本發(fā)明涉及一種大麥花藥誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方，具體涉及一種可以顯著提高大麥花藥出愈率的花藥誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方，屬于農(nóng)業(yè)高新技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
大麥系禾本科大麥屬的一年生草本植物，有30多個(gè)種，只有普通大麥（horderm vulgare L.）一個(gè)種具有栽培價(jià)值，包括二棱、多棱和中間型大麥3個(gè)亞種。大麥栽培歷史悠久，是第一個(gè)被馴化的谷類作物，遠(yuǎn)在新石器時(shí)代中期就已經(jīng)是黃河上游的栽培作物，經(jīng)歷了幾千年的自然進(jìn)化和人工改良，以其適應(yīng)性廣、抗逆性強(qiáng)（包括耐寒、耐旱、耐鹽堿等）、用途廣泛而在全世界種植。作為工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的重要谷類作物，全球現(xiàn)種植大麥6100多萬hm2，總產(chǎn)量約1.7億噸，面積和總產(chǎn)僅次于小麥、水稻、玉米，為第四大谷物。許多發(fā)達(dá)國家對大麥生產(chǎn)特別重視，這是與其發(fā)展啤酒工業(yè)和畜牧業(yè)，以提高人民生活質(zhì)量相適應(yīng)的。世界大麥面積分布依次為歐洲占50%以上，亞洲占20%～25%，美洲10%～15%，非洲占6%左右，大洋洲占5%左右。
我國近20年來啤酒工業(yè)發(fā)展迅速，現(xiàn)已成為世界第一啤酒生產(chǎn)大國，由于我國優(yōu)質(zhì)啤酒專用大麥品種選育研究滯后于啤酒工業(yè)的迅速發(fā)展，以及啤麥生產(chǎn)方式及設(shè)備等因素，我國的啤酒原料因質(zhì)量問題而主要依賴進(jìn)口。我國成為啤酒大麥的第一進(jìn)口國，目前我國進(jìn)口啤麥占世界啤麥進(jìn)口貿(mào)易量的一半以上，占我國啤麥需求的60%左右。世界啤麥生產(chǎn)國（澳大利亞、加拿大、歐盟）均瞄準(zhǔn)了我國的啤麥?zhǔn)袌?，制定了各種對策，而世界啤麥價(jià)格也因我國的旺盛需求而居高不下。目前，國內(nèi)大型啤酒、麥芽企業(yè)的原麥主要依賴進(jìn)口，這一現(xiàn)狀長期地、嚴(yán)重地制約著我國啤麥生產(chǎn)和啤酒工業(yè)的穩(wěn)定發(fā)展。由于全球啤酒工業(yè)的發(fā)展和大麥原料的緊缺，再加國外水、旱和病蟲害的影響，大麥進(jìn)口極不穩(wěn)定，國內(nèi)企業(yè)易受國外價(jià)格的沖擊，我國啤酒業(yè)今后將面臨漲價(jià)的壓力。因此，努力實(shí)現(xiàn)啤酒原料國產(chǎn)化，對于促進(jìn)我國啤酒工業(yè)的穩(wěn)定發(fā)展具有十分重要的意義。
同時(shí)，大麥?zhǔn)且粋€(gè)優(yōu)良的飼料作物，飼用價(jià)植不亞于玉米。在全球?qū)Υ篼湹男枨笾校暳洗篼湹氖袌龇蓊~占到70%左右。我國南方各省飼料嚴(yán)重緊缺，每年從北方調(diào)入上千萬噸玉米與豆粕等原料來彌補(bǔ)缺口，或直接以稻谷替代。在我國飼料工業(yè)中，近幾年大麥型配合飼料所必需的β-葡聚糖酶等飼料添加劑的研制與生產(chǎn)已取得成功的突破，大麥型配合飼料開始在我國南方進(jìn)入快速發(fā)展階段。選育優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)飼料專用大麥新品種和建立飼麥生產(chǎn)基地等產(chǎn)業(yè)化網(wǎng)絡(luò)，利用南方大片冬閑地、海涂鹽堿地大力發(fā)展飼麥生產(chǎn)，對于解決我國南方地區(qū)飼料的供需矛質(zhì)，促進(jìn)該地區(qū)畜牧漁業(yè)的發(fā)展將發(fā)揮重大作用。盡管目前我國的大麥生產(chǎn)處于低谷階段，但是從國內(nèi)對大麥的巨大需求和充分利用我國有限的土地資源這兩個(gè)重要的國情分析，我國的大麥生產(chǎn)應(yīng)該和必將會得到迅速發(fā)展，大麥仍然是我國最具有發(fā)展?jié)摿Φ墓任铩?/p>
