專利名稱:用于全身性炎癥的預(yù)后和診斷的溶血磷脂酰膽堿檢測的制作方法
用于全身性炎癥的預(yù)后和診斷的溶血磷脂酰膽堿檢測
1、發(fā)明領(lǐng)域
本發(fā)明涉及用于，例如診斷或預(yù)后個體全身性炎癥的方法和組合物。全身性炎癥可能是例如全身性炎性反應(yīng)綜合征、膿毒癥、嚴重膿毒癥、膿毒性休克、多器官功能障礙(MOD)或死亡。
2、發(fā)明背景
疾病病狀的早期檢測通常容許更有效的治療性處理和相應(yīng)更有利的臨床結(jié)果。然而，在許多情況中，由于疾病的復雜性，疾病癥狀的早期檢測存在問題；因此，在可能被診斷之前，疾病可能已變?yōu)橄鄬ν砥?。全身性炎癥代表了這樣的一類疾病。這些病癥，尤其是膿毒癥，通常(但不總是)由病原微生物和宿主防御系統(tǒng)之間的相互作用引起，該相互作用在宿主中引發(fā)過度且異常調(diào)節(jié)的炎性反應(yīng)。全身性炎性反應(yīng)期間宿主應(yīng)答的復雜性使得了解疾病發(fā)病機理的努力錯綜復雜(Healy，2002，Annul.Pharmacother.36:648-54中綜述)。對疾病發(fā)病機理的不完全理解又使發(fā)現(xiàn)有用的診斷性生物標記變得困難。然而，由于膿毒癥會及其迅速地發(fā)展成威脅生命的病癥，所以迫切需要早期并且可靠的診斷。
個體中膿毒癥的進展遵循明確的進程，從全身性炎性反應(yīng)綜合征(“SIRS”)-陰性進展為SIRS-陽性，然后再進展為膿毒癥，膿毒癥然后可能發(fā)展成嚴重膿毒癥、膿毒性休克、多器官功能障礙(“M0D”)，最終死亡。
記載在臨床上對膿毒癥重要的病原微生物的存在已經(jīng)被證明是困難的。通常通過培養(yǎng)個體的血液、痰、尿、傷口分泌物、內(nèi)置線導管表面等來檢測致病微生物。然而，致病微生物可能僅存在于體內(nèi)的某些微環(huán)境中，從而所培養(yǎng)的具體材料可能不含有污染性微生物。感染部位的微生物數(shù)目少可使檢測更加復雜。血液中病原體數(shù)目少給通過培養(yǎng)血液診斷膿毒癥帶來了特別的問題。例如，在一項研究中，僅在17%的具有膿毒癥臨床表現(xiàn)的個體中得到陽性培養(yǎng)結(jié)果(Rangel-Frausto等，1995，JAMA 273:117-123)。非病原微生物污染樣品可使診斷進一步復雜化 。例如，在對707名敗血病患者的研究中，僅有12.4%的檢出微生物具有臨床意義(Weinstein 等，1997, Clinical InfectiousDiseases, 24:584-602)。
膿毒癥早期診斷的困難通過與該疾病相關(guān)的高發(fā)病率和高死亡率反映出來。當前膿毒癥是美國位居第十位的死亡原因并且在非冠脈(noncoronary)重病監(jiān)護室(I⑶)中的住院患者中特別普遍，在非冠脈ICU中膿毒癥是最常見的死亡原因?？偹劳雎矢哌_35%，估計僅在美國每年就發(fā)生750，000例死亡。僅在美國治療膿毒癥的年花費就達數(shù)十億美元。
多數(shù)現(xiàn)存的膿毒癥評分系統(tǒng)或預(yù)測模型僅能預(yù)測已經(jīng)確診的膿毒癥患者的晚期并發(fā)癥包括死亡的風險，且不能夠預(yù)測膿毒癥本身的發(fā)展。通常，膿毒癥的診斷基于使用經(jīng)驗評分系統(tǒng)例如APACHE II (Knaus等，1985，Crit.CareMed.13 =818-829)的臨床懷疑，隨后進行血液培養(yǎng)。這可能花費48小時或更長的時間來確定全身感染。到那時候，再來挽救病人就往往太遲了。如果膿毒癥的診斷或預(yù)后能夠早一些進行，可以進行治療阻止或延緩膿毒癥發(fā)展成嚴重膿毒癥或膿毒性休克。
