生產(chǎn)冬蟲夏草菌飼料添加劑的方法及產(chǎn)品的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生產(chǎn)冬蟲夏草菌飼料添加劑的方法及產(chǎn)品，屬于飼料發(fā)酵【技術(shù)領(lǐng)域】，其采用廉價(jià)的啤酒干酵母和啤酒糟為原料、首先通過液體發(fā)酵快速生產(chǎn)大量菌絲，再大接種量接種到固體培養(yǎng)基進(jìn)行固體發(fā)酵，發(fā)酵采用淺盤式靜態(tài)固態(tài)發(fā)酵設(shè)備，其簡易且操作方便，發(fā)酵周期短，減少了污染、降低了生產(chǎn)成本，能高效生產(chǎn)北冬蟲夏草菌絲體作為飼料添加劑。
【專利說明】生產(chǎn)冬蟲夏草菌飼料添加劑的方法及產(chǎn)品

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生產(chǎn)冬蟲夏草菌飼料添加劑的方法及產(chǎn)品，屬于飼料發(fā)酵【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]冬蟲夏草又名“蟲草”，是我國醫(yī)藥寶庫中的一種名貴中藥，其化學(xué)成分復(fù)雜。冬蟲夏草除了含粗蛋白25.32%，粗纖維18.53%，碳水化合物28.9%，脂肪8.4%，灰分4.1%，水分10.84%。其中蟲草菌素、核苷類、氨基酸、多肽、多糖類、糖醇、留醇類、脂肪酸、酯、烷烴、多胺類物質(zhì)、超氧化物歧化酶(S0D)、氨基酸、維生素及多種微量元素等活性成分，具有多種藥理及活性功能，已報(bào)道其具有抗癌、增強(qiáng)免疫力、免疫調(diào)節(jié)、降血糖和抑制mRNA翻譯的作用(陳桂寶等，1997 ;Seldin等，1997 ;李祝等，2002 ;陳暢等，2004)。還可以顯著降低顱壓、促進(jìn)新陳代謝，抗疲勞(都興范等，2003 ;王志高等2007 ;賁松彬等2009)，其中留醇類有抗瘧疾作用(PAN等，1999)。冬蟲夏草可明顯減少小白鼠自發(fā)性活動(dòng)，延長戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間和鎮(zhèn)靜，抗驚厥等作用(雷堅(jiān)，1992 ;郭亭芳，2000 ;許愛榮等，2001)。程顯好、白毓謙報(bào)道冬蟲夏草發(fā)酵液中含有耐熱的廣譜性抗菌物質(zhì)，能夠拮抗革蘭氏陰性及陽性菌、芽孢菌和非芽孢菌、鏈霉菌，對酵母及絲狀真菌則沒有抗菌活性(程顯好等，1995)，張正使用感染乙肝病毒的幼鴨實(shí)驗(yàn)證明，冬蟲夏草對乙肝病毒HBV-FDNAP抑制率可達(dá)85%，抑制細(xì)胞系PLC/PRF/5細(xì)胞分泌HbsAg作用超過50%，并能抑制鴨體內(nèi)的鴨乙肝病毒(DHBV)感染，因此它具有抑菌、抗病毒和抗癌作用(靳朝霞等，2005)，另外，藥用真菌具有分解纖維素、淀粉、蛋白質(zhì)、脂類等物質(zhì)的強(qiáng)大酶系(許正宏，2010)。
[0003]2008年中國添加劑預(yù)混料約500萬t，產(chǎn)值約300億元-400億元，美國飼料添加劑年消費(fèi)量650萬t，歐共體560萬t。世界各國飼料添加劑總量中營養(yǎng)性添加劑占55%?60%，獸藥占30%?35%，生物制品占10%-15%。獸藥抗生素添加劑在飼料中使用已有50多年的歷史，在美國調(diào)查表明，使用抗生素提高各種畜產(chǎn)品的產(chǎn)量，使消費(fèi)者每年的食品開支節(jié)約55億美元，購買肉、蛋及乳制品可節(jié)省開支9%，年國民生產(chǎn)總值增加了 100億美元(朱蓓蕾，1994)。