本發(fā)明涉及環(huán)糊精-苯乙烯-二乙烯苯微球的制備及其在手性分離中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

高效液相色譜是手性分離常用的方法之一，可分為分析型和制備型兩種。無(wú)論應(yīng)用哪種色譜分離分析手性藥物，色譜固定相都是其核心。目前應(yīng)用最廣泛的高效液相色譜固定相可分為化學(xué)鍵合的硅膠和高分子聚合物。高分子聚合物基質(zhì)的填料具有良好的化學(xué)穩(wěn)定性，在酸性、堿性及有機(jī)溶劑作用下都能保持較好的化學(xué)穩(wěn)定，這是硅膠基質(zhì)固定相不具備的優(yōu)勢(shì)。交聯(lián)的微球同時(shí)具有良好的機(jī)械強(qiáng)度，能滿足高效液相色譜的要求。此外，聚合物基質(zhì)微球也易于進(jìn)行各種化學(xué)改性，擴(kuò)展了其分離模式和應(yīng)用范圍。特別是對(duì)于生物大分子來(lái)說(shuō)，由于聚合物微球沒(méi)有硅羥基，表面無(wú)電荷，不會(huì)發(fā)生非特異性吸附，能極大限度保持被分離樣品的生物學(xué)活性。制備聚合物基質(zhì)的填料方法有很多種，目前比較常用的包括懸浮聚合法、沉淀聚合法、分散聚合法、多步溶脹聚合法等。使用這些方法制備出的微球具有不同的特點(diǎn)，如制備出的微球的粒徑、微球的交聯(lián)度、制備工藝復(fù)雜程度及成本等。1979年和1985年Ugelstad等人(Ugelstad J,Kaggerud K H,Hansen F K,et al.Absorption of low molecular weight compounds in aqueous dispersions of polymer-oligomer particles,a two-step swelling process of polymer particles giving an enormous increase in absorption capacity[J].Makromolekulare Chemie,180(3),737-744(1979).),(Ugelstad J,Mfutakamba H R,Mork P C,et al.Preparation and application of monodisperse polymer particles[J].Journal of Polymer Science:Polymer Synposium,72(1),225-240(1985).)開(kāi)發(fā)了多步溶脹聚合法，制備出的微球具有單分散、粒徑可控均一、高交聯(lián)度并且制備成本低廉的特點(diǎn)。這種方法可以使用包括苯乙烯、甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸縮水甘油酯、2-羥乙基甲基丙烯酸酯、乙烯基苯酚和氯甲基苯乙烯在內(nèi)的多種單體制備微球?；诖耍覀儜?yīng)用多步溶脹聚合法，以苯乙烯為單體，二乙烯苯為交聯(lián)劑，在溶脹過(guò)程中加入修飾的環(huán)糊精，直接獲得單分散、大小均勻、球型度良好、可控孔結(jié)構(gòu)的環(huán)糊精苯乙烯二乙烯苯(CD-PS-DVB)微球，制備出可用于高效液相色譜的手性固定相，應(yīng)用于更廣泛的手性藥物的分離與分析。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是制備CD-PS-DVB微球，并將CD-PS-DVB微球裝填成色譜柱，應(yīng)用在手性分離中。

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提出的一種環(huán)糊精-苯乙烯-二乙烯苯微球的制備方法，應(yīng)用多步溶脹聚合法，以苯乙烯為單體，二乙烯苯為交聯(lián)劑，在溶脹過(guò)程中加入修飾的環(huán)糊精，從而獲得環(huán)糊精-苯乙烯-二乙烯苯微球，制備的反應(yīng)路線如下：

