化嗜堿性粒細(xì)胞；
[0032](3)每例樣本檢測僅需不超過100 μ L的全血；
[0033](4)本發(fā)明方法重復(fù)性好，誤差小于10%
[0034](5)能可靠鑒定嗜堿性粒細(xì)胞激活和/或脫顆粒狀態(tài)。
【附圖說明】
[0035]圖1.1所表達(dá)的是血液中⑶123陽性細(xì)胞群；
[0036]圖1.2所表達(dá)的是血液中⑶123陽性HLA陰性細(xì)胞群；
[0037]圖1.3所表達(dá)的是血液中⑶123陽性HLA陰性CCR3陽性細(xì)胞群即嗜堿性粒細(xì)胞；
[0038]圖1.4所表達(dá)的是血液中⑶123陽性HLA陰性CCR3陽性細(xì)胞⑶63表達(dá)情況即脫顆粒檢測結(jié)果；
[0039]圖1.5所表達(dá)的是血液中⑶123陽性HLA陰性CCR3陽性細(xì)胞⑶203c表達(dá)情況即激活檢測結(jié)果；
[0040]本發(fā)明的檢測結(jié)果，血液中嗜堿性粒細(xì)胞激活、脫顆粒檢測結(jié)果。
[0041]圖2.1所表達(dá)的是血液中⑶123陽性細(xì)胞群；
[0042]圖2.2所表達(dá)的是血液中⑶123陽性HLA陰性細(xì)胞群；
[0043]圖2.3所表達(dá)的是血液中⑶123陽性HLA陰性CCR3陽性細(xì)胞群即嗜堿性粒細(xì)胞；
[0044]圖2.4所表達(dá)的是血液中⑶123陽性HLA陰性CCR3陽性細(xì)胞⑶203c表達(dá)情況即激活檢測結(jié)果；
[0045]本發(fā)明的檢測結(jié)果，血液中嗜堿性粒細(xì)胞激活檢測結(jié)果。
[0046]圖3.1所表達(dá)的是血液中⑶123陽性細(xì)胞群；
[0047]圖3.2所表達(dá)的是血液中⑶123陽性HLA陰性細(xì)胞群；
[0048]圖3.3所表達(dá)的是血液中⑶123陽性HLA陰性CCR3陽性細(xì)胞群即嗜堿性粒細(xì)胞；
[0049]圖3.4所表達(dá)的是血液中⑶123陽性HLA陰性CCR3陽性細(xì)胞⑶63表達(dá)情況即脫顆粒檢測結(jié)果；
[0050]本發(fā)明的檢測結(jié)果，血液中嗜堿性粒細(xì)胞脫顆粒檢測結(jié)果。
【具體實施方式】
[0051]為了使本發(fā)明的技術(shù)手段、創(chuàng)作特征、工作流程、使用方法達(dá)成目的與功效易于明白了解，下面將結(jié)合本發(fā)明實施例，對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0052]實施例1
[0053]—種嗜堿性粒細(xì)胞激活、脫顆粒的鑒定方法，如圖1.1、1.2、1.3、1.4、1.5所示，包括如下步驟:
[0054](I)首先按照9:1的比例，用9倍的超純水將試劑盒中的濃縮的紅細(xì)胞裂解液儲存液稀釋到工作狀態(tài)；同樣地用9倍的超純水將試劑盒中的濃縮的磷酸鹽緩沖液的儲存液稀釋到工作狀態(tài)。注意:紅細(xì)胞裂解液建議現(xiàn)用現(xiàn)配；
[0055](2)按順序?qū)⒃囼灅颖揪幪枺?biāo)記好試驗所需的流式上樣管；
[0056](3)在每個流式上樣管內(nèi)加入所需的抗體組合:抗人⑶123、抗人CCR3、抗人Hla-DRJAA⑶203c和抗人⑶63熒光標(biāo)記流式抗體組合，如FITC標(biāo)記的抗人⑶123、APC標(biāo)記的抗人CCR3、APC/Cy7標(biāo)記的抗人HLA-DR，PE標(biāo)記的抗人CD203c、PE/Cy7標(biāo)記的抗人CD63，用量為每人份五種抗體各5 μ L，以鑒定嗜堿性粒細(xì)胞激活和脫顆粒狀態(tài)；
[0057](4)患者全血低速漩渦混勻后，用加樣槍吸取混合好的25 μ L至125 μ L全血加到標(biāo)記好的流式管內(nèi)，漩渦振蕩器上低速漩渦混勻3?5s，室溫避光孵育15min ;
[0058](5)孵育結(jié)束后，每個樣本管內(nèi)加入ImL的紅細(xì)胞裂解液，漩渦振蕩器上低速漩渦混勻3?5s，室溫避光孵育1min ；
[0059](6)孵育結(jié)束后，1200rpm/min轉(zhuǎn)速離心6min，離心結(jié)束后，棄去上清液，加入ImL的PBS緩沖液，以同樣的速度離心，(離心結(jié)束取樣操作時，應(yīng)避免劇烈晃動引起細(xì)胞沉淀懸浮);
[0060](7)離心后，以同樣的方式去上清液，加入300 μ L的PBS緩沖液，用流式細(xì)胞儀檢測；
[0061](8)用不同流式細(xì)胞儀相應(yīng)的分析軟件分析嗜堿性粒細(xì)胞的計數(shù)及平均熒光強(qiáng)度。
[0062]本實施例中所述熒光標(biāo)記流式抗體包括FITC、APC、APC/Cy7、PE、PE/Cy7或PerCP熒光標(biāo)記的抗人CD123、抗人CCR3、抗人HLA-DR、抗人CD203c和抗人CD63抗體。
