本發(fā)明涉及一種植物的培育繁殖方法，特別涉及藥物的培育繁殖方法。

背景技術(shù)：

白芨Bletilla striata(Thunb.)Reichb.f.為蘭科白芨屬多年生草本植物，具有收斂止血、消腫生肌、治療外傷出血、瘡瘍腫毒、皮膚皸裂及肺結(jié)核咳血、潰瘍病出血等藥用價(jià)值，同時(shí)還具有美容、美白、祛斑及觀賞價(jià)值被廣泛應(yīng)用，其野生資源瀕臨滅絕。

白芨種子細(xì)小，似粉末狀，沒有胚乳，發(fā)育不完全的胚，不易發(fā)芽，很難進(jìn)行種子繁殖；采用分株繁殖時(shí)，繁殖率低、繁殖速度慢。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的旨在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種通過組織培育進(jìn)行繁殖，且繁殖率高、速度快的野生白芨組織培養(yǎng)快速繁殖方法。

本發(fā)明所述的野生白芨組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其操作步驟為：

a.外植體材料及處理，取紫花白芨的假鱗莖，用小刀、牙刷處理表面雜物和泥土，置于飽和洗衣粉水溶液中浸泡10分鐘，并充分搖晃后放于自來水下沖洗1-2小時(shí)，置于超凈化工作臺(tái)待處理；

b.將步驟a處理的假磷莖置于超凈化工作臺(tái)中用無菌水沖洗1次，75％乙醇消毒30s左右，無菌水沖洗1次；采用0.1-0.2％升汞消毒滅菌5-10分鐘，無菌水沖洗3-4次，再將消毒處理后的假鱗莖切開，大小為0.5平方厘米，每塊均帶有芽眼，即得芽塊；

c.將步驟b切好的芽塊置于瓶裝的誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)基中，每瓶培養(yǎng)基接種3-4塊同，經(jīng)過20-30天即可長(zhǎng)出愈傷組織；

d.無菌苗分化，步驟c誘導(dǎo)的愈傷組織置于公化培養(yǎng)基中進(jìn)行分化，用1/2MS+6-BA2.0-4.0+NAA0.1-0.2+蔗糖20％+瓊脂8％+PVP0.5％+PH 5.8，原球莖分化出莖葉分化苗，28-30天的分化率達(dá)500—900％；

繼代增殖，步驟d分化苗置于新的培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)，：MS+BA2.0+NAA0.2較適合，30天為一個(gè)周期，增殖倍數(shù)500％；

e.步驟d分化培養(yǎng)后，采用有機(jī)物促進(jìn)莖葉分化，所采用的培養(yǎng)基是以MS為基本培養(yǎng)基，并加入1.0的6-BA和0.1的NAA以及7.5％的香蕉汁，既可以促進(jìn)白芨球莖的生長(zhǎng)，又可以促進(jìn)白芨的生根，在光照條件下培養(yǎng)35-45天，苗高度約1.5-2.0cm并有葉片展開的白芨試管苗；

f.生根誘導(dǎo)培養(yǎng)，將步驟e的白芨試管苗轉(zhuǎn)接到篩選出的生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每培養(yǎng)瓶接5-7株小苗，進(jìn)行壯苗及誘根生長(zhǎng)的培養(yǎng)，至平均根數(shù)達(dá)到3-6條；

g.緩苗：取生長(zhǎng)健壯、根系3-5條、苗高10—15厘米的組培苗從培養(yǎng)室內(nèi)移出到普通室內(nèi),避陽光直射，存放7-10天，然后再將瓶蓋打開，在室內(nèi)存放10—20天后將幼苗移出培養(yǎng)瓶；

h.煉苗：將幼苗根部的瓊脂等培養(yǎng)苗全部洗去，將幼苗稍晾干(根系為白色)，放于0.1％的高錳酸鉀溶液中消毒8-12分鐘，煉苗過程中選擇基質(zhì)為蛭石：泥炭：珍珠巖＝1：2：1進(jìn)行移栽，移栽苗存活率可以達(dá)到90％；

