采用gc-ms法測定玉竹中糖類含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定，設(shè)及一種采用GC-MS法測定玉竹中糖類含量 的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 玉竹為百合科（Xiliaceae)黃精屬植物玉竹（Polygonatumodoratum(Mill.) 化uce)的干燥根莖，最早W萎義之名載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為草部上品。作為藥食兩用的 常見中藥材，歷史悠久，在國內(nèi)外久負(fù)盛名。早在《神農(nóng)本草經(jīng)》中記載玉竹性味甘，平；具 養(yǎng)陰潤燥、生津止渴功效。治熱病陰傷，咳嗽煩渴，虛勞發(fā)熱，消谷易饑，小便頻數(shù)等癥。玉 竹含有多種化學(xué)物質(zhì)，目前已從玉竹中分離了多糖、黃酬、皂巧、生物堿、醬醇等成分，其中 多糖是主要有效成分?，F(xiàn)代藥理研究表明玉竹具有降血糖、擴(kuò)張血管等作用，除此之外，玉 竹還能夠提高免疫力、抗腫瘤W及抗衰老，因而被開發(fā)成為多種保健食品，諸如玉竹酒、玉 竹餅干、玉竹茶等，銷售國內(nèi)外，其經(jīng)濟(jì)價值不斷提高。
[0003] 玉竹主要含有多糖，分子量比較大，多含徑基，質(zhì)量控制方面含量測定的指標(biāo)是總 多糖，目前采用的是紫外-可見分光光度法，此法誤差大，質(zhì)量控制指標(biāo)單一，重現(xiàn)性不好， 不易控制，影響其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定W及原藥材和中成藥的質(zhì)量控制。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種采用GC-MS法測定玉竹中糖類含量的方法。 陽〇化]為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的一種采用GC-MS法測定玉竹中糖類含量的方法， 所述方法是將玉竹干燥后加工成粉末，向玉竹粉末中加入DMF(二甲基甲酯胺）和硅烷化試 劑，在一定條件下反應(yīng)，將玉竹中的糖類衍生化為糖類TMS衍生物，然后采用GC-MS法測定 玉竹中糖類TMS衍生物的含量，從而測得玉竹中糖類含量。
[0006] 本發(fā)明中玉竹粉末的制備方法按照《中國藥典》（2010年版）一部進(jìn)行，干燥條件 包括陰干法，真空干燥法，烘干法和傳統(tǒng)揉糖法。玉竹干燥粉末包括最粗粉，粗粉，中粉，細(xì) 粉，最細(xì)粉和極細(xì)粉，優(yōu)選細(xì)粉。
[0007] 前述的方法，所述硅烷化試劑為雙（S甲基娃烷基）S氣乙酷胺度STFA)和S甲 基氯硅烷燈MC巧的混合液，BSTFA和TMCS的體積比為99 :1。
[0008] 前述的方法，所述糖類包括薦糖和葡萄糖。
[0009] 所述方法具體包括W下步驟：
[0010] 1)樣品的處理：取玉竹粉末0.05g，于2ml色譜樣品瓶中，加入1mlDMF和 0. 3-0. 5ml硅烷化試劑，蓋緊瓶蓋搖勻后放入60-80°C左右烘箱中恒溫約20-30min，然后冷 卻至室溫，用于GC-MS法檢測；
[0011] 2)對照品溶液的配制：取薦糖0. 04015g和葡萄糖0. 00128g分別置于2ml色譜樣 品瓶中，加入1. 00mlDMF和0. 3-0. 5ml硅烷化試劑，蓋緊瓶蓋搖勻后放入60-80°C左右烘箱 中恒溫約20-30min，然后冷卻至室溫，并定容至2ml，搖勻，作為對照品溶液；
[0012] 3)GC-MS檢測：氣相色譜條件為：色譜柱：規(guī)格為30mX0. 25mmX0. 25ym的毛細(xì) 管色譜柱化x-5ms;載氣：He;流速：1. 0血/min;進(jìn)樣口溫度：250°C;程序升溫：初始溫度 60°C，保持Imin，W8°C/min升溫到 172°C，保持 2min，再W3°C/min升溫到 220°C，保持 5min，再Wl〇°C/min升溫到270°C，保持5min;進(jìn)樣量1yL;分流比20:1 ;質(zhì)譜條件為：離 子源：El源；電子能量：70eV;溶劑延遲時間3min;質(zhì)量掃描范圍：33-800amu;采集方式： SCAN掃描；
[0013] 4)建立回歸方程：將薦糖和葡萄糖對照品溶液分別進(jìn)樣，采用丙S醇為內(nèi)標(biāo)，W 薦糖和葡萄糖對照品溶液的濃度為橫坐標(biāo)，對照品與丙=醇的峰面積比值為縱坐標(biāo)，分別 建立回歸方程；
[0014] 5)試樣中薦糖和葡萄糖含量的測定：將試樣進(jìn)樣，根據(jù)樣品的峰面積，代入上述 回歸方程，分別計(jì)算得出試樣中薦糖和葡萄糖含量。 陽0巧]優(yōu)選地，上述步驟1)和。具體如下：
[0016] 1)樣品的處理：取玉竹細(xì)粉0.05g，于2ml色譜樣品瓶中，加入1mlDMF和0.4ml 硅烷化試劑，蓋緊瓶蓋搖勻后放入70°C烘箱中恒溫20min，然后冷卻至室溫，用于GC-MS法 檢測；
