一種激素誘導(dǎo)快速繁殖蓖齒眼子菜工程苗的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種植物培育領(lǐng)域，尤其涉及一種激素誘導(dǎo)快速繁殖蓖齒眼子菜工程苗的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]目前湖泊污染嚴(yán)重，大多數(shù)水體呈現(xiàn)富營(yíng)養(yǎng)化，藍(lán)藻水華爆發(fā)，水體透明度明顯下降，對(duì)水生植被造成毀滅性的破壞。但沉水植物作為湖泊生態(tài)系統(tǒng)的初級(jí)生產(chǎn)者，在湖泊營(yíng)養(yǎng)鹽循環(huán)、藻類(lèi)抑制等方面發(fā)揮重要作用。因此湖泊水生植被恢復(fù)迫在眉睫。
[0003]蓖齒眼子菜是世界廣布種，生態(tài)幅較寬，在寡營(yíng)養(yǎng)至超富營(yíng)養(yǎng)水體中都能生長(zhǎng)，并在淡水和海水中均有生長(zhǎng)。因此蓖齒眼子菜能耐受較高的營(yíng)養(yǎng)鹽，同時(shí)對(duì)藍(lán)藻的耐受性也較強(qiáng)。蓖齒眼子菜能適應(yīng)各種各樣的水環(huán)境，因此適宜作為湖泊修復(fù)的關(guān)鍵物種。但蓖齒眼子菜的種子萌發(fā)性低，使其群落恢復(fù)存在一定的弊端，因此我們研宄了蓖齒眼子菜利用營(yíng)養(yǎng)體進(jìn)行快速繁殖的方法，可以在短期內(nèi)建立較大規(guī)模的群落，使其快速成為湖泊修復(fù)的重要種群。
[0004]蓖齒眼子菜又稱(chēng)龍須眼子菜，具有有性繁殖和無(wú)性繁殖兩種方式，其中有性繁殖方式的種子萌發(fā)率低，不到6%，因此無(wú)性繁殖成為蓖齒眼子菜的主要繁殖方式。無(wú)性繁殖主要通過(guò)斷株、根狀莖、塊莖、地上莖節(jié)等進(jìn)行繁殖。植物離體快速繁殖利用植物細(xì)胞的全能性對(duì)莖尖、嫩芽等組織，通過(guò)離體培養(yǎng)誘導(dǎo)生芽生根，從而形成新的植株。具有全年可繁殖，不受季節(jié)和氣候的限制。因此可以利用蓖齒眼子菜的莖進(jìn)行快速繁殖，生成更多的植株。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]發(fā)明目的:為了提高蓖齒眼子菜的繁殖速率，我們利用植物外植體快速繁殖方式，以蓖齒眼子菜的莖段作為研宄對(duì)象，采用激素誘導(dǎo)的方式促進(jìn)其快速生芽、生根。提供一種促進(jìn)蓖齒眼子菜快速繁殖的方法，有利于彌補(bǔ)其有性繁殖能力差的弊端。
[0006]為了達(dá)到上述目的，采用以下技術(shù)方案，本發(fā)明包括以下步驟:
[0007](I)植物體的消毒
[0008]采集生長(zhǎng)良好、健壯的蓖齒眼子菜植株，用清水清洗3?4遍，清除表面附著物，將葉子去除。然后對(duì)植物莖段消毒，先用75%的酒精浸泡5分鐘，然后用5%的次氯酸鈉溶液浸泡10分鐘，最后用無(wú)菌水沖洗4?5次，每次2?3分鐘，最后截取0.5?0.8cm帶節(jié)間的莖段。
[0009](2)誘導(dǎo)培養(yǎng)
[0010]將消毒后的植物莖段移入添加了 0.5?2mg/L的6-BA和0.lmg/L的IBA的MS培養(yǎng)基，設(shè)置20?25°C，光照強(qiáng)度2000?3000Lux，光照12h/d，培養(yǎng)10?15天，誘導(dǎo)生芽。
[0011]每升MS培養(yǎng)基含:硝酸銨1650mg，硝酸鉀1900mg，氯化鈣440mg，硫酸鎂370mg，磷酸二氫鉀170mg，碘化鉀0.83mg，硼酸6.2mg，硫酸鎂22.3mg，硫酸鋅8.6mg，鉬酸鈉0.25mg，硫酸銅0.025mg，氯化鈷0.025mg，硫酸亞鐵27.8mg，乙二胺四乙酸二鈉37.3mg，肌醇lOOmg，煙酸0.5mg，鹽酸P比卩多醇(維生素B6) 0.5mg，鹽酸硫胺素(維生素BI) 0.1mg,甘氨酸2.0mg0