i.從白芨根段中分離到白芨真菌，初步鑒定為絲核菌屬真菌，鑒定為白芨共生菌，通過拌菌移栽實(shí)驗(yàn)中，在蛭石：泥炭：珍珠巖＝1：2：1基質(zhì)上，移栽存活率可達(dá)98％；

j.栽培技術(shù)：采用大棚和遮陽網(wǎng)相結(jié)合，紫花三叉白芨每畝栽培6000—12000株/畝，每畝需要400瓶以上的快繁白芨苗(每瓶有苗15株左右)，栽種2年，產(chǎn)量近2噸；

k.白芨苗的田間管理，白芨在田間管理除草要求嚴(yán)格，組培苗栽植后應(yīng)適當(dāng)用遮陽，避免陽光直射，同時(shí)注意澆水保濕，去除雜草，除草時(shí)淺鋤，避免傷根；白芨喜陰，保持濕潤(rùn)，干旱時(shí)要澆水，7～9月份早晚各澆一次水；白芨又怕澇，大雨及時(shí)排水避免傷根；白芨是喜肥的植物，每個(gè)月噴施一次磷酸二氫鉀或稀薄的人畜糞尿，10月以后，逐漸停止生長(zhǎng)，進(jìn)入休眠，但是要防止雜草叢生。

所述的誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)基，是以1/2MS為基本培養(yǎng)基，加入4.0的6-BA、0.2的NAA、0.5的PVP、糖20、瓊脂8，PH5.8，經(jīng)過20-30天即長(zhǎng)出愈傷組織。

所述的生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基，是以1/2MS為基本培養(yǎng)基，并加入1.0的NAA和0.1的6-BA，生根率為83.3％。

所述的生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基，是以1/2MS為基本培養(yǎng)基，并加入1.0的NAA和75g/L的香蕉泥，生根率達(dá)100％。

本發(fā)明所述的野生白芨組織培養(yǎng)快速繁殖方法，采用紫花白芨的假鱗莖進(jìn)行組織培育，經(jīng)培養(yǎng)基培養(yǎng)后，其分化度率得到了較大的提高，可達(dá)到500％-900％，以適應(yīng)快速擴(kuò)大種源，經(jīng)過緩苗、煉苗后移栽成活率達(dá)98％。本發(fā)明所述的培育方法簡(jiǎn)單、適用，成本低，不僅提高了組織培育的分化率，而且培育出的苗較為壯碩，移栽成活率高，一個(gè)月基本分化結(jié)束，經(jīng)過誘根、緩苗、練苗，基本在65-80天即可完成育苗，大大縮短了白芨的培育繁殖時(shí)間，為野生白芨的訓(xùn)養(yǎng)提供了規(guī)模化種植的可能。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說明，但不限于實(shí)施例。

實(shí)施例1

所述的野生白芨組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其操作步驟為：

a.外植體材料及處理，取紫花白芨的假鱗莖，用小刀、牙刷處理表面雜物和泥土，置于飽和洗衣粉水溶液中浸泡10分鐘，并充分搖晃后放于自來水下沖洗1-2小時(shí)，置于超凈化工作臺(tái)待處理；

b.將步驟a處理的假磷莖置于超凈化工作臺(tái)中用無菌水沖洗1次，75％乙醇消毒30s左右，無菌水沖洗1次；采用0.1-0.2％升汞消毒滅菌5-10分鐘，無菌水沖洗3-4次，再將消毒處理后的假鱗莖切開，大小為0.5平方厘米，每塊均帶有芽眼，即得芽塊；

c.將步驟b切好的芽塊置于瓶裝的誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)基中，每瓶培養(yǎng)基接種3-4塊同，經(jīng)過20-30天即可長(zhǎng)出愈傷組織，誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)基，是以1/2MS為基本培養(yǎng)基，加入4.0的6-BA、0.2的NAA、0.5的PVP、糖20、瓊脂8，PH＝5.8；

