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一種用于栽培藍(lán)莓的菌根真菌土的制備方法及應(yīng)用與流程

文檔序號:12597911閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種用于栽培藍(lán)莓的菌根真菌土的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:

(1)、菌根真菌的取樣:選取生長健壯的杜鵑花樹,在樹干周圍20cm處向下挖至主要根系分布處,在菌根周圍取土樣;

(2)、制備土壤稀釋液:過濾所取土樣,將過濾后土樣連同細(xì)跟一起放入裝有無菌水的三角瓶中,振蕩搖晃使土與水充分混合,用無菌吸管從中吸取土壤懸液注入盛有無菌水的試管中,制成10-1、10-2、10-3…不同稀釋倍數(shù)的土壤溶液;

(3)、倒平板:將預(yù)先制備的馬丁氏培養(yǎng)基熔化,待冷卻至55℃~60℃時,向馬丁氏培養(yǎng)基中加入鏈霉素溶液,使每1ml馬丁氏培養(yǎng)基中含有鏈霉素30-60uk;在無菌操作下向培養(yǎng)皿內(nèi)注入培養(yǎng)基,平置于桌面上,待凝固后成平板;

(4)、涂布真菌:將步驟(3)中所得的平板分別標(biāo)上不同稀釋倍數(shù),用無菌吸管從土壤稀釋液中吸取0.2~0.4ml不同稀釋倍數(shù)10-1、10-2、10-3…加入到對應(yīng)稀釋倍數(shù)的平板中,用無菌玻璃棒在培養(yǎng)基平板表面輕涂均勻;

(5)、培養(yǎng)及挑菌:將上述培養(yǎng)基平板倒置于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)60~72h;將培養(yǎng)后長出的單個菌落分別挑取接種到培養(yǎng)基的斜面上于28℃培養(yǎng),待菌苔長出后,檢查菌苔是否單純,如有其它雜菌混雜,再次進(jìn)行分離純化,直至把真菌分純?yōu)橹梗?/p>

(6)、無菌河沙土的制備:向河沙土中加入10wt%稀鹽酸,加熱煮沸30min;倒去酸水,用水沖洗至中性;烘干,40目過篩去掉粗顆粒;裝入小試管,塞上棉塞,進(jìn)行滅菌、烘干;

(7)、菌根真菌土的培養(yǎng):選擇培養(yǎng)成熟的優(yōu)良菌株,用無菌水洗,制成孢子懸液;向每個裝有河沙土小試管中加入1.0~1.2ml孢子懸液,以接種針拌勻;放入真空干燥器內(nèi),抽干水分,存放于冰箱或室內(nèi)干燥處備用。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于栽培藍(lán)莓的菌根真菌土的制備方法,其特征在于,所述土樣含有直徑小于2mm細(xì)菌根,該土樣采用20目篩網(wǎng)過濾,每10g土樣用90ml無菌水混合。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于栽培藍(lán)莓的菌根真菌土的制備方法,其特征在于,所述鏈霉素的濃度為10~12mg/ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于栽培藍(lán)莓的菌根真菌土的制備方法,其特征在于,所述馬丁氏培養(yǎng)基組成為:KH2PO4 1g,MgSO4·7H2O 0.5g,蛋白胨5g,葡萄糖10g,瓊脂15-20g,水1000ml,pH自然,1%孟加拉紅水溶液3.3ml。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于栽培藍(lán)莓的菌根真菌土的制備方法,其特征在于,所述步驟(6)中每100ml小試管裝2g河沙土。

6.由權(quán)利要求1所述方法制備的真菌土在藍(lán)莓栽培中的應(yīng)用,其特征在于,在藍(lán)莓生長季,選取需接菌的藍(lán)莓,以藍(lán)莓主根基部為中心,直徑20~30cm的區(qū)域挖坑,使用接種匙將菌根真菌土接入到藍(lán)莓根系附近。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用,其特征在于,接種時間每年4-8月份,每株藍(lán)莓只接種一次即可。

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