本發(fā)明涉及一種植物繁殖方法，特別是一種紫玉簪的組織培養(yǎng)快速繁殖方法。

背景技術(shù)：

紫玉簪(Hosta ventricosa(Salisb.)Stearn)亦名紫萼、山玉簪，為百合科玉簪屬多年生宿根草本植物。全草含香豆精類、紫玉簪三萜、紫玉簪多糖等活性成分；具有散瘀止痛、解毒功效，治跌打損作、胃痛；根可治療牙痛、燒燙傷、乳腺炎、中耳炎等癥，其在非特異性炎癥方面很有價值，在中老年人呼吸道疾病防治方面有特殊療效。

然而目前國內(nèi)外紫玉簪都存在著單花花期短、缺乏香氣、繁殖系數(shù)低、周期長等缺陷。在自然條件下，紫玉簪存在育種周期長及物種局限性的影響，采用生物技術(shù)組織培養(yǎng)技術(shù)，可以有效快速地提高紫玉簪種苗的繁殖速度和質(zhì)量，實現(xiàn)紫玉簪優(yōu)質(zhì)種苗的工廠化育苗，以滿足生產(chǎn)上的需要。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種紫玉簪的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，它能夠快速繁殖出大量適合移栽的優(yōu)良紫玉簪種苗。

本發(fā)明通過以下技術(shù)方案達到上述目的：一種紫玉簪的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括以下步驟：

(1)外植體的選擇與消毒：取紫玉簪側(cè)芽作為外植體，依次用2％(v/v)洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15-30min、添加了2-3滴吐溫-20的100毫升0.1％(v/v)升汞消毒8-10min、無菌水沖洗3-5次，最后用消毒濾紙吸去表面水分，得到外植體，其中無菌水為經(jīng)高溫高壓滅菌的蒸餾水；

(2)側(cè)芽分化獲得叢生芽快速繁殖培養(yǎng)：將步驟(1)得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-26℃，光照強度1400-2000lux，光照時間為10-12小時/天的條件下培養(yǎng)30天，側(cè)芽分化后獲得叢生芽，其中MS培養(yǎng)基中加入0.5-1.5mg/L的6-BA、0.1-0.3mg/L的IAA、50-60g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8；

(3)叢生芽壯苗培養(yǎng)：將步驟(2)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-26℃，光照強度1400-2000lux，光照時間為10-12小時/天的條件下培養(yǎng)30天得到健壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基中加入0.5-1.5mg/L的6-BA、0.1-0.3mg/L的IAA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8；

(4)健壯植株生根培養(yǎng)：將步驟(3)中得到的健壯植株置于1/2MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-26℃，光照強度1400-2000lux，光照時間為10-12小時/天的條件下培養(yǎng)20天得到帶根的完整植株，其中1/2MS生根培養(yǎng)基中加入0.1-0.3mg/L的NAA、10-15g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8；

(5)煉苗與移栽：步驟(4)獲得帶根的完整植株后，在室溫為25℃的室內(nèi)打開瓶蓋，煉苗2-4天，洗凈根部培養(yǎng)基，立即移栽到通風良好且弱光沙土壤中，在沙土壤中生長一個半月后移栽大田。

移栽后一個星期內(nèi)，每天早8點到晚6點噴霧3-5次，每次10min，此后每天早8點、晚6點各噴霧1次，每次10min；移栽時的溫度條件為20-28℃，相對濕度75-80％，遮陽率為75％。

本發(fā)明的突出優(yōu)點在于：

(1)通過生物技術(shù)對紫玉簪進行組織培養(yǎng)快速繁殖，在短時間內(nèi)培育出大量可供大田栽培的紫玉簪幼苗，顯著提高了紫玉簪種苗的繁殖系數(shù)和種苗質(zhì)量，實現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)，滿足生產(chǎn)上的需要。

(2)在MS繁殖培養(yǎng)基中添加0.5-1.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA能夠促進叢生芽的分化；添加濃度為0.1-0.3mg/L的生長激素吲哚乙酸IAA能夠促進叢生芽的生長；

在MS壯苗培養(yǎng)基中添加濃度為1.5mg/L的6-BA和0.1-0.3mg/L的IAA能夠促進叢生芽葉片的展開；

在1/2MS生根培養(yǎng)基上組合使用濃度為0.1-0.3mg/L的生長激素萘乙酸NAA，能夠獲得帶根的完整植株，這些植株經(jīng)煉苗后能夠直接移栽沙床。

(3)采用本發(fā)明所述的培養(yǎng)方法，得到的單芽增殖系數(shù)達到5-8倍，獲得的組培苗生根率在95％以上，每株平均帶3-4個根，根長為3-5厘米，移栽沙床成活率在98％以上；快速、便捷、高效地進行紫玉簪組織培養(yǎng)，實現(xiàn)紫玉簪組培種苗的規(guī)?；a(chǎn)。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案進一步說明。

實施例1

本發(fā)明所述的紫玉簪的組織培養(yǎng)快速繁殖方法的一個實例，包括以下步驟：

(1)外植體的選擇與消毒：取紫玉簪側(cè)芽作為外植體，依次用2％(v/v)洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15-30min、添加入2-3滴吐溫-20的100毫升0.1％(v/v)升汞消毒8-10min、無菌水沖洗3-5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到無菌外植體，其中無菌水為經(jīng)高溫高壓滅菌的蒸餾水；

(2)側(cè)芽分化獲得叢生芽快速繁殖：將步驟(1)得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-26℃，光照強度1400-2000lux，光照時間為10-12h/d的條件下培養(yǎng)30天，側(cè)芽分化后獲得大量叢生芽，其中MS培養(yǎng)基中添加0.5mg/L的6-BA、0.1mg/L的IAA、60g/L蔗糖和4.0g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，叢生芽增殖倍率為6.0；