d.無菌苗分化，步驟c誘導(dǎo)的愈傷組織置于公化培養(yǎng)基中進(jìn)行分化，用1/2MS+6-BA2.0-4.0+NAA0.1-0.2+蔗糖20％+瓊脂8％+PVP0.5％+PH 5.8，原球莖分化出莖葉分化苗，28-30天的分化率達(dá)500—900％；

e.步驟d分化培養(yǎng)后，采用有機(jī)物促進(jìn)莖葉分化，所采用的培養(yǎng)基是以MS為基本培養(yǎng)基，并加入1.0的6-BA和0.1的NAA以及7.5％的香蕉汁，既可以促進(jìn)白芨球莖的生長(zhǎng)，又可以促進(jìn)白芨的生根，在光照條件下培養(yǎng)35-45天，苗高度約1.5-2.0cm并有葉片展開的白芨試管苗；

f.生根誘導(dǎo)培養(yǎng)，將步驟e的白芨試管苗轉(zhuǎn)接到篩選出的生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每培養(yǎng)瓶接5-7株小苗，進(jìn)行壯苗及誘根生長(zhǎng)的培養(yǎng)，至平均根數(shù)達(dá)到3-6條，所述的生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基，是以1/2MS為基本培養(yǎng)基，并加入1.0的NAA和0.1的6-BA，生根率為83.3％；

g.緩苗：取生長(zhǎng)健壯、根系3-5條、苗高10—15厘米的組培苗從培養(yǎng)室內(nèi)移出到普通室內(nèi),避陽光直射，存放7-10天，然后再將瓶蓋打開，在室內(nèi)存放10—20天后將幼苗移出培養(yǎng)瓶；

h.煉苗：將幼苗根部的瓊脂等培養(yǎng)苗全部洗去，將幼苗稍晾干(根系為白色)，放于0.1％的高錳酸鉀溶液中消毒8-12分鐘，煉苗過程中選擇基質(zhì)為蛭石：泥炭：珍珠巖＝1：2：1進(jìn)行移栽，移栽苗存活率可以達(dá)到90％；

i.從白芨根段中分離到白芨真菌，初步鑒定為絲核菌屬真菌，鑒定為白芨共生菌，通過拌菌移栽實(shí)驗(yàn)中，在蛭石：泥炭：珍珠巖＝1：2：1基質(zhì)上，移栽存活率可達(dá)98％；

j.栽培技術(shù)：采用大棚和遮陽網(wǎng)相結(jié)合，紫花三叉白芨每畝栽培6000—12000株/畝，每畝需要400瓶以上的快繁白芨苗(每瓶有苗15株左右)，栽種2年，產(chǎn)量近2噸；

k.白芨苗的田間管理，白芨在田間管理除草要求嚴(yán)格，組培苗栽植后應(yīng)適當(dāng)用遮陽，避免陽光直射，同時(shí)注意澆水保濕，去除雜草，除草時(shí)淺鋤，避免傷根；白芨喜陰，保持濕潤(rùn)，干旱時(shí)要澆水，7～9月份早晚各澆一次水；白芨又怕澇，大雨及時(shí)排水避免傷根；白芨是喜肥的植物，每個(gè)月噴施一次磷酸二氫鉀或稀薄的人畜糞尿，10月以后，逐漸停止生長(zhǎng)，進(jìn)入休眠，但是要防止雜草叢生。

實(shí)施例2

野生白芨組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其操作步驟為：

a.外植體材料及處理，取紫花白芨的假鱗莖，用小刀、牙刷處理表面雜物和泥土，置于飽和洗衣粉水溶液中浸泡10分鐘，并充分搖晃后放于自來水下沖洗1-2小時(shí)，置于超凈化工作臺(tái)待處理；

b.將步驟a處理的假磷莖置于超凈化工作臺(tái)中用無菌水沖洗1次，75％乙醇消毒30s左右，無菌水沖洗1次；采用0.1-0.2％升汞消毒滅菌5-10分鐘，無菌水沖洗3-4次，再將消毒處理后的假鱗莖切開，大小為0.5平方厘米，每塊均帶有芽眼，即得芽塊；

c.將步驟b切好的芽塊置于瓶裝的誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)基中，每瓶培養(yǎng)基接種3-4塊同，經(jīng)過20-30天即可長(zhǎng)出愈傷組織，誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)基，是以1/2MS為基本培養(yǎng)基，加入4.0的6-BA、0.2的NAA、0.5的PVP、糖20、瓊脂8，PH5.8；

d.無菌苗分化，步驟c誘導(dǎo)的愈傷組織置于公化培養(yǎng)基中進(jìn)行分化，用1/2MS+6-BA2.0-4.0+NAA0.1-0.2+蔗糖20％+瓊脂8％+PVP0.5％+PH 5.8，原球莖分化出莖葉分化苗，28-30天的分化率達(dá)500—900％，

繼代增殖，步驟d分化苗置于新的培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)，：MS+BA2.0+NAA0.2較適合，30天為一個(gè)周期，增殖倍數(shù)500％；

e.步驟d分化培養(yǎng)后，采用有機(jī)物促進(jìn)莖葉分化，所采用的培養(yǎng)基是以MS為基本培養(yǎng)基，并加入1.0的6-BA和0.1的NAA以及7.5％的香蕉汁，既可以促進(jìn)白芨球莖的生長(zhǎng)，又可以促進(jìn)白芨的生根，在光照條件下培養(yǎng)35-45天，苗高度約1.5-2.0cm并有葉片展開的白芨試管苗；

f.生根誘導(dǎo)培養(yǎng)，將步驟e的白芨試管苗轉(zhuǎn)接到篩選出的生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每培養(yǎng)瓶接5-7株小苗，進(jìn)行壯苗及誘根生長(zhǎng)的培養(yǎng)，至平均根數(shù)達(dá)到3-6條，所述的生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基，是以1/2MS為基本培養(yǎng)基，并加入1.0的NAA和75g/L的香蕉泥，生根率達(dá)100％；

g.緩苗：取生長(zhǎng)健壯、根系3-5條、苗高10—15厘米的組培苗從培養(yǎng)室內(nèi)移出到普通室內(nèi),避陽光直射，存放7-10天，然后再將瓶蓋打開，在室內(nèi)存放10—20天后將幼苗移出培養(yǎng)瓶；

h.煉苗：將幼苗根部的瓊脂等培養(yǎng)苗全部洗去，將幼苗稍晾干(根系為白色)，放于0.1％的高錳酸鉀溶液中消毒8-12分鐘，煉苗過程中選擇基質(zhì)為蛭石：泥炭：珍珠巖＝1：2：1進(jìn)行移栽，移栽苗存活率可以達(dá)到90％；

i.從白芨根段中分離到白芨真菌，初步鑒定為絲核菌屬真菌，鑒定為白芨共生菌，通過拌菌移栽實(shí)驗(yàn)中，在蛭石：泥炭：珍珠巖＝1：2：1基質(zhì)上，移栽存活率可達(dá)98％；

j.栽培技術(shù)：采用大棚和遮陽網(wǎng)相結(jié)合，紫花三叉白芨每畝栽培6000—12000株/畝，每畝需要400瓶以上的快繁白芨苗(每瓶有苗15株左右)，栽種2年，產(chǎn)量近2噸；

k.白芨苗的田間管理，白芨在田間管理除草要求嚴(yán)格，組培苗栽植后應(yīng)適當(dāng)用遮陽，避免陽光直射，同時(shí)注意澆水保濕，去除雜草，除草時(shí)淺鋤，避免傷根；白芨喜陰，保持濕潤(rùn)，干旱時(shí)要澆水，7～9月份早晚各澆一次水；白芨又怕澇，大雨及時(shí)排水避免傷根；白芨是喜肥的植物，每個(gè)月噴施一次磷酸二氫鉀或稀薄的人畜糞尿，10月以后，逐漸停止生長(zhǎng)，進(jìn)入休眠，但是要防止雜草叢生。