因此，需要利用具有令人滿意的特異性和靈敏性的技術(shù)來足夠早地診斷膿毒癥的方法，以允許有效的干預(yù)和預(yù)防。
發(fā)明內(nèi)容
一方面，本發(fā)明部分基于一個發(fā)現(xiàn)，即來自患者的樣品中的總?cè)苎字Ｄ憠A的量可被用于快速、靈敏和精確地診斷或預(yù)后個體的全身性炎癥。本發(fā)明的各方面中，來自患者的樣品中的總?cè)苎字Ｄ憠A被用于評估全身性炎癥的存在或風險。如下文的例子所示，本發(fā)明的方法和組合物可被用于診斷或預(yù)后全身性炎癥。全身性炎癥可以是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的任何全身性炎癥，包括全身性炎性反應(yīng)綜合征(“SIRS”)、膿毒癥、嚴重膿毒癥、膿毒性休克、多器官功能障礙(“MOD”)和死亡。
在某些實施方案中，通過評價個體樣品中的總?cè)苎字Ｄ憠A，來估計全身性炎癥的存在或風險。正如本文中敘述，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)來自患者樣品的總?cè)苎字Ｄ憠A量與全身性炎癥的發(fā)作有關(guān)聯(lián)，甚至能表明全身性炎癥發(fā)作前的情況。因此，在某些實施方案中，來自患者樣品的總?cè)苎字Ｄ憠A可以用作全身性炎癥的預(yù)后。該評價可根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的評價總?cè)苎字Ｄ憠A的任何技術(shù)進行。示例的技術(shù)本文中已有敘述。然而，本發(fā)明提供了基于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的任何評價總?cè)苎字Ｄ憠A的技術(shù)的方法。
在另一方面，本發(fā)明部分基于一類溶血磷脂酰膽堿生物標記的發(fā)現(xiàn)，這類生物標記能夠用于快速、靈敏和精確地診斷或預(yù)后個體的全身性炎癥。在本發(fā)明的一些方面，對該個體中本發(fā)明的生物標記的評價被用于估計全身性炎癥的存在或風險。如下文例子所示，本發(fā)明的方法和組合物可以用于在很短的時間內(nèi)(例如8小時或甚至6小時)診斷或預(yù)后全身性炎癥，準確率高達80%或更高。全身性炎癥是本領(lǐng)域技術(shù)人員公認的任何全身性炎癥，包括全身性炎性反應(yīng)綜合征(“SIRS”)、膿毒癥、嚴重膿毒癥、膿毒性休克和多器官功能障礙(“MOD”)。
在某些實施方案中，生物標記是1-0-酰基-2-溶血-sn-甘油_3_磷酸膽堿。?；潜绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何?；?。在某些實施方案中，?；荂14-C22?；?，在進一步的實施方案中，?；荂16-C18酰基。在特定的實施方案中，?；荂16?；?。在優(yōu)選的實施方案中，?；亲貦磅！Ｔ谶M 一步 具體實施方案中，酰基是C18?；?。在優(yōu)選實施方案中，?；怯仓?。生物標記可以是來自個體的任何生物標記形式，例如本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠鑒定的生物標記的任何鹽或溶劑化物。
在某些實施方案中，生物標記是式(I)的化合物，或其鹽或溶劑化物:
