本發(fā)明屬于中藥成分含量測定領(lǐng)域，具體涉及一種醒腦靜注射液或其中間體中多指標成分含量的測定方法。

背景技術(shù)：

醒腦靜注射液是由麝香、郁金、梔子、冰片四味中藥制成的注射劑，具有清熱瀉火、涼血解毒、開竅醒腦的功效，臨床上主要用于中風、腦缺血、意識障礙、急性酒精中毒等病癥。醒腦靜注射液的現(xiàn)行質(zhì)量標準是2003年的國家藥品標準(ws3-b-3353-98-2003)，該標準僅對注射液中的麝香酮進行鑒別，對冰片進行含量測定，而對于梔子、郁金中的成分并沒有進行質(zhì)量控制。

多篇文獻報道了對醒腦靜注射液中麝香酮和冰片的含量測定方法。有文獻報道了對醒腦靜注射液中來源于郁金的莪術(shù)雙環(huán)烯酮、莪術(shù)烯醇、莪術(shù)二酮、莪術(shù)酮、吉馬酮5個倍半萜類成分的含量測定方法。公開號為cn105548385a的中國專利文獻公開了一種醒腦靜注射液液相指紋圖譜測定方法，公開號為cn102091283a的中國專利文獻公開了一種醒腦靜注射液氣相指紋圖譜測定方法。指紋圖譜測定方法雖然能以半定量的方式對注射液質(zhì)量進行評價，但不能對注射液中各指標成分的含量進行準確測定。

另一方面，梔子在腦血管疾病中的治療作用已被多篇文獻報道，而對于醒腦靜注射液中源于梔子的成分目前尚缺少含量測定方法，這不利于實現(xiàn)對該產(chǎn)品的全面質(zhì)量控制。此外，對于醒腦靜注射液中莪術(shù)呋喃二烯酮的含量測定方法，目前尚無報道。

由于梔子、郁金中的揮發(fā)性成分并不穩(wěn)定，且莪術(shù)酮、莪術(shù)雙環(huán)烯酮、4-亞甲基-異佛爾酮等成分的對照品非常緊缺且價格昂貴，若采用常規(guī)的多個對照品外標定量測定方法，分析成本太高。一測多評法是一種基于待測成分間的相對校正因子，以一個內(nèi)參物對照品代替多個成分對照品進行定量的方法，可用于解決對照品緊缺和檢測成本高的問題，是一種適合中藥特點的多指標質(zhì)量評價新模式。因此為了在生產(chǎn)中控制好醒腦靜注射液中間體及其成品的質(zhì)量，很有必要在現(xiàn)有技術(shù)基礎之上研究設計出能準確且低成本地測定源于梔子和郁金的多指標成分含量的方法。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是為了解決上述問題，基于一測多評法，提供一種能夠準確測定醒腦靜注射液或其中間體中異佛爾酮、4-亞甲基-異佛爾酮、莪術(shù)雙環(huán)烯酮、莪術(shù)烯醇、莪術(shù)二酮、莪術(shù)酮、莪術(shù)呋喃二烯酮、莪術(shù)醇和吉馬酮9種成分含量的高效液相色譜分析方法。該方法檢測靈敏度高，操作簡便、實用性高、檢測成本低，可以客觀、全面、準確地評價醒腦靜注射液或其中間體的質(zhì)量，解決因?qū)φ掌啡狈Χ鵁o法準確測定多種指標成分含量的問題。

為了實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：

一種醒腦靜注射液或其中間體中多指標成分含量的測定方法，包括以下步驟：

(1)供試品溶液的制備

直接將醒腦靜注射液或其中間體作為供試品溶液進行分析；本發(fā)明醒腦靜注射液中間體指梔子和郁金的水蒸氣蒸餾提取液；

(2)對照品溶液的制備

分別精密稱取異佛爾酮、4-亞甲基-異佛爾酮、莪術(shù)雙環(huán)烯酮、莪術(shù)烯醇、莪術(shù)二酮、莪術(shù)酮、莪術(shù)呋喃二烯酮、莪術(shù)醇、吉馬酮9種成分的對照品適量，分別用質(zhì)量分數(shù)為30～100％的甲醇水溶液溶解并定容，制成具有已知濃度的各指標成分的單一對照品儲備液；

再分別精密吸取各成分的單一對照品儲備液適量，混合后加質(zhì)量分數(shù)為10～50％的甲醇水溶液稀釋得到適宜濃度的混合對照品溶液，備用；

(3)相對校正因子的測定

取步驟(2)制備的混合對照品溶液，注入高效液相色譜儀，得到混合對照品溶液中莪術(shù)二酮和其他各待測成分的峰面積，以莪術(shù)二酮為內(nèi)參物，以相對校正因子計算公式fx/s＝fx/fs＝(mx×as)/(ms×ax)分別計算異佛爾酮、4-亞甲基-異佛爾酮、莪術(shù)雙環(huán)烯酮、莪術(shù)烯醇、莪術(shù)酮、莪術(shù)呋喃二烯酮、莪術(shù)醇和吉馬酮8種成分對莪術(shù)二酮的相對校正因子，

式中，fs為莪術(shù)二酮的校正因子，fx為除莪術(shù)二酮以外的某一待測成分的校正因子，ms是混合對照品溶液中莪術(shù)二酮的進樣質(zhì)量，as是混合對照品溶液中莪術(shù)二酮進樣質(zhì)量為ms時測得的峰面積，mx是混合對照品溶液中除莪術(shù)二酮以外的某一待測成分的進樣質(zhì)量，ax是混合對照品溶液中除莪術(shù)二酮以外的某一待測成分進樣質(zhì)量為mx時測得的峰面積；

(4)樣品中多指標成分的測定

精密吸取供試品溶液，注入高效液相色譜儀，得到供試品溶液中各待測成分的峰面積，供試品溶液中莪術(shù)二酮的進樣質(zhì)量ms’由莪術(shù)二酮單一對照品溶液以外標定量法測定得到，供試品溶液中除莪術(shù)二酮以外的其他某一待測成分的進樣質(zhì)量mx’由公式mx’＝fx/s×ms’×(ax’/as’)計算得到，

式中，as’和ax’分別是供試品溶液中測得的莪術(shù)二酮和除莪術(shù)二酮以外的其他某一待測成分的峰面積，fx/s是步驟(3)測得的異佛爾酮、4-亞甲基-異佛爾酮、莪術(shù)雙環(huán)烯酮、莪術(shù)烯醇、莪術(shù)酮、莪術(shù)呋喃二烯酮