但由于抗生素的大量使用，隨之出現(xiàn)的負(fù)面效應(yīng)也日益突出，人與動(dòng)物的病原體存在交叉耐藥性，耐藥性增加、藥物在動(dòng)物產(chǎn)品中殘留對人類的生命和財(cái)產(chǎn)是一個(gè)巨大的危脅。1980-1983年對豬屠宰場的調(diào)查表明，1%豬肉樣品中的抗生素殘留超標(biāo)。毒理學(xué)試驗(yàn)表明有些抗生素有致癌、致畸形和致突變的作用。由于抗生素的耐藥性和殘留問題，歐共體禁止在飼料中使用青霉素、四環(huán)素、奧沃霉素、螺旋霉素、桿菌肽鋅、維吉尼亞霉素、泰樂菌素、氯氟芐腺嘌呤和異丙硝達(dá)唑。瑞典和瑞士全面禁止在飼料中使用抗生素。這些國家的實(shí)踐可能導(dǎo)致世界范圍內(nèi)飼用抗生素的全面禁用。
[0004]與化學(xué)合成相比，生物添加劑如益生菌、中藥的研制周期短，成本低，副作用小，作為飼料添加劑在飼料工業(yè)應(yīng)該具有廣闊的應(yīng)用前景。隨著我國畜牧業(yè)由傳統(tǒng)粗放型向現(xiàn)代化集約型生產(chǎn)經(jīng)營的轉(zhuǎn)變，以及對動(dòng)物性食品品質(zhì)的要求日益增高，以防病保健、促進(jìn)生產(chǎn)、無耐藥性、無副作用、無殘留等優(yōu)勢特點(diǎn)的中藥飼料添加劑替代飼料抗生素是發(fā)展必然趨勢。我國使用的5000多種中草藥中已有200余種用于中草藥飼料添加劑，但未見研究冬蟲夏草作為飼用添加劑。這是由于天然冬蟲夏草產(chǎn)量極少，遠(yuǎn)不足人類的使用，更何談畜禽類享用。如，仔豬早期斷奶在現(xiàn)代養(yǎng)豬業(yè)已成為一項(xiàng)常規(guī)技術(shù)，早期斷奶對仔豬是一種很大的應(yīng)激(郭芳彬，1996)，表現(xiàn)為食欲不振、消化不良、活動(dòng)增加、飲欲增加、鳴叫、打斗，生長速度下降，容易患病。豬斷奶時(shí)容易發(fā)生腹瀉，仔豬從斷奶到肥育前期，斷奶腹瀉造成的損失占全部的75% (Svensm等，1989)。目前主要是改善飼養(yǎng)管理和在糧中添加抗生素，但是抗生素的耐藥性和殘留問題日益引起關(guān)注，抗生素替代品益生素、酶制劑、酸制劑等的研究與開發(fā)成為近年來綠色飼料添劑的熱點(diǎn)(黃滄海，2003)。由于冬蟲夏草自身蟲體營養(yǎng)物質(zhì)豐富，不僅含較高蛋白營養(yǎng)物質(zhì)為動(dòng)物所利用，還含有各種生理活性物質(zhì)，具有增強(qiáng)免疫力、蟲草菌素有廣譜抑菌、抗病毒、對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用具有鎮(zhèn)靜，抗驚厥等作用(雷堅(jiān)，1992 ;郭亭芳，2000 ;許愛榮等，2001)。因此，冬蟲夏草用于飼用也是非常理想的生物飼料添加劑。
[0005]研究證實(shí)蟲草無性型發(fā)酵菌絲體的主要有效成份含量與野生型的有效成分含量大致相同，功效相似，甚至某些成分還高于野生蟲草(林群英，2006 ;王建芳，2005)。迄今為止，由于冬蟲夏草特殊的生態(tài)環(huán)境和嚴(yán)格的寄生性及人工培育技術(shù)不成熟，造成產(chǎn)量低、資源緊缺，價(jià)格昂貴，現(xiàn)在多采用人工培養(yǎng)其菌絲體作為替代物。人工培養(yǎng)是一種獲得蟲草素和菌體多糖的好途徑，國內(nèi)外一直致力于蟲草菌絲體的人工培養(yǎng)研究(銀濤，2011 ;鐘思敏，2011)。但在蛹蟲草的規(guī)?；耘嘀邪l(fā)現(xiàn)，蛹蟲草的人工栽培需要消耗大量的人力物力，且產(chǎn)量不高。
[0006]冬蟲夏草能否用于飼用的關(guān)鍵是成本問題。北冬蟲夏草菌絲體既可以通過液體深層發(fā)酵來生產(chǎn)，也可以通過固態(tài)發(fā)酵來生產(chǎn)。固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)的報(bào)道不多(Holliday，
