一種土壤過氧化物酶活性測定試劑盒及其方法
【技術領域】
[0001 ]本發(fā)明屬于生命科學領域，設及一種試劑盒，具體設及一種±壤過氧化物酶活性 測定試劑盒及其方法。
【背景技術】
[0002] 過氧化物酶(S-P0D)主要來源于±壤微生物，能夠氧化±壤有機物質(zhì)產(chǎn)生過氧化 物，在腐殖質(zhì)的形成過程中具有重要作用。
[0003] 目前測定過氧化物酶活性最權威的方法是愈創(chuàng)木酪法。但該方法只能適用于測定 動物、植物和培養(yǎng)細胞中過氧化物酶活性，不能適用于±壤樣本。目前市面上還沒有一種有 效的±壤過氧化物活性的測定方法及其試劑盒。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為了彌補現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明旨在提供一種±壤過氧化物酶活性測定試劑盒 及其方法，可快速準確的對±壤過氧化物酶活性進行測定。
[0005] 為實現(xiàn)上述技術目的，達到上述技術效果，本發(fā)明通過W下技術方案實現(xiàn)： 一種±壤過氧化物酶活性測定試劑盒，包括W下試劑： 試劑一，粉劑X 1瓶，4°c保存，由一定量的鄰苯立酪組成，置于lOmL試劑瓶中； 試劑二，液體XI瓶，4°C保存，由一定量的過氧化氨與蒸饋水混勻而成，置于2mL試劑瓶 中； 試劑Ξ，液體X 1瓶，4°C保存，由巧樣酸-憐酸緩沖液組成，置于5mL試劑瓶中； 試劑四，液體X 1瓶，4°C保存，由乙酸組成，置于100血試劑瓶中。
[0006] 進一步的，所述試劑一中的鄰苯Ξ酪的質(zhì)量為0.125g; 進一步的，所述試劑二中的過氧化氨的體積為50uL，蒸饋水的體積為1.95mL; 進一步的，所述試劑Ξ中的巧樣酸-憐酸緩沖液的抑=4.5,所述的巧樣酸-憐酸緩沖液 是由57.4mg-水合巧樣酸、162.6mg十二水合憐酸氨二鋼和5m蒸饋水混勻而成； 進一步的，所述試劑四中的乙酸的體積為lOOmL。
[0007] ±壤過氧化物酶(S-P0D)催化有機物質(zhì)氧化成紫色沒食子素，后者在430nm有特征 光吸收。
[000引一種采用上述試劑盒且基于分光光度法的±壤過氧化物酶活性測定方法，包括W 下步驟： 步驟1儀器和用品的準備； 可見分光光度計或酶標儀、臺式離屯、機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿或96 孔板、50mL乙酸、研鉢、冰和蒸饋水； 步驟2試劑的配制； 所述試劑一在臨用前加 lOmL蒸饋水充分溶解，制成試劑一水溶液； 步驟3分光光度計或酶標儀的預熱； 分光光度計或酶標儀預熱30min W上，調(diào)節(jié)波長至430nm，蒸饋水調(diào)零； 步驟4 ±壤過氧化物酶活性的測定操作； 取一支1.5mLEP管，作為測定管，在其中加入0.0?風干±樣、100化所述試劑一水溶液、 20化所述試劑二，振蕩混勻，30°C恒溫培養(yǎng)1 h;再加入50化所述試劑Ξ和43化L所述試劑 四，振蕩數(shù)次，室溫靜置30min，取20化L上層液，于430nm處測定吸光值A; 步驟5 ±壤過氧化物酶活性的計算； 1) 用微量石英比色皿測定，其計算公式如下： 標準條件下測定吸光值A的回歸方程為y = 8.97x - 0.003; 其中，X為標準品濃度(mg/mL)，y為吸光值A; 單位的定義:每天每肖±樣中產(chǎn)生Img紫色沒食子素定義為一個酶活力單位； ±壤過氧化物酶活性化/g±樣)=(A+0.003)今8.97XV反旨今W今T = 80X(A+0.003); 其中，T=lh=l/24d，表示反應時間； V反宮=0.6mL，表示反應體系總體積； W=0.02g，表示樣本質(zhì)量； 2) 用96孔板測定，其計算公式如下： 標準條件下測定吸光值A的回歸方程為y = 4.485X - 0.003; 其中，X為標準品濃度(mg/mL)，y為吸光值A; 單位的定義:每天每肖±樣中產(chǎn)生Img紫色沒食子素定義為一個酶活力單位； ±壤過氧化物酶活性化/邑±樣)=(4+0.003)今4.485 X V反旨今W今Τ=160 X (A+0.003); 其中，T=lh=l/24d，表示反應時間； V反宮=0.6mL，表示反應體系總體積； W=0.02g，表示樣本質(zhì)量。
