一種代替抗生素的紫花苜蓿提取物及在生物飼料中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種代替抗生素的紫花苜蓿提取物及在生物飼料中的應(yīng)用，由如下方法制備：(a)將干燥的紫花苜蓿全草和穿山龍混合，粉碎，用85～95％乙醇溶液熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液；(b)乙醇提取濃縮液依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，減壓濃縮，得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(c)正丁醇萃取物用水溶解，過濾，用D101型大孔樹脂富集，先用10～20％乙醇沖洗7～11個(gè)柱體積除去大極性成分，再用75～85％乙醇洗脫12～16個(gè)柱體積，收集75～85％乙醇洗脫液，減壓濃縮，噴霧干燥即得；其中，紫花苜蓿全草與穿山龍的重量份之比為7～9:1。本發(fā)明提供的紫花苜蓿提取物添加到生物飼料中可明顯提高畜禽免疫力。
【專利說明】
一種代替抗生素的紫花苜蓿提取物及在生物飼料中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及功能性植物提取物在生物飼料中的應(yīng)用，具體涉及一種代替抗生素的 紫花苜蓿提取物及在生物飼料中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 紫花苜蓿，原名：紫苜蓿，又名苜蓿，薔薇目、豆科、苜蓿屬多年生草本，根粗壯，深 入土層，根頸發(fā)達(dá)。莖直立、叢生以至平臥，四棱形，無毛或微被柔毛，枝葉茂盛。種子卵形， 長(zhǎng)1-2.5毫米，平滑，黃色或棕色?；ㄆ?-7月，果期6-8月。原產(chǎn)于小亞細(xì)亞、伊朗、外高加索 一帶。世界各地都有栽培或呈半野生狀態(tài)。生于田邊、路旁、曠野、草原、河岸及溝谷等地。歐 亞大陸和世界各國(guó)廣泛種植為飼料與牧草。紫花苜蓿具有營(yíng)養(yǎng)、保健和生理調(diào)節(jié)三大功能， 在增加畜禽體重、增強(qiáng)畜禽免疫力、降低疾病發(fā)病率方面有特殊的效果，相關(guān)的研究報(bào)道非 常多。
[0003] 研究表明，苜蓿多糖作為豬瘟兔化弱毒疫苗的強(qiáng)化劑對(duì)60日齡體重18~20kg的仔 豬進(jìn)行免疫試驗(yàn)研究，結(jié)果表明，苜蓿多糖可使豬外周血液的B淋巴細(xì)胞增多，血清抗體水 平提高，并對(duì)豬瘟疫苗免疫效果具有明顯的強(qiáng)化作用。還有研究表明，紫花苜蓿水提物喂 鼠，可明顯增加幼齡鼠、成年鼠的脾臟重量及胸腺重量;增強(qiáng)鼠的抗疲勞、耐饑餓能力；以及 提高小鼠的應(yīng)激能力和適應(yīng)能力。紫花苜蓿對(duì)提高動(dòng)物免疫力有明顯的促進(jìn)作用，主要通 過提高T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率、巨噬細(xì)胞的吞噬指數(shù)和血清抗體水平來提高動(dòng)物免疫力，同時(shí)能 夠促進(jìn)抗體組織細(xì)胞增生，抑制金色葡萄球菌、大腸桿菌及鏈球菌生長(zhǎng)來提高動(dòng)物的免疫 力和預(yù)防腸道疾病的發(fā)生。兩種植物對(duì)提高動(dòng)物免疫力，降低發(fā)病率方面的功能具有互補(bǔ) 作用。在進(jìn)一步的檢索中，至今還未見有關(guān)把紫花苜蓿和苣菜水提物按比例混合配制成免 疫功能更強(qiáng)、作用范圍更廣的飼料添加劑的報(bào)道。
[0004] 為了進(jìn)一步提高紫花苜蓿提取物提高畜禽免疫功能的能力，有必要進(jìn)一步研究， 以開發(fā)出免疫功能更強(qiáng)、作用范圍更廣的紫花苜蓿提取物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種代替抗生素的紫花苜蓿提取物，該紫花苜蓿提取物添加 到生物飼料中后可明顯提高畜禽的免疫力，提高其抵抗細(xì)菌感染等疾病的能力;本發(fā)明紫 花苜蓿提取物的免疫功能更強(qiáng)。
[0006] 上述目的是通過如下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0007] -種代替抗生素的紫花苜蓿提取物，通過如下方法制備：（a)將干燥的紫花苜蓿全 草和穿山龍混合，粉碎，用85~95%乙醇溶液熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味得到 乙醇提取濃縮液；（b)將乙醇提取濃縮液用水稀釋，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正 丁醇萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇 萃取物用水溶解，過濾，用D101型大孔樹脂富集活性成分，先用10~20%乙醇沖洗7~11個(gè) 柱體積除去大極性成分，再用75~85%乙醇洗脫12~16個(gè)柱體積，收集75~85%乙醇洗脫 液，減壓濃縮，噴霧干燥即得;其中，紫花苜蓿全草與穿山龍的重量份之比為7~9:1。