本發(fā)明環(huán)糊精-苯乙烯-二乙烯苯微球的制備方法，包括如下步驟：

1)苯乙烯種子微球的制備：

在三口燒瓶中加入醇類溶劑，所述醇類溶劑選用無(wú)水乙醇或正丁醇，再向三口燒瓶中加入提純后的偶氮二異丁腈和聚乙烯吡咯烷酮，其中，偶氮二異丁腈與聚乙烯吡咯烷酮的質(zhì)量比為2:15，醇類溶劑與偶氮二異丁腈與和聚乙烯吡咯烷酮總和的體積質(zhì)量比1000mL/17g，攪拌完全溶解，通氮?dú)庖灾脫Q空氣，然后加入苯乙烯，其中，苯乙烯與醇類溶劑的體積比為1:4，常溫?cái)嚢?.5-2h后，升溫至60-90℃，待溶液逐漸由透明變?yōu)槿榘咨?，繼續(xù)反應(yīng)18-24h后停止加熱；乳白色溶液中有沉淀物，將乳白色的溶液倒出，對(duì)沉淀物依次進(jìn)行離心、乙醇和水洗，然后放置在60-100℃的真空干燥箱內(nèi)干燥12h后得到苯乙烯種子微球；

2)烯丙基-環(huán)糊精的制備：

稱取環(huán)糊精溶解在二甲基甲酰胺中，所述環(huán)糊精選用β-環(huán)糊精或是γ-環(huán)糊精，然后加入氫化鈉，其中，環(huán)糊精與二甲基甲酰胺與氫化鈉的質(zhì)量體積質(zhì)量比為25:200:2，常溫下攪拌0.5-2h后過(guò)濾，在濾液中加入烯丙基縮水甘油醚，其中，烯丙基縮水甘油醚與二甲基甲酰胺的體積比為3:80，升溫至60-90℃，反應(yīng)18-24h。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液倒入甲醇中，沉淀出烯丙基-環(huán)糊精固體，過(guò)濾，烘干，備用；

3)環(huán)糊精-苯乙烯-二乙烯苯微球的制備：

將鄰苯二甲酸丁酯滴加入裝有質(zhì)量體積濃度為0.125-0.5％的十二烷基硫酸鈉水溶液的燒杯中，其中，鄰苯二甲酸丁酯與十二烷基硫酸鈉的體積比為4:75，超聲直至在顯微觀察下沒(méi)有液滴得到乳化液為止；將步驟1)制備得到的苯乙烯種子微球超聲分散于裝有質(zhì)量體積濃度為0.125-0.5％的十二烷基硫酸鈉水溶液的燒杯中，其中，苯乙烯種子微球與十二烷基硫酸鈉水溶液的質(zhì)量體積比為7:125，將兩個(gè)燒杯中的溶液合并后再超聲0.5-2h，倒入單口瓶中，放入水浴搖床中，振搖3-7h以活化種球；

將偶氮二異丁腈溶解于甲苯中，加入到質(zhì)量體積濃度為0.125-0.5％的十二烷基硫酸鈉水溶液中，其中，偶氮二異丁腈、甲苯、十二烷基硫酸鈉水溶液的質(zhì)量比為21:500:1250，超聲混勻后加入到反應(yīng)體系中，繼續(xù)在水浴搖床中振搖溶脹10-15h；

將苯乙烯和二乙烯苯加入到質(zhì)量體積濃度為0.125-0.5％的十二烷基硫酸鈉水溶液中，其中，苯乙烯、二乙烯苯和十二烷基硫酸鈉水溶液的體積比為1:1:5，超聲混勻；

稱取步驟2)得到的烯丙基-環(huán)糊精加入到二甲基亞砜中，其中，烯丙基-環(huán)糊精與二甲基亞砜的質(zhì)量體積比為1:5，超聲溶解；

將上述溶液全部加入到反應(yīng)體系中，繼續(xù)在水浴搖床中振搖溶脹10-15h；將上述反應(yīng)液倒入分液漏斗中，靜置0.5-2h以分層，去除上層黃色的有機(jī)層；

向反應(yīng)液中加入質(zhì)量體積濃度為5-30％的聚乙烯吡咯烷酮溶液，其中，聚乙烯吡咯烷酮溶液的體積與反應(yīng)液的容積比為1:10，常溫?cái)嚢柘峦ǖ獨(dú)?0-30min，然后用帶有氣球的塞子封口，放入60-90℃的水浴搖床中，聚合10-15h得到微球，將微球用水洗至無(wú)聚乙烯吡咯烷酮，再用乙醇洗后烘干；將干燥的微球用甲苯浸提18-24h，用乙醇洗至無(wú)色溶液，烘干；再將干燥的微球用四氫呋喃浸提18-24h，用乙醇洗至無(wú)色溶液，烘干，即得到環(huán)糊精-苯乙烯-二乙烯苯微球。

