本發(fā)明涉及一種藍(lán)莓組培苗生根的培養(yǎng)基及使用該培養(yǎng)基的培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)：

藍(lán)莓營(yíng)養(yǎng)價(jià)值極高，富含多種維生素(例如VA、VB、VC、VE等)以及各種礦質(zhì)元素(例如K、Fe、Zn、Ca等)、蛋白質(zhì)、食用纖維、抗氧化劑、細(xì)菌生長(zhǎng)抑制劑、鞣花酸、鞣花單寧、葉酸、花色素苷、類黃酮等化合物，具有提高免疫力、明目抗癌、改善循環(huán)、軟化血管、延緩神經(jīng)老化、緩解眼部疲勞、防衰抗突變等獨(dú)特功效，被譽(yù)為“21

世紀(jì)功能性保健漿果”和“水果皇后”，并被國(guó)際糧農(nóng)組織列為人類五大健康食品之一。伴隨著人們對(duì)其營(yíng)養(yǎng)保健功效認(rèn)識(shí)的不斷加深，藍(lán)莓產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速，苗木需求量迅速擴(kuò)大。組織培養(yǎng)具有高效和保存親本優(yōu)良性狀等優(yōu)點(diǎn)，適合藍(lán)莓優(yōu)良品種規(guī)模繁育，近年來藍(lán)莓組培育苗技術(shù)有了不少的進(jìn)展，但現(xiàn)有報(bào)道文獻(xiàn)中，藍(lán)莓組培多采用瓶外生根法，不僅存在生根率較低，生根時(shí)間長(zhǎng)等問題，也影響了育苗效率。

因此，對(duì)于目前藍(lán)莓組培苗生根的培養(yǎng)方法，有待于做進(jìn)一步的改進(jìn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的現(xiàn)狀，提供一種針對(duì)性強(qiáng)、適用性好的藍(lán)莓組培苗生根的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基能有效提高藍(lán)莓的生根率、縮短生根時(shí)間。

本發(fā)明所要解決的另一個(gè)技術(shù)問題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的現(xiàn)狀，提供一種使用上述培養(yǎng)基的藍(lán)莓組培苗生根的培養(yǎng)方法，該方法生根時(shí)間短、生根率高。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：一種藍(lán)莓組培苗生根的培養(yǎng)基，其特征在于：包括營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ、支持物Ⅰ及激素，其中，所述的營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ采用蒸餾水配制，該營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ包含以下組分及含量：

(NH₄)₂SO₄ 375～385mg/L、K₂SO₄ 445～455mg/L、KH₂PO₄ 165～175mg/L、Ca(NO₃)₂.4H₂O 145～155mg/L、MgSO₄.7H₂O 175～185mg/L、FeSO₄·7H₂O 27～28mg/L、EDTA·Na₂ 37～38mg/L、ZnSO₄·7H₂O 4～4.5mg/L、MnSO₄·H₂O 8～9mg/L、CuSO₄.5H₂O 0.05～0.15mg/L、Na₂MoO₄.2H₂O 0.05～0.1mg/L、H₃BO₃ 6～6.5mg/L、VB₁0.5～1.5mg/L、VB₆ 0.2～0.6mg/L、V_C0.1～0.3mg/L、白糖18～22g/L；

所述的支持物Ⅰ為珍珠巖和瓊脂，所述珍珠巖在上述營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ中的含量為55～65g/L，所述瓊脂在上述營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ中的含量為3～4g/L；

所述的激素為IBA，該激素在營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ中的含量為0.05～0.5mg/L。

在上述方案中，所述營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ的pH值為5.2～5.5。

作為優(yōu)選，所述營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ包含的組分及含量為(NH₄)₂SO₄ 380mg/L、K₂SO₄ 450mg/L、KH₂PO₄ 170mg/L、Ca(NO₃)₂.4H₂O 150mg/L、MgSO₄.7H₂O 180mg/L、FeSO₄·7H₂O 27.8mg/L、EDTA·Na₂ 37.3mg/L、ZnSO₄·7H₂O 4.3mg/L、MnSO₄·H₂O 8.5mg/L、CuSO₄.5H₂O 0.1mg/L、Na₂MoO₄.2H₂O 0.1mg/L、H₃BO₃ 6.2mg/L、VB₁1.0mg/L、VB₆ 0.5mg/L、V_C0.2mg/L、白糖20g/L。

優(yōu)選地，所述珍珠巖在營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ中的含量為60g/L，所述瓊脂在營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ中的含量為3.5g/L。

一種使用上述培養(yǎng)基的藍(lán)莓組培苗生根的培養(yǎng)方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)組培苗的培植