[0017] 2)對照品溶液的配制：取薦糖0.04015g和葡萄糖0.00128g分別置于2ml色譜 樣品瓶中，加入1. 00mlDMF和0. 4ml硅烷化試劑，蓋緊瓶蓋搖勻后放入70°C烘箱中恒溫 20min，然后冷卻至室溫，并定容至2ml，搖勻，作為對照品溶液。
[0018] 前述的方法，W薦糖對照品溶液的濃度為橫坐標(biāo)，對照品與丙=醇的峰面積比值 為縱坐標(biāo)，建立的回歸方程如下：
[0019]Y= 0. 1315X+0. 0189,相關(guān)系數(shù)r2為 0. 9996,薦糖濃度在 2. 007 ~16. 060g/L范 圍內(nèi)，與峰面積比值呈現(xiàn)良好線性關(guān)系。
[0020] 前述的方法，W葡萄糖對照品溶液的濃度為橫坐標(biāo)，對照品與丙=醇的峰面積比 值為縱坐標(biāo)，建立的回歸方程如下：
[0021] Y= 0. 1742X+0. 0503,相關(guān)系數(shù)r2為 0. 9993,葡萄糖濃度在 0. 032 ~3. 072g/L范 圍內(nèi)，與峰面積比值呈現(xiàn)良好線性關(guān)系。 陽02引本發(fā)明采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS法），通過硅烷化試劑將娃烷基引入糖 分子中，從而降低糖類化合物的極性，采用GC-MS內(nèi)標(biāo)法分析玉竹糖類TMS衍生物組成，其 中薦糖和葡萄糖含量的測定準(zhǔn)確度精密性高，測量指標(biāo)明確，可控性強(qiáng)，為玉竹質(zhì)量評價標(biāo) 準(zhǔn)體系的優(yōu)化升級提供新的方法。
【附圖說明】 陽02引圖1為本發(fā)明實(shí)施例1中湘玉竹的TMS衍生物的總離子流圖。
[0024]圖2為本發(fā)明實(shí)施例1中江北玉竹的TMS衍生物的總離子流圖。
[0025] 圖3為本發(fā)明實(shí)施例1中關(guān)玉竹的TMS衍生物的總離子流圖。
[0026]圖4為本發(fā)明實(shí)施例4中內(nèi)標(biāo)、薦糖和葡萄糖對照品溶液衍生物色譜圖；其中，a 內(nèi)標(biāo)；b葡萄糖；C薦糖。
[0027]圖5為本發(fā)明實(shí)施例4中內(nèi)標(biāo)、薦糖和葡萄糖對照品溶液衍生物質(zhì)譜圖；其中，a 內(nèi)標(biāo)；b葡萄糖；C薦糖。
【具體實(shí)施方式】
[0028] W下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實(shí)施例 中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段，所用原料均為市售商品。
[0029]W下實(shí)施例中玉竹粉末樣品的制備方法為按照《中國藥典》（2010年版）一部進(jìn) 行，干燥條件包括陰干法，真空干燥法，烘干法和傳統(tǒng)揉糖法。玉竹干燥粉末包括最粗粉，粗 粉，中粉，細(xì)粉，最細(xì)粉和極細(xì)粉，
[0030] W下實(shí)施例中所用硅烷化試劑為BSTFA和TMCS按99 :1體積比配制的混合液。
[0031] 實(shí)施例1采用GC-MS法分析玉竹中糖類TMS衍生物 陽0巧 1、樣品的處理：W湘玉竹、江北玉竹、關(guān)玉竹作為檢測對象，分別制備玉竹粉末。精 密稱取玉竹粉末0.〇5g，于2ml色譜樣品瓶中，加入1mlDMF和0.ml硅烷化試劑，蓋緊瓶蓋 搖勻后放入70°C左右烘箱中恒溫約20-30min，然后冷卻至室溫，采用GC-MS法進(jìn)行進(jìn)樣分 析。
[0033] 2、GC-MS檢測：氣相色譜條件為：色譜柱：規(guī)格為30mX0. 25mmX0. 25ym的毛細(xì) 管色譜柱化x-5ms;載氣：He;流速：1. 0血/min;進(jìn)樣口溫度：250°C;程序升溫：初始溫度 60°C，保持Imin，W5°C/min升溫到 100°C，保持 2min，再W3°C/min升溫到 220°C，保持 5min，再Wl〇°C/min升溫到270°C，保持5min;進(jìn)樣量1iiL;分流比20:1 ;質(zhì)譜條件為：離 子源：El源；電子能量：70eV;溶劑延遲時間3min;質(zhì)量掃描范圍：33-800amu;采集方式： SCAN掃描。
[0034] 上述玉竹樣品在硅烷衍生化后經(jīng)GC-MS分析，通過美國國家標(biāo)準(zhǔn)與技術(shù)研究院 (化tionalInstituteofStandardsandTechnology,NIST)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，W及 質(zhì)譜碎片解析，結(jié)果見表1，包含單糖、
[0035] 二糖、糖醇、有機(jī)酸、腺巧、氨基酸等娃烷基化衍生物。
[0036] 表1玉竹多糖硅烷化衍生物的分析結(jié)果（％ )
[0037] CN105116071A 說明書 4/7 頁
[0038] 湘玉竹、江北玉竹、關(guān)玉竹的TMS衍生物的總離子流圖分別如圖1-圖3所示。從 圖1-圖3可W看出，薦糖和葡萄糖是玉竹糖類的主要成分，因此W薦糖和葡萄糖作為玉竹 中所含糖類的測量指標(biāo)。
[0039] 實(shí)施例2玉竹中薦