專利名稱：一種培養(yǎng)金毛狗孢子的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及金毛狗孢子的培養(yǎng)方法。
背景技術：
金毛狗(Cibotium barometz(L.)J.Sm)為水龍骨目蚌殼蕨科金毛狗屬的一種，分布于亞洲熱帶及亞熱帶地區(qū)，在中國主要分布于南部和西南地區(qū)，如廣西、貴州、廣東、云南、四川、重慶、海南、西藏、湖南、浙江、江西省的亞熱帶地區(qū)，因其根狀莖粗大，木質，平臥或斜升，連同葉柄基部密被金黃色的長茸毛，形如金毛狗而得名，具有極高的觀賞價值。其根狀莖又稱“狗脊”，具有補肝腎、強腰膝、除風濕等功效，是治療風濕骨痛、足膝無力、老人尿頻、半身不遂、小便失禁等癥的理想藥材，根狀莖上的鱗毛還可外敷，治外傷出血，在中國及亞洲其他地區(qū)長期作為中藥使用(Zhang，X.-C；Jia，J.-S；Zhang，G.M.Survey and evaluation of the natural resources of Cibotiumbarometz(L.)Smith in China，with reference to the implementation of the cites convention.Fern Gazette.16(6-8).2002.383-387.)。
雖然我國是世界上“狗脊”資源最豐富的國家，但由于近年來人們對金毛狗藥用、保健、美食、營養(yǎng)等價值的進一步認識，開發(fā)之風盛行，“狗脊”的交易日趨增多，野生金毛狗資源被過度開采，金毛狗人工繁殖與栽培又相對滯后，使我國的金毛狗資源連年銳減，有些地區(qū)已經枯竭，因此，金毛狗已被列入CITES附錄∏中。
進行金毛狗孢子培養(yǎng)可以加快金毛狗的繁殖速度。目前，金毛狗孢子繁殖技術一般是將金毛狗孢子播種于蛭石、泥炭土、珍珠石構成的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)(《臺灣林業(yè)科學》，行政院農業(yè)委員會林業(yè)試驗所出版社2003年163)，但是采用該方法進行培養(yǎng)時，金毛狗的繁殖速度相當慢，金毛狗幼孢子體大約自播種后的第12-16周才出現(xiàn)。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種培養(yǎng)效率高的金毛狗孢子的培養(yǎng)方法。
本發(fā)明所提供的金毛狗孢子的培養(yǎng)方法，是先將無菌金毛狗孢子懸濁液接種于固體MS基本培養(yǎng)基上，然后在23-27℃溫度下先避光保存24-36h，接著在光照強度2000-2300Lux，光照時間12-14h/天條件下培養(yǎng)。
其中，所述無菌金毛狗孢子懸濁液按如下過程制備將孢子先用無菌水清洗，然后用NaClO溶液浸泡滅菌，滅菌后的孢子用無菌水清洗、分散，得到所述無菌金毛狗孢子懸浮液。
所述NaClO溶液的體積百分濃度為4-6％；所述浸泡滅菌的時間為4-5min。所得到的無菌金毛狗孢子懸濁液中孢子數(shù)一般為105個/ml左右；MS基本培養(yǎng)基上的接種量一般為3000-4000個孢子/皿。
孢子接種后進行培養(yǎng)時，培養(yǎng)溫度優(yōu)選為25℃；所述避光保存的時間優(yōu)選為24h；所述光照時間優(yōu)選為12h/天。
本發(fā)明將無菌金毛狗孢子懸濁液接種到滅菌固體MS培養(yǎng)基上進行無菌培養(yǎng)，使用少量孢子可得到大量金毛狗的孢子體，培養(yǎng)效率高達95％左右；孢子繁殖速度快，約8周即可得到大量的孢子體。本發(fā)明為金毛狗的保育提供了條件，具有重要的理論及實踐意義。
具體實施例方式
實施例1、金毛狗孢子的培養(yǎng)1、培養(yǎng)基所用培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基，其中不加入蔗糖，加入瓊脂7g/L作為固化劑，將培養(yǎng)基高溫滅菌，分裝到培養(yǎng)皿中備用。