本發(fā)明步驟1)中，所述醇類溶劑選用無(wú)水乙醇時(shí)，得到的苯乙烯種子微球的粒徑為2μm；醇類溶劑選用正丁醇時(shí)，得到的環(huán)糊精-苯乙烯-二乙烯苯微球的粒徑為5μm。

本發(fā)明步驟3)中，以2μm苯乙烯種子微球?yàn)榉N球時(shí)，可獲得5μm環(huán)糊精-苯乙烯-二乙烯苯微球；以5μm苯乙烯種子微球?yàn)榉N球時(shí)，可獲得10μm環(huán)糊精-苯乙烯-二乙烯苯微球。

將上述得到的環(huán)糊精-苯乙烯-二乙烯苯微球應(yīng)用于高效液相色譜法中，采用高壓勻漿法填裝環(huán)糊精-苯乙烯-二乙烯苯微球，分別得到了5μmβ-CD-PS-DVB微球、5μmγ-CD-PS-DVB微球、10μm CD-PS-DVB微球裝填的反相HPLC色譜柱以及5μm CD-PS-DVB微球裝填的正相HPLC色譜柱，然后將這些手性色譜柱應(yīng)用在高效液相色譜法中分離不同的手性藥物。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

(1)本發(fā)明首次將環(huán)糊精-苯乙烯-二乙烯苯微球裝填成色譜柱，應(yīng)用在手性分離中。

(2)本發(fā)明制備手性色譜柱，試劑價(jià)格低廉，方法簡(jiǎn)單可行。

(3)本發(fā)明制備的微球在擴(kuò)展手性分離方法和范圍方面具有一定的潛力。

附圖說(shuō)明

圖1(a)為PS-DVB的SEM圖，圖1(b)是圖1(a)的局部放大圖；

圖1(c)為β-CD-PS-DVB的SEM圖，圖1(d)是圖1(c)的局部放大圖；

圖1(e)為β-CD-PS-DVB的TEM圖，圖1(f)是圖1(e)的局部放大圖；

圖2為PS-DVB微球和β-CD-PS-DVB微球的紅外圖譜。

圖3為5μmγ-CD-PS-DVB柱分離手性藥物普萘洛爾的色譜圖。

圖4為5μmγ-CD-PS-DVB柱分離手性藥物華法林的色譜圖。

圖5為10μmγ-CD-PS-DVB柱分離手性藥物撲爾敏的色譜圖。

圖6為5μmγ-CD-PS-DVB柱分離手性藥物氧氟沙星的色譜圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)描述，所描述的具體實(shí)施例僅對(duì)本發(fā)明進(jìn)行解釋說(shuō)明，并不用以限制本發(fā)明。

本發(fā)明的設(shè)計(jì)思路是：首先采用分散聚合法合成了不同粒徑大小的種子微球，同時(shí)將環(huán)糊精進(jìn)行修飾，使其結(jié)構(gòu)上帶上雙鍵；然后，利用多步溶脹和聚合的方法將環(huán)糊精溶脹入PS-DVB微球內(nèi)部，通過(guò)考察分散劑、穩(wěn)定劑和溶脹溫度，確定了最優(yōu)合成條件，最終分別得到不同粒徑大小的β-CD-PS-DVB微球和γ-CD-PS-DVB微球。

本發(fā)明提出的一種環(huán)糊精-苯乙烯-二乙烯苯微球的制備方法，應(yīng)用多步溶脹聚合法，以苯乙烯為單體，二乙烯苯為交聯(lián)劑，在溶脹過(guò)程中加入修飾的環(huán)糊精，從而獲得環(huán)糊精-苯乙烯-二乙烯苯微球，制備的反應(yīng)路線如下：

