專利名稱：：7-氫氧基-星狀孢子素在制備治療病毒性肝炎的藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及7-氫氧基-星狀孢子素(UCN01)在制備治療病毒性肝炎的藥物中的用途，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：乙肝病毒(HBV)本身不能直接引起肝細(xì)胞病變，而肝炎的發(fā)病(即肝組織的壞死和炎癥)是由于HBV感染后啟動(dòng)人體免疫清除過(guò)程的結(jié)果。如果人體的免疫機(jī)制不能及時(shí)清除HBV在體內(nèi)的持續(xù)存在和活躍復(fù)制，必將導(dǎo)致肝組織損傷的不斷進(jìn)展。因此，要想阻止肝臟的進(jìn)行性損害，必須采取有效藥物清除或抑制HBV的復(fù)制，也就是說(shuō)，抗病毒治療是控制慢性乙型肝炎關(guān)鍵措施。目前國(guó)內(nèi)外抗HBV(乙型肝炎病毒)的主要藥物為干擾素，它的免疫調(diào)節(jié)作用可導(dǎo)致感染的肝細(xì)胞破壞，從而達(dá)到清除病毒的目的。干擾素的有效率為30-60%，但對(duì)于重癥肝炎等肝細(xì)胞很少的患者不推薦使用。另外一類抗病毒藥物為核苷類似物，主要針對(duì)病毒逆轉(zhuǎn)錄酶，現(xiàn)在正在進(jìn)行臨床I、II期實(shí)驗(yàn)的拉美氟啶對(duì)于免疫耐受的HBV攜帶者有效，但停藥后HBVDNA水平又升高，長(zhǎng)期用藥病毒易產(chǎn)生耐藥變異。7-hydroxy-staurosporine(7-氫氧基-星狀孢子素，UCN01)是國(guó)外近幾年開發(fā)的抗腫瘤新藥，目前美國(guó)已進(jìn)入I期臨床試驗(yàn)。它是細(xì)胞節(jié)點(diǎn)激酶1的抑制劑，能夠去除G2期阻滯，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡增加,降低細(xì)胞存活率，增加DNA殺傷藥物的毒性。國(guó)內(nèi)外未有UCNOl在乙型肝炎治療中的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供UCN01用于制備治療病毒性肝炎的藥物的用途。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案UCN01用于制備治療病毒性肝炎的藥物的用途，所述病毒性肝炎包含但不限于乙型肝炎(即由HBV感染引起的肝炎)。UCN01用于制備抗乙型肝炎病毒的藥物的用途。本研究意想不到地發(fā)現(xiàn)UCNOl可以顯著的抑制細(xì)胞分泌乙肝表面抗原，這個(gè)結(jié)果目前國(guó)內(nèi)外沒有類似的報(bào)道，所以UCN-01可以開發(fā)制成抗肝炎類治療藥物。一種抗乙肝病毒的藥物，含有活性組分UCNOl。所述藥物是以UCN01為活性組分的制劑，既包括將UCN01作為唯一活性組分也包括將UCN01作為部分活性組分的情況。所述制劑為口服制劑或靜脈給藥制劑。所述口服制劑為片劑。所述靜脈給藥制劑為水針劑或粉針劑。該制劑可制成普通片劑、普通膠囊、顆粒劑、緩釋片劑、舌下含片、口腔速崩片、分散片、腸溶片、腸溶膠囊、延遲釋放片、定時(shí)/位釋放片、緩釋膠囊、控釋膠囊、含有微丸或小片的膠囊、含有微丸或小片的pH依賴型膠囊、顆粒劑、口服液、等劑型。該制劑中還含有藥劑學(xué)可接受的載體，可制成普通口服制劑，包括普通片劑、普通膠囊、顆粒劑等，制成片劑時(shí)所述藥學(xué)上可接受的載體包括有助于將活性化合物配制成藥用制劑的賦形劑和輔藥，如淀粉、微晶纖維素、無(wú)機(jī)鹽類、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化鈉、半胱氨酸、檸檬酸和亞硫酸鈉等的一種或幾種物質(zhì)的組合物，屬于本領(lǐng)域常識(shí)。