[0009] 本發(fā)明的有益效果是： 1、本發(fā)明的試劑盒是目前市面上唯一的檢測±壤過氧化物的試劑盒，具有獨創(chuàng)性。
[0010] 2、本發(fā)明的試劑盒檢測靈敏度極高，最低檢測限達到0.抓/肖±樣。
[0011] 3、本發(fā)明的方法操作步驟簡便，快速，可W-次性測定96個樣本。
[0012] 4、本發(fā)明的方法所用的試劑均為常見試劑，成本極低，對設備和用品的要求也相 對較低。
[0013] 上述說明僅是本發(fā)明技術方案的概述，為了能夠更清楚了解本發(fā)明的技術手段， 并可依照說明書的內(nèi)容予W實施，W下W本發(fā)明的較佳實施例詳細說明。本發(fā)明的具體實 施方式由W下實施例詳細給出。
【具體實施方式】
[0014] 下面將結合實施例，來詳細說明本發(fā)明。
[0015] -種±壤過氧化物酶活性測定試劑盒，包括W下試劑： 試劑一，粉劑X 1瓶，4°C保存，由0.125g的鄰苯立酪組成，置于10血試劑瓶中； 試劑二，液體X 1瓶，4°C保存，由50uL過氧化氨與1.95血蒸饋水混勻而成，置于2mL試劑 瓶中； 試劑立，液體X 1瓶，4°C保存，由pH=4.5的巧樣酸-憐酸緩沖液組成，置于5mL試劑瓶中； 所述的巧樣酸-憐酸緩沖液是由57.4mg-水合巧樣酸、162.6mg十二水合憐酸氨二鋼和5m蒸 饋水混勻而成； 試劑四，液體X 1瓶，4°C保存，由100血乙酸組成，置于100血試劑瓶中。
[0016] ±壤過氧化物酶(S-P0D)催化有機物質(zhì)氧化成紫色沒食子素，后者在430nm有特征 光吸收。
[0017] -種采用上述試劑盒且基于分光光度法的±壤過氧化物酶活性測定方法，包括W 下步驟： 步驟1儀器和用品的準備； 可見分光光度計或酶標儀、臺式離屯、機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿或96 孔板、50mL乙酸、研鉢、冰和蒸饋水； 步驟2試劑的配制； 所述試劑一在臨用前加 lOmL蒸饋水充分溶解，制成試劑一水溶液； 步驟3分光光度計或酶標儀的預熱； 分光光度計或酶標儀預熱30min W上，調(diào)節(jié)波長至430nm，蒸饋水調(diào)零； 步驟4 ±壤過氧化物酶活性的測定操作；
參見上表所示，取一支1.5mLEP管，作為測定管，在其中加入0.0?風干±樣、lOOiiL所述 試劑一水溶液、2化L所述試劑二，振蕩混勻，30°C恒溫培養(yǎng)1 h;再加入50化所述試劑Ξ和 43化L所述試劑四，振蕩數(shù)次，室溫靜置30min，取20化L上層液，于430nm處測定吸光值A; 步驟5 ±壤過氧化物酶活性的計算； 1) 用微量石英比色皿測定，其計算公式如下： 標準條件下測定吸光值A的回歸方程為y = 8.97x - 0.003; 其中，X為標準品濃度(mg/mL)，y為吸光值A; 單位的定義:每天每肖±樣中產(chǎn)生Img紫色沒食子素定義為一個酶活力單位； ±壤過氧化物酶活性化/g±樣)=(A+0.003)今8.97XV反旨今W今T = 80X(A+0.003); 其中，T=lh=l/24d，表示反應時間； V反宮=0.6mL，表示反應體系總體積； W=0.02g，表示樣本質(zhì)量； 2) 用96孔板測定，其計算公式如下： 標準條件下測定吸光值A的回歸方程為y = 4.485X - 0.003; 其中，X為標準品濃度(mg/mL)，y為吸光值A; 單位的定義:每天每肖±樣中產(chǎn)生Img紫色沒食子素定義為一個酶活力單位； ±壤過氧化物酶活性化/邑±樣)=(4+0.003)今4.485 X V反旨今W今Τ=160 X (A+0.003); 其中，T=lh=l/24d，表示反應時間； V反宮=0.6mL，表示反應體系總體積； W=0.02g，表示樣本質(zhì)量。