[0008] 進(jìn)一步地，所述紫花苜蓿提取物通過如下方法制備：（a)將干燥的紫花苜蓿全草和 穿山龍混合，粉碎，用90%乙醇溶液熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取 濃縮液；（b)將乙醇提取濃縮液用水稀釋，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取， 減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇萃取物用 水溶解，過濾，用D101型大孔樹脂富集活性成分，先用15%乙醇沖洗9個(gè)柱體積除去大極性 成分，再用80%乙醇洗脫14個(gè)柱體積，收集80%乙醇洗脫液，減壓濃縮，噴霧干燥即得；其 中，紫花苜蓿全草與穿山龍的重量份之比為8:1。
[0009] 進(jìn)一步地，所述紫花苜蓿提取物通過如下方法制備：（a)將干燥的紫花苜蓿全草和 穿山龍混合，粉碎，用85%乙醇溶液熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取 濃縮液；（b)將乙醇提取濃縮液用水稀釋，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取， 減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇萃取物用 水溶解，過濾，用D101型大孔樹脂富集活性成分，先用10%乙醇沖洗11個(gè)柱體積除去大極性 成分，再用75%乙醇洗脫16個(gè)柱體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮，噴霧干燥即得；其 中，紫花苜蓿全草與穿山龍的重量份之比為7:1。
[0010]進(jìn)一步地，所述紫花苜蓿提取物通過如下方法制備：（a)將干燥的紫花苜蓿全草和 穿山龍混合，粉碎，用95%乙醇溶液熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取 濃縮液；（b)將乙醇提取濃縮液用水稀釋，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取， 減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇萃取物用 水溶解，過濾，用D101型大孔樹脂富集活性成分，先用20%乙醇沖洗7個(gè)柱體積除去大極性 成分，再用85%乙醇洗脫12個(gè)柱體積，收集85%乙醇洗脫液，減壓濃縮，噴霧干燥即得；其 中，紫花苜蓿全草與穿山龍的重量份之比為9:1。
[0011]上述紫花苜蓿提取物在提高畜禽免疫力方面的應(yīng)用。
[0012]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：
[0013] 本發(fā)明提供的紫花苜蓿提取物具有類似抗生素的功能，添加到生物飼料中后可明 顯提高畜禽的免疫力，提高其抵抗細(xì)菌感染等疾病的能力，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實(shí) 質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì) 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0015] 實(shí)施例中，穿山龍為薯截科植物穿龍薯蕷的根莖，秋季采挖，去細(xì)根，刮去栓皮，曬 干。
[0016] 實(shí)施例1:紫花苜蓿提取物的制備
[0017] (a)將干燥的紫花苜蓿全草和穿山龍混合，粉碎，用90 %乙醇溶液熱回流提取，合 并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液；（b)將乙醇提取濃縮液用水稀釋，依次用石 油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取 物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇萃取物用水溶解，過濾，用D101型大孔樹脂富集活性成分，先 用15 %乙醇沖洗9個(gè)柱體積除去大極性成分，再用80 %乙醇洗脫14個(gè)柱體積，收集80 %乙醇 洗脫液，減壓濃縮，噴霧干燥即得;其中，紫花苜蓿全草與穿山龍的重量份之比為8:1。
[0018]實(shí)施例2:紫花苜蓿提取物的制備
