本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種胡椒科植物——豆瓣綠的組織培養(yǎng)快速繁殖的方法。

背景技術(shù)：

豆瓣綠(Peperomia magnolifolia)，別名柱香、巖豆瓣、豆瓣草、豆瓣如意、四瓣金釵、指甲草、豆瓣打不死、圓葉椒草、青葉碧玉，是胡椒科草胡椒屬，多年生常綠草本植物。高10-30cm。莖肉質(zhì)，基部匍匐，多分枝，下部數(shù)節(jié)常生不定根，節(jié)間有粗縱棱。葉密集，3-4片輪生，大小近相等；葉柄短長1-2mm，無毛或被短柔毛；葉片橢圓形或近圓形，長9-12cm，寬5-9cm，兩端鈍或圓，無毛或幼葉被疏柔毛，葉脈3條，細弱，通常不明顯；葉帶肉質(zhì)，有透明腺點，干時變淡黃色，并顯皺紋。穗狀花序單生、頂生或腋生，長2-4.5cm；總花梗稍較花序軸短細，被疏毛或近無毛，而花序軸密被毛；苞片近圓形，有短柄，盾狀；花小，兩性，無花被，與苞片同生于花序軸凹陷處；雄蕊2，花絲短，花藥近橢圓形；子房卵形，1室，柱頭頂生，近頭狀，被短柔毛。漿果卵狀球形，先端尖，長近1mm/花期2-4月及9-10月。

豆瓣綠原產(chǎn)于西印度群島、巴拿馬、南美洲北部，后來傳入中國，一般作為盆栽裝飾用，以其明亮的光澤和自然地綠色受到廣泛歡迎。而且該植物還可以藥用，根據(jù)中醫(yī)藥理，其內(nèi)用可以祛風(fēng)除濕，止咳祛痰。外用可以治跌打損傷，骨折，所以其也是中草藥的重要一部分。

青葉碧玉(即豆瓣綠)具有較高的園林觀賞價值和藥用價值。作為小型盆栽。常用白色塑料盆、白瓷盆栽培，置于茶幾、裝飾柜、博古架、辦公桌上，十分美麗。或任枝條蔓延垂下，懸吊于室內(nèi)窗前或浴室處，也極清新悅目。功效應(yīng)用：對甲醛，二甲苯，二手煙有一定的凈化作用。

在《全國中草藥匯編》中記載豆瓣綠全草入藥。全年可采，鮮用或曬干。【主治】祛風(fēng)除濕，止咳祛痰，活血止痛。用于風(fēng)濕筋骨疼痛，肺結(jié)核，支氣管炎，哮喘，百日咳，肺膿瘍，小兒疳積，痛經(jīng)；外用治跌打損傷，骨折?！吨参锩麑崍D考》：治跌打。在《貴州草藥》中記載可止咳，健脾?！对颇现胁菟帯分杏涊d可清熱解毒，舒筋活絡(luò)。

傳統(tǒng)的分株和扦插繁殖法，周期長，繁殖系數(shù)低，每年只能增殖1～3倍，，而且不能獲得品質(zhì)一致的種苗，極大地限制了豆瓣綠作為園林綠化植物、藥用植物方面的應(yīng)用。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明的第一目的在于提供一種豆瓣綠的組織培養(yǎng)快速繁殖的方法，包括以下步驟：

(1)外植體的建立；

(2)叢生芽誘導(dǎo)階段；

(3)增殖培養(yǎng)階段：

(4)壯苗生根階段；

(5)練苗及移栽。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述豆瓣綠的組織培養(yǎng)快速繁殖的方法中，所述步驟(1)外植體的建立為選取生長健壯的豆瓣綠母株；更優(yōu)選地，所述外植體的建立為采用生長健壯的豆瓣綠母株的葉片作為外植體。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述豆瓣綠的組織培養(yǎng)快速繁殖的方法中，所述步驟(2)叢生芽誘導(dǎo)階段：為將所述豆瓣綠母株的葉片，消毒后將芽莖段接種到MS附加培養(yǎng)基后，30天左右誘導(dǎo)生出小芽；優(yōu)選地，所述消毒方法為用70％的酒精浸泡10～20秒，置于0.1％的氯化汞溶液中消毒5～7分種，無菌水沖洗4～5次。

更優(yōu)選地，本發(fā)明所述豆瓣綠的組織培養(yǎng)快速繁殖的方法中，所述步驟(2)叢生芽誘導(dǎo)階段的所述MS附加培養(yǎng)基中添加了噻苯隆(TDZ)0.1mg/l～0.5mg/l及α-奈乙酸(NAA)0.1mg/l～0.5mg/l；

