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一種淮陰苜蓿蛋白的提取方法與流程

文檔序號(hào):12581721閱讀:來源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種淮陰苜蓿蛋白的提取方法,是由-20℃預(yù)冷的三氯乙酸的丙酮進(jìn)行沉淀,用-20℃預(yù)冷丙酮清洗三次,沉淀通過裂解液溶解。其特征在于,三氯乙酸的丙酮中三氯乙酸的含量為8-10%;丙酮濃度為90-100%;裂解液成分為7M尿素,2M硫脲,4%CHAPS,1%DTT,2%Ampholytes。

2.按照權(quán)利要求1所述的提取方法,其特征在于:淮陰苜蓿處理方法是:

取生長(zhǎng)狀況完好的淮陰苜蓿葉片,放入液氮預(yù)冷的研缽,在液氮中充分研磨至粉末。

3.按照權(quán)利要求1所述的提取方法,其特征在于:三氯乙酸丙酮溶液的配置方法是:

準(zhǔn)確稱取50g三氯乙酸,溶解于丙酮溶液中,定容至500mL。

4.按照權(quán)利要求1所述的提取方法,其特征在于:丙酮溶液的配置方法是:

準(zhǔn)確量取450mL丙酮,50mL蒸餾水,充分混勻后,4℃儲(chǔ)存。

5.按照權(quán)利要求1所述的提取方法,其特征在于:裂解液的配置方法是:

準(zhǔn)確稱取4.2g尿素、1.52g硫脲、0.4gCHAPS、0.1g DTT,取3mL蒸餾水,逐步加入尿素進(jìn)行溶解,當(dāng)無法完全溶解時(shí)加入少量蒸餾水,尿素完全溶解后再溶解硫脲,然后溶解CHAPS和DTT,待所有粉末完全溶解后,加入0.2mL Ampholytes,將溶液混合均勻,-80℃儲(chǔ)存。

6.按照權(quán)利要求1所述的提取方法,其特征在于:所述淮陰苜蓿蛋白的提取為下述步驟:

1)研磨:取0.5g葉片,放入液氮預(yù)冷的研缽,研磨好的粉末轉(zhuǎn)移到50mL離心管;

2)沉淀:按1∶10的比例加入-20℃預(yù)冷含0.07%巰基乙醇、8-10%TCA的丙酮,混合充分后,-20℃放置30-50min,4℃,14000g離心15min,棄上清;

3)清洗:沉淀加入-20℃預(yù)冷含0.07%巰基乙醇的90-100%丙酮溶液25mL,充分混合后,-20℃靜置1h,4℃,14000g離心15min,棄上清,重復(fù)3次;

4)轉(zhuǎn)移:沉淀轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管中,4℃,14000g,5min,棄上清,室溫干燥2h;

5)溶解:沉淀按10μl/mg的比例加入裂解液,充分裂解2h后,15℃,16000g離心10min,將上清轉(zhuǎn)移至新的離心管,上清液即為提取好的蛋白溶液。

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