[0019] (a)將干燥的紫花苜蓿全草和穿山龍混合，粉碎，用85%乙醇溶液熱回流提取，合 并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液；（b)將乙醇提取濃縮液用水稀釋，依次用石 油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取 物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇萃取物用水溶解，過濾，用D101型大孔樹脂富集活性成分，先 用10 %乙醇沖洗11個(gè)柱體積除去大極性成分，再用75 %乙醇洗脫16個(gè)柱體積，收集75 %乙 醇洗脫液，減壓濃縮，噴霧干燥即得;其中，紫花苜蓿全草與穿山龍的重量份之比為7:1。
[0020]實(shí)施例3:紫花苜蓿提取物的制備
[0021 ] (a)將干燥的紫花苜蓿全草和穿山龍混合，粉碎，用95 %乙醇溶液熱回流提取，合 并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液；（b)將乙醇提取濃縮液用水稀釋，依次用石 油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取 物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇萃取物用水溶解，過濾，用D101型大孔樹脂富集活性成分，先 用20 %乙醇沖洗7個(gè)柱體積除去大極性成分，再用85 %乙醇洗脫12個(gè)柱體積，收集85 %乙醇 洗脫液，減壓濃縮，噴霧干燥即得;其中，紫花苜蓿全草與穿山龍的重量份之比為9:1。
[0022]實(shí)施例4:紫花苜蓿提取物的制備
[0023] (a)將干燥的紫花苜蓿全草和穿山龍混合，粉碎，用90 %乙醇溶液熱回流提取，合 并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液；（b)將乙醇提取濃縮液用水稀釋，依次用石 油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取 物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇萃取物用水溶解，過濾，用D101型大孔樹脂富集活性成分，先 用15 %乙醇沖洗9個(gè)柱體積除去大極性成分，再用80 %乙醇洗脫14個(gè)柱體積，收集80 %乙醇 洗脫液，減壓濃縮，噴霧干燥即得;其中，紫花苜蓿全草與穿山龍的重量份之比為7:1。
[0024]實(shí)施例5:紫花苜蓿提取物的制備
[0025] (a)將干燥的紫花苜蓿全草和穿山龍混合，粉碎，用90 %乙醇溶液熱回流提取，合 并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液；（b)將乙醇提取濃縮液用水稀釋，依次用石 油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取 物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇萃取物用水溶解，過濾，用D101型大孔樹脂富集活性成分，先 用15 %乙醇沖洗9個(gè)柱體積除去大極性成分，再用80 %乙醇洗脫14個(gè)柱體積，收集80 %乙醇 洗脫液，減壓濃縮，噴霧干燥即得;其中，紫花苜蓿全草與穿山龍的重量份之比為9:1。
[0026]實(shí)施例6:實(shí)施例1的對(duì)比，紫花苜蓿全草與穿山龍的重量份之比為6:1 [0027] (a)將干燥的紫花苜蓿全草和穿山龍混合，粉碎，用90 %乙醇溶液熱回流提取，合 并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液；（b)將乙醇提取濃縮液用水稀釋，依次用石 油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取 物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇萃取物用水溶解，過濾，用D101型大孔樹脂富集活性成分，先 用15 %乙醇沖洗9個(gè)柱體積除去大極性成分，再用80 %乙醇洗脫14個(gè)柱體積，收集80 %乙醇 洗脫液，減壓濃縮，噴霧干燥即得;其中，紫花苜蓿全草與穿山龍的重量份之比為6:1。
[0028]實(shí)施例7:實(shí)施例1的對(duì)比，紫花苜蓿全草與穿山龍的重量份之比為10:1
[0029] (a)將干燥的紫花苜蓿全草和穿山龍混合，粉碎，用90 %乙醇溶液熱回流提取，合 并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液；（b)將乙醇提取濃縮液用水稀釋，依次用石 油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取 物和正丁醇萃取物；（C)正丁醇萃取物用水溶解，過濾，用D101型大孔樹脂富集活性成分，先 用15 %乙醇沖洗9個(gè)柱體積除去大極性成分，再用80 %乙醇洗脫14個(gè)柱體積，收集80 %乙醇 洗脫液，減壓濃縮，噴霧干燥即得;其中，紫花苜蓿全草與穿山龍的重量份之比為10:1。
[0030] 實(shí)施例8:效果實(shí)施例，對(duì)雞免疫功能的影響
[0031] 分別在5日齡雞飼料中加入實(shí)施例1~7制備的紫花苜蓿提取物，每噸飼料中添加 400g紫花苜蓿提取物。對(duì)照組不添加紫花苜蓿提取物。