最優(yōu)選地，步驟(2)叢生芽誘導(dǎo)階段的所述MS附加培養(yǎng)基中添加了噻苯隆(TDZ)0.5mg/l及α-奈乙酸(NAA)0.1mg/l。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述豆瓣綠的組織培養(yǎng)快速繁殖的方法中，其特征在于，所述步驟(3)為利用步驟(2)誘導(dǎo)出的小芽接種在MS附加培養(yǎng)基中培養(yǎng)45～60天，形成芽的叢生植株。更優(yōu)選地，所述MS附加培養(yǎng)基中添加了6-芐基氨基嘌呤(6-BA)0.6mg/l～1.0mg/l及α-奈乙酸(NAA)0.3mg/l～0.5mg/l。最優(yōu)選地，所述MS附加培養(yǎng)基中添加了6-芐基氨基嘌呤(6-BA)0.6mg/l及α-奈乙酸(NAA)0.3mg/l。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述豆瓣綠的組織培養(yǎng)快速繁殖的方法中，所述步驟(4)為將所述步驟(3)的芽的叢生植株，接種到添加MS附加培養(yǎng)基上，培養(yǎng)20天后長成具2～3條根、3～6片葉的完整植株。更優(yōu)選地，所述MS附加培養(yǎng)基中添加了吲哚乙酸(IBA)0.1mg/l～0.3mg/l及α-奈乙酸(NAA)0.1mg/l～0.5mg/l；最優(yōu)選地，所述MS附加培養(yǎng)基中添加了吲哚乙酸(IBA)0.3mg/l及α-奈乙酸(NAA)0.1mg/l。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述豆瓣綠的組織培養(yǎng)快速繁殖的方法中，所述步驟(5)為當(dāng)所述步驟(4)的完整豆瓣綠植株的試管苗長至2～4厘米時，移栽前在溫室中自然光照下煉苗7～10天左右，然后將其從玻璃瓶中取出，洗凈根部附著的培養(yǎng)基，移入用0.01％的高錳酸鉀消毒的腐殖土基質(zhì)中。溫室保持15～25℃的溫度、60％以上的濕度、70～80％的遮陰并通風(fēng)，即可正常生長豆瓣綠的種苗。

本發(fā)明的另一目的在于提供上述方法獲得的豆瓣綠種苗。

由上可知，本發(fā)明通過在專門配制的培養(yǎng)基上，通過葉片作為外植體，經(jīng)過誘導(dǎo)分化、增殖培養(yǎng)、壯苗生根和試管苗移栽等繁殖步驟，獲得豆瓣綠完整植物，利用分化的小苗進行增殖，在短時間內(nèi)獲得大量整齊一致的試管苗，通過壯苗生根培養(yǎng)能形成完整植株。通過發(fā)明人的努力，完成了豆瓣綠組培快繁方法的研究工作。，該方法與該方法獲得種苗至少具有以下優(yōu)點：

1)本發(fā)明的方法，采用組培快繁技術(shù)通常有利于解決其繁殖困難和種苗的不足，并在短期內(nèi)提供大量種苗，以保護園林綠化植物的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展，為豆瓣綠的有效保護、產(chǎn)業(yè)開發(fā)，優(yōu)良品種的培育及種源基地培育建設(shè)提供技術(shù)支撐。

2)通過青豆瓣綠組培快繁技術(shù)研究，可大大提高種苗的繁殖系數(shù)，獲得品相高度一致的種苗，便于大規(guī)模的工廠化培育，在今后豆瓣綠的種苗繁育及藥用開發(fā)利用方面具有十分重要的意義。

具體實施方式

以下實施例被引入以例舉說明本發(fā)明的具體實施方案。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，在接下來的所述實施例中公開的技術(shù)表示了由本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)的技術(shù)，其在本發(fā)明的實踐中作用良好。但是，通過參考本公開內(nèi)容，本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，在不背離本發(fā)明精神及范圍下，可以對公開的具體實施方案作很多變化，并且仍然得到相同或相似的結(jié)果。

實施例1青葉碧玉的組培快繁方法

青葉碧玉的組培快繁，包括以下步驟：

(1)外植體的建立：

選取生長健壯的豆瓣綠母株，采用葉片作為外植體。

(2)叢生芽誘導(dǎo)階段：

選用生長健壯的葉片用70％的酒精浸泡10～20秒，置于0.1％的氯化汞溶液中消毒5～7分種，無菌水沖洗4～5次，用鑷子將帶芽莖段接種到MS附加噻苯隆(TDZ)0.5mg/l及α-奈乙酸(NAA)0.1mg/l的培養(yǎng)基上，30天左右誘導(dǎo)出小芽。

(3)增殖培養(yǎng)階段：

為獲得更多的種苗，利用誘導(dǎo)出的小芽接種在MS附加6-芐基氨基嘌呤(6-BA)0.6mg/l及α-奈乙酸(NAA)0.3mg/l培養(yǎng)基上，經(jīng)45～60天培養(yǎng)，形成芽的叢生植株。

(4)壯苗生根階段：

將長成的叢生植株分開，接種到添加吲哚乙酸(IBA)0.3mg/l及α-奈乙酸(NAA)0.1mg/l培養(yǎng)基上培養(yǎng)，20天后長成具2～3條根、3～6片葉的完整植株。

(5)練苗及移栽：

當(dāng)豆瓣綠試管苗長至2～4厘米時，移栽前在溫室中自然光照下煉苗7～10天左右，然后將其從玻璃瓶中取出，洗凈根部附著的培養(yǎng)基，移入用0.01％的高錳酸鉀消毒的腐殖土基質(zhì)中。溫室保持15～25℃的溫度、60％以上的濕度、70～80％的遮陰并通風(fēng)，豆瓣綠即可正常生長，種苗的移栽成活率可達85％～90％以上。通常每7天噴施0.1％的磷酸二氫鉀，薄肥勤施，加強病蟲害管護措施即可完成豆瓣綠種苗的組培快繁過程建設(shè)。

經(jīng)過培養(yǎng)試驗，結(jié)果表明：組培快繁獲得的豆瓣綠種苗增殖系數(shù)高，繁殖速度快，不受季節(jié)限制，能在短期內(nèi)獲得品質(zhì)一致的苗木。嫁接成活率可達到95％以上，生產(chǎn)成本降低40％以上。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。