[0063]本實施例中所述的抗體組合為任何熒光標(biāo)記的抗人CD123、抗人CCR3、抗人Hla-DRJAA⑶203c、抗人⑶63五種抗體組合。
[0064]本實施例中所述的抗體組合為任何分子標(biāo)記的抗人CD 123、抗人CCR3、抗人Hla-DRJAA⑶203c、抗人⑶63五種抗體組合。
[0065]實施例2
[0066]一種嗜堿性粒細(xì)胞激活的鑒定方法，如圖2.1,2.2,2.3,2.4所示，包括如下步驟:
[0067](I)首先按照9:1的比例，用9倍的超純水將試劑盒中的濃縮的紅細(xì)胞裂解液儲存液稀釋到工作狀態(tài)；同樣地用9倍的超純水將試劑盒中的濃縮的磷酸鹽緩沖液的儲存液稀釋到工作狀態(tài)。注意:紅細(xì)胞裂解液建議現(xiàn)用現(xiàn)配；
[0068](2)按順序?qū)⒃囼灅颖揪幪枺?biāo)記好試驗所需的流式上樣管；
[0069](3)在每個流式上樣管內(nèi)加入所需的抗體組合:抗人⑶123、抗人CCR3、抗人HLA-DRJ^A⑶203c熒光標(biāo)記流式抗體組合，如FITC標(biāo)記的抗人⑶123、APC標(biāo)記的抗人CCR3、APC/Cy7標(biāo)記的抗人HLA_DR，PE標(biāo)記的抗人CD203c，用量為每人份四種抗體各5 μ L，以鑒定嗜堿性粒細(xì)胞激活狀態(tài)；
[0070](4)患者全血低速漩渦混勻后，用加樣槍吸取混合好的25 μ L至125 μ L全血加到標(biāo)記好的流式管內(nèi)，漩渦振蕩器上低速漩渦混勻3?5s，室溫避光孵育15min ;
[0071](5)孵育結(jié)束后，每個樣本管內(nèi)加入ImL的紅細(xì)胞裂解液，漩渦振蕩器上低速漩渦混勻3?5s，室溫避光孵育1min ；
[0072](6)孵育結(jié)束后，1200rpm/min轉(zhuǎn)速離心6min，離心結(jié)束后，棄去上清液，加入ImL的PBS緩沖液，以同樣的速度離心，(離心結(jié)束取樣操作時，應(yīng)避免劇烈晃動引起細(xì)胞沉淀懸浮);
[0073](7)離心后，以同樣的方式去上清液，加入300 UL的PBS緩沖液，用流式細(xì)胞儀檢測；
[0074](8)用不同流式細(xì)胞儀相應(yīng)的分析軟件分析嗜堿性粒細(xì)胞的計數(shù)及平均熒光強(qiáng)度。
[0075]本實施例中所述熒光標(biāo)記流式抗體包括FITC、APC、APC/Cy7、PE、PE/Cy7或PerCP熒光標(biāo)記的抗人⑶123、抗人CCR3、抗人HLA-DR和抗人⑶203c抗體。
[0076]本實施例中所述的抗體組合為任何熒光標(biāo)記的抗人CD123、抗人CCR3、抗人HLA-DRJjtA CD203c四種抗體組合。
[0077]本實施例中所述的抗體組合為任何分子標(biāo)記的抗人CD123、抗人CCR3、抗人HLA-DRJjtA CD203c四種抗體組合。
[0078]實施例3
[0079]一種嗜堿性粒細(xì)胞脫顆粒的鑒定方法，如圖3.1、3.2、3.3、3.4所示，包括如下步驟:
[0080](I)首先按照9:1的比例，用9倍的超純水將試劑盒中的濃縮的紅細(xì)胞裂解液儲存液稀釋到工作狀態(tài)；同樣地用9倍的超純水將試劑盒中的濃縮的磷酸鹽緩沖液的儲存液稀釋到工作狀態(tài)。注意:紅細(xì)胞裂解液建議現(xiàn)用現(xiàn)配。
[0081](2)按一定的順序?qū)⒃囼灅颖揪幪?，并?biāo)記好試驗所需的流式上樣管；
[0082](3)在每個流式上樣管內(nèi)加入所需的抗體組合:抗人⑶123、抗人CCR3、抗人HLA-DRj^A⑶63熒光標(biāo)記流式抗體組合，如FITC標(biāo)記的抗人⑶123、APC標(biāo)記的抗人CCR3、APC/Cy7標(biāo)記的抗人HLA_DR，PE標(biāo)記的抗人CD63，用量為每人份四種抗體各5 μ L，以鑒定嗜堿性粒細(xì)胞脫顆粒狀態(tài)；
[0083](4)患者全血低速漩渦混勻后，用加樣槍吸取混合好的25 μ L至125 μ L全血加到標(biāo)記好的流式管內(nèi)，漩渦振蕩器上低速漩渦混勻3?5s，室溫避光孵育15min ;
[0084](5)孵育結(jié)束后，每個樣本管內(nèi)加入ImL的紅細(xì)胞裂解液，漩渦振蕩器上低速漩渦混勻3?5s，室溫避光孵育1min ；
[0085](6)孵育結(jié)束后，1200rpm/min轉(zhuǎn)速離心6min，離心結(jié)束后，棄去上清液，加入ImL的PBS緩沖液，以同樣的速度離心，(離心結(jié)束取樣操作時，應(yīng)避免劇烈晃動引起細(xì)胞沉淀懸浮);
[0086](7)離心后，以同樣的方式去上清液，加入300 μ L的PBS緩沖液，用流式細(xì)胞儀檢測。
[0087](8)用不同流式細(xì)胞儀相應(yīng)的分析軟件分析嗜堿性粒細(xì)胞的計數(shù)及平均熒光