[0032]分別測(cè)定35日齡時(shí)雞的巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)、活性E-玫瑰花環(huán)率和ND抗體效價(jià)，并 計(jì)算比對(duì)照組的增加率（％)。
[0033] 結(jié)果見下表1。
[0034]表1對(duì)雞免疫功能的影響
[0036]實(shí)施例2和實(shí)施例3的效果與實(shí)施例4和實(shí)施例5的效果相似，無顯著差異。
[0037]上述結(jié)果表明，本發(fā)明提供的紫花苜蓿提取物可以更強(qiáng)的提高畜禽免疫功能，提 高生長(zhǎng)性能，這與紫花苜蓿與穿山龍的重量份比例有關(guān)，二者重量份之比為7~9:1時(shí)效果 最好。
[0038]上述實(shí)施例的作用在于說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種代替抗生素的紫花苜蓿提取物，其特征在于，通過如下方法制備：（a)將干燥的 紫花苜蓿全草和穿山龍混合，粉碎，用85~95%乙醇溶液熱回流提取，合并提取液，濃縮至 無醇味得到乙醇提取濃縮液；（b)將乙醇提取濃縮液用水稀釋，依次用石油醚、乙酸乙酯和 水飽和的正丁醇萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取 物；（c)正丁醇萃取物用水溶解，過濾，用D101型大孔樹脂富集活性成分，先用10~20%乙醇 沖洗7~11個(gè)柱體積除去大極性成分，再用75~85%乙醇洗脫12~16個(gè)柱體積，收集75~ 85%乙醇洗脫液，減壓濃縮，噴霧干燥即得;其中，紫花苜蓿全草與穿山龍的重量份之比為7 ~9:1 〇2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述紫花苜蓿提取物，其特征在于，通過如下方法制備：（a)將干燥的 紫花苜蓿全草和穿山龍混合，粉碎，用90%乙醇溶液熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇 味得到乙醇提取濃縮液；（b)將乙醇提取濃縮液用水稀釋，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽 和的正丁醇萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（c) 正丁醇萃取物用水溶解，過濾，用D101型大孔樹脂富集活性成分，先用15%乙醇沖洗9個(gè)柱 體積除去大極性成分，再用80 %乙醇洗脫14個(gè)柱體積，收集80 %乙醇洗脫液，減壓濃縮，噴 霧干燥即得;其中，紫花苜蓿全草與穿山龍的重量份之比為8:1。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫花苜蓿提取物，其特征在于，通過如下方法制備：（a)將干燥 的紫花苜蓿全草和穿山龍混合，粉碎，用85%乙醇溶液熱回流提取，合并提取液，濃縮至無 醇味得到乙醇提取濃縮液；（b)將乙醇提取濃縮液用水稀釋，依次用石油醚、乙酸乙酯和水 飽和的正丁醇萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物； (c)正丁醇萃取物用水溶解，過濾，用D101型大孔樹脂富集活性成分，先用10%乙醇沖洗11 個(gè)柱體積除去大極性成分，再用75%乙醇洗脫16個(gè)柱體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃 縮，噴霧干燥即得;其中，紫花苜蓿全草與穿山龍的重量份之比為7:1。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫花苜蓿提取物，其特征在于，通過如下方法制備：（a)將干燥 的紫花苜蓿全草和穿山龍混合，粉碎，用95%乙醇溶液熱回流提取，合并提取液，濃縮至無 醇味得到乙醇提取濃縮液；（b)將乙醇提取濃縮液用水稀釋，依次用石油醚、乙酸乙酯和水 飽和的正丁醇萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物； (c)正丁醇萃取物用水溶解，過濾，用D101型大孔樹脂富集活性成分，先用20%乙醇沖洗7個(gè) 柱體積除去大極性成分，再用85%乙醇洗脫12個(gè)柱體積，收集85%乙醇洗脫液，減壓濃縮， 噴霧干燥即得;其中，紫花苜蓿全草與穿山龍的重量份之比為9:1。5. 權(quán)利要求1~4任一所述的紫花苜蓿提取物在提高畜禽免疫力方面的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P37/04GK105853494SQ201610299060
【公開日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年5月6日
【發(fā)明人】孫中超, 方華, 季春源, 郭蓓蓓, 肖方方, 夏佳吉
【申請(qǐng)人】江蘇鹽城源耀生物科技有限公司