[0018]上述實施例只是為了說明本發(fā)明的技術構思及特點，其目的是在于讓本領域內(nèi)的 普通技術人員能夠了解本發(fā)明的內(nèi)容并據(jù)W實施，并不能W此限制本發(fā)明的保護范圍。凡 是根據(jù)本
【發(fā)明內(nèi)容】
的實質(zhì)所作出的等效的變化或修飾，都應涵蓋在本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。
【主權項】
1. 一種土壤過氧化物酶活性測定試劑盒，其特征在于，包括以下試劑： 試劑一，粉劑X 1瓶，4°c保存，由一定量的鄰苯三酚組成，置于10mL試劑瓶中； 試劑二，液體X 1瓶，4°C保存，由一定量的過氧化氫與蒸餾水混勻而成，置于2mL試劑瓶 中； 試劑三，液體X 1瓶，4°C保存，由檸檬酸-磷酸緩沖液組成，置于5mL試劑瓶中； 試劑四，液體X 1瓶，4°C保存，由乙醚組成，置于100mL試劑瓶中。2. 根據(jù)權利要求1所述的土壤過氧化物酶活性測定試劑盒，其特征在于： 所述試劑一中的鄰苯三酚的質(zhì)量為〇.125g; 所述試劑二中的過氧化氫的體積為50uL，蒸餾水的體積為1.95mL; 所述試劑三中的檸檬酸-磷酸緩沖液的pH=4.5，所述的檸檬酸-磷酸緩沖液是由57.4mg 一水合梓檬酸、162.6mg十二水合磷酸氫二鈉和5m蒸餾水混勾而成； 所述試劑四中的乙醚的體積為l〇〇mL。3. -種采用如權利要求2所述的試劑盒的土壤過氧化物酶活性測定方法，其特征在于， 基于分光光度法，包括以下步驟： 步驟1儀器和用品的準備； 可見分光光度計或酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿或96 孔板、50mL乙醚、研缽、冰和蒸餾水； 步驟2試劑的配制； 所述試劑一在臨用前加10mL蒸餾水充分溶解，制成試劑一水溶液； 步驟3分光光度計或酶標儀的預熱； 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至430nm，蒸餾水調(diào)零； 步驟4 土壤過氧化物酶活性的測定操作； 取一支1.5mLEP管，作為測定管，在其中加入0.02g風干土樣、10(^所述試劑一水溶液、 20yL所述試劑二，振蕩混勻，30°C恒溫培養(yǎng)1 h;再加入50yL所述試劑三和430Λ所述試劑 四，振蕩數(shù)次，室溫靜置30min，取200yL上層液，于430nm處測定吸光值A; 步驟5 土壤過氧化物酶活性的計算； 1) 用微量石英比色皿測定，其計算公式如下： 土壤過氧化物酶活性(U/g 土樣)=(A+0.003) + 8.97XV願+W+T = 80Χ(Α+0·003); 其中，T=lh=l/24d，表示反應時間； Vm^=0.6mL，表示反應體系總體積； W=0.02g，表示樣本質(zhì)量； 2) 用96孔板測定，其計算公式如下： 土壤過氧化物酶活性(U/g 土樣)=(A+0.003) + 4.485XV^+W+T=160X(A+0.003); 其中，T=lh=l/24d，表示反應時間； Vm^=0.6mL，表示反應體系總體積； W=0.02g，表示樣本質(zhì)量。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種土壤過氧化物酶活性測定試劑盒及其方法，該試劑盒包括：由鄰苯三酚組成的試劑一，由過氧化氫與蒸餾水混勻而成的試劑二，由一水合檸檬酸、十二水合磷酸氫二鈉和蒸餾水混勻而成的試劑三，由乙醚組成的試劑四。本發(fā)明的試劑盒是目前市面上唯一的檢測土壤過氧化物的試劑盒，具有獨創(chuàng)性，靈敏度極高，最低檢測限達到0.5U/g土樣。本發(fā)明的方法操作步驟簡便，快速，可以一次性測定96個樣本，且所用的試劑均為常見試劑，成本極低，對設備和用品的要求也相對較低。
【IPC分類】C12Q1/28
【公開號】CN105543331
【申請?zhí)枴緾N201610039406
【發(fā)明人】趙林川
【申請人】蘇州科銘生物技術有限公司
【公開日】2016年5月4日
【申請日】2016年1月21日