù)變化規(guī)律進行了跟蹤,結(jié)果如圖4。根據(jù)跟蹤的數(shù)據(jù)顯示,0UR最大值出現(xiàn)在發(fā)酵進行12h左右,隨后,OUR在40h左右有個低谷(相對),在所有的批次都會出現(xiàn)類似情況。進一步分析可知,40h阿維鏈霉菌正處于初級代謝與次級代謝的轉(zhuǎn)換點,正是40h后產(chǎn)素開始啟動。進入次級代謝后,OUR開始穩(wěn)定,進入穩(wěn)定期,但隨著發(fā)酵的進行,培養(yǎng)基等營養(yǎng)物質(zhì)被消耗,代謝產(chǎn)物逐漸積累,菌體代謝減弱,0UR隨著發(fā)酵的進行也逐步下降。實驗表明,在發(fā)酵接近200h時,若不進行補糖操作,OUR可能下降到5mmol/Lh以下。1.4.250L罐以0UR為控制依據(jù)的補糖變化規(guī)律針對不補糖操作的批次OUR在發(fā)酵后期下降趨勢嚴重的情況,提出以O(shè)UR為依據(jù)的補糖策略。在以O(shè)UR為依據(jù)發(fā)酵補糖過程中與不補糖的批次進行了比較,其結(jié)果如圖5所示,補糖批次OUR在后期保持平穩(wěn),其值穩(wěn)定在lOmmol/Lh左右。而不補糖的批次,其0UR在150h后下降明顯,反映了菌體衰老較快,發(fā)酵結(jié)束比補糖批次要早。1.4.3以0UR為補糖策略在2噸中試罐上的發(fā)酵放大驗證為了驗證補糖策略的可行性,在2噸中試罐上進行了放大驗證實驗,其中2噸罐上的補糖速率采用50L罐上的補糖速率進行簡單的幾何放大。實驗結(jié)果表明,該方法能較大幅度提高阿維菌素的發(fā)酵單位,為工業(yè)生產(chǎn)放大奠定了科學(xué)基礎(chǔ),具體實驗結(jié)果見圖6。從圖6可知,補糖組與不補糖組在OUR和最終的效價上有較大差別。補糖組效價體現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢,可達4982u/ml,比對照組效價4056u/ml提高了22.83%。從OUR變化來看,補糖時機為144h左右開始,補糖組OUR下降趨勢明顯趨緩,這與補糖速率有關(guān),OUR下降到llmmol/Lh附近時,適當控制補糖速率,可使OUR值維持在llmmol/Lh。而不補糖組,在整個發(fā)酵過程中,因菌體衰老,呼吸減弱,0UR下降幅度遠遠比補糖組要大,當不補糖組的0UR下降到8mmol/Lh以下時,對照效價增加緩慢,甚至不增長。在2噸中試罐通過補糖與不補糖試驗對比,根據(jù)OUR適當控制補糖速率,使得發(fā)酵水平提高20%左右,為工業(yè)規(guī)模發(fā)酵水平提高提供科學(xué)基礎(chǔ),同時也驗證了通過采用代謝參數(shù)OUR發(fā)酵補糖操作來提高阿維菌素生產(chǎn)工藝的可行性。權(quán)利要求1.一種基于代謝參數(shù)OUR補糖發(fā)酵生產(chǎn)阿維菌素工藝,其特征在于包括以下工藝步驟(1)將除蟲鏈霉菌移種至250ml搖瓶中進行一級種子培養(yǎng);(2)將步驟(1)得到的種子液移種至15L種子罐中進行二級種子培養(yǎng);(3)將步驟(2)得到的種子液移種至50L發(fā)酵罐進行發(fā)酵培養(yǎng),發(fā)酵過程中實時測定發(fā)酵尾氣OUR值,根據(jù)OUR值變化進行補糖操作。2.如權(quán)利要求1所述的一種基于代謝參數(shù)OUR補糖發(fā)酵生產(chǎn)阿維菌素工藝,其特征在于步驟(1)中一級種子培養(yǎng)條件為在溫度28。C,搖床轉(zhuǎn)速250轉(zhuǎn)/分鐘下,培養(yǎng)30-40小時,搖瓶中的一級種子培養(yǎng)基含有玉米淀粉28-32g/L、玉米漿3-7g/L、酵母膏13-17g/L、KH2P042-6g/L和蒸餾水,并調(diào)PH為7.0-7.2,優(yōu)選為玉米淀粉29-31g/L、玉米漿4-6g/L、酵母膏14-16g/L、KH2P043-5g/L和蒸餾水。3.