本發(fā)明涉及水產(chǎn)學(xué)領(lǐng)域，具體地說，是一種基于貝殼微量元素的竹蟶放流效果評估方法。
背景技術(shù)：
竹蟶又名蟶子王，為海產(chǎn)雙殼軟體動物，它是我國近海海產(chǎn)優(yōu)質(zhì)貝類，在我國從北到南沿海均有分布。竹蟶肉質(zhì)鮮美、營養(yǎng)豐富，具有很高的食療藥用價值。近年來隨著野生竹蟶的種質(zhì)資源逐步衰退，為了更好的保存竹蟶資源，我國廣泛開展了竹蟶苗種的放流。然而，如何評價放流的效果是目前急需解決的關(guān)鍵問題。傳統(tǒng)標(biāo)記重捕的放流效果評估方法因受限于費用高、標(biāo)記困難、標(biāo)記死亡率高、回捕率低等因素的影響，而不適合用作竹蟶放流效果的評估。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種基于貝殼微量元素的竹蟶放流效果評估方法，該方法利用竹蟶貝殼的微量元素來分析竹蟶的放流效果，包括竹蟶貝殼微量元素的測定和放流效果的評估。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種基于貝殼微量元素的竹蟶放流效果評估方法，包括如下步驟：
a、竹蟶選?。哼x取養(yǎng)殖竹蟶幼苗和野外捕撈的竹蟶成體；
b、貝殼提?。簩⒅裣|放入清水中煮沸，然后用解剖刀將貝殼內(nèi)部的肌肉和結(jié)締組織剔除；
c、捕撈竹蟶貝殼的切割：(用小型手動切割機)切取代表竹蟶幼體期的貝殼頂端；
d、去污：用超聲波清洗，超純水沖洗；
e、干燥：去污后的貝殼冷凍干燥后研磨成粉末樣品，過篩；制備過程應(yīng)避免沾污和待測元素?fù)p失；
f、消解：在百萬分之一天平上準(zhǔn)確稱取樣品粉末，置于聚四氟乙烯高溫高壓消解罐中，加入硝酸(ρ＝1.42g/ml)消解，90攝氏度真空干燥至少24小時；
g、定容：將步驟f中的溶液用慢速定量濾紙將提取液過濾，全部轉(zhuǎn)移至50ml定量瓶中，待提取液濾盡后，用少量硝酸溶液清洗消解罐的蓋子內(nèi)壁、罐體內(nèi)壁和濾渣至少3次，洗液一并過濾收集于容量瓶中，冷卻后用超純水定容至標(biāo)線，搖勻；
h、制備空白試樣：不加樣品，按照步驟f和步驟g制備空白試樣；
i、微量元素測定：繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用上述步驟g和步驟h中獲得的澄清稀釋溶液在電感耦合等離子質(zhì)譜儀(icp-ms)上測定微量元素；
j、根據(jù)測定結(jié)果計算竹蟶中元素的含量；
k、放流效果分析：野外捕撈竹蟶幼體期微量元素與養(yǎng)殖的竹蟶幼苗貝殼微量元素?zé)o差異的判定為放流群體，反之則為野生群體。
優(yōu)選的，所述的步驟k中的放流效果分析步驟為：
a、微量元素差異分析：采用方差分析養(yǎng)殖竹蟶幼苗貝殼和野外捕撈竹檉幼體期貝殼的微量元素差異；
b、逐步判別分析：對差異顯著的微量元素進行逐步判別分析，獲取判別系數(shù)，并制作散點圖；
c、判別成功率獲?。和ㄟ^判別分析獲取捕撈竹蟶來自于放流的比例。
本發(fā)明優(yōu)點在于：
本發(fā)明的方法簡化操作過程，步驟簡單，節(jié)省試劑和樣本的用量，降低了人為誤差，通過比較養(yǎng)殖竹蟶幼苗與野外捕撈成蛤幼體期貝殼微量元素的差異，并采用逐步判別分析捕撈竹蟶是否來自于放流群體，為竹蟶的放流效果的評估提供了一個新的方法。
附圖說明
圖1.竹蟶判別分析圖(橢圓代表95％置信區(qū)間)。
具體實施方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明提供的具體實施方式作詳細(xì)說明。
實施例
適用本發(fā)明方法對竹蟶放流效果進行評估，具體評估步驟如下：
(1)竹蟶選?。哼x取實驗室飼養(yǎng)的竹蟶幼苗和野外捕撈的竹蟶成體；
(2)貝殼提?。簩⒅裣|放入清水中煮沸5分鐘，然后用解剖刀將貝殼內(nèi)部的肌肉和結(jié)締組織剔除；
(3)捕撈竹蟶貝殼的切割：用小型手動切割機分別切取代表竹蟶幼體期的貝殼頂端和代表成體期的貝殼邊緣；
(4)去污：用超聲波清洗5分鐘后超純水沖洗；
(5)干燥：去污后的貝殼冷凍干燥24小時，研磨成粉末樣品，過篩(100目)，制備過程應(yīng)避免沾污和待測元素?fù)p失；
(6)消解：在百萬分之一天平上準(zhǔn)確稱取樣品粉末1mg，置于10ml聚四氟乙烯高溫高壓消解罐中，加入5ml硝酸(ρ＝1.42g/ml)消解，放入真空干燥箱中，溫度調(diào)至90攝氏度保存至少24小時；
(7)定容：將(6)中溶液用慢速定量濾紙將提取液過濾，全部轉(zhuǎn)移至50ml定量瓶中，待提取液濾盡后，用少量硝酸溶液清洗消解罐的蓋子內(nèi)壁、罐體內(nèi)壁和濾渣至少3次，洗液一并過濾收集于容量瓶中，冷卻后用超純水定容至標(biāo)線，搖勻；
(8)制備空白試樣：不加樣品，按照步驟(6)和(7)制備空白試樣；
(9)微量元素測定：繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用上述步驟(7)和(8)中獲得的澄清稀釋溶液在電感耦合等離子質(zhì)譜儀(icp-ms)上測定微量元素；
(10)根據(jù)測定結(jié)果計算花蛤中元素的含量；
(11)放流效果分析：野外捕撈竹蟶幼體期微量元素與養(yǎng)殖幼苗貝殼微量元素?zé)o差異的判定為放流群體，反之則為野生群體。
其中，在所述步驟(11)中的放流效果分析步驟為：
(1)微量元素差異分析：采用方差分析anova分析養(yǎng)殖幼苗貝殼和野外捕撈竹蟶幼體期貝殼和成體期貝殼的微量元素差異；
(2)逐步判別分析：對差異顯著的微量元素進行逐步判別分析，獲取判別系數(shù)，并制作散點圖(圖1)；
(3)判別成功率獲?。和ㄟ^判別分析顯示23尾(15+8)占總體75.2％(55.6％+29.6％)野外幼體期竹蟶來自養(yǎng)殖幼苗，而另外4尾占14.8％的野外幼體期竹蟶來自野生環(huán)境，因此野外采集的成體竹蟶75％以上是來自放流的養(yǎng)殖幼檉(表1)。
表1養(yǎng)殖竹蟶幼苗及野外采集成體竹蟶幼體期和成體期的群體判別結(jié)果
以上已對本發(fā)明創(chuàng)造的較佳實施例進行了具體說明，但本發(fā)明創(chuàng)造并不限于所述實施例，熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員在不違背本發(fā)明創(chuàng)造精神的前提下還可做出種種的等同的變型或替換，這些等同的變型或替換均包含在
本技術(shù)：
權(quán)利要求所限定的范圍內(nèi)。