本發(fā)明涉及一種育苗方法，具體涉及蘋果砧木M26的組培快速育苗方法，屬于植物育苗
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：蘋果產(chǎn)業(yè)是我國農(nóng)業(yè)的優(yōu)勢產(chǎn)業(yè)，在我國農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)中占有非常重要的地位。2014年我國蘋果種植面積2272.20千公頃，產(chǎn)量為4092.32萬噸，面積和產(chǎn)量均居世界第一。但是，與美國、歐洲等世界蘋果先進(jìn)生產(chǎn)國家相比，我國的蘋果生產(chǎn)還存在較大差距，主要表現(xiàn)為單位面積產(chǎn)量低、果品質(zhì)量差、經(jīng)濟(jì)效益不高、在國際鮮果市場上占有的份額少，與我國蘋果生產(chǎn)大國的地位極不相稱，其中蘋果苗木質(zhì)量差是造成這種局面的重要原因之一。苗木是蘋果生產(chǎn)栽培的基礎(chǔ)，苗木的質(zhì)量直接影響著蘋果樹體的生長、開花、結(jié)果以及抗逆性、抗病能力和壽命。我國目前大部分果園采用的是喬化砧苗木栽植模式，樹體高大，開始結(jié)果較晚，盛果期果園容易郁閉，病蟲害較重。另外，砧木是用種子繁殖的實(shí)生苗，其后代性狀分離嚴(yán)重，因此，導(dǎo)致喬華砧苗木長勢差異較大，建園時即使挑選相對一致的苗木建園，其長勢在幾年后仍會產(chǎn)生較大差異，園相不整齊，給生產(chǎn)管理帶來很大難度。矮化砧木具有早果、豐產(chǎn)、樹體高度適中等諸多優(yōu)點(diǎn)，并且矮化自根砧苗木的砧木一般采用組培、壓條等無性繁殖方式，苗木整齊度高，長勢好，因此，歐美蘋果生產(chǎn)發(fā)達(dá)國家廣泛采用矮化自根砧苗建立果園，園貌整齊，結(jié)果早，產(chǎn)量高，品質(zhì)好，取得了良好效果。今后一段時期是我國蘋果大規(guī)模更新?lián)Q代的關(guān)鍵時期，如何從苗木方面提供支持和保障便成為一個值得高度重視的問題。目前，我國矮化蘋果苗木市場供不應(yīng)求，限制苗木產(chǎn)業(yè)發(fā)展的關(guān)鍵在于一方面缺乏適應(yīng)性廣的優(yōu)良矮化砧木，另一方面對現(xiàn)有矮化砧木繁育技術(shù)尚未取得突破。蘋果矮化砧木M26是我國目前應(yīng)用最廣泛的矮化砧木，具有矮化、早果、豐產(chǎn)、抗性強(qiáng)、適應(yīng)性較廣等諸多優(yōu)點(diǎn)。由于其扦插育苗難以生根，壓條繁育自根砧木則耗時長，占地較多，出苗慢，因此，為盡快在生產(chǎn)上推廣應(yīng)用，我國主要是以中間砧的形式對其加以利用，矮化中間砧苗木也具有較好的矮化和早結(jié)果的作用，但是由于其和喬化砧一樣，中間砧蘋果樹由于是用海棠等實(shí)生種子繁殖苗做基砧，實(shí)生苗由于其后代性狀分離嚴(yán)重，因此，導(dǎo)致中間砧苗木長勢差異較大，即使挑選相對一致的苗木建園，其長勢在幾年后仍會產(chǎn)生較大差異，園相不整齊，給生產(chǎn)管理帶來一定難度。另外，中間砧段嫁接長度很難保持一致，果農(nóng)把握不好栽植的深淺，常常造成樹勢過旺或過弱等問題。矮化自根砧嫁接苗繁育過程中不用實(shí)生種子播種，因此，苗木整齊度、建園后的整齊度都相對較好，并且長勢也優(yōu)于中間砧苗木，然而由于前述原因，M26自根砧苗木繁育主要通過壓條繁育的，目前在推廣應(yīng)用上存在諸多問題，例如，壓條繁育需要有一定的土地做苗圃，每年只能繁育一次，出苗量小，耗時較長。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種蘋果砧木M26的組培快速育苗方法，該方法可快速繁育無毒自根砧木苗，成苗率和移栽成活率均極高，可以短時間內(nèi)大量成苗并控制成本，從而為M26自根砧苗的普及應(yīng)用打下良好的基礎(chǔ)。