以制備β-環(huán)糊精-苯乙烯-二乙烯苯(β-CD-PS-DVB)微球?yàn)槔?，說(shuō)明本發(fā)明的制備方法，包括如下步驟：

1)苯乙烯種子微球的制備：在250mL的三口瓶中加入100mL無(wú)水乙醇，無(wú)水乙醇與三口瓶體積比為2:5。再向三口瓶中加入0.2g提純后的偶氮二異丁腈和1.5g提純后的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，190r/min的機(jī)械攪拌使AIBN和PVP完全溶解，通氮?dú)庖灾脫Q空氣。然后加入25mL的苯乙烯，常溫?cái)嚢?.5h后，升溫至75℃，待反應(yīng)溶液逐漸由透明變?yōu)槿榘咨?，繼續(xù)反應(yīng)24h后停止加熱；乳白色溶液中有微球狀沉淀物，將乳白色的溶液倒出，用離心的方法洗滌微球，用乙醇洗微球以去除未反應(yīng)的苯乙烯，再用水洗去PVP，然后將洗滌后的微球放置在60℃的真空干燥箱內(nèi)干燥過(guò)夜，得到直徑為2μm的苯乙烯種子微球，備用。按照上述方法制備直徑為5μm的苯乙烯種子微球，將其中的無(wú)水乙醇替換為正丁醇即可。

2)烯丙基-β-環(huán)糊精(β-ACD)的制備：稱取10g的β-環(huán)糊精(β-CD)溶解在80mL的二甲基甲酰胺(DMF)中，加入0.8g的氫化鈉(NaH)，常溫下攪拌0.5h后過(guò)濾，在濾液中加入3mL的烯丙基縮水甘油醚(AGE)，升溫至70℃，反應(yīng)10h。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液倒入大量甲醇中，沉淀出β-ACD固體，過(guò)濾，烘干，備用；

3)β-環(huán)糊精-苯乙烯-二乙烯苯(β-CD-PS-DVB)微球的制備：將4mL鄰苯二甲酸丁酯滴加入裝有75mL質(zhì)量體積濃度為0.25％的十二烷基硫酸鈉水溶液的燒杯中，超聲直至在顯微觀察下沒(méi)有液滴得到乳化液為止；將1.4g由步驟1)制備得到的苯乙烯種子微球超聲分散于裝有25mL質(zhì)量體積濃度為0.25％的SDS水溶液的燒杯中，加入上述盛裝有乳化液的燒杯中，兩相合并后再超聲0.5h，倒入500mL單口瓶中，放入水浴搖床中，150rpm攪拌4h以活化種球。將0.42g偶氮二異丁腈溶解于10mL甲苯中，加入到25mL 0.25％(m/v)的SDS水溶液中，超聲混勻后加入到反應(yīng)體系中，繼續(xù)在水浴搖床中150rpm攪拌溶脹12h。將5mL苯乙烯(St)和5mL二乙烯苯加入到25mL 0.25％(m/v)的SDS水溶液中，超聲混勻得到溶液A；稱取2g由步驟2)得到的β-ACD加入到10mL二甲基亞砜(DMSO)中，超聲溶解得到溶液B；將上述溶液A和溶液B全部加入到反應(yīng)體系中，繼續(xù)在水浴搖床中150rpm攪拌溶脹12h；將上述反應(yīng)液倒入分液漏斗中，靜置1h以分層，去除上層黃色的有機(jī)層。向去除了上層黃色的有機(jī)層的溶液中加入50mL20％(m/v)的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)溶液，常溫?cái)嚢柘峦ǖ獨(dú)?0min，然后用帶有氣球的塞子封口，放入75℃的水浴搖床中，150rpm聚合12h得到微球，將微球用水洗至無(wú)PVP，再用乙醇洗后烘干；將干燥的微球用甲苯浸提24h，用乙醇洗至無(wú)色溶液，烘干；再將干燥的微球用四氫呋喃(THF)浸提24h，用乙醇洗至無(wú)色溶液，烘干，即得到單分散多孔高交聯(lián)度的環(huán)糊精-β-苯乙烯-二乙烯苯微球。

本實(shí)施例中，在步驟2)中，若加入的是直徑為2μm的苯乙烯種子微球，則最終得到的β-CD-PS-DVB微球的直徑為5μm；若加入的是直徑為5μm的苯乙烯種子微球，則最終得到的β-CD-PS-DVB微球的直徑為10μm。