我國大麥育種工作起步較晚，在過去幾十年的育種改良過程中，育種目標(biāo)從提高產(chǎn)量到提升品質(zhì)，有了很大的改變。除了常規(guī)育種方法如引種、選擇育種、有性雜交育種、雜種優(yōu)勢育種、物理及化學(xué)誘變育種外，大麥植物組織培養(yǎng)育種和生物技術(shù)育種也得到了很大拓展。花藥培養(yǎng)是利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，把發(fā)育到一定階段的花藥。通過無菌操作接種在培養(yǎng)基上，在一系列條件誘導(dǎo)下改變花藥的發(fā)育程序，進(jìn)行有絲分裂，經(jīng)過脫分化后形成細(xì)胞團(tuán)，進(jìn)而形成愈傷組織，經(jīng)歷再分化發(fā)育成完整的單倍體植株的過程?，F(xiàn)在花藥培養(yǎng)集成了雜交育種、誘變育種、細(xì)胞學(xué)、遺傳學(xué)等各種生物科學(xué)的內(nèi)容，是育種學(xué)發(fā)展的趨勢之一，利用花藥培養(yǎng)可以明顯的加快育種進(jìn)程、縮短育種年限。
大麥花藥培養(yǎng)最早于1973年獲得成功，隨后人們在供體植株生長條件、花藥預(yù)處理方法、培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)條件等進(jìn)行了一系列的研究，使培養(yǎng)效率有了較大的提高，我國研究者利用花藥培養(yǎng)技術(shù)育成了品種“單二”和“花30”和一些高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)新品系，但大麥的花藥培養(yǎng)誘導(dǎo)單倍體的方法和培養(yǎng)基還不完善，限制了該技術(shù)在大麥遺傳改良中的廣泛應(yīng)用。培養(yǎng)基是花藥培養(yǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)，直接關(guān)系到培養(yǎng)物的生長與分化，培養(yǎng)基組分是影響花培成功的一個(gè)很重要的因素，多種禾本科作物花培實(shí)驗(yàn)表明：培養(yǎng)基各組分的合適用量，以及它們之間一定的組合關(guān)系，可顯著影響花培效率，發(fā)現(xiàn)和優(yōu)化組合花藥培養(yǎng)有機(jī)附加物質(zhì)，可進(jìn)一步提高花藥培養(yǎng)力。
在花藥程序中，愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)是大麥花藥培養(yǎng)過程的第一步，也是重點(diǎn)和難點(diǎn)，而花藥愈傷組織誘導(dǎo)的頻率和質(zhì)量直接決定著花藥培養(yǎng)的成敗。因此，組合和優(yōu)化培養(yǎng)基組分，摸索出實(shí)用的花藥誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方是實(shí)現(xiàn)大麥花藥誘導(dǎo)培養(yǎng)的關(guān)鍵。通過多年大麥花藥培養(yǎng)的摸索和實(shí)踐，我們進(jìn)一步優(yōu)化了基本培養(yǎng)基配方，并且不斷嘗試加入一些提高大麥花藥誘導(dǎo)力的有機(jī)添加物并組合其種類搭配及濃度，最終摸索出了一種大麥花藥高效誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方，進(jìn)一步提高了大麥花藥培養(yǎng)的效率。我們的研究結(jié)果對大麥單倍體育種和大麥花藥培養(yǎng)技術(shù)在遺傳轉(zhuǎn)化中的應(yīng)用具有較大的實(shí)用價(jià)值。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供了一種大麥花藥誘導(dǎo)培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基的配方如下：