在增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)藍(lán)莓組培苗；

(2)生根培養(yǎng)基的配制及分瓶

按照營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ的組分配比配制營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ，向營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ中加入組分量的瓊脂及激素IBA，然后用NaOH或HCl溶液將營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ的pH值調(diào)節(jié)至5.2～5.5，每瓶培養(yǎng)基中加入1.8～2.2g珍珠巖，將營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ分瓶灌裝得到培養(yǎng)基，完畢后進(jìn)行滅菌處理；

(3)生根培養(yǎng)

將步驟(1)中增殖培養(yǎng)基中長(zhǎng)度大于3cm的組培苗接種于步驟(2)滅菌處理后的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，控制溫度為23～27℃，光照強(qiáng)度為2000～2500Lx，光照時(shí)間為12～14h/d。

在上述方案中，所述增殖培養(yǎng)基包括營(yíng)養(yǎng)液Ⅱ、支持物Ⅱ及激素，其中，所述的營(yíng)養(yǎng)液Ⅱ采用蒸餾水配制，該營(yíng)養(yǎng)液Ⅱ?yàn)閃PM基本培養(yǎng)基，其中白糖30g/L；

所述的支持物Ⅱ?yàn)榄傊?，該瓊脂在上述營(yíng)養(yǎng)液Ⅱ中的含量為6～8g/L；

所述的激素為ZT，該激素在營(yíng)養(yǎng)液Ⅱ中的含量為0.2～1.0mg/L。

優(yōu)選地，所述營(yíng)養(yǎng)液Ⅱ中的白糖含量30g/L；所述瓊脂在營(yíng)養(yǎng)液Ⅱ中的含量為7g/L；所述激素ZT在營(yíng)養(yǎng)液Ⅱ中的含量為0.6mg/L。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：本發(fā)明的培養(yǎng)基合理控制了氨態(tài)氮與硝態(tài)氮比例，有利于藍(lán)莓組培苗健壯生長(zhǎng)，且該培養(yǎng)基中配制的低氮高磷和硼組合，尤為適合藍(lán)莓組培苗生根的要求，有利于藍(lán)莓的根系生長(zhǎng)，而VC的添加可有效防褐化、促生根，從而提高了藍(lán)莓的生根率；另外，本發(fā)明采用瓊脂及珍珠巖作為培養(yǎng)基支持物，通透性好，進(jìn)一步為藍(lán)莓組培苗生根提供了較好的條件；本發(fā)明的培養(yǎng)方法針對(duì)性強(qiáng)、適應(yīng)性好，培植藍(lán)莓組培苗30d的生根率可達(dá)到90％以上，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于現(xiàn)有技術(shù)相同時(shí)間的生根率。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。

實(shí)施例1：

本實(shí)施例的藍(lán)莓組培苗生根的培養(yǎng)基包括營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ、支持物Ⅰ及激素，其中，營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ采用蒸餾水配制，該營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ包含以下組分及含量：

(NH₄)₂SO₄ 380mg/L、K₂SO₄ 450mg/L、KH₂PO₄ 170mg/L、Ca(NO₃)₂.4H₂O 150mg/L、MgSO₄.7H₂O 180mg/L、FeSO₄·7H₂O 27.8mg/L、EDTA·Na₂ 37.3mg/L、ZnSO₄·7H₂O 4.3mg/L、MnSO₄·H₂O 8.5mg/L、CuSO₄.5H₂O 0.1mg/L、Na₂MoO₄.2H₂O 0.1mg/L、H₃BO₃ 6.2mg/L、VB₁1.0mg/L、VB₆ 0.5mg/L、V_C0.2mg/L、白糖20g/L；該營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ的pH值為5.2；

支持物Ⅰ為珍珠巖和瓊脂，珍珠巖在上述營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ中的含量為60g/L，瓊脂在上述營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ中的含量為3.5g/L；

激素為IBA，該激素在營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ中的含量為0.2mg/L。

本實(shí)施例中使用上述培養(yǎng)基的藍(lán)莓組培苗生根的培養(yǎng)方法包括以下步驟：

(1)組培苗的培植

在增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)藍(lán)莓組培苗；該增殖培養(yǎng)基包括營(yíng)養(yǎng)液Ⅱ、支持物Ⅱ及激素，其中，營(yíng)養(yǎng)液Ⅱ采用蒸餾水配制，該營(yíng)養(yǎng)液Ⅱ?yàn)閃PM基本培養(yǎng)基，其中白糖30g/L；支持物Ⅱ?yàn)榄傊?，該瓊脂在營(yíng)養(yǎng)液Ⅱ中的含量為7g/L；激素為ZT，該激素在營(yíng)養(yǎng)液Ⅱ中的含量為0.5mg/L；營(yíng)養(yǎng)液Ⅱ?yàn)閜H 5.2；培養(yǎng)條件為控制溫度為23～25℃，光照強(qiáng)度為2300～2500Lx，光照時(shí)間為12h/d；