如權(quán)利要求1所述的一種基于代謝參數(shù)OUR補糖發(fā)酵生產(chǎn)阿維菌素工藝,其特征在于步驟(2)中二級種子培養(yǎng)條件為在溫度28卩,轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)/分鐘,壓力0.05MPa,通風比為0.5vvm下,培養(yǎng)36-48小時,種子罐中二級種子培養(yǎng)基含有玉米淀粉28-32g/L、玉米漿3-7g/L、酵母膏13-17g/L、KH2P042-6g/L和蒸餾水,并調(diào)PH為7.0-7.2,優(yōu)選為玉米淀粉29-31g/L、玉米漿4-6g/L、酵母膏14-16g/L、KH2P043-5g/L和蒸餾水。4.如權(quán)利要求1所述的一種基于代謝參數(shù)OUR補糖發(fā)酵生產(chǎn)阿維菌素工藝,其特征在于步驟(3)中發(fā)酵培養(yǎng)條件為在溫度28'C下,培養(yǎng)13天,發(fā)酵罐中發(fā)酵培養(yǎng)基含有玉米淀粉110-130g/L、酵母粉13-17g/L、豆粕粉3-7g/L、花生餅粉3-7g/L、KH2P043-7g/L和蒸餾水,并調(diào)pH為7.0-7.2,優(yōu)選為玉米淀粉115-125g/L、酵母粉14-16g/L、豆粕粉4-6g/L、花生餅粉4-6g/L、K&P044-6g/L和蒸餾水。5.如權(quán)利要求1所述的一種基于代謝參數(shù)OUR補糖發(fā)酵生產(chǎn)阿維菌素工藝,其特征在于步驟(3)中采用流加補糖方式進行補糖操作。6.如權(quán)利要求1所述的一種基于代謝參數(shù)OUR補糖發(fā)酵生產(chǎn)阿維菌素工藝,其特征在于步驟(3)中發(fā)酵130-150小時后,即OUR值開始出現(xiàn)下降時,開始進行補糖操作,補糖操作采用重量濃度為15-45%的葡萄糖溶液,補糖速度為7-27ml/h,使0UR值控制在9-14mmol/Lh。7.如權(quán)利要求1所述的一種基于代謝參數(shù)OUR補糖發(fā)酵生產(chǎn)阿維菌素工藝,其特征在于步驟(3)中發(fā)酵144小時后進行補糖操作,補糖采用濃度為20-40%的葡萄糖溶液,在發(fā)酵144-168小時,補糖速度為7-13ml/h,169-193小時,補糖速度為10-17ml/h,194-218小時,補糖速度為10-30ml/h,219-243小時,補糖速度為7-27ml/h,使OUR值控制在10-13腿ol/Lh。8.如權(quán)利要求7所述的一種基于代謝參數(shù)OUR補糖發(fā)酵生產(chǎn)阿維菌素工藝,其特征在于在發(fā)酵144-168小時,補糖速度為8-12ml/h,169-193小時,補糖速度為10-16ml/h,194-218小時,補糖速度為12-30ml/h,219-243小時,補糖速度為8-24ml/h。全文摘要一種基于代謝參數(shù)OUR補糖發(fā)酵生產(chǎn)阿維菌素工藝,屬于生物發(fā)酵
技術(shù)領(lǐng)域
。其特征在于包括以下工藝步驟(1)將除蟲鏈霉菌移種至250ml搖瓶中進行一級種子培養(yǎng);(2)將步驟(1)得到的種子液移種至15L種子罐中進行二級種子培養(yǎng);(3)將步驟(2)得到的種子液移種至50L發(fā)酵罐進行發(fā)酵培養(yǎng),發(fā)酵過程中實時測定發(fā)酵尾氣OUR值,根據(jù)OUR值變化進行補糖操作。本發(fā)明設(shè)計合理,降低了生產(chǎn)成本,在發(fā)酵過程中有效的延緩了菌體的衰老,提高阿維菌素的效價20%左右,從而有效的利用原料獲得高產(chǎn)。文檔編號C12P17/18GK101560535SQ200910098980公開日2009年10月21日申請日期2009年5月26日優(yōu)先權(quán)日2009年5月26日發(fā)明者倪火榮,炬儲,儲消和,姚云泉,姚小員,梁劍光,王永紅,陳中兵,黃海濤申請人:浙江升華拜克生物股份有限公司;華東理工大學(xué)
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