KNO3 900～1100mg/L，NH4NO3 900～1100mg/L，谷氨酰胺 500～700mg/L，Ca(NO3)2?4H2O 330～360mg/L，KH2PO4 270～330mg/L，KCl 60～70mg/L，MgSO4?7H2O 30～40mg/L，Na2-EDTA 35～40mg/L，F(xiàn)eSO4?7H2O 26～30mg/L，MnSO4?4H2O 4.0～5.0mg/L，ZnSO4?7H2O 1.2～1.8mg/L，H3BO3 1.4～1.8mg/L，KI 0.7～0.9mg/L，甲基磺酸乙酯 0.35～0.45mg/L，肌醇 90～110mg/L，甘氨酸 1.8～2.2mg/L，丙氨酸 1.4～1.6mg/L，葉酸 0.25～0.35mg/L，維生素B1 0.09～0.11mg/L，維生素B6 0.09～0.11mg/L，煙酸 0.45～0.55mg/L，蔗糖 45～55g/L，瓊脂 7～8g/L；
2，4-D 1.8～2.2mg/L，NAA 0.45～0.55mg/L，復(fù)酞核酸0.45～0.55mg/L，水解蛋白 0.25～0.35g/L，植物硫化激動(dòng)素PSK-α 23～27pmol/L，胰島素 3.5～4.5mg/L，生物素 0.18～0.22mg/L，PH 5.6～6.0。
本發(fā)明所述的培養(yǎng)基具有顯著提高大麥花藥出愈率的優(yōu)點(diǎn)，從而大大提高了大麥花藥培養(yǎng)的效率。下面的實(shí)施例以及對比實(shí)驗(yàn)可以清楚地反映本發(fā)明所述培養(yǎng)基的特點(diǎn)。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
配制如下配方的培養(yǎng)基：
KNO3 1000mg/L，NH4NO3 1000mg/L，谷氨酰胺 600mg/L，Ca(NO3)2?4H2O 345mg/L，KH2PO4 300mg/L，KCl 65mg/L，MgSO4?7H2O 35mg/L，Na2-EDTA 37.5mg/L，F(xiàn)eSO4?7H2O 27.5mg/L，MnSO4?4H2O 4.4mg/L，ZnSO4?7H2O 1.5mg/L，H3BO3 1.6mg/L，KI 0.8mg/L，甲基磺酸乙酯 0.4mg/L，肌醇 100mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，丙氨酸 1.5mg/L，葉酸 0.3mg/L，維生素B1 0.1mg/L，維生素B6 0.1mg/L，煙酸 0.5mg/L，蔗糖 50g/L，瓊脂 7.5g/L；
2，4-D 2.0mg/L，NAA 0.5mg/L，復(fù)酞核酸0.5mg/L，水解蛋白 0.3g/L，植物硫化激動(dòng)素PSK-α 25pmol/L，胰島素 4.0mg/L，生物素 0.2mg/L，PH 5.8。
選取大麥品種甘啤3號和金川3號作為花藥培養(yǎng)供體，供體材料于2011年秋季大田播種，2012年春季取中部小花小孢子發(fā)育處于單核靠邊期的花藥接種，從大田采取供體材料的主莖穗和大分蘗穗，用75%的酒精滅菌，在超凈臺上取中部花藥分別接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，每瓶接種40枚花藥，放置于暗培室，27℃培養(yǎng)30～40 d后長出愈傷組織后計(jì)算愈傷組織誘導(dǎo)率，然后轉(zhuǎn)移入分化培養(yǎng)基。
實(shí)施例2
配制如下配方的培養(yǎng)基（谷氨酰胺添加濃度的優(yōu)選）：
KNO3 1000mg/L，NH4NO3 1000mg/L，Ca(NO3)2?4H2O 345mg/L，KH2PO4 300mg/L，KCl 65mg/L，MgSO4?7H2O 35mg/L，Na2-EDTA 37.5mg/L，F(xiàn)eSO4?7H2O 27.5mg/L，MnSO4?4H2O 4.4mg/L，ZnSO4?7H2O 1.5mg/L，H3BO3 1.6mg/L，KI 0.8mg/L，甲基磺酸乙酯 0.4mg/L，肌醇 100mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，丙氨酸 1.5mg/L，葉酸 0.3mg/L，維生素B1 0.1mg/L，維生素B6 0.1mg/L，煙酸 0.5mg/L，蔗糖 50g/L，瓊脂 7.5g/L；
