一種穩(wěn)定、抗干擾能力強(qiáng)的血清磷脂檢測試劑及檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及血清憐脂檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別設(shè)及一種血清憐脂檢測試劑，還設(shè)及使 用此檢測試劑的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 血清憐脂主要包括卵憐脂、溶血卵憐脂、神經(jīng)憐脂和腦憐脂等四部分。臨床工作中 一般只測定血清總憐脂，血清憐脂的增高見于糖尿病、腎病綜合癥、慢性出血性貧血、肝硬 化、肝壞死、膽道阻塞、甲狀腺功能減退、原發(fā)性高血壓、梅毒等;減退見于甲狀腺功能亢進(jìn)、 急性感染性發(fā)熱、營養(yǎng)不良性肝硬化等。
[0003] 目前，血清總憐脂的檢測有化學(xué)法和酶法等，現(xiàn)W酶法最為常用?；瘜W(xué)法，方法穩(wěn) 定，但操作繁瑣，試劑對操作人員危害較大，易造成環(huán)境污染，且難W實(shí)現(xiàn)自動化操作。而酶 法試劑，操作簡便，靈敏度高，適用自動化分析，但試劑穩(wěn)定性稍差，容易受膽紅素和抗壞血 酸等干擾物質(zhì)干擾。
[0004] 鑒于此，本發(fā)明在酶法的基礎(chǔ)上采用Trinder反應(yīng)新色原DAOS，添加穩(wěn)定劑聚乙二 醇6000、薦糖、甘露醇、海藻糖、BSA、黃原膠等，有效提高了試劑的穩(wěn)定性;并且通過添加膽 紅素氧化酶和抗壞血酸氧化酶，可W有效膽紅素和抗壞血酸的干擾，大大增強(qiáng)試劑的抗干 擾能力。此外，優(yōu)選的新型非離子表面活性劑聚氧丙締氧化乙締甘油酸(Pluranic L64)的 加入可防止反應(yīng)體系渾濁，增強(qiáng)底物的穩(wěn)定性，提高試劑的抗干擾能力。該試劑操作簡便快 速，適用于自動化分析，是一種更加穩(wěn)定、抗干擾能力強(qiáng)的血清血清憐脂(PLIP)試劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[000引本發(fā)明的目的是提供一種用于檢測血清憐脂(PLIP)的試劑及使用該試劑檢測血 清憐脂含量的方法。該試劑盒采用酶法，可W有效檢測血清憐脂的含量，抗干擾能力強(qiáng)，穩(wěn) 定性好等優(yōu)點(diǎn)。
[0006] 基本原理； 憐脂在憐脂酶D的作用水解生成膽堿和憐脂酸，膽堿被膽堿氧化酶氧化生成過氧化氨， 過氧化氨與4-氨基安替比林、DAOS反應(yīng)生成藍(lán)色染料。此染料在600nm有最大吸收峰，吸收 強(qiáng)度與血清中憐脂含量成正比。
[0007] 憐脂酶D 憐脂+也膽堿+憐脂酸 膽堿氧化酶 膽堿 + 2〇2+ 也0 甜菜堿 + 2也〇2 P孤 2也02 + DA0S+4-AA 擬薩《師? 4也0+藍(lán)色染料 注:DAOS: Ν-乙基-Ν-( 2-徑基-3-橫丙基)-3 ' 5-二甲氧基苯胺鋼鹽 4-AA:4-氨基氨替化嘟 POD:過氧化物酶 本發(fā)明是通過W下步驟得到的： 一種血清憐脂檢測試劑，包括試劑R1和試劑R2,所述試劑R1和試劑R2的組成如下： 1) 試劑R1中含有 緩沖液......................................................lOOmmol/L， 憐脂酶D.....................................................1KU/L， DAOS........................................................1.4mmol/L, 抗壞血酸氧化酶..............................................2KU/L, 膽紅素氧化酶................................................2KU/L, 聚乙二醇6000................................................lOg/L， 薦糖........................................................20g/L, 黃原膠......................................................〇.5g/L， 甘露醇......................................................20g/L, 海藻糖......................................................lOg/L， BSA.........................................................2g/L, 聚氧丙締氧化乙締甘油酸(Pluranic L64)........................Ig/L, 防腐劑......................................................