該制劑中還含有藥劑學(xué)可接受的載體，可制成緩釋片劑，包括賦形劑和輔料等。所述的賦形劑和輔料包括起緩釋作用的輔料為羥丙甲纖維素和/或乙基纖維素和/或聚丙烯酸樹脂類和/或聚羧乙烯類和/或海藻酸的可溶性/不溶性鹽和/或其它起緩釋作用的輔料，羥丙甲纖維素采用內(nèi)含羥丙甲基纖維素(HPMC)的各種商品如各種規(guī)格的美多秀(Methocel)，乙基纖維素采用內(nèi)含乙基纖維素(EC)的各種商品，聚丙烯酸樹脂類采用內(nèi)含聚丙烯酸樹脂n、m類或類似物如各種規(guī)格的丙烯酸樹脂(Eudragit)。上述的輔料為致孔劑、粘合劑、潤(rùn)滑劑、乳化劑、膜材料、溶劑或其它輔料，致孔劑可采用蔗糖、甘露醇、淀粉、滑石粉、二氧化硅等；粘合劑可采用聚乙烯吡咯烷酮、羥丙甲纖維素等；潤(rùn)濕劑可釆用水、無(wú)水乙醇、各種濃度的乙醇-水溶液；潤(rùn)滑劑可采用硬脂酸、硬脂酸鎂、滑石粉、淀粉、石蠟等；增溶劑可采用酒石酸、檸檬酸等；乳化劑可采用span8(Aspan85等；膜材料可采用聚乙烯醇、羥甲纖維素、羥乙纖維素、羥乙甲纖維素、甲基纖維素等；發(fā)泡劑可采用堿式碳酸鎂、碳酸氫鈉等；助漂劑可采用十六醇、十八醇、蜂蠟等；溶劑可采用無(wú)水乙醇、乙醇、水等。該制劑中還含有藥劑學(xué)可接受的載體，可制成控釋片劑，包括活性藥物及起控釋作用的輔料。上述起控釋作用的輔料為聚氧乙烯和/或羥丙甲纖維素和/或乙基纖維素和/或氯化鈉和/或乳糖和/或甘露醇和/或果糖和/或葡萄糖和/或蔗糖/或低取代羥丙基纖維素和/或交聯(lián)羧甲基纖維素鈉和/或交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮和/或醋酸纖維素。上述的輔料為藥物載體、膨脹材料、助滲劑、增溶劑、粘合劑、潤(rùn)濕劑、潤(rùn)滑劑、著色劑、致孔劑、膜材料、抗粘劑、增塑劑、避光劑、溶劑。藥物載體、膨脹材料可采用聚氧乙烯、羥丙甲纖維素、乙基纖維素、山崳酸甘油酯類等；助滲劑可采用氯化鈉、乳糖、甘露醇、果糖、葡萄糖、蔗糖等；增溶劑可采用十二垸基硫酸鈉或泊洛沙姆等；粘合劑可采用聚乙烯吡咯烷酮、羥丙甲纖維素等；潤(rùn)濕劑可采用水、無(wú)水乙醇、各種濃度的乙醇-水溶液；潤(rùn)滑劑可采用硬脂酸、硬脂酸鎂、滑石粉、淀粉、石蠟等；著色劑可采用氧化鐵紅、氧化鐵黃等；致孔劑可采用蔗糖、甘露醇、聚乙二醇、二氧化鈦、滑石粉、二氧化硅等；膜材料可采用醋酸纖維素、乙基纖維素等；溶劑可采用丙酮、無(wú)水乙醇、乙醇、水等。該制劑中還含有藥劑學(xué)可接受的載體，可制成舌下含片、口腔速崩片或分散片等，包括賦形劑和輔料等。所述的賦形劑和輔料有低取代羥丙基甲基纖維素、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)羧甲纖維素鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯垸酮、處理瓊脂以及甘露醇、乳糖等。該制劑中還含有藥劑學(xué)可接受的載體，可制成腸溶片或腸溶膠囊等，包括賦形劑和輔料等，所述的賦形劑和輔料有淀粉、微晶纖維素、無(wú)機(jī)鹽類、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、聚丙烯酸樹脂類、聚羧乙烯類、海藻酸的可溶性/不溶性鹽類、十八醇、十八酸、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化鈉、半胱氨酸、檸檬酸和亞硫酸鈉等的一種或幾種物質(zhì)的組合物，腸溶包衣材料包括蟲膠、醋酸纖維素酞酸酯、丙烯酸樹脂類(如EudragitL和S型等)、聚醋酸乙烯苯二甲酸酯、鄰苯二甲酸羥丙甲纖維素酯、琥珀酸醋酸羥丙甲基纖維素，以及增塑劑(如鄰苯二甲酸二乙酯、聚乙二醇、丙二醇、甘油三乙酸酯、鄰苯二甲酸二甲酯、癸二酸二丁酯、檸檬酸三乙酯、檸檬酸三丁酯、乙?