[0012]⑶增殖培養(yǎng)
[0013]將經(jīng)步驟(2)得到的培養(yǎng)物接入分化與增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)20?25天，以獲得更多的蓖齒眼子菜的芽。分化與增殖培養(yǎng)基為每升MS培養(yǎng)基中加入1.0mg的6-BA和0.1mg/L 的 IBAo
[0014]⑷生根培養(yǎng)
[0015]將步驟(3)獲得的蓖齒眼子菜芽轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)液中誘導(dǎo)生根，培養(yǎng)10?15天即可得到蓖齒眼子菜苗，生根培養(yǎng)液為添加了 0.5?2mg/L的NAA和0.02mg/L的6-BA的霍格蘭營(yíng)養(yǎng)液。
[0016]霍格蘭營(yíng)養(yǎng)液的配方:
[0017]每升營(yíng)養(yǎng)液中含:四水硝酸媽945mg、硝酸錢(qián)80mg、磷酸二氫鉀136mg、硫酸鎂493mg，七水硫酸亞鐵2.78g，乙二胺四乙酸二鈉3.73g ;微量元素:碘化鉀0.00415mg，硼酸0.031mg，硫酸錳 0.1115mg，硫酸鋅 0.043mg，鉬酸鈉 0.00125mg，硫酸銅 0.000125mg，氯化鈷0.000125mgo
[0018](5)煉苗
[0019]將步驟(4)獲得的蓖齒眼子菜苗，轉(zhuǎn)接到育苗箱中自然條件下培養(yǎng)，待植株長(zhǎng)至20?30cm即可移栽到自然水體。
【具體實(shí)施方式】
[0020]通過(guò)激素誘導(dǎo)蓖齒眼子菜快速繁殖的方法，其具體實(shí)施措施如下:
[0021]從自然水體中采集生長(zhǎng)良好、健壯的蓖齒眼子菜植株。
[0022]然后用清水浸泡、清洗3?4遍，清除表面附著物，葉子去除后，用75%酒精和5%的次氯酸鈉對(duì)莖段進(jìn)行消毒處理，將莖段切成0.5?0.8cm帶節(jié)間的小段。
[0023]將上述莖段放入添加了 0.5?2mg/L的6_芐基腺嘌呤(6-BA)和0.lmg/L的吲哚丁酸(IBA)的MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)，控制溫度在20?25°C，光照2000?3000Lux，光照周期為12h/d，條件下培養(yǎng)10?15天，長(zhǎng)出新的芽；
[0024]待新生的芽長(zhǎng)到2cm，轉(zhuǎn)接到繼代增殖培養(yǎng)基中，繼代培養(yǎng)產(chǎn)生更多的芽；
[0025]將生芽的新株放入添加了 0.5?2mg/L萘乙酸(NAA)和0.02mg/L 6-芐基腺嘌呤(6-BA)的霍格蘭營(yíng)養(yǎng)液中培養(yǎng)15天左右，長(zhǎng)出新的根；
[0026]將生根生芽的新植株移入鋪有砂石的育苗箱中煉苗，當(dāng)蓖齒眼子菜植株高過(guò)30cm時(shí)向目標(biāo)水體移栽。
[0027]一種激素誘導(dǎo)快速繁殖蓖齒眼子菜工程苗的方法，包括如下步驟:
[0028](I)植物體的消毒
[0029]采集生長(zhǎng)良好、健壯的蓖齒眼子菜植株，用清水清洗3?4遍，清除表面附著物，將葉子去除；然后對(duì)植物莖段消毒，先用75%的酒精浸泡5分鐘，然后用5%的次氯酸鈉溶液浸泡10分鐘，最后用無(wú)菌水沖洗4?5次，每次2?3分鐘，最后截取0.5?0.8cm帶節(jié)間的莖段；
[0030](2)誘導(dǎo)培養(yǎng)
[0031]將消毒后的植物莖段移入添加了 0.5?2mg/L的6-BA和0.lmg/L的IBA的MS培養(yǎng)基，設(shè)置20?25°C，光照強(qiáng)度2000?3000Lux，光照12h/d，培養(yǎng)10?15天，誘導(dǎo)生芽；
