本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體地說，本發(fā)明涉及一種高效快速繁殖牡丹的方法。
背景技術(shù)：
：牡丹屬于芍藥科(原毛莨科)芍藥屬牡丹組(Sect.MoutanDC.)植物，原產(chǎn)我國，是我國傳統(tǒng)名花。自然條件下適宜移栽期在每年的九月下旬到十月上旬。由于牡丹的適宜移栽期短，移栽后生根困難，常常造成牡丹移栽后成活率低，緩苗期長，植株生活力弱，限制了牡丹的廣泛栽培和觀賞價值的提高。牡丹用于群體綠化美麗中國和油料生產(chǎn)亟需大量優(yōu)質(zhì)種苗。目前生產(chǎn)上繁殖牡丹種苗的方法主要有播種、嫁接、分株和吊包等方法，播種繁殖的實生苗存在兩個嚴重問題，繁殖后代群體變異大，苗木質(zhì)量難以保證；田間播種繁殖的植株大多數(shù)帶有根結(jié)線蟲病，容易導(dǎo)致病疫傳播，嚴重制約產(chǎn)業(yè)發(fā)展和國內(nèi)外交流。牡丹無性繁殖方式主要有嫁接、分株、吊包等，這些繁殖方式受到母株品質(zhì)和繁殖材料數(shù)量和質(zhì)量限制，主要用于觀賞牡丹品種繁殖，且種苗大小、長勢等參差不齊，難以標準化或量化生產(chǎn)。牡丹無性繁殖存在的主要問題是：(1)外植體(鱗芽)表面消毒困難，需要用劇毒消毒劑氯化汞，其殘留對環(huán)境、操作者和培養(yǎng)材料等會有影響；(2)不定芽在培養(yǎng)基上容易褐化以至死亡；(3)試管苗生根困難，移栽馴化難以成活。小植株(生根試管苗)從實驗室環(huán)境過渡到適應(yīng)田間環(huán)境的過程中容易死亡。本領(lǐng)域技術(shù)人員致力于開發(fā)牡丹生根劑，能夠促進牡丹移栽后新根形成和生長，延長牡丹移栽的適宜期，滿足人們對栽種牡丹花的迫切需求。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于一種高效快速繁殖牡丹的方法。本發(fā)明第一方面，提供了一種高效快速繁殖牡丹的方法，包括步驟：(1)制備插穗：選取牡丹的一年生枝條，修剪成長度為5-15cm的插穗，將所述插穗的下端用55℃～65℃水浸泡30min～90min；(2)制備生根基質(zhì)：取以下組分：以重量份數(shù)計，枯草芽孢桿菌菌劑5～15、尿素3～5、四硼酸鈉0.2～0.4、磷酸二氫鉀0.5～1、硫酸錳0.03～0.05、鉬酸銨0.1～0.2、多效唑0.3～0.5、萘乙酸(NAA)0.02～0.04、吲哚丁酸(IBA)0.01～0.03，加入等重的水中，混合均勻得生根營養(yǎng)液；然后將生根營養(yǎng)液和棉籽粉以重量比為1:1～2比例混合，充分攪拌，使棉籽粉完全吸收生根營養(yǎng)液，制得所述生根基質(zhì)；(3)扦插：將步驟(1)經(jīng)浸泡處理的插穗，扦插于所述生根基質(zhì)中；和(4)培養(yǎng)：在環(huán)境溫度不低于20℃的條件下，培養(yǎng)20-30天后，獲得扦插成活的牡丹植株。優(yōu)選地，所述步驟(1)中，插穗的下端用58℃～60℃水浸泡40min～60min。優(yōu)選地，所述步驟(2)中，以重量份數(shù)計，枯草芽孢桿菌菌劑10、尿素4、四硼酸鈉0.3、磷酸二氫鉀0.8、硫酸錳0.04、鉬酸銨0.15、多效唑0.4、萘乙酸(NAA)0.03、吲哚丁酸(IBA)0.02，加入等重的水中，混合均勻得生根營養(yǎng)液。優(yōu)選地，所述步驟(2)中，將生根營養(yǎng)液和棉籽粉以重量比為1:1比例混合。優(yōu)選地，所述步驟(4)中，維持環(huán)境溫度為25-28℃，維持相對濕度為80-99％。優(yōu)選地，所述插穗的直徑為0.4-1.0cm，較佳地為0.5-0.8cm。優(yōu)選地，所述插穗的的長度為7-10cm。具體實施方式下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。除非另外說明，否則百分比和份數(shù)是重量百分比和重量份數(shù)。以下實施例中所用的實驗材料和試劑如無特別說明均可從市售渠道獲得。