為了實(shí)現(xiàn)上述目標(biāo)，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：一種蘋果砧木M26的組培快速育苗方法，其特征在于，包括以下步驟：Step1、初代培養(yǎng)：以蘋果砧木M26為材料，選擇生長健壯無病蟲害的母樹，于3月份取1年生枝條，放置25℃的溫室內(nèi)進(jìn)行水培，每升水含有30g蔗糖，每隔3d換一次水并剪掉舊剪口，當(dāng)水培的一年生枝條上的芽抽生為1.5cm～2.0cm時，剪取嫩芽，去除展開葉片，在自來水下沖洗6h～8h，然后用75％酒精處理8s，再用0.1％升汞處理7min，進(jìn)行消毒處理后，用超聲波清洗機(jī)清洗3min，再用無菌水沖洗3次～4次，將處理好的嫩芽接種到初代培養(yǎng)基中，前述初代培養(yǎng)基的配方為：MS+6BA0.3mg/L+NAA0.03mg/L+蔗糖40g/L+瓊脂8g/L，pH＝5.8，每個三角瓶接3個嫩芽，然后放置在25℃條件下進(jìn)行光培養(yǎng)，光照強(qiáng)度2000lux，光周期16h光照/8h黑暗，培養(yǎng)14d；Step2、繼代培養(yǎng)：將獲得的無菌體接種到繼代培養(yǎng)基中，前述繼代培養(yǎng)基的配方為：MS+6BA0.2g/L+IBA0.5g/L+蔗糖40g/L+瓊脂8g/L，pH＝5.8，每個三角瓶接3株無菌體，然后放置在25℃條件下進(jìn)行光培養(yǎng)，光照強(qiáng)度2000lux，光周期12h光照/12h黑暗，培養(yǎng)20d；Step3、生根培養(yǎng)：選擇繼代培養(yǎng)獲得的生長健壯、高度大于4.0cm的芽苗，接種于生根培養(yǎng)基中，前述生根培養(yǎng)基的配方為：1/2MS+IBA0.3mg/L+IAA0.6mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂8g/L，pH＝5.8，每個三角瓶接種3個芽苗，然后放置在25℃條件下進(jìn)行光培養(yǎng)，光照強(qiáng)度2000lux，光周期14h光照/10h黑暗，直至組培苗根長度達(dá)到2cm；Step4、煉苗移栽：當(dāng)組培苗根長度達(dá)到2cm后，移到室外遮陰煉苗10d～12d，然后將培養(yǎng)容器瓶口打開，自然光下進(jìn)行開瓶煉苗2d～4d，然后將生根苗從培養(yǎng)基中取出，放入濃度為0.1％多菌靈溶液中浸泡5min，并把根部多余的培養(yǎng)基清洗干凈，最后用清水沖洗2次～3次，然后移栽到容量相同的營養(yǎng)缽中，前述營養(yǎng)缽中裝有純鋸末；Step5：按照Step2、Step3和Step4的記載，重復(fù)的對蘋果砧木M26品種進(jìn)行繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和煉苗移栽。前述的蘋果砧木M26的組培快速育苗方法，其特征在于，在Step4中，移栽苗的管理方式為：將生根苗在遮陰網(wǎng)下進(jìn)行管理，第一周采用濃度為0.1％多菌靈溶液進(jìn)行噴灌，第二周每天用水噴灌一次，保持基質(zhì)濕潤透氣，培養(yǎng)14d。本發(fā)明的有益之處在于：(1)本發(fā)明的快速育苗方法以蘋果砧木M26的新梢為材料，通過組織培養(yǎng)的方式，可快速繁育無毒自根砧木苗，成苗率(95％以上)和移栽成活率(90％以上)均極高，可以短時間內(nèi)大量成苗并控制成本，從而為蘋果砧木M26自根砧苗的普及應(yīng)用打好了基礎(chǔ)；(2)可以在全年任何時候進(jìn)行自根砧苗木繁育，打破了每年只能繁育一次的限制；(3)通過對無菌體進(jìn)行脫毒處理，從源頭上保證了苗木的無毒性，苗木長勢更好，應(yīng)用前景廣闊。具體實(shí)施方式以下結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作具體的介紹。Step1：初代培養(yǎng)以蘋果砧木M26為材料，選擇生長健壯無病蟲害的母樹，于3月份取1年生枝條，放置25℃的溫室內(nèi)進(jìn)行水培(每升水含有30g蔗糖)，每隔3d換一次水并剪掉舊剪口，當(dāng)水培的一年生枝條上的芽抽生為1.5cm～2.0cm時，剪取嫩芽，去除展開葉片，在自來水下沖洗6h～8h，然后用75％酒精處理8s，再用0.1％升汞處理7min，進(jìn)行消毒處理后，用超聲波清洗機(jī)清洗3min，再用無菌水沖洗3次～4次，將處理好的嫩芽接種到激素濃度不同的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，每個激素濃度處理的培養(yǎng)基灌裝15個三角瓶，每個三角瓶接3個嫩芽，然后放置在25℃條件下進(jìn)行光培養(yǎng)，光照強(qiáng)度2000lux，光周期16h光照/8h黑暗，14d后分別調(diào)查污染率、褐化率、成活率。