；鶛幟仕崛阴ァ⒈吐橛秃透鞣N百分比的乙?；瘑嗡岣视王サ?與致孔劑(如PEG6000等)等多種藥劑學(xué)輔料。該制劑中還含有藥劑學(xué)可接受的載體，可制成延遲釋放片或定時(shí)(位)釋放片，包括賦形劑和輔料，所述的賦形劑和輔料有淀粉、微晶纖維素、無(wú)機(jī)鹽類、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、聚丙烯酸樹脂類、聚羧乙烯類、海藻酸的可溶性/不溶性鹽類、十八醇、十八酸、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化鈉、半胱氨酸、擰檬酸和亞硫酸鈉等的一種或幾種物質(zhì)的組合物，所述的起延遲釋放或定時(shí)(位)釋放的包衣材料包括蟲膠、醋酸纖維素酞酸酯、乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、丙烯酸樹脂類(如EudragitL和S型等)、聚醋酸乙烯苯二甲酸酯、鄰苯二甲酸羥丙甲纖維素酯、琥珀酸醋酸羥丙甲基纖維素、醋酸羥丙基甲基纖維素酞酸酯、以及增塑劑(如鄰苯二甲酸二乙酯、聚乙二醇、丙二醇、甘油三乙酸酯、鄰苯二甲酸二甲酯、癸二酸二丁酯、檸檬酸三乙酯、檸檬酸三丁酯、乙?；鶛幟仕崛阴?、蓖麻油和各種百分比的乙酰化單酸甘油酯等等)與致孔劑(如PEG6000等)等多種藥劑學(xué)輔料。該制劑中還含有藥劑學(xué)可接受的載體，可制成緩釋膠囊、控釋膠囊，含有微丸或小片的膠囊，含有微丸或小片的pH依賴型膠囊等，包括賦形劑和輔料，所述的賦形劑和輔料有淀粉、微晶纖維素、無(wú)機(jī)鹽類、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、聚丙烯酸樹脂類、聚羧乙烯類、海藻酸的可溶性/不溶性鹽類、十八醇、十八酸、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化鈉、半胱氨酸、檸檬酸和亞硫酸鈉等的一種或幾種物質(zhì)的組合物，包衣材料包括蟲膠、醋酸纖維素、醋酸纖維素酞酸酯、乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、丙烯酸樹脂類(如Eudragit系列)、聚醋酸乙烯苯二甲酸酯、鄰苯二甲酸羥丙甲纖維素酯、琥珀酸醋酸羥丙甲基纖維素、醋酸羥丙基甲基纖維素酞酸酯、單硬酯酸甘油脂、以及增塑劑(如鄰苯二甲酸二乙酯、聚乙二醇、丙二醇、甘油三乙酸酯、鄰苯二甲酸二甲酯、癸二酸二丁酯、檸檬酸三乙酯、檸檬酸三丁酯、乙?；鶛幟仕崛阴ァ⒈吐橛秃透鞣N百分比的乙?；瘑嗡岣视王サ鹊?與致孔劑(如PEG6000等)等多種藥劑學(xué)輔料。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是本發(fā)明開發(fā)了一種專門針對(duì)乙肝病毒復(fù)制的新的藥物靶點(diǎn)，這種藥物可以抑制所有肝炎類病毒的復(fù)制，從體外抗病毒模型HepG22,2,15實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，與現(xiàn)有的抗病毒藥物如干擾素和拉米夫定相比，本藥物的抗病毒效果更好。下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明，并非對(duì)本發(fā)明的限制。凡是依照本發(fā)明公開內(nèi)容所做的任何本領(lǐng)域的等同替換，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。