本發(fā)明中，制備γ-環(huán)糊精-苯乙烯-二乙烯苯(γ-CD-PS-DVB)微球，包括步驟1)苯乙烯種子微球的制備，步驟2)γ-ACD的制備，3)γ-CD-PS-DVB微球的制備，制備方法與上述β-CD-PS-DVB微球的方法基本相同，只是在步驟2)將β-CD替換為γ-CD即可。

本發(fā)明制備得到的CD-PS-DVB微球的表征，包括：

(1)微球表面形態(tài)表征：取適量CD-PS-DVB微球，用蒸餾水超聲分散，用生物顯微鏡觀察CD-PS-DVB微球的大小、分散性和均勻度；用掃描電鏡(SEM)和透射電鏡(TEM)觀察微球的表面及孔徑形貌。

(2)微球的官能團(tuán)表征：取適量CD-PS-DVB微球以溴化鉀壓片進(jìn)行傅立葉紅外光譜分析(FTIR)。

將本發(fā)明制得的CD-PS-DVB微球在高效液相色譜法中的應(yīng)用，采用高壓勻漿法填裝環(huán)糊精-苯乙烯-二乙烯苯微球，得到了不同的手性色譜柱，然后將這些手性色譜柱應(yīng)用在高效液相色譜法中分離不同的手性藥物。包括如下步驟：

(1)將本發(fā)明制得的環(huán)糊精-苯乙烯-二乙烯苯微球過(guò)篩，稱取2.5g微球，以無(wú)水乙醇為勻漿液，利用超聲將過(guò)篩后的2.5g的微球分散在勻漿液中，采用高壓勻漿法分散有環(huán)糊精-苯乙烯-二乙烯苯微球的勻漿液裝填至不銹鋼柱管中，得到手性色譜柱；

(2)手性分離實(shí)驗(yàn)在室溫下進(jìn)行，所用反相流動(dòng)相為甲醇-水或乙腈-水體系，正相流動(dòng)相為乙醇-正己烷體系，反相流動(dòng)相和正相流動(dòng)相在使用前均經(jīng)過(guò)0.45μm的濾膜過(guò)濾，并采用真空脫氣的方法進(jìn)行脫氣。

實(shí)施例1

CD-PS-DVB微球制備條件的考察與優(yōu)化，包括如下步驟：

(1)分散劑用量的優(yōu)化：分散劑不僅可以提高或改善固體或者液體在乳液中的分散情況，同時(shí)可以防止顆粒沉降和聚積的發(fā)生。SDS是一種良好的分散劑，分子內(nèi)同時(shí)具有親水性和親脂性的基團(tuán)。實(shí)驗(yàn)中嘗試改變SDS的含量來(lái)改善由于加入環(huán)糊精帶來(lái)的影響。分別使用0.5％SDS 100mL和200mL來(lái)溶脹種子微球，經(jīng)溶脹聚合后得到CD-PS-DVB微球。SDS溶液的體積指的是種子微球溶脹中SDS溶液體積的總和。由顯微鏡圖看出，通過(guò)增加SDS的體積，稀釋PS種子微球和環(huán)糊精的濃度，并沒(méi)有獲得單分散的CD-PS-DVB微球，還有很多微球粘連的現(xiàn)象出現(xiàn)。SDS屬于小分子分散劑，其溶液粘度小，無(wú)法達(dá)到分散開(kāi)微球的目的。依據(jù)降低成本的原則，最終仍選擇添加100mLSDS溶液參與溶脹。

(2)穩(wěn)定劑濃度的優(yōu)化：通過(guò)改變穩(wěn)定劑的濃度，改變反應(yīng)溶液的粘度，達(dá)到防止微球粘連的效果。在聚合之前加入不同濃度的PVP溶液，當(dāng)PVP質(zhì)量體積濃度為5％和10％時(shí)，由于粘度不足，產(chǎn)品中都有不同程度的微球粘連在一起，當(dāng)PVP質(zhì)量體積濃度增加到20％后，CD-PS-DVB微球表現(xiàn)出良好的單分散性。