2004;靳朝霞，2005)。相對于液體深層發(fā)酵，固體培養(yǎng)具有設(shè)備簡單、發(fā)酵條件易控制、培養(yǎng)物中全部營養(yǎng)和保健成分均可充分利用等優(yōu)點(diǎn)，但作為人類食品，它不能分離純菌絲體且培養(yǎng)周期較長(靳朝霞，2005)，限制了其應(yīng)用。而作為飼料添加劑，則可以直接烘干，培養(yǎng)基也可以不像人類食品要求那么高(如異味等)，成本較低，值得推廣應(yīng)用。
[0007]設(shè)備的選擇:北冬蟲夏草固態(tài)發(fā)酵一般以室內(nèi)淺盤、室外大床和塑料袋培養(yǎng)，無需復(fù)雜的設(shè)備，生產(chǎn)方簡單易行，且成本低，但生產(chǎn)周期長，污染率高，品質(zhì)低下且不穩(wěn)定，如果采用傳統(tǒng)的開放式固態(tài)淺盤發(fā)酵，不僅容易造成發(fā)酵中雜菌污染，而且溫度、濕度等培養(yǎng)條件難以控制，隨氣溫變化的影響大，產(chǎn)品質(zhì)量不一致(繆文等，1993)，所以難以滿足商品化生產(chǎn)和制劑加工需要，研制自動(dòng)化、密封的固態(tài)發(fā)酵裝置是解決上述問題的關(guān)鍵。在研制固態(tài)發(fā)酵罐時(shí)，應(yīng)考慮許多方面的問題:(1)和液態(tài)深層發(fā)酵相比，固態(tài)發(fā)酵的培養(yǎng)基水分含量少，氣相多，而空氣的熱導(dǎo)率比水低的多，因此，固態(tài)發(fā)酵反應(yīng)器的限制因素包括:氧傳質(zhì)、溫度和固體培養(yǎng)基含水量等。(2)冬蟲夏草固態(tài)發(fā)酵反應(yīng)器設(shè)計(jì)還需要考慮真菌的形態(tài)學(xué)和對機(jī)械攪拌的抗力。
[0008]培養(yǎng)基的選擇:目前研究北冬蟲夏草培養(yǎng)基的碳源采用葡萄糖的較多(Mao等.2005;Masuda等，2006)。氮源以酵母提取物(Shih等.2007)或者酵母提取物與蛋白胨混合物(Masuda等，2006 ；Gu等.2007)為主，Xie等(2009)以農(nóng)副產(chǎn)品糙米糊、麥芽汁和大豆汁作為培養(yǎng)基也得到了較高產(chǎn)量的蟲草素。張顯科等(1997)研究認(rèn)為高粱米，小米，玉米渣和蠶蛹可以代替大米栽培蛹蟲草，劉守華等(1999)實(shí)驗(yàn)得出大米加豬血培養(yǎng)基更適宜蟲草菌絲的生長，使產(chǎn)量有所提高。邵愛娟等(1994)研究得出蟲草菌絲在進(jìn)行菌絲發(fā)酵時(shí)氮源以蛋白胨為最優(yōu)。人們還在柞蠶活蛹、桑蠶活蛹、家蠶、蓖麻蠶蛹(蔣本律，1996)以及大米、高粱米、小米、玉米渣等多種基質(zhì)上培養(yǎng)出蛹蟲草子實(shí)體(鄭貴朝，2008)。以有機(jī)氮源蛋白胨、牛肉膏、酵母膏為氮源時(shí)，蟲草素產(chǎn)量明顯比無機(jī)氮源高。添加腺嘌呤也能加大蟲草素產(chǎn)量(Masuda等，2007)。趙明文等(2000)優(yōu)化玉米粉、黃豆粉、酵母粉、無機(jī)離子和培養(yǎng)條件，認(rèn)為碳源因子對胞外多糖的產(chǎn)生影響顯著。陳晉安等(2001)優(yōu)化了蔗糖、玉米漿、酵母膏、無機(jī)離子，認(rèn)為蔗糖為碳源最好，以酵母膏為氮源，菌體產(chǎn)量最高。李燁(2003)研究認(rèn)為蛹蟲草菌絲的生長可以利用多種碳源和氮源，在以紅糖碳源、奶粉為氮源的液體培養(yǎng)基中生長最佳。柴建萍等(2004)通過實(shí)驗(yàn)得出玉米粉為最優(yōu)碳源，蠶蛹粉為最優(yōu)氮源，MgSO4S最優(yōu)無機(jī)鹽。