(2)生根培養(yǎng)基的配制及分瓶

按照營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ的組分配比配制營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ，向營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ中加入組分量的瓊脂及激素IBA，然后用NaOH或HCl溶液將營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ的pH值調(diào)節(jié)至5.2，每瓶培養(yǎng)基中加入2g珍珠巖，將營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ分瓶灌裝得到培養(yǎng)基，完畢后在壓力為1.05kg/cm²、溫度121℃下進(jìn)行滅菌20分鐘處理；

(3)生根培養(yǎng)

將步驟(1)中增殖培養(yǎng)基中長(zhǎng)度大于3cm的組培苗接種于步驟(2)滅菌處理后的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，控制溫度為24～26℃，光照強(qiáng)度為2000～2200Lx，光照時(shí)間為12h/d。

采用上述培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法，培植藍(lán)莓組培苗30d的生根率為93％。

實(shí)施例2：

本實(shí)施例的藍(lán)莓組培苗生根的培養(yǎng)基包括營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ、支持物Ⅰ及激素，其中，營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ采用蒸餾水配制，該營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ包含以下組分及含量：

(NH₄)₂SO₄ 375mg/L、K₂SO₄ 445mg/L、KH₂PO₄ 165mg/L、Ca(NO₃)₂.4H₂O 145mg/L、MgSO₄.7H₂O 175mg/L、FeSO₄·7H₂O 27mg/L、EDTA·Na₂ 37mg/L、ZnSO₄·7H₂O 4mg/L、MnSO₄·H₂O 8mg/L、CuSO₄.5H₂O 0.05mg/L、Na₂MoO₄.2H₂O 0.05mg/L、H₃BO₃ 6mg/L、VB₁0.5mg/L、VB₆0.2mg/L、V_C0.1mg/L、白糖20g/L；該營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ的pH值為5.3；

支持物Ⅰ為珍珠巖和瓊脂，珍珠巖在上述營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ中的含量為55g/L，瓊脂在上述營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ中的含量為4g/L；

激素為IBA，該激素在營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ中的含量為0.05mg/L。

本實(shí)施例中使用上述培養(yǎng)基的藍(lán)莓組培苗生根的培養(yǎng)方法包括以下步驟：

(1)組培苗的培植

在增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)藍(lán)莓組培苗；該增殖培養(yǎng)基包括營(yíng)養(yǎng)液Ⅱ、支持物Ⅱ及激素，其中，營(yíng)養(yǎng)液Ⅱ采用蒸餾水配制，該營(yíng)養(yǎng)液Ⅱ?yàn)閃PM基本培養(yǎng)基；支持物Ⅱ?yàn)榄傊摥傊跔I(yíng)養(yǎng)液Ⅱ中的含量為6g/L；激素為ZT，該激素在營(yíng)養(yǎng)液Ⅱ中的含量為0.2mg/L；pH 5.3。培養(yǎng)條件為控制溫度為22～25℃，光照強(qiáng)度為2000～2300Lx，光照時(shí)間為13h/d；

(2)生根培養(yǎng)基的配制及分瓶

按照營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ的組分配比配制營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ，向營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ中加入組分量的瓊脂及激素IBA，然后用NaOH或HCl溶液將營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ的pH值調(diào)節(jié)至5.3，每瓶培養(yǎng)基中加入1.8g珍珠巖，將營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ分瓶灌裝得到培養(yǎng)基，完畢后在壓力為1.05kg/cm²、溫度121℃下進(jìn)行滅菌20分鐘處理；

(3)生根培養(yǎng)

將步驟(1)中增殖培養(yǎng)基中長(zhǎng)度大于3cm的組培苗接種于步驟(2)滅菌處理后的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，控制溫度為22～25℃，光照強(qiáng)度為2000～2200Lx，光照時(shí)間為12h/d。

采用上述培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法，培植藍(lán)莓組培苗30d的生根率為90％。

實(shí)施例3：

本實(shí)施例的藍(lán)莓組培苗生根的培養(yǎng)基包括營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ、支持物Ⅰ及激素，其中，營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ采用蒸餾水配制，該營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ包含以下組分及含量：