(3)叢生芽壯苗培養(yǎng)：將步驟(2)中得到的叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)30天得到健壯植株，培養(yǎng)溫度23-26℃，光照強度1400-2000lux，光照時間為10-12小時/天；其中MS壯苗培養(yǎng)基中添加1.5mg/L的6-BA和0.2mg/L的IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8；

(4)試管苗生根培養(yǎng)：將步驟(3)中得到的叢生芽置于1/2MS生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)20天得到帶根的完整植株，培養(yǎng)溫度23-26℃，光照強度1400-2000lux，光照時間為10-12小時/天；其中1/2MS生根培養(yǎng)基中添加0.2mg/L的NAA、15g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8。生根率達98.7％。

實施例2

本發(fā)明所述的紫玉簪的組織培養(yǎng)快速繁殖方法的另一個實例，包括以下步驟：

(1)外植體的選擇與消毒：取紫玉簪側(cè)芽作為外植體，依次用2％(v/v)洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15-30min、添加入2-3滴吐溫-20的100毫升0.1％(v/v)升汞消毒8-10min、無菌水沖洗3-5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到無菌外植體，其中無菌水為經(jīng)高溫高壓滅菌的蒸餾水；

(2)側(cè)芽分化獲得叢生芽快速繁殖：將步驟(1)得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-26℃，光照強度1400-2000lux，光照時間為10-12h/d的條件下培養(yǎng)30天，側(cè)芽分化后獲得大量叢生芽，其中MS培養(yǎng)基中添加1.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的IAA、60g/L蔗糖和4.0g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，叢生芽增殖倍率為5.5；

(3)叢生芽壯苗培養(yǎng)：將步驟(2)中得到的叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)30天得到健壯植株，培養(yǎng)溫度23-26℃，光照強度1400-2000lux，光照時間為10-12小時/天；其中MS壯苗培養(yǎng)基中加入1.5mg/L的6-BA和0.2mg/L的IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8；

(4)試管苗生根培養(yǎng)：將步驟(3)中得到的叢生芽置于1/2MS生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)20天得到帶根的完整植株，培養(yǎng)溫度23-26℃，光照強度1400-2000lux，光照時間為10-12小時/天；其中1/2MS生根培養(yǎng)基中添加0.2mg/L的NAA、15g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，生根率達95.8％。

實施例3

本發(fā)明所述的紫玉簪的組織培養(yǎng)快速繁殖方法的再一個實例，包括以下步驟：

(1)外植體的選擇與消毒：取紫玉簪側(cè)芽作為外植體，依次用2％(v/v)洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15-30min、添加入2-3滴吐溫-20的100毫升0.1％(v/v)升汞消毒8-10min、無菌水沖洗3-5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到無菌外植體，其中無菌水為經(jīng)高溫高壓滅菌的蒸餾水；

(2)側(cè)芽分化獲得叢生芽快速繁殖：將步驟(1)得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-26℃，光照強度1400-2000lux，光照時間為10-12h/d的條件下培養(yǎng)30天，側(cè)芽分化后獲得大量叢生芽，其中MS培養(yǎng)基中添加1.5mg/L的6-BA、0.1mg/L的IAA、60g/L蔗糖和4.0g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，叢生芽增殖倍率為5.3；

(3)叢生芽壯苗培養(yǎng)：將步驟(2)中得到的叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)30天得到健壯植株，培養(yǎng)溫度23-26℃，光照強度1400-2000lux，光照時間為10-12小時/天；其中MS壯苗培養(yǎng)基中添加1.0mg/L的6-BA和0.1mg/L的IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8；

(4)試管苗生根培養(yǎng)：將步驟(3)中得到的叢生芽置于1/2MS生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)20天得到帶根的完整植株，培養(yǎng)溫度23-26℃，光照強度1400-2000lux，光照時間為10-12小時/天；其中1/2MS生根培養(yǎng)基中添加0.2mg/L的NAA、15g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，生根率達96.5％。

實施例4

本發(fā)明所述的紫玉簪的組織培養(yǎng)快速繁殖方法的又一個實例，包括以下步驟：

(1)外植體的選擇與消毒：取紫玉簪側(cè)芽作為外植體，依次用2％(v/v)洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15-30min、添加入2-3滴吐溫-20的100毫升0.1％(v/v)升汞消毒8-10min、無菌水沖洗3-5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到無菌外植體，其中無菌水為經(jīng)高溫高壓滅菌的蒸餾水；

(2)側(cè)芽分化獲得叢生芽快速繁殖：將步驟(1)得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-26℃，光照強度1400-2000lux，光照時間為10-12h/d的條件下培養(yǎng)30天，側(cè)芽分化后獲得大量叢生芽，其中MS培養(yǎng)基中添加0.5mg/L的6-BA、0.1mg/L的IAA、60g/L蔗糖和4.0g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，叢生芽增殖倍率為6.0；

(3)叢生芽壯苗培養(yǎng)：將步驟(2)中得到的叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)30天得到健壯植株，培養(yǎng)溫度23-26℃，光照強度1400-2000lux，光照時間為10-12小時/天；其中MS壯苗培養(yǎng)基中添加1.5mg/L的6-BA和0.2mg/L的IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8；

(4)試管苗生根培養(yǎng)：將步驟(3)中得到的叢生芽置于1/2MS生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)20天得到帶根的完整植株，培養(yǎng)溫度23-26℃，光照強度1400-2000lux，光照時間為10-12小時/天；其中1/2MS生根培養(yǎng)基中添加0.1mg/L的NAA、15g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，生根率達97.7％。