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一種小松子組織培養(yǎng)再生體系構(gòu)建方法與流程

文檔序號(hào):11784374閱讀:來源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種小松子組織培養(yǎng)再生體系構(gòu)建方法,其特征在于包括以下步驟:

(1)種子消毒:選擇初期成熟茶尚存青的小松子果實(shí)放入中等濃度的洗衣粉水浸泡32min,洗凈后自來水沖洗2.5h,取出經(jīng)消毒的種子,在超凈工作臺(tái)中,剝開外種皮,先用75%乙醇消毒32s后用無菌水洗6次,再用0.1%升汞溶液消毒30min,用無菌水沖洗8次后備用;

(2)胚愈傷組織誘導(dǎo):將經(jīng)步驟(1)處理后未成熟種胚切成0.6cm×0.6cm×0.6cm接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上,先在29℃條件下全暗培養(yǎng)46天,然后每天光照15小時(shí),光照強(qiáng)度為3200lx,直至誘導(dǎo)形成胚性愈傷組織;

(3)分化培養(yǎng):將步驟(2)培養(yǎng)獲得的呈綠色的子葉愈傷組織轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基上進(jìn)行分化培養(yǎng),接種后先在29℃條件下全暗培養(yǎng)15天,然后每天光照18小時(shí),光照強(qiáng)度為5500lx,置于培養(yǎng)溫度為29℃的條件下培養(yǎng)直至形成叢生芽;

(4)生根培養(yǎng):將步驟(3)過程獲得的高度約為3.6cm的叢生芽分切接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng),接種后先在29℃條件下全暗培養(yǎng)15天,然后每天光照18小時(shí),光照強(qiáng)度為3200lx,培養(yǎng)溫度為29℃的條件下培養(yǎng)至生根;

(5)煉苗移栽:將步驟(4)獲得的高約9cm的生根試管苗去瓶蓋自然光照下煉苗8天后,將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出,洗掉根部培養(yǎng)基,栽入由泥炭土和黃沙泥混合成的基質(zhì)中并定植于大田中。

2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小松子組織培養(yǎng)再生體系構(gòu)建方法,其特征在于步驟(2)所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:ER+5-BA4mg/L+NAA0.6mg/L+GA36 mg/L+蔗糖32g/L+瓊脂3.2g/L,pH為5.9。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小松子組織培養(yǎng)再生體系構(gòu)建方法,其特征在于步驟(3)所述的分化培養(yǎng)基為:ER+5-BA6mg/L+IBA0.6mg/L+蔗糖32g/L+瓊脂6.5g/L,pH為5.9。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小松子組織培養(yǎng)再生體系構(gòu)建方法,其特征在于步驟(4)所述的生根培養(yǎng)基為:1/2MS+IBA1.0mg/L+GGR2.2mg/L+KT3.5mg/L+蔗糖32g/L+瓊脂3.0g/L,pH為5.9。

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