2，4-D 2.0mg/L，NAA 0.5mg/L，復(fù)酞核酸0.5mg/L，水解蛋白 0.3g/L，植物硫化激動(dòng)素PSK-α 25pmol/L，胰島素 4.0mg/L，生物素 0.2mg/L，PH 5.8。
谷氨酰胺的添加濃度設(shè)置以下5種：0；200mg/L；400mg/L；800mg/L；1000mg/L。
同樣選取該兩個(gè)大麥品種作為花藥供體，操作方法、培養(yǎng)方法同實(shí)施例1，計(jì)算愈傷組織誘導(dǎo)率。
實(shí)施例3
配制如下配方的培養(yǎng)基（甲基磺酸乙酯的優(yōu)選）：
KNO3 1000mg/L，NH4NO3 1000mg/L，谷氨酰胺 600mg/L，Ca(NO3)2?4H2O 345mg/L，KH2PO4 300mg/L，KCl 65mg/L，MgSO4?7H2O 35mg/L，Na2-EDTA 37.5mg/L，F(xiàn)eSO4?7H2O 27.5mg/L，MnSO4?4H2O 4.4mg/L，ZnSO4?7H2O 1.5mg/L，H3BO3 1.6mg/L，KI 0.8mg/L，肌醇 100mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，丙氨酸 1.5mg/L，葉酸 0.3mg/L，維生素B1 0.1mg/L，維生素B6 0.1mg/L，煙酸 0.5mg/L，蔗糖 50g/L，瓊脂 7.5g/L；
2，4-D 2.0mg/L，NAA 0.5mg/L，復(fù)酞核酸0.5mg/L，水解蛋白 0.3g/L，植物硫化激動(dòng)素PSK-α 25pmol/L，胰島素 4.0mg/L，生物素 0.2mg/L，PH 5.8。
甲基磺酸乙酯設(shè)置為以下4種：0；0.2mg/L；0.6mg/L；0.8mg/L。
同樣選取該兩個(gè)大麥品種作為花藥供體，操作方法、培養(yǎng)方法同實(shí)施例1，計(jì)算愈傷組織誘導(dǎo)率。
實(shí)施例4
配制如下配方的培養(yǎng)基（肌醇添加濃度的優(yōu)選）：
KNO3 1000mg/L，NH4NO3 1000mg/L，谷氨酰胺 600mg/L，Ca(NO3)2?4H2O 345mg/L，KH2PO4 300mg/L，KCl 65mg/L，MgSO4?7H2O 35mg/L，Na2-EDTA 37.5mg/L，F(xiàn)eSO4?7H2O 27.5mg/L，MnSO4?4H2O 4.4mg/L，ZnSO4?7H2O 1.5mg/L，H3BO3 1.6mg/L，KI 0.8mg/L，甲基磺酸乙酯 0.4mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，丙氨酸 1.5mg/L，葉酸 0.3mg/L，維生素B1 0.1mg/L，維生素B6 0.1mg/L，煙酸 0.5mg/L，蔗糖 50g/L，瓊脂 7.5g/L；
2，4-D 2.0mg/L，NAA 0.5mg/L，復(fù)酞核酸0.5mg/L，水解蛋白 0.3g/L，植物硫化激動(dòng)素PSK-α 25pmol/L，胰島素 4.0mg/L，生物素 0.2mg/L，PH 5.8。
肌醇的添加濃度設(shè)置以下7種：0；200mg/L；400mg/L；600mg/L；800mg/L；1200mg/L；1400mg/L。
同樣選取該兩個(gè)大麥品種作為花藥供體，操作方法、培養(yǎng)方法同實(shí)施例1，計(jì)算愈傷組織誘導(dǎo)率。
實(shí)施例5
配制如下配方的培養(yǎng)基（甘氨酸添加濃度的優(yōu)選）：