本發(fā)明采用的菌種如下：枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)CGMCCNo.7926，購自中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編100101。按照說明書上的常規(guī)方式培養(yǎng)。種子培養(yǎng)基配方為：20g葡萄糖、15g蛋白胨、5g氯化鈉、0.5g牛肉膏、1L水；發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：玉米粉12g、葡萄糖5g、豆餅粉20g、CaCO38g、(NH4)2SO41g、K2HPO40.3g、MgSO4·7H2O0.2g、1L水。所述菌株特性是產(chǎn)耐高溫α-淀粉酶的酶活力高，耐熱、耐酸性強。所述菌株特點如下：所述菌株在固體平板上菌落顏色為乳白色，表面干燥不透明，邊緣整齊，為具有運動性的好氧菌。鏡檢為長桿狀，革蘭氏染色呈陽性。該菌可利用檸檬酸鹽，硝酸還原、V-P實驗成陽性。實施例1制備枯草芽孢桿菌菌劑：將枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)CGMCCNo.7926的保藏菌種劃線轉(zhuǎn)接到活化斜面37℃恒溫靜置培養(yǎng)48h。接1環(huán)生長良好的活化斜面種子至種子培養(yǎng)基中，種子培養(yǎng)基為：20g葡萄糖、15g蛋白胨、5g氯化鈉、0.5g牛肉膏、1L水。于37℃、120r/min條件下培養(yǎng)24h。將活化后的種子接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為5％，液體發(fā)酵培養(yǎng)基為：玉米粉12g、葡萄糖5g、豆餅粉20g、CaCO38g、(NH4)2SO41g、K2HPO40.3g、MgSO4·7H2O0.2g、1L水。發(fā)酵枯草芽孢桿菌48h后，發(fā)酵液經(jīng)過板框過濾后進行干燥處理，干燥后的培養(yǎng)物即為枯草芽孢桿菌菌劑。牡丹(品種：洛陽紅)繁殖：(1)制備插穗：選取牡丹的一年生枝條，修剪成長度為10cm的插穗，插穗的直徑為0.8cm，將所述插穗的下端用60℃水浸泡60min；(2)制備生根基質(zhì)：取以下組分：枯草芽孢桿菌菌劑100kg、尿素40kg、四硼酸鈉3kg、磷酸二氫鉀8kg、硫酸錳0.4kg、鉬酸銨1.5kg、多效唑4kg、萘乙酸(NAA)0.3kg、吲哚丁酸(IBA)0.2kg混合，加入等重(157.4kg)的水中，混合均勻得生根營養(yǎng)液；然后將生根營養(yǎng)液和棉籽粉以重量比為1:1比例混合，充分攪拌，使棉籽粉完全吸收生根營養(yǎng)液，制得所述生根基質(zhì)；(3)扦插：將步驟(1)經(jīng)浸泡處理的插穗，扦插于所述生根基質(zhì)中；和(4)培養(yǎng)：在環(huán)境溫度不低于20℃、相對濕度為80-99％的條件下，培養(yǎng)25天后，獲得扦插成活的牡丹植株。優(yōu)選地，所述步驟(4)中，維持環(huán)境溫度為25-28℃，維持相對濕度為80-99％。對比例1同實施例1，不同之處在于，步驟(1)的插穗不用熱水浸泡。對比例2同實施例1，不同之處在于，不使用生根基質(zhì)扦插，使用大田土壤扦插。牡丹扦插繁殖結(jié)果如表1所示。表1組別插穗生根率平均不定根條數(shù)平均根長實施例192％38.66.2cm對比例163％14.83.8cm對比例246％26.45.7cm實驗結(jié)果表明，使用本發(fā)明的方法進行牡丹繁殖，插穗成活率極高，可以快速高效地繁殖牡丹。在插穗處理上，采用熱水浸泡的方式，不僅可以消毒消除病菌污染，有效的減少爛根現(xiàn)象的發(fā)生，還能促進生根(生根率較使用殺菌劑浸泡時提高了約20％)，配合本發(fā)明的生根基質(zhì)，插穗生根率可以達到90％以上，顯著提高了插穗成活率。使用棉籽粉制備的生根基質(zhì)，不僅能夠極好的保持營養(yǎng)，起到緩釋的作用，同時棉籽粉中的含有的棉籽酚能夠顯著提高扦插植株對病菌和害蟲的抵抗能力，提高扦插成功率。在本發(fā)明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。當前第1頁1 2 3