2、孢子滅菌取孢子置于1.5ml離心管內，滴加無菌水，用旋渦混合器混合使其成懸濁液，4000rpm/min離心1min，棄去上清液，重復操作4-5遍；然后，離心管內再滴入1ml5％NaClO水溶液，浸泡滅菌4min，4000rpm/min離心，棄上清液，用無菌水沖洗、離心4-5遍；最后，將孢子用無菌水懸浮，獲得無菌孢子懸濁液(孢子數(shù)為105個/ml)。
3、孢子接種用滴管吸取此懸濁液，滴加在培養(yǎng)基表面，并涂布均勻，接種量一般為3000個/皿。
4、孢子培養(yǎng)接種后的培養(yǎng)皿放入塑料盤中，以玻璃覆蓋，塑料盤底部鋪有多層紗布，培養(yǎng)過程中始終保持紗布濕潤，以保證孢子萌發(fā)所需濕度。先將塑料盤置于25℃培養(yǎng)室中避光保存24h，然后在光照強度為2000-2300Lux的熒光燈光源下，每日光照培養(yǎng)12h，避光培養(yǎng)12h。連續(xù)培養(yǎng)8周左右，即可得到大量的幼孢子體，培養(yǎng)效率高達95％左右。
權利要求
1.一種培養(yǎng)金毛狗孢子的方法，是先將無菌金毛狗孢子懸濁液接種于固體MS基本培養(yǎng)基上，然后在23-27℃溫度下先避光保存24-36h，接著在光照強度2000-2300Lux，光照時間12-14h/天條件下培養(yǎng)。
2.根據(jù)權利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述無菌金毛狗孢子懸濁液按如下過程制備將孢子先用無菌水清洗，然后用NaClO溶液浸泡滅菌，滅菌后的孢子用無菌水清洗、分散，得到所述無菌金毛狗孢子懸浮液。
3.根據(jù)權利要求2所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述NaClO溶液的體積百分濃度為4-6％；所述浸泡滅菌的時間為4-5min。
4.根據(jù)權利要求3所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述NaClO溶液的體積百分濃度為5％；所述浸泡滅菌的時間為4min。
5.根據(jù)權利要求1-4任一所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述無菌金毛狗孢子懸濁液中孢子數(shù)為105個/ml；所述MS基本培養(yǎng)基上的接種量為3000-4000個孢子/皿。
6.根據(jù)權利要求1-4任一所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述培養(yǎng)溫度為25℃。
7.根據(jù)權利要求6所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述避光保存的時間為24h。
8.根據(jù)權利要求7所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述光照時間為12h/天。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種培養(yǎng)金毛狗孢子的方法。本發(fā)明所提供的金毛狗孢子的培養(yǎng)方法，是先將無菌金毛狗孢子懸濁液接種于固體MS基本培養(yǎng)基，然后在23－27℃溫度下先避光保存24－36h，接著在光照強度2000－2300Lux，光照時間12h/天條件下培養(yǎng)。本發(fā)明將無菌金毛狗孢子懸濁液接種到滅菌固體MS培養(yǎng)基上進行無菌培養(yǎng)，使用少量孢子可得到大量金毛狗的孢子體，培養(yǎng)效率高達95％左右；孢子繁殖速度快，約8周即可得到大量的孢子體。本發(fā)明為金毛狗的保育提供了條件，具有重要的理論及實踐意義。
文檔編號A01G7/00GK1788546SQ20041009849
公開日2006年6月21日 申請日期2004年12月13日 優(yōu)先權日2004年12月13日
發(fā)明者石雷, 張開梅 申請人:中國科學院植物研究所