KNO3 1000mg/L，NH4NO3 1000mg/L，谷氨酰胺 600mg/L，Ca(NO3)2?4H2O 345mg/L，KH2PO4 300mg/L，KCl 65mg/L，MgSO4?7H2O 35mg/L，Na2-EDTA 37.5mg/L，F(xiàn)eSO4?7H2O 27.5mg/L，MnSO4?4H2O 4.4mg/L，ZnSO4?7H2O 1.5mg/L，H3BO3 1.6mg/L，KI 0.8mg/L，甲基磺酸乙酯 0.4mg/L，肌醇 100mg/L，丙氨酸 1.5mg/L，葉酸 0.3mg/L，維生素B1 0.1mg/L，維生素B6 0.1mg/L，煙酸 0.5mg/L，蔗糖 50g/L，瓊脂 7.5g/L；
2，4-D 2.0mg/L，NAA 0.5mg/L，復(fù)酞核酸0.5mg/L，水解蛋白 0.3g/L，植物硫化激動(dòng)素PSK-α 25pmol/L，胰島素 4.0mg/L，生物素 0.2mg/L，PH 5.8。
甘氨酸添加濃度設(shè)置以下6種：0；0.5mg/L；1.0mg/L；1.5mg/L；2.5mg/L；3.0mg/L。
同樣選取該兩個(gè)大麥品種作為花藥供體，操作方法、培養(yǎng)方法同實(shí)施例1，計(jì)算愈傷組織誘導(dǎo)率。
實(shí)施例6
配制如下配方的培養(yǎng)基（丙氨酸添加濃度的優(yōu)選）：
KNO3 1000mg/L，NH4NO3 1000mg/L，谷氨酰胺 600mg/L，Ca(NO3)2?4H2O 345mg/L，KH2PO4 300mg/L，KCl 65mg/L，MgSO4?7H2O 35mg/L，Na2-EDTA 37.5mg/L，F(xiàn)eSO4?7H2O 27.5mg/L，MnSO4?4H2O 4.4mg/L，ZnSO4?7H2O 1.5mg/L，H3BO3 1.6mg/L，KI 0.8mg/L，甲基磺酸乙酯 0.4mg/L，肌醇 100mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，葉酸 0.3mg/L，維生素B1 0.1mg/L，維生素B6 0.1mg/L，煙酸 0.5mg/L，蔗糖 50g/L，瓊脂 7.5g/L；
2，4-D 2.0mg/L，NAA 0.5mg/L，復(fù)酞核酸0.5mg/L，水解蛋白 0.3g/L，植物硫化激動(dòng)素PSK-α 25pmol/L，胰島素 4.0mg/L，生物素 0.2mg/L，PH 5.8。
丙氨酸添加濃度設(shè)置以下5種：0；0.5mg/L；1.0mg/L；2.0mg/L；2.5mg/L。
同樣選取該兩個(gè)大麥品種作為花藥供體，操作方法、培養(yǎng)方法同實(shí)施例1，計(jì)算愈傷組織誘導(dǎo)率。
實(shí)施例7
配制如下配方的培養(yǎng)基（葉酸添加濃度的優(yōu)選）：
KNO3 1000mg/L，NH4NO3 1000mg/L，谷氨酰胺 600mg/L，Ca(NO3)2?4H2O 345mg/L，KH2PO4 300mg/L，KCl 65mg/L，MgSO4?7H2O 35mg/L，Na2-EDTA 37.5mg/L，F(xiàn)eSO4?7H2O 27.5mg/L，MnSO4?4H2O 4.4mg/L，ZnSO4?7H2O 1.5mg/L，H3BO3 1.6mg/L，KI 0.8mg/L，甲基磺酸乙酯 0.4mg/L，肌醇 100mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，丙氨酸 1.5mg/L，維生素B1 0.1mg/L，維生素B6 0.1mg/L，煙酸 0.5mg/L，蔗糖 50g/L，瓊脂 7.5g/L；
2，4-D 2.0mg/L，NAA 0.5mg/L，復(fù)酞核酸0.5mg/L，水解蛋白 0.3g/L，植物硫化激動(dòng)素PSK-α 25pmol/L，胰島素 4.0mg/L，生物素 0.2mg/L，PH 5.8。
葉酸添加濃度設(shè)置以下5種：0；0.1mg/L；0.2mg/L；0.4mg/L；0.5mg/L。
同樣選取該兩個(gè)大麥品種作為花藥供體，操作方法、培養(yǎng)方法同實(shí)施例1，計(jì)算愈傷組織誘導(dǎo)率。
實(shí)施例8
配制如下配方的培養(yǎng)基（復(fù)酞核酸添加濃度的優(yōu)選）：