[0032]每升MS培養(yǎng)基含:硝酸銨1650mg，硝酸鉀1900mg，氯化鈣440mg，硫酸鎂370mg，磷酸二氫鉀170mg，碘化鉀0.83mg，硼酸6.2mg，硫酸鎂22.3mg，硫酸鋅8.6mg，鉬酸鈉0.25mg，硫酸銅0.025mg，氯化鈷0.025mg，硫酸亞鐵27.8mg，乙二胺四乙酸二鈉37.3mg，肌醇lOOmg，煙酸0.5mg，鹽酸P比卩多醇(維生素B6) 0.5mg，鹽酸硫胺素(維生素BI) 0.1mg,甘氨酸2.0mg0
[0033](3)增殖培養(yǎng)
[0034]將經(jīng)步驟(2)得到的培養(yǎng)物接入分化與增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)20?25天，以獲得更多的蓖齒眼子菜的芽。分化與增殖培養(yǎng)基為每升MS培養(yǎng)基中加入1.0mg的6-BA和0.1mg/L 的 IBAo
[0035](4)生根培養(yǎng)
[0036]將步驟(3)獲得的蓖齒眼子菜芽轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)液中誘導(dǎo)生根，培養(yǎng)10?15天即可得到蓖齒眼子菜苗，生根培養(yǎng)液為添加了 0.5?2mg/L的NAA和0.02mg/L的6-BA的霍格蘭營(yíng)養(yǎng)液；
[0037]霍格蘭營(yíng)養(yǎng)液的配方:
[0038]每升營(yíng)養(yǎng)液中含:四水硝酸媽945mg、硝酸錢(qián)80mg、磷酸二氫鉀136mg、硫酸鎂493mg，七水硫酸亞鐵2.78g，乙二胺四乙酸二鈉3.73g ;微量元素:碘化鉀0.00415mg，硼酸0.031mg，硫酸錳 0.1115mg，硫酸鋅 0.043mg，鉬酸鈉 0.00125mg，硫酸銅 0.000125mg，氯化鈷0.000125mgo
[0039](5)煉苗
[0040]將步驟(4)獲得的蓖齒眼子菜苗，轉(zhuǎn)接到育苗箱中自然條件下培養(yǎng)，待植株長(zhǎng)至20?30cm即可移栽到自然水體。
[0041]所述的蓖齒眼子菜快速繁殖的方法，是生芽培養(yǎng)過(guò)程中添加0.5?2mg/L的6-BA和 0.lmg/L 的 IBAo
[0042]所述的蓖齒眼子菜快速繁殖的方法，生根培養(yǎng)過(guò)程中添加0.5?2mg/L的NAA和0.02mg/L 的 6-BA。
[0043]所述的蓖齒眼子菜快速繁殖方法，外植體的培養(yǎng)需要光照2000?3000Lux，光照周期為12h/d。
[0044]利用所培育的種苗應(yīng)用于水生植被種植和水體污染治理修復(fù)工程。
[0045]由此可見(jiàn)，實(shí)施本發(fā)明短期內(nèi)可以培育大量蓖齒眼子菜種苗。
[0046]以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非是對(duì)本發(fā)明作其它形式的限制，任何熟悉本專(zhuān)業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等效實(shí)施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何簡(jiǎn)單修改、等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種激素誘導(dǎo)快速繁殖蓖齒眼子菜工程苗的方法，其特征是，包括如下步驟: (1)植物體的消毒 采集生長(zhǎng)良好、健壯的蓖齒眼子菜植株，用清水清洗3?4遍，清除表面附著物，將葉子去除；然后對(duì)植物莖段消毒，先用75%的酒精浸泡5分鐘，然后用5%的次氯酸鈉溶液浸泡10分鐘，最后用無(wú)菌水沖洗4?5次，每次2?3分鐘，最后截取0.5?0.8cm帶節(jié)間的莖段； (2)誘導(dǎo)培養(yǎng) 將消毒后的植物莖段移入添加了 0.5?2mg/L的6-BA和0.lmg/L的IBA的MS培養(yǎng)基，設(shè)置20?25°C，光照強(qiáng)度2000?3000Lux，光照12h/d，培養(yǎng)10?15天，誘導(dǎo)生芽； 