(NH₄)₂SO₄ 385mg/L、K₂SO₄ 455mg/L、KH₂PO₄ 175mg/L、Ca(NO₃)₂.4H₂O 155mg/L、MgSO₄.7H₂O185mg/L、FeSO₄·7H₂O28mg/L、EDTA·Na₂38mg/L、ZnSO₄·7H₂O 4.5mg/L、MnSO₄·H₂O9mg/L、CuSO₄.5H₂O 0.15mg/L、Na₂MoO₄.2H₂O 0.1mg/L、H₃BO₃ 6.5mg/L、VB₁1.5mg/L、VB₆0.6mg/L、V_C0.3mg/L、白糖22g/L；該營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ的pH值為5.5；

支持物Ⅰ為珍珠巖和瓊脂，珍珠巖在上述營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ中的含量為65g/L，瓊脂在上述營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ中的含量為3g/L；

激素為IBA，該激素在營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ中的含量為0.5mg/L。

本實(shí)施例中使用上述培養(yǎng)基的藍(lán)莓組培苗生根的培養(yǎng)方法包括以下步驟：

(1)組培苗的培植

在增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)藍(lán)莓組培苗；該增殖培養(yǎng)基包括營(yíng)養(yǎng)液Ⅱ、支持物Ⅱ及激素，其中，營(yíng)養(yǎng)液Ⅱ采用蒸餾水配制，該營(yíng)養(yǎng)液Ⅱ?yàn)閃PM基本培養(yǎng)基，其中白糖含量30g/L；支持物Ⅱ?yàn)榄傊摥傊跔I(yíng)養(yǎng)液Ⅱ中的含量為8g/L；激素為ZT，該激素在營(yíng)養(yǎng)液Ⅱ中的含量為1.0mg/L；pH 5.5；培養(yǎng)條件為控制溫度為25～27℃，光照強(qiáng)度為2000～2300Lx，光照時(shí)間為14h/d；

(2)生根培養(yǎng)基的配制及分瓶

按照營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ的組分配比配制營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ，向營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ中加入組分量的瓊脂及激素IBA，然后用NaOH或HCl溶液將營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ的pH值調(diào)節(jié)至5.5，每瓶培養(yǎng)基中加入2.2g珍珠巖，將營(yíng)養(yǎng)液Ⅰ分瓶灌裝得到培養(yǎng)基，完畢后在壓力為1.05kg/cm²、溫度121℃下進(jìn)行滅菌20分鐘處理；

(3)生根培養(yǎng)

將步驟(1)中增殖培養(yǎng)基中長(zhǎng)度大于3cm的組培苗接種于步驟(2)滅菌處理后的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，控制溫度為23～25℃，光照強(qiáng)度為2400～2500Lx，光照時(shí)間為13h/d；

采用上述培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法，培植藍(lán)莓組培苗30d的生根率為91％。

對(duì)比例：

本對(duì)比例的藍(lán)莓組培苗生根的培養(yǎng)基包括1/2WPM基本培養(yǎng)基，其中白糖含量為20g/L、瓊脂7g/L、激素IBA0.2mg/L，pH 5.2。

本對(duì)比例中使用上述培養(yǎng)基的藍(lán)莓組培苗生根的培養(yǎng)方法包括以下步驟：

(1)組培苗的培植

在增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)藍(lán)莓組培苗；該增殖培養(yǎng)基組分為WPM基本培養(yǎng)基，其中白糖30g/L、瓊脂7g/L，激素ZT 0.5mg/L，pH 5.2；培養(yǎng)條件為控制溫度為23～25℃，光照強(qiáng)度為2300～2500Lx，光照時(shí)間為12h/d；

(2)生根培養(yǎng)基的配制及分瓶

培養(yǎng)基組分為1/2WPM基本培養(yǎng)基，其中白糖20g/L、瓊脂7g/L、激素IBA0.2mg/L；用NaOH或HCl溶液將培養(yǎng)基溶液的pH值調(diào)節(jié)至5.2，分瓶灌裝得到培養(yǎng)基，完畢后在壓力為1.05kg/cm²、溫度121℃下進(jìn)行滅菌20分鐘處理；

(3)生根培養(yǎng)

將步驟(1)中增殖培養(yǎng)基中長(zhǎng)度大于3cm的組培苗接種于步驟(2)滅菌處理后的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，控制溫度為24～26℃，光照強(qiáng)度為2000～2200Lx，光照時(shí)間為12h/d。

采用上述培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法，培植藍(lán)莓組培苗30d的生根率為20％左右。

通過對(duì)比本發(fā)明實(shí)施例與對(duì)比例的培養(yǎng)結(jié)果可以看出，本實(shí)施例的培養(yǎng)基相較于現(xiàn)有技術(shù)而言，對(duì)藍(lán)莓組培苗生根的針對(duì)性強(qiáng)、適應(yīng)性好，培植藍(lán)莓組培苗的生根率高。