美國和日本人，用大米在塑料袋和玻璃瓶中培養(yǎng)蟲草，但大米培養(yǎng)基能產(chǎn)生阻礙生長的代謝物，使蟲草素含量低。燕麥、小米、白高粱+小米比大米更有利于活性物質(zhì)的生成(Holliday，2004)。賁松彬(2010)報(bào)道組氨酸、精氨酸、賴氨酸是對蛹蟲草生長影響較大的3種堿性氨基酸。Masuda等(2007)發(fā)現(xiàn)在液體發(fā)酵培養(yǎng)基內(nèi)添加甘氨酸，L-天門冬氨酸以及L-谷氨酰胺可以提高蛹蟲草的產(chǎn)量，最大可以達(dá)到2.5g/L。另有報(bào)道真菌激發(fā)子培養(yǎng)液加入到蛹擬青霉的培養(yǎng)物中，發(fā)現(xiàn)疫霉、灰霉做激發(fā)子菌株可提高蟲草素的含量(李祝等2006)。
[0009]啤酒酵母的利用:在啤酒發(fā)酵過程中產(chǎn)生大量的啤酒酵母泥，一般都作為廢液排放，回收啤酒酵母可減少啤酒廢水污染負(fù)荷50% (COD)(鄒法俊，2002)。啤酒酵母細(xì)胞內(nèi)含有豐富的蛋白質(zhì)、核酸、維生素、碳水化合物、類脂物質(zhì)、礦物質(zhì)等多種營養(yǎng)成分(李興革等，1998)，酵母菌體含蛋白質(zhì)之高是任何動(dòng)植物無可比量的，干物質(zhì)含有50%的蛋白質(zhì)，含有18種氨基酸等，還有人體必需的8種氨基酸；富含維生素V B2、B6、B12，達(dá)到酵母干重的0.7%，而且多以磷酸酯形式存在，還含有維生素D、E (管教儀，1982)、麥留醇、煙酸、葉酸、泛酸、肌醇等；含有有機(jī)酸、糖和14種礦物質(zhì)磷、鐵、鈣、鈉、鉀、鎂等，以及豐富的酶系蛋白酶、磷脂酶、胰蛋白酶及輔酶A和生理活性物質(zhì)，如輔酶A、輔酶Q、輔酶1、細(xì)胞色素C、凝血質(zhì)、谷胱甘肽等。目前我國的啤酒產(chǎn)量連續(xù)多年位居世界第一，生產(chǎn)已經(jīng)形成集團(tuán)化、規(guī)?；行С煞譀]有得到充分利用，造成了資源浪費(fèi)，污染了環(huán)境。日本在啤酒酵母約有12% -13%用于強(qiáng)化飼料生產(chǎn)，50%用于混合飼料生產(chǎn)。上述已報(bào)道酵母是冬蟲夏草的良好培養(yǎng)基，可提供良好的氮源、維生素、促生長因子等，本專利擬采用廉價(jià)的啤酒廢酵母培養(yǎng)蟲草，達(dá)到降低成本，廢物利用的目的。
[0010]啤酒糟的利用:啤酒糟為啤酒生產(chǎn)過程糖化階段的廢棄物，主要成分是麥芽殼和未糖化的不溶性高分子物質(zhì)，含18種氨基酸，含有大量纖維素、半纖維素和麥膠等大分子物質(zhì)(管敦儀，1998);還含有豐富的B族維生素(宋正明等，1999)，此外還含有Ca、鉀、P等微量元素，其營養(yǎng)價(jià)值及開發(fā)價(jià)值極高(邱峰，2007)。
[0011]因此急需要研究發(fā)明一種利用啤酒酵母、啤酒糟作為固態(tài)發(fā)酵的培養(yǎng)基，變廢為寶生產(chǎn)冬蟲夏草菌飼料添加劑的方法及產(chǎn)品，以減少環(huán)境污染。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0012]本發(fā)明的目的是提供一種利用啤酒糟作為固態(tài)發(fā)酵的培養(yǎng)基生產(chǎn)冬蟲夏草菌飼料添加劑的方法及產(chǎn)品；
本發(fā)明的目的是以如下方式實(shí)現(xiàn)的:一種生產(chǎn)冬蟲夏草菌飼料添加劑的方法:其采用啤酒干酵母和啤酒糟為固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，以液態(tài)發(fā)酵大量培養(yǎng)北冬蟲夏草菌種后大量接種量于啤酒廢棄物固態(tài)培養(yǎng)基，于一種淺盤式的固體發(fā)酵設(shè)備上淺盤培養(yǎng)冬蟲夏草菌菌絲體，讓蟲草生長到菌絲體覆蓋滿培養(yǎng)基并完成轉(zhuǎn)色后即干燥粉碎作為飼料添加劑，生產(chǎn)步驟:
一級種子培養(yǎng):采用三角瓶培養(yǎng)；培養(yǎng)基(g /L):馬鈴薯200，葡萄糖20，蛋白胨2，KH2PO4 0.5，MgSO4.7H20 1.0,瓊脂20 ; pH自然；斜面轉(zhuǎn)接北冬蟲夏草菌株于200mL/500 mL三角瓶中，接種量5%-10%，放在搖床上，轉(zhuǎn)速130 r/min -150 r/min，于(18-25)±1 °C 培養(yǎng) 3 d-5 d ;
二級種子培養(yǎng):采用液體機(jī)械攪拌發(fā)酵罐培養(yǎng)；培養(yǎng)基:啤酒糟30 g-50 g、葡萄糖20g、啤酒干酵母 5 g-20 g, KH2PO4 3 g、MgS04.7H20 1.5 g，加水至 1000 mL，pH 5.5-6.5,121°C滅菌30 min -45 min ;接入一級菌種，接種量5%_10%，通風(fēng)V/V:0.5-0.8 ;轉(zhuǎn)速:130 r/min -160 r/min ;罐壓:0.05 MPa, 20°C _25°C培養(yǎng) 3 d -5 d ;
固體培養(yǎng)基的配制:含水80%啤酒糟25%-30%或干啤酒糟10%-20%，大米粉0%_5%、麥麩 40%-60%、蠶蛹粉或豆柏 0%-10%、啤酒干酵母 10%-20%、KH2PO4 0.05%-0.1%、MgSO40.05%-0.1%，固體原料與水的重量比為1:0.5-0.6，pH值5.0-7.0 ;采用蒸汽121°C滅菌45min,熟化30 min,滅菌后培養(yǎng)基含水55%_60% ；
接種室內(nèi)接種:接種室內(nèi)采用臭氧消毒器消毒，消毒后通入無菌空氣；接種量按重量比8%-15%接入二級菌種，接入液體菌種后拌勻，接種后的培養(yǎng)基濕度應(yīng)低于65 %，在帶假底的淺盤(14)上裝料厚度5 cm-10 cm，輕輕刮平培養(yǎng)基表面，每10 cm -15 cm見方四角各鉆一個(gè)直徑2 cm粗的孔到培養(yǎng)基底部；然后裝在靜態(tài)固態(tài)發(fā)酵生物反應(yīng)器罐體(12)內(nèi)的帶孔的固定床(13)上進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)；
發(fā)酵培養(yǎng):固體發(fā)酵開始溫度控制在15 0C -20 °C，每日通風(fēng)30 min-45 min，陰暗下通氣培養(yǎng)3 d左右，菌絲基本布滿培養(yǎng)基，橙色光50 Ix -100 Ix每日光照14 h，溫度控制在20°C -25°C，空氣濕度70%-85%，每日通風(fēng)80 min-120 min，分3次通風(fēng)，第6 d_8 d菌絲徹底布滿培養(yǎng)基，培養(yǎng)基完全轉(zhuǎn)色發(fā)酵結(jié)束，開始干燥；
干燥:在靜態(tài)固態(tài)發(fā)酵生物反應(yīng)器內(nèi)直接通風(fēng)干燥，干燥控制溫度在30°C -40°C，鼓風(fēng)干燥12 h以上，水份小于10%;菌絲體連同固體培養(yǎng)基干燥后，粉碎過40目-60目篩，得蟲草粉含蟲草素5 mg/g -8.8 mg/g,多糖含量3.5%-7% ；
復(fù)配制成添加劑產(chǎn)品:以麥飯石、淀粉為稀釋保護(hù)劑，預(yù)混合上述干燥過篩后的蟲草粉得飼料添加劑預(yù)混料，使預(yù)混料每克含蟲草粉10%-20% ;產(chǎn)品呈白色的粉末狀，具有冬蟲夏草蟲體特有的味道，無異味；混合均勻，各衛(wèi)生指標(biāo)符合國標(biāo)。