每升MS培養(yǎng)基含:硝酸銨1650mg，硝酸鉀1900mg，氯化鈣440mg，硫酸鎂370mg，磷酸二氫鉀170mg，碘化鉀0.83mg，硼酸6.2mg，硫酸鎂22.3mg，硫酸鋅8.6mg，鉬酸鈉0.25mg，硫酸銅0.025mg，氯化鈷0.025mg，硫酸亞鐵27.8mg，乙二胺四乙酸二鈉37.3mg，肌醇lOOmg，煙酸0.5mg，鹽酸P比卩多醇(維生素B6) 0.5mg，鹽酸硫胺素(維生素BI) 0.1mg,甘氨酸2.0mg0 (3)增殖培養(yǎng) 將經(jīng)步驟(2)得到的培養(yǎng)物接入分化與增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)20?25天，以獲得更多的蓖齒眼子菜的芽。分化與增殖培養(yǎng)基為每升MS培養(yǎng)基中加入1.0mg的6-BA和0.lmg/L的IBA0 (4)生根培養(yǎng) 將步驟(3)獲得的蓖齒眼子菜芽轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)液中誘導(dǎo)生根，培養(yǎng)10?15天即可得到蓖齒眼子菜苗，生根培養(yǎng)液為添加了 0.5?2mg/L的NAA和0.02mg/L的6-BA的霍格蘭營(yíng)養(yǎng)液； 霍格蘭營(yíng)養(yǎng)液的配方: 每升營(yíng)養(yǎng)液中含:四水硝酸I? 945mg、硝酸錢(qián)80mg、磷酸二氫鉀136mg、硫酸鎂493mg，七水硫酸亞鐵2.78g，乙二胺四乙酸二鈉3.73g ;微量元素:碘化鉀0.00415mg，硼酸0.031mg，硫酸錳 0.1115mg，硫酸鋅 0.043mg，鉬酸鈉 0.00125mg，硫酸銅 0.000125mg，氯化鈷0.000125mgo (5)煉苗 將步驟(4)獲得的蓖齒眼子菜苗，轉(zhuǎn)接到育苗箱中自然條件下培養(yǎng)，待植株長(zhǎng)至20?30cm即可移栽到自然水體。
2.如權(quán)利要求1所述的蓖齒眼子菜快速繁殖的方法，其特征是生芽培養(yǎng)過(guò)程中添加0.5 ?2mg/L 的 6-BA 和 0.lmg/L 的 IBA。
3.如權(quán)利要求1所述的蓖齒眼子菜快速繁殖的方法，其特征是生根培養(yǎng)過(guò)程中添加0.5 ?2mg/L 的 NAA 和 0.02mg/L 的 6-BA。
4.如權(quán)利要求1所述的蓖齒眼子菜快速繁殖方法，其特征是外植體的培養(yǎng)需要光照2000?3000Lux，光照周期為12h/d。
5.利用權(quán)利要求1所培育的種苗應(yīng)用于水生植被種植和水體污染治理修復(fù)工程。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了一種激素誘導(dǎo)快速繁殖蓖齒眼子菜工程苗的方法，主要包括以下步驟：(1)采集蓖齒眼子菜，用水洗去表面附著物后，用75％酒精和5％的次氯酸鈉對(duì)莖段進(jìn)行消毒處理；(2)培養(yǎng)基、培養(yǎng)液的配制和培養(yǎng)條件的設(shè)定；(3)新株的培育。將蓖齒眼子菜莖段在添加生長(zhǎng)素和分裂素的培養(yǎng)基或培養(yǎng)液中培養(yǎng)誘導(dǎo)生芽、生根，然后將誘導(dǎo)出根和芽的蓖齒眼子菜新株移入到育苗箱中煉苗。本發(fā)明操作簡(jiǎn)單，可以在短期內(nèi)繁殖大量蓖齒眼子菜種苗，解決蓖齒眼子菜繁殖率低的問(wèn)題，并且可以做到全年、可持續(xù)繁殖蓖齒眼子菜種苗。
【IPC分類(lèi)】A01H4-00
【公開(kāi)號(hào)】CN104705194
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510161551
【發(fā)明人】錢(qián)新, 吳紅飛, 高海龍, 張紅星, 呂志剛, 周乙新
【申請(qǐng)人】南京大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年6月17日
【申請(qǐng)日】2015年4月3日