〇.5g/L; 2) 試劑R2的組分為： 緩沖液......................................................lOOmmol/L， 4-氨基氨替口比口林..............................................2.5mmol/L， 過氧化物酶..................................................20KU/L, 膽堿氧化酶..................................................8KU/L， 聚乙二醇6000................................................lOg/L， 薦糖........................................................20g/L, 黃原膠......................................................〇.5g/L， 甘露醇......................................................20g/L, 海藻糖......................................................lOg/L， BSA.........................................................2g/L, 聚氧丙締氧化乙締甘油酸(Pluranic L64)........................Ig/L, 防腐劑......................................................〇.5g/L; 所述的血清憐脂檢測試劑，試劑R1中緩沖液為25°C，pH為7.2的肥PES緩沖液。
[0008] 所述的血清憐脂檢測試劑，試劑R2中緩沖液為25°C，pH為7.2的肥PES緩沖液。
[0009] 所述的血清憐脂檢測試劑，所述防腐劑為NaN3。
[0010] 所述的血清憐脂檢測試劑來檢測血清憐脂含量的檢測方法，使用全自動生化分析 儀利用終點(diǎn)法進(jìn)行測定，檢測主波長為600nm。
[0011] 所述的檢測方法，R1試劑和R2試劑的比例為4:1。
[0012] 本發(fā)明的有益效果： 1)優(yōu)化反應(yīng)體系，采用化inder反應(yīng)新色原DAOS，并添加聚乙二醇6000、薦糖、甘露醇、 海藻糖、BSA、黃原膠等多種穩(wěn)定劑，可W顯著改善試劑的穩(wěn)定性； 2) 添加膽紅素氧化酶和抗壞血酸氧化酶，可W有效避免膽紅素和抗壞血酸的干擾，大 大增強(qiáng)試劑的抗干擾能力； 3) 新型非離子表面活性劑聚氧丙締氧化乙締甘油酸(Pluranic L64)的加入可防止反 應(yīng)體系渾濁，增強(qiáng)底物的穩(wěn)定性，提高試劑的抗干擾能力； 4) 試劑的準(zhǔn)確度和穩(wěn)定性良好，抗干擾性強(qiáng)，使用方便，完全可W滿足臨床需要。
【附圖說明】
[0013] 圖1為兩種試劑的相關(guān)性曲線圖， 圖2為兩種試劑效期穩(wěn)定性曲線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明： 實(shí)施例1 血清憐脂的檢測試劑，包試劑R1和試劑R2: 1) 其R1的組成為： 肥陽S(4-徑乙基贓嗦乙橫酸）緩沖液(pH=7.2，25°C) . 1 OOmmo 1 /L， 憐脂酶D.......................................IKU/L， DAOS..........................................1.4mmol/L, 抗壞血酸氧化酶................................2KU/L, 膽紅素氧化酶..................................2KU/L, 聚乙二醇6000..................................lOg/L， 薦糖..........................................20g/L, 黃原膠........................................〇.5g/L， 甘露醇........................................20g/L, 海藻糖........................................lOg/L， BSA...........................................2g/L, 聚氧丙締氧化乙締甘油酸(Pluranic L64)..........Ig/L, 防腐劑 NaN3....................................〇.5g/L; 2) 試劑R2的組分為： 肥陽S(4-徑乙基贓嗦乙橫酸）緩沖液(pH=7.2，25°C) . 1 OOmmo 1 /L， 4-氨基氨替口比口林................................2.5mmol/L， 過氧化物酶........