[0013]上述工藝使用發(fā)酵設(shè)備:為淺盤式靜態(tài)固態(tài)發(fā)酵設(shè)備，其包括罐體(12)，罐體
(12)內(nèi)有帶孔的固定床(13)、帶孔的固定床(13)是多層帶孔的層格，帶假底的淺盤(14)置于帶孔的固定床(13)上、帶假底的淺盤(14)是網(wǎng)狀假底孔徑小于Imm的淺盤，帶孔的固定床(13)每層間距35 cm -50 cm,每層帶孔的固定床的下方設(shè)有照明燈(5);罐體(12)內(nèi)底層設(shè)有無菌空氣及蒸汽管(4)，其經(jīng)過無菌空氣入口(6)與加熱、冷卻和增濕自動(dòng)節(jié)裝置
(I)和無菌膜過濾裝置(2)與空壓機(jī)(3)相聯(lián)接。罐體(12)上還聯(lián)接有溫度、濕度自動(dòng)測量和調(diào)節(jié)系統(tǒng)(7)、空氣出口(8)、蒸汽排出口(9)、蒸汽入口(10)、壓力表(11);通過無菌空氣的增濕或加熱或冷卻或綜合調(diào)整、循環(huán)(15)來調(diào)整控制發(fā)酵罐內(nèi)的溫、濕度和氧等條件；在罐內(nèi)直接采用空氣干燥，實(shí)現(xiàn)發(fā)酵、干燥在一個(gè)罐內(nèi)完成。
[0014]本專利采用廉價(jià)的啤酒干酵母和啤酒糟為原料、首先通過液體發(fā)酵快速生產(chǎn)大量菌絲，再大接種量接種到固體培養(yǎng)基進(jìn)行固體發(fā)酵，不僅可以提高培養(yǎng)基碳源、氨基酸、維生素等，還可以提高培養(yǎng)基的透氣性，促進(jìn)冬蟲夏草對氧的吸收和熱的傳質(zhì)，可以起到變廢為寶的作用，減少環(huán)境污染，是綠色的生產(chǎn)工藝。其縮短了發(fā)酵周期，減少污染，降低生產(chǎn)成本，能高效生產(chǎn)低成本的北冬蟲夏草菌絲體作為飼料添加劑。
[0015]下面將結(jié)合附圖對本發(fā)明進(jìn)一步說明。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0016]圖1工藝流程圖圖2固態(tài)發(fā)酵罐示意圖
圖3帶孔的固定床與帶假底的盤示意圖
1加熱、冷卻和增濕自動(dòng)可循環(huán)調(diào)節(jié)裝置；2無菌膜過濾裝置；3空壓機(jī)；4環(huán)形側(cè)孔無菌空氣及蒸汽管；5照明燈；6無菌空氣入口 ；7溫度、濕度自動(dòng)測量和調(diào)節(jié)系統(tǒng)；8空氣出口 ；9蒸汽排出口 ；10蒸汽入口 ；11壓力表；12罐體；13帶孔的固定床；14帶假底的淺盤；15、增濕或加熱或冷卻或綜合調(diào)整循環(huán)。

【具體實(shí)施方式】
[0017]實(shí)旋例1
一級種子培養(yǎng):培養(yǎng)基(g /L):馬鈴薯200，葡萄糖20，蛋白胨2，KH2P04 0.5，MgS04.7Η20 1.0，瓊脂20，pH自然。斜面轉(zhuǎn)接北冬蟲夏草菌株與高壓蒸汽滅菌的含上述培養(yǎng)基200 mL/500 mL三角瓶中，放在搖床上，轉(zhuǎn)速150 r/min，于18 °C培養(yǎng)4 d。
[0018]二級種子培養(yǎng):采用鎮(zhèn)江東方生物工程設(shè)備技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)7 L液體機(jī)械攪拌發(fā)酵罐培養(yǎng)。培養(yǎng)基:啤酒糟35 g、葡萄糖20 g、啤酒干酵母10 g、KH2P04 3 g、MgS04.7Η20 1.5 g，加水至 1000 mL，pH 6.5，121 °C滅菌 40 min。通風(fēng) V/V:0.6 ;轉(zhuǎn)速:150r/min ;罐壓:0.05 MPa，20°C培養(yǎng) 3.5 d。