(3)溶脹溫度的優(yōu)化：在溶脹的過(guò)程中，通過(guò)加熱可以加速種子微球的溶脹過(guò)程，使更多的單體，交聯(lián)劑和制孔劑等參與種子微球的溶脹。但是由于在溶脹過(guò)程中加入了AIBN為引發(fā)劑，而AIBN的在較高溫度下就會(huì)開(kāi)始分解，因此溶脹溫度不可過(guò)高。實(shí)驗(yàn)中選擇比較常溫溶脹和加熱至43℃溶脹的方式，對(duì)比溫度對(duì)微球制備的影響。從顯微鏡圖可以看出，加熱溶脹的微球大小要比常溫溶脹的微球大一些，說(shuō)明溶脹溫度對(duì)于微球粒徑是有影響的。同時(shí)在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可發(fā)現(xiàn)，加熱溶脹的種子微球溶液，在靜置時(shí)，上層的有機(jī)相明顯少于常溫下溶脹的種子微球溶液。另外，保持穩(wěn)定溫度進(jìn)行溶脹，也可以排除由于室溫不同帶來(lái)的不同批次之間微球粒徑不同的影響，有利于不同批次之間微球的重現(xiàn)性。

(4)最優(yōu)條件的選擇：通過(guò)考察分散劑、穩(wěn)定劑和溶脹溫度對(duì)CD-PS-DVB微球制備過(guò)程的影響，最終確定了以2μm聚苯乙烯微球?yàn)榉N子微球，制備乳化液時(shí)加入SDS溶液總量為100mL，并保持溶脹溫度為43℃，聚合前加入質(zhì)量體積濃度為20％的PVP溶液，來(lái)獲得5μm單分散高交聯(lián)的γ-CD-PS-DVB微球。若要獲得更大粒徑的CD-PS-DVB微球，則需要使用更大的種子微球進(jìn)行溶脹和聚合。當(dāng)使用5μm的聚苯乙烯微球?yàn)榉N子微球時(shí)，通過(guò)相同的溶脹和聚合方法，可得到10μm的γ-CD-PS-DVB微球。此方法同樣適用于β-CD-PS-DVB微球的制備，在溶脹的時(shí)候溶解β-ACD于DMSO中，加入到反應(yīng)體系中，參與溶脹和聚合，即可得到單分散10μm的β-CD-PS-DVB微球。

實(shí)施例2

CD-PS-DVB微球的表征，包括如下步驟：

(1)微球表面形態(tài)表征：取適量CD-PS-DVB微球，用蒸餾水超聲分散，用生物顯微鏡觀察CD-PS-DVB微球的大小、分散性和均勻度；用掃描電鏡(SEM)和透射電鏡(TEM)觀察微球的表面及孔徑形貌。

加入了環(huán)糊精之后，通過(guò)優(yōu)化反應(yīng)條件，最后產(chǎn)物形態(tài)和孔結(jié)構(gòu)并沒(méi)有受到很大的影響，微球并沒(méi)有發(fā)生破壞或碎裂，環(huán)糊精也沒(méi)有堵塞微球的孔結(jié)構(gòu)，CD-PS-DVB微球呈單分散，微球粒徑均勻，具有良好的球型度和完整的孔結(jié)構(gòu)(圖1(a)至圖1(f))。

(2)微球的官能團(tuán)表征：取適量CD-PS-DVB微球以溴化鉀壓片進(jìn)行傅立葉紅外光譜分析(FTIR)。

3500cm^-1處的峰代表了O-H的伸縮振動(dòng)，圖2的(B)中-OH的伸縮振動(dòng)明顯強(qiáng)于圖2的(A)中-OH伸縮振動(dòng)，表明環(huán)糊精已經(jīng)成功的聚合在CD-PS-DVB微球內(nèi)。在3000到3100cm^-1之間的三個(gè)峰，1602cm^-1和1492cm^-1處的峰，都是苯環(huán)振動(dòng)的特征峰。在700和759cm^-1兩處的峰也與單取代苯環(huán)上C-H伸縮振動(dòng)有關(guān)(圖2)。