權(quán)利要求
1.一種組合物在制備用于診斷或預(yù)后全身性炎性反應(yīng)綜合征-陽性患者膿毒癥的試劑盒中的用途，其中所述組合物能夠用于測量患者血液、血漿或血清中的總?cè)苎字Ｄ憠A的量，其中所述溶血磷脂酰膽堿是式(I)代表的化合物或其鹽或溶劑化物:
2.權(quán)利要求
1的用途，其中所述診斷或預(yù)后是在實驗室確認臨床上顯著的導致膿毒癥的感染前的0、12、24、36或48小時作出的。
3.權(quán)利要求
1的用途，其中所述組合物包含: 能夠使溶血磷脂酰膽堿反應(yīng)生成甘油磷脂酰膽堿的酶或試劑， 能夠使甘油磷脂酰膽堿反應(yīng)生成膽堿的酶或試劑，能夠使膽堿、水和氧反應(yīng)生成過氧化物的酶或試劑，過氧化物酶和所述過氧化物酶的熒光底物。
4.權(quán)利要求
3的用途，其中所述能夠使溶血磷脂酰膽堿反應(yīng)生成甘油磷脂酰膽堿的酶或試劑是溶血磷脂酶。
5.權(quán)利要求
3的用途，其中所述能夠使溶血磷脂酰膽堿轉(zhuǎn)換成甘油磷脂酰膽堿的酶或試劑是EC3.L 1.5。
6.權(quán)利要求
3的用途，其中所述能夠使甘油磷脂酰膽堿反應(yīng)生成膽堿的酶或試劑是甘油磷酯酰膽堿二脂酶。
7.權(quán)利要求
3的用途，其中所述能夠使甘油磷脂酰膽堿反應(yīng)生成膽堿的酶或試劑是EC3.1.4.2。
8.權(quán)利要求
3的用途，其中所述能夠使膽堿反應(yīng)生成過氧化物的酶或試劑是膽堿氧化酶。
9.權(quán)利要求
3的用途，其中所述能夠使膽堿反應(yīng)生成過氧化物的酶或試劑是ECl.1.3.17。
10.權(quán)利要求
3的用途，其中所述過氧化物酶是辣根過氧化物酶。
11.權(quán)利要求
3的用途，其中所述熒光底物是10-乙?；?3，7-二羥基吩噁嗪，且所述熒光產(chǎn)物是7-羥基-3H-吩噁嗪-3-酮。
12.權(quán)利要求
3的用途，其中所述熒光產(chǎn)物通過熒光檢測測定。
13.權(quán)利要求
1的用途，其中所述組合物包含能夠選擇性結(jié)合式(I)的化合物的抗體。
14.權(quán)利要求
1的用途，其中所述組合物能夠測量一個或多個額外的生物標記，該一個或多個額外的生物標記用于全身性炎癥的預(yù)后或診斷。
15.權(quán)利要求
14的用途，其中所述生物標記選自:內(nèi)毒素、細菌DNA、蛋白C、降鈣素原、LBP-LPS-結(jié)合蛋白、纖維蛋白降解產(chǎn)物、HLA-DR、CD-64、E-選擇素、皮質(zhì)醇、ACTH、CD-14、sTNFR1、sTNF-RI1、TNF, IL-6、IL-8、IL-10、D- 二聚體、凝血酶原、活化的部分凝血活酶、纖溶酶原激活物抑制劑-1、可溶性血栓調(diào)節(jié)蛋白、凝血酶激活的纖溶抑制物、蛋白S和抗凝血酶。
16.如權(quán)利要求
15所述的用途， 其中所述生物標記選自抗凝血酶III和TNF-α。
專利摘要
本發(fā)明提供了用于診斷或預(yù)后全身性炎癥例如膿毒癥的方法和組合物。
文檔編號C12Q1/06GKCN101316512 B發(fā)布類型授權(quán) 專利申請?zhí)朇N 200680044371
公開日2013年7月31日 申請日期2006年9月27日
發(fā)明者石松, 托馬斯·吉恩特, 理查德·摩爾 申請人:貝克頓迪金森公司導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan專利引用 (6), 非專利引用 (1),