圖1為UCN01抑制乙肝病毒的復(fù)制結(jié)果。具體實(shí)施例方式實(shí)施例hUCN01抑制HBVDNA的復(fù)制一.材料細(xì)胞培養(yǎng)板等耗材均購(gòu)自華美公司HL7702細(xì)胞購(gòu)自中科院上海生化所細(xì)胞保存中心乙肝病毒陽(yáng)性血清由武警總醫(yī)院檢驗(yàn)科提供，經(jīng)熒光定量PCR檢測(cè)血清的HBVDNA滴度為5X107UCN01購(gòu)自SIGMA公司乙肝病毒DNA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京東勝生物有限公司二.方法1.乙肝病毒感染HL7702細(xì)胞HL7702細(xì)胞轉(zhuǎn)至6CM平板后24小時(shí)進(jìn)行HBV感染試驗(yàn)，試驗(yàn)分為未加藥物對(duì)照組以及藥物處理組，對(duì)照組加入含30%乙肝病毒陽(yáng)性血清的FCS/DMEM，藥物處理組感染后加入50nM的UCN01，于9小時(shí)，24小時(shí)，48小時(shí)后用PBS清洗，共洗8次后收集細(xì)胞煮沸5分鐘裂解后用于熒光定量PCR檢測(cè)。2.熒光定量PCR:樣品上樣后準(zhǔn)備SDS-PAGE電泳，電泳后轉(zhuǎn)膜，用5%脫脂奶粉PBST封閉1小時(shí)，加入一抗在搖床上輕搖1小時(shí)過(guò)夜，PBST洗三次，每次5min，然后加入二抗在搖床上輕搖1小時(shí)，PBST洗三次，每次5min，加入ECL(WesternBlotECL超敏發(fā)光液)中的A液和B液，曝光后進(jìn)行曝顯影，定影。三.結(jié)果圖1顯示，UCN01處理后再進(jìn)行乙肝病毒的感染，發(fā)現(xiàn)HBVDNA病毒的復(fù)制在UCN01藥物處理組明顯受到抑制。結(jié)論UCN01可以抑制HBV病毒的復(fù)制。實(shí)施例2:UCN01可以抑制HepG22,2,15細(xì)胞分泌乙肝表面抗原一.材料UCNOl，購(gòu)自SIGMA公司FBS胎牛血清，購(gòu)自杭州四季青DMEM培養(yǎng)基，購(gòu)自GIBCOL公司HepG2-2,2,15，是由高肝癌細(xì)胞HepG2衍生而來(lái)的穩(wěn)定支持HBV復(fù)制、組裝和分泌的細(xì)胞系，是本領(lǐng)域研究HBV細(xì)胞內(nèi)活動(dòng)過(guò)程和HBV對(duì)宿主細(xì)胞作用的常規(guī)細(xì)胞模型(購(gòu)于北京醫(yī)科大學(xué)人民醫(yī)院病毒室)Y-干擾素，購(gòu)自三元基因拉咪呋叮，購(gòu)自嘉事堂藥店乙肝表面抗原與核心抗原診斷試劑盒，購(gòu)自華美生物工程公司二.方法以HepG22,2,15為細(xì)胞模型，將細(xì)胞以3XloVcm2接種于24孔培養(yǎng)板，每孔加入含10。/。FBS的DMEMlml，次日移除上述培基，每孔加入含5。/。FBS的DMEM培養(yǎng)基lml;實(shí)驗(yàn)組分別加入不同濃度的陽(yáng)性對(duì)照IFN-r以及不同濃度的UCNOl，陰性對(duì)照組不加藥物。每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。每3d收集培養(yǎng)上清待測(cè)HBsAg定量檢測(cè)。乙肝病毒表面(核心)抗原的檢測(cè)各取50ul培養(yǎng)液加入表面抗原的96孔板中，再加入50iU相應(yīng)的酶標(biāo)結(jié)合物，37。C孵育lh。相應(yīng)洗液洗板5次，再依次加入50ul顯色液A及50ul顯色液B，37。C避光顯色15min，最后加入50iU終止液。