通過(guò)用SEM、TEM和紅外光譜對(duì)CD-PS-DVB微球進(jìn)行表征，證明了高交聯(lián)度的CD-PS-DVB微球上含有環(huán)糊精，且分散性良好，粒徑均一，具有完整的球型度和孔結(jié)構(gòu)。

實(shí)施例3

5μmβ-CD-PS-DVB微球在反相HPLC手性分離中的應(yīng)用：

普萘洛爾是一種已經(jīng)商品化的β腎上腺素受體的拮抗藥，廣泛應(yīng)用于治療心血管疾病。但是市售的普萘洛爾是外消旋體，其對(duì)映體表現(xiàn)出了明顯不同的藥效學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)特性，S-對(duì)映體比R-對(duì)映體更有效。普萘洛爾可用β-CD-PS-DVB色譜柱分離(圖3)。

實(shí)施例4

5μmγ-CD-PS-DVB微球在反相HPLC手性分離中的應(yīng)用：

以華法林為模型手性藥物，驗(yàn)證γ-CD-PS-DVB色譜柱的手性分離能力。華法林是一種常用的抗凝劑，通常用于預(yù)防血栓和血栓栓塞性疾病。市售的華法林是一種外消旋的混合物，在預(yù)防血栓栓塞性疾病方面，S-對(duì)映體的活性是R對(duì)映體的5倍，因此分離分析華法林也具有非常重要的意義(圖4)。

實(shí)施例5

10μm CD-PS-DVB微球在反相HPLC手性分離中的應(yīng)用：

有機(jī)胺類藥物撲爾敏是一種典型的H1受體拮抗劑，常用于治療過(guò)敏等癥狀，在其化學(xué)結(jié)構(gòu)中具有手性中心。在各種組織中受體結(jié)合的研究表明，d-異構(gòu)體的活性是l-異構(gòu)體的100倍。撲爾敏可以用來(lái)證明大粒徑γ-CD-PS-DVB色譜柱的手性分離能力，在含有緩沖鹽的流動(dòng)相作用下，撲爾敏在10μm的γ-CD-PS-DVB手性柱上表現(xiàn)出了分離趨勢(shì)(圖5)。

實(shí)施例6

5μm CD-PS-DVB微球在正相HPLC手性分離中的應(yīng)用：

CD-PS-DVB色譜柱不僅在反相液相色譜中可以分離手性藥物，在正相色相色譜中，CD-PS-DVB色譜柱同樣表現(xiàn)出了一定的手性分離潛力。外消旋的氧氟沙星是一種喹諾酮類抗菌藥物，其立體化學(xué)結(jié)構(gòu)顯著影響了其藥理活性。一些研究表明，S-對(duì)映體(左氧氟沙星)比其R-對(duì)映體活性大8-128倍。使用乙醇和正己烷為流動(dòng)相，二乙胺調(diào)節(jié)流動(dòng)相酸堿度，在短時(shí)間內(nèi)氧氟沙星在γ-CD-PS-DVB色譜柱中就展示了分離趨勢(shì)(圖6)。

將本發(fā)明制備得到的這些CD-PS-DVB微球裝填成色譜柱，應(yīng)用在手性分離中，證明了其在手性識(shí)別方面具有一定的潛力。由以上方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果可以看出，將本發(fā)明的以環(huán)糊精苯乙烯二乙烯苯微球作為HPLC手性固定相分離方法具有可行性，且結(jié)果較為穩(wěn)定。

本方法制備手性色譜柱，試劑價(jià)格低廉，方法簡(jiǎn)單可行，制備的微球在擴(kuò)展手性分離方法和范圍具有一定的潛力。

通過(guò)上述結(jié)合實(shí)驗(yàn)附圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了描述，但以上具體實(shí)施案例僅僅是部分實(shí)驗(yàn)，并不是用來(lái)限制本發(fā)明的實(shí)施范圍。本領(lǐng)域的相關(guān)技術(shù)人員依據(jù)本發(fā)明或不脫離本發(fā)明宗旨的情況下，所進(jìn)行的等效變形和相關(guān)修飾，這些都在本發(fā)明的保護(hù)之內(nèi)。