調(diào)查結(jié)果如下：通過觀察上述調(diào)查結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)：在第2組培養(yǎng)基培養(yǎng)下的嫩芽污染率和褐化率均較低、成活率較高，所以我們最終確定第2組培養(yǎng)基為蘋果砧木M26的最適宜的初代培養(yǎng)基，即：MS+6BA0.3mg/L+NAA0.03mg/L+蔗糖40g/L+瓊脂8g/L，pH＝5.8。在第2組培養(yǎng)基培養(yǎng)下的嫩芽，其污染率僅為11.23％、褐化率僅為47.39％，成活率高達(dá)41.38％，這十分有利于蘋果砧木M26組培苗無菌體系的建立。Step2：繼代培養(yǎng)將獲得的無菌體接種到含有不同濃度6-BA和IBA配比的培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)，每升培養(yǎng)基中加40g蔗糖和8g瓊脂，每個濃度配比的培養(yǎng)基灌裝10個三角瓶，每個三角瓶接3株無菌體，重復(fù)3次。然后放置在25℃條件下進(jìn)行光培養(yǎng)，光照強(qiáng)度2000lux，光周期12h光照/12h黑暗，20d后調(diào)查苗的高度、擴(kuò)繁系數(shù)、葉片數(shù)量。調(diào)查結(jié)果如下：通過觀察上述調(diào)查結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)：在第3組培養(yǎng)基培養(yǎng)下的無菌體高度較高且均勻、擴(kuò)繁系數(shù)較大、葉片數(shù)量較多，所以我們最終確定第3組培養(yǎng)基為蘋果砧木M26的最優(yōu)的繼代培養(yǎng)基，即：MS+6BA0.2g/L+IBA0.5g/L+蔗糖40g/L+瓊脂8g/L，pH＝5.8。在第3組培養(yǎng)基培養(yǎng)下的無菌體，其苗平均高度為4.36cm、擴(kuò)繁系數(shù)高達(dá)5.46、葉片數(shù)量為5.23片，這十分有利于蘋果砧木M26快速繁殖。Step3：生根培養(yǎng)選擇繼代培養(yǎng)獲得的生長健壯、高度大于4.0cm、生長時間為20天的芽苗，接種于1/2MS+不同濃度IBA(0.3mg/L、0.4mg/L、)+不同濃度IAA(0.5mg/L、0.6mg/L)處理的生根培養(yǎng)中進(jìn)行生根培養(yǎng)，每個濃度配比的培養(yǎng)基灌裝10個三角瓶，每個三角瓶接種3個芽苗，重復(fù)3次。然后放置在25℃條件下進(jìn)行光培養(yǎng)，光照強(qiáng)度2000lux，光周期14h光照/10h黑暗，25d后調(diào)查成苗率、生根率、根長。調(diào)查結(jié)果如下：通過對比上述調(diào)查結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)：在第2組培養(yǎng)基培養(yǎng)下的芽苗成苗率和生根率均較高，根的長度也適宜，所以我們最終確定第2組培養(yǎng)基為蘋果砧木M26的最適宜的生根培養(yǎng)基，即：1/2MS+IBA0.3mg/L+IAA0.6mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂8g/L，pH＝5.8。在第2組培養(yǎng)基培養(yǎng)下的芽苗，其成苗率高達(dá)95.48％、生根率高達(dá)95.03％，根長平均達(dá)到2cm以上，這十分有利于蘋果砧木M26的快速繁殖。Step4：煉苗移栽當(dāng)組培苗根的長度達(dá)到2cm后(大概的培養(yǎng)時間是25d)，移到室外遮陰煉苗10d～12d，然后將培養(yǎng)容器瓶口打開，自然光下進(jìn)行開瓶煉苗2d～4d，然后將生根苗從培養(yǎng)基中取出，放入濃度為0.1％多菌靈溶液中浸泡5min，并把根部多余的培養(yǎng)基清洗干凈，最后用清水沖洗2次～3次，然后移栽到容量相同的不同基質(zhì)處理(純鋸末、鋸末+基質(zhì)、純基質(zhì)、基質(zhì)+珍珠巖)的營養(yǎng)缽中。移栽苗的管理方式為：將生根苗在遮陰網(wǎng)下進(jìn)行管理，第一周采用濃度為0.1％多菌靈溶液進(jìn)行噴灌，第二周每天用水噴灌一次，保持基質(zhì)濕潤透氣。