KNO3 1000mg/L，NH4NO3 1000mg/L，谷氨酰胺 600mg/L，Ca(NO3)2?4H2O 345mg/L，KH2PO4 300mg/L，KCl 65mg/L，MgSO4?7H2O 35mg/L，Na2-EDTA 37.5mg/L，F(xiàn)eSO4?7H2O 27.5mg/L，MnSO4?4H2O 4.4mg/L，ZnSO4?7H2O 1.5mg/L，H3BO3 1.6mg/L，KI 0.8mg/L，甲基磺酸乙酯 0.4mg/L，肌醇 100mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，丙氨酸 1.5mg/L，葉酸 0.3mg/L，維生素B1 0.1mg/L，維生素B6 0.1mg/L，煙酸 0.5mg/L，蔗糖 50g/L，瓊脂 7.5g/L；
2，4-D 2.0mg/L，NAA 0.5mg/L，水解蛋白 0.3g/L，植物硫化激動(dòng)素PSK-α 25pmol/L，胰島素 4.0mg/L，生物素 0.2mg/L，PH 5.8。
復(fù)酞核酸添加濃度設(shè)置以下7種：0；0.1mg/L；0.2mg/L；0.3mg/L；0.4mg/L；0.6mg/L；0.7mg/L。
同樣選取該兩個(gè)大麥品種作為花藥供體，操作方法、培養(yǎng)方法同實(shí)施例1，計(jì)算愈傷組織誘導(dǎo)率。
實(shí)施例9
配制如下配方的培養(yǎng)基（生物素添加濃度的優(yōu)選）：
KNO3 1000mg/L，NH4NO3 1000mg/L，谷氨酰胺 600mg/L，Ca(NO3)2?4H2O 345mg/L，KH2PO4 300mg/L，KCl 65mg/L，MgSO4?7H2O 35mg/L，Na2-EDTA 37.5mg/L，F(xiàn)eSO4?7H2O 27.5mg/L，MnSO4?4H2O 4.4mg/L，ZnSO4?7H2O 1.5mg/L，H3BO3 1.6mg/L，KI 0.8mg/L，甲基磺酸乙酯 0.4mg/L，肌醇 100mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，丙氨酸 1.5mg/L，葉酸 0.3mg/L，維生素B1 0.1mg/L，維生素B6 0.1mg/L，煙酸 0.5mg/L，蔗糖 50g/L，瓊脂 7.5g/L；
2，4-D 2.0mg/L，NAA 0.5mg/L，復(fù)酞核酸0.5mg/L，水解蛋白 0.3g/L，植物硫化激動(dòng)素PSK-α 25pmol/L，胰島素 4.0mg/L，PH 5.8。
生物素添加濃度設(shè)置以下6種：0；0.05mg/L；0.1mg/L；0.15mg/L；0.25mg/L；0.3mg/L。
同樣選取該兩個(gè)大麥品種作為花藥供體，操作方法、培養(yǎng)方法同實(shí)施例1，計(jì)算愈傷組織誘導(dǎo)率。
實(shí)施例10
配制如下配方的培養(yǎng)基（水解蛋白添加濃度的優(yōu)選）：
KNO3 1000mg/L，NH4NO3 1000mg/L，谷氨酰胺 600mg/L，Ca(NO3)2?4H2O 345mg/L，KH2PO4 300mg/L，KCl 65mg/L，MgSO4?7H2O 35mg/L，Na2-EDTA 37.5mg/L，F(xiàn)eSO4?7H2O 27.5mg/L，MnSO4?4H2O 4.4mg/L，ZnSO4?7H2O 1.5mg/L，H3BO3 1.6mg/L，KI 0.8mg/L，甲基磺酸乙酯 0.4mg/L，肌醇 100mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，丙氨酸 1.5mg/L，葉酸 0.3mg/L，維生素B1 0.1mg/L，維生素B6 0.1mg/L，煙酸 0.5mg/L，蔗糖 50g/L，瓊脂 7.5g/L；
2，4-D 2.0mg/L，NAA 0.5mg/L，復(fù)酞核酸0.5mg/L，植物硫化激動(dòng)素PSK-α 25pmol/L，胰島素 4.0mg/L，生物素 0.2mg/L，PH 5.8。
水解蛋白添加濃度設(shè)置以下5種：0；0.1mg/L；0.2mg/L；0.4mg/L；0.5mg/L。
同樣選取該兩個(gè)大麥品種作為花藥供體，操作方法、培養(yǎng)方法同實(shí)施例1，計(jì)算愈傷組織誘導(dǎo)率。
培養(yǎng)基對比實(shí)驗(yàn)