[0019]固體培養(yǎng)基配方:干啤酒糟15%，大米粉5%、麥麩65%、蠶蛹粉5%、啤酒干酵母10%、ΚΗ2Ρ04 0.05%、MgS04 0.05%，料水比為 1:0.6，pH值7.0。1211:蒸汽滅菌45 min，熟化30 min,即可。接種室采用臭氧消毒器，消毒后通入無菌空氣。接種量按重量比10%，接入二級菌種，接入液體菌種后拌勻，接種后的培養(yǎng)基濕度65%，在帶假底的淺盤(14)上裝料厚度6.5 cm,輕輕刮平培養(yǎng)基表面，每10 cm見方四角各鉆一個(gè)直徑2 cm粗的孔到培養(yǎng)基底部；然后裝在靜態(tài)固態(tài)發(fā)酵生物反應(yīng)器罐體(12)內(nèi)的帶孔的固定床(13)上進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。
[0020]發(fā)酵開始溫度控制在15 V-20 °C，每日通風(fēng)30 min，陰暗下通氣培養(yǎng)3 d后，菌絲基本布滿培養(yǎng)基，橙色光100 lx每日光照14 h，溫度控制在20 °C,空氣濕度75 %，每日通風(fēng)100 min，分早、午、晚三次通風(fēng)，第7 d菌絲徹底布滿培養(yǎng)基，培養(yǎng)基完成轉(zhuǎn)色發(fā)酵結(jié)束。
[0021]干燥:發(fā)酵結(jié)束后，在罐內(nèi)直接開始干燥。溫度干燥控制在30 °C，鼓風(fēng)干燥16 h，水份8%。菌絲體連同固體培養(yǎng)基干燥后，粉碎過40目篩，得蟲草粉含蟲草素5.58 mg/g，多糖含量5.3%。
[0022]稱量蟲草粉30 kg與70 kg的淀粉進(jìn)行一級預(yù)混至100 kg。后稱取100 kg麥飯石粉加入混合機(jī)中，再加100 kg淀粉，開機(jī)預(yù)混2 min，停機(jī)；再加入上述I中混合物100kg，開機(jī)預(yù)混2 min，停機(jī)，放料。最終添加劑產(chǎn)品含冬蟲夏草菌線絲體10%。產(chǎn)品呈白色的粉末狀，具有冬蟲夏草蟲體特有的味道，無異味，各衛(wèi)生指標(biāo)符合國標(biāo)。
[0023]選擇12頭28 ±2 d斷奶的仔豬，體重7.65 ± 1.0 kg，隨機(jī)分成2組，試驗(yàn)組仔豬每只每天在日常飼料中混合50 g的上述冬蟲夏草添加劑，對照組多添加50 g日常飼料。2wk試驗(yàn)組仔豬腹瀉發(fā)病率比對照組分別下降43.1%。對照組在攻毒后第二天即有第一頭仔豬發(fā)生腹瀉，而服用冬蟲夏草添加劑組一直到第7 d才發(fā)現(xiàn)第一頭仔豬腹瀉。用冬蟲夏草添加劑喂仔豬，日增重提高5.4%，而對照組則日增重提高2.3%，冬蟲夏草添加劑喂仔豬飼料轉(zhuǎn)化率提高5.8%。這可能是由于冬蟲夏草蟲草具有增加免疫力，抗應(yīng)激和抗菌作用。
【權(quán)利要求】
1.一種生產(chǎn)冬蟲夏草菌飼料添加劑的方法:其特征是采用啤酒干酵母和啤酒糟為固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，以液態(tài)發(fā)酵大量培養(yǎng)北冬蟲夏草菌種后大量接種量于啤酒廢棄物固態(tài)培養(yǎng)基，于一種淺盤式的固體發(fā)酵設(shè)備上淺盤培養(yǎng)冬蟲夏草菌菌絲體，讓蟲草生長到菌絲體覆蓋滿培養(yǎng)基并完成轉(zhuǎn)色后即干燥粉碎作為飼料添加劑，生產(chǎn)步驟: 一級種子培養(yǎng):采用三角瓶培養(yǎng)；培養(yǎng)基(g /L):馬鈴薯200，葡萄糖20，蛋白胨2，KH2PO4 0.5，MgSO4.7H20 1.0,瓊脂20 ; pH自然；斜面轉(zhuǎn)接北冬蟲夏草菌株于200mL/500 mL三角瓶中，接種量5%-10%，放在搖床上，轉(zhuǎn)速130 r/min -150 