于14d后統(tǒng)計煉苗移栽成活率、苗高、葉片數(shù)、根長等。統(tǒng)計結(jié)果如下：組號營養(yǎng)缽內(nèi)物質(zhì)移栽成活率苗高葉片數(shù)根長1純鋸末90.35％21.36cm18.43片8.37cm2鋸末+基質(zhì)86.21％13.63cm12.78片5.69cm3純基質(zhì)65.18％9.45cm7.36片5.16cm4基質(zhì)+珍珠巖73.29％11.53cm9.47片5.78cm通過觀察上述統(tǒng)計結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)：在第1組物質(zhì)培養(yǎng)下的組培苗移栽成活率較高、苗高度較高、葉片數(shù)量多、根系較長，所以我們最終確定第1組物質(zhì)為蘋果砧木M26的最適宜的煉苗物質(zhì)，即：使用純鋸末進(jìn)行煉苗時，煉苗移栽成活率高達(dá)90％，煉苗移栽效果最好。在第1組物質(zhì)培養(yǎng)下的組培苗，其移栽成活率高達(dá)90.35％、苗高達(dá)20cm以上、葉片數(shù)18片以上、根長達(dá)8.37cm，這十分有利于蘋果砧木M26向大田的移栽。Step5：重復(fù)繼代培養(yǎng)-生根培養(yǎng)-煉苗移栽按照Step2、Step3和Step4的記載，重復(fù)的對蘋果砧木M26品種進(jìn)行繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和煉苗移栽，這樣就能夠在較短的時間內(nèi)實(shí)現(xiàn)蘋果砧木M26無病毒苗木的快繁生產(chǎn)。由此可見，本發(fā)明的快速育苗方法具有以下特點(diǎn)和優(yōu)勢：1、能夠在短時間內(nèi)大量成苗由于繁殖是在室內(nèi)進(jìn)行，不受外界溫度、濕度、光照等自然條件的影響，按照正常生產(chǎn)，扣除啟動14d、生根培養(yǎng)25d、煉苗12d、移栽14d，一株成功啟動的小芽一年可繁殖出50萬株以上馴化苗，所以本發(fā)明的方法能夠在短時間內(nèi)大量成苗，并且最快的成苗時間是85d。2、成苗率極高本發(fā)明的方法是經(jīng)過十余年不斷的探索、反復(fù)實(shí)踐總結(jié)而成的，尤其是最終確定的生根配方(1/2MS+IBA0.3mg/L+IAA0.6mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂8g/L)，使得成苗率達(dá)到了95％以上，成苗率極高。3、移栽成活率極高在組培生根階段其成苗率高達(dá)95.48％、生根率高達(dá)95.03％、根長平均達(dá)到2cm以上，這十分有利于蘋果砧木M26的馴化移栽。再在移栽時采用鋸末做基質(zhì)，其移栽成活率高達(dá)90％以上、苗高達(dá)20cm以上、葉片數(shù)18片以上、根長達(dá)8.37cm，這大大提高了蘋果砧木M26向大田移栽的成活率，移栽成活率高達(dá)90％以上。4、保留了蘋果砧木M26的優(yōu)良特性組培初代啟動時，選擇的外植體是健壯無病蟲害、性狀最能表現(xiàn)M26特性的材料，且在組培繼代過程中通過熱處理還可以脫除其感染的病毒，進(jìn)行品種復(fù)壯，所以采用本發(fā)明的方法生產(chǎn)的M26組培苗保留了蘋果砧木M26的優(yōu)良特性。5、成本可控且較低假如按照年產(chǎn)50萬株M26馴化苗計算，試劑藥品4萬元、用工10萬元、水電費(fèi)8萬元、培養(yǎng)容器5萬元、栽培基質(zhì)3萬元、組培室及溫室租金10萬元、其他3萬元，每株成本0.86元，如果生產(chǎn)量大，成本還可以降低，所以采用本發(fā)明的方法生產(chǎn)M26自根砧脫毒苗成本可控且較低。綜上所述，本發(fā)明通過組織培養(yǎng)技術(shù)不僅能夠在短時間內(nèi)大量成苗，而且保證了蘋果砧木M26較高的成苗率和成活率，同時也保留了蘋果砧木M26的優(yōu)良特性，為蘋果產(chǎn)業(yè)的發(fā)展和進(jìn)一步擴(kuò)大提供了便捷的方法和途徑。需要說明的是，上述實(shí)施例不以任何形式限制本發(fā)明，凡采用等同替換或等效變換的方式所獲得的技術(shù)方案，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁1 2 3