在多標(biāo)記酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀(VIC2TORTMWallac1420MultilabelCounter,Wallac)上測(cè)定450nm處吸光值A(chǔ)。三.結(jié)果細(xì)胞加入50nM的UCN01后不同時(shí)間收樣，進(jìn)行熒光定量PCR的檢測(cè)，見表l。細(xì)胞加入藥物后不同時(shí)間收集上清利用表面抗原檢測(cè)試劑盒檢測(cè)表面抗原的分泌量，抑制率二(對(duì)照孔吸光值A(chǔ)—實(shí)驗(yàn)組吸光值A(chǔ))/對(duì)照組吸光值A(chǔ)。表l:UCN01可以抑制細(xì)胞分泌乙肝表面抗原<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表1顯示，UCN01可以抑制HepG22,2,15細(xì)胞分泌乙肝表面抗原，隨著藥物作用時(shí)間的推移，這種抑制作用逐漸增強(qiáng)，低濃度(20nM)至第12天后的抑制率超過(guò)15%以上。高低濃度(150nM)至第12天后的抑制率超過(guò)30%以上。150pM拉咪夫定的平均抑制作用為30%，500IUi干擾素的平均抑制作用為15%。結(jié)論UCN01在實(shí)驗(yàn)濃度下可抑制HepG22,2,15細(xì)胞表面抗原的表達(dá)。權(quán)利要求1.UCN01用于制備治療病毒性肝炎的藥物的用途。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的UCNOl用于制備治療病毒性肝炎的藥物的用途，其特征在于所述肝炎為乙型肝炎。3.UCNOl用于制備抗乙型肝炎病毒的藥物的用途。4.一種抗乙型肝炎病毒的藥物，其特征在于活性組分包含UCNOl。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的抗乙型肝炎病毒的藥物，其特征在于所述UCNOl為唯一活性組分或部分活性組分。6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的抗乙型肝炎病毒的藥物，其特征在于所述制劑為口服制劑或靜脈給藥制劑。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗乙型肝炎病毒的藥物，其特征在于所述口服制劑為片劑。8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗乙型肝炎病毒的藥物，其特征在于所述靜脈給藥制劑為水針劑或粉針劑。全文摘要本發(fā)明公開了7-氫氧基-星狀孢子素在制備治療病毒性肝炎的藥物中的用途，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。UCN01用于制備治療病毒性肝炎的藥物的用途。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是本發(fā)明開發(fā)了一種專門針對(duì)乙肝病毒復(fù)制的新的藥物靶點(diǎn)，這種藥物可以抑制所有肝炎類病毒的復(fù)制，從體外抗病毒模型HepG22，2，15實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，與現(xiàn)有的抗病毒藥物如干擾素和拉米夫定相比，本藥物的抗病毒效果更好。文檔編號(hào)A61P31/00GK101366718SQ200810056490公開日2009年2月18日申請(qǐng)日期2008年1月18日優(yōu)先權(quán)日2008年1月18日發(fā)明者湘何,侯寧波,張艷紅,帆趙,輝鐘,馬清鈞申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所