r/min，于(18-25)±1 °C 培養(yǎng) 3 d-5 d ; 二級種子培養(yǎng):采用液體機(jī)械攪拌發(fā)酵罐培養(yǎng)；培養(yǎng)基:啤酒糟30 g-50 g、葡萄糖20g、啤酒干酵母 5 g-20 g, KH2PO4 3 g、MgS04.7H20 1.5 g，加水至 1000 mL，pH 5.5-6.5,121°C滅菌30 min -45 min ;接入一級菌種，接種量5%_10%，通風(fēng)V/V:0.5-0.8 ;轉(zhuǎn)速:130 r/min -160 r/min ;罐壓:0.05 MPa, 20°C _25°C培養(yǎng) 3 d -5 d ; 固體培養(yǎng)基本配制:含水80%啤酒糟25%-30%或干啤酒糟10%-20%，大米粉0%_5%、麥麩 40%-60%、蠶蛹粉或豆柏 0%-10%、啤酒干酵母 10%-20%、KH2PO4 0.05%-0.1%、MgSO40.05%-0.1%，固體原料與水的重量比為1:0.5-0.6，pH值5.0-7.0 ;采用蒸汽121°C滅菌45min,熟化30 min,滅菌后培養(yǎng)基含水55%_60% ； 接種室內(nèi)接種:接種室內(nèi)采用臭氧消毒器消毒，消毒后通入無菌空氣；接種量按重量比8%-15%接入二級菌種，接入液體菌種后拌勻，接種后的培養(yǎng)基濕度應(yīng)低于65 %，在帶假底的淺盤(14)上裝料厚度5 cm-10 cm，輕輕刮平培養(yǎng)基表面，每10 cm -15 cm見方四角各鉆一個(gè)直徑2 cm粗的孔到培養(yǎng)基底部；然后裝在靜態(tài)固態(tài)發(fā)酵生物反應(yīng)器罐體(12)內(nèi)的帶孔的固定床(13)上進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)； 發(fā)酵培養(yǎng):固體發(fā)酵開始溫度控制在15 0C -20 °C，每日通風(fēng)30 min-45 min，陰暗下通氣培養(yǎng)3 d左右，菌絲基本布滿培養(yǎng)基，橙色光50 Ix -100 Ix每日光照14 h，溫度控制在20°C -25°C，空氣濕度70%-85%，每日通風(fēng)80 min-120 min，分3次通風(fēng)，第6 d_8 d菌絲徹底布滿培養(yǎng)基，培養(yǎng)基完全轉(zhuǎn)色發(fā)酵結(jié)束，開始干燥； 干燥:在靜態(tài)固態(tài)發(fā)酵生物反應(yīng)器內(nèi)直接通風(fēng)干燥，干燥控制溫度在30°C -40°C，鼓風(fēng)干燥12 h以上，水份小于10%;菌絲體連同固體培養(yǎng)基干燥后，粉碎過40目-60目篩，得蟲草粉含蟲草素5 mg/g -8.8 mg/g,多糖含量3.5%-7% ； 復(fù)配制成添加劑產(chǎn)品:以麥飯石、淀粉為稀釋保護(hù)劑，預(yù)混合上述干燥過篩后的蟲草粉得飼料添加劑預(yù)混料，使預(yù)混料每克含蟲草粉10%-20% ;產(chǎn)品呈白色的粉末狀，具有冬蟲夏草蟲體特有的味道，無異味，混合均勻，各衛(wèi)生指標(biāo)符合國標(biāo)。
2.—種冬蟲夏草菌飼料添加劑，其特征是采用上述方法生產(chǎn)的一種冬蟲夏草菌飼料添加劑。
【文檔編號】A23K1/18GK104381615SQ201410757452
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年12月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月12日
【發(fā)明者】鄒雙全, 鄒芳芳, 胡敏杰, 黃福墩, 吳麗云, 馮力彪, 李丹, 賴慧玲, 季艷林, 梁文賢, 黃銘星 申請人:福建農(nóng)大科技開發(fā)總公司