將實(shí)施例2-10分別與實(shí)施例1進(jìn)行對比，對比的結(jié)果如下表所示：
從表1-9可以看出，使用本發(fā)明所提供的培養(yǎng)基比使用其它任何對比培養(yǎng)基誘導(dǎo)大麥花藥愈傷組織的效率更高，表明本發(fā)明提供的培養(yǎng)基配方是經(jīng)過大量單因子、多因子試驗(yàn)所篩選的最優(yōu)組合，多年來我們亦圍繞本發(fā)明的組合配比做了小范圍單因子改變優(yōu)化組合試驗(yàn)，大量的實(shí)驗(yàn)研究亦得出本發(fā)明的組分配比是最優(yōu)的。使用本發(fā)明所提供的培養(yǎng)基對大麥品種甘啤3號、金川3號的愈傷組織誘導(dǎo)率高達(dá)62.7%和48.5%，充分說明了本發(fā)明提供的培養(yǎng)基是一種優(yōu)良的大麥花藥誘導(dǎo)培養(yǎng)基，具有較高的產(chǎn)業(yè)推廣價(jià)值和理論研究價(jià)值。
實(shí)施例11
為了比較本發(fā)明所提供的培養(yǎng)基與前人采用的培養(yǎng)基誘導(dǎo)大麥花藥愈傷效果的差異，我們從相關(guān)文獻(xiàn)查找了3個(gè)大麥花藥愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方，配成花藥愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基，同樣選取大麥品種甘啤3號、金川3號作為花藥供體誘導(dǎo)花藥愈傷，操作方法、培養(yǎng)方法同實(shí)施例1，計(jì)算愈傷組織誘導(dǎo)率。
其它3個(gè)誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：
馬鈴薯培養(yǎng)基：馬鈴薯培養(yǎng)基+9%蔗糖+5g/L瓊脂+1.5ppm2，4-D+0.5ppm激動(dòng)素，pH為5.8（對比文件來自于F?S?Wen等《大麥花藥培養(yǎng)中低溫預(yù)處理對花粉愈傷組織形成的影響》）；
M1培養(yǎng)基：FHG+2,4-D 3.0mg/L+6-BA 0.5mg/L+脯氨酸 1000mg/L+谷胺酰氨1000mg/L+麥芽糖9.0% +瓊脂0.6%，pH為5.8（對比文件來自于何玉池等《大麥花藥培養(yǎng)力的遺傳模式分析》）；
N6培養(yǎng)基：N6基本培養(yǎng)基+2,4,5-T 3.0mg/L+KT 0.5mg/L+CH 800mg/L+麥芽糖50g/L，pH為5.8（對比文件來自于孫月芳等《NaCl脅迫對不同基因型大麥花藥離體培養(yǎng)的影響》）。
培養(yǎng)基對比實(shí)驗(yàn)
將實(shí)施例11與實(shí)施例1進(jìn)行對比，對比的結(jié)果如下表所示：
從不同培養(yǎng)基的誘導(dǎo)效果來看，本發(fā)明的培養(yǎng)基對2個(gè)大麥品種花藥愈傷組織平均誘導(dǎo)率為55.6%，而馬鈴薯培養(yǎng)基、M1培養(yǎng)基、N6培養(yǎng)基則分別只有13.9%、36.6%、35.8%，可以發(fā)現(xiàn)本發(fā)明對大麥花藥愈傷組織的誘導(dǎo)率要顯著高于其他3種誘導(dǎo)培養(yǎng)基。
以上11個(gè)實(shí)施例可以說明本發(fā)明提供的培養(yǎng)基配方的組分配比是最優(yōu)組合，本發(fā)明提供的培養(yǎng)基對大麥花藥愈傷組織的誘導(dǎo)比前人發(fā)現(xiàn)的大麥花藥誘導(dǎo)培養(yǎng)基具有明顯優(yōu)勢。我們的研究結(jié)果對于進(jìn)一步推廣和應(yīng)用大麥單倍體育種無疑有較大的現(xiàn)實(shí)意義和實(shí)用價(jià)值。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)本發(fā)明公開的內(nèi)容和所掌握的本領(lǐng)域技術(shù)對本發(fā)明內(nèi)容作出替換或變型，但是這些替換或變型都不應(yīng)視為脫離本發(fā)明構(gòu)思的，這些替換或變型均在本發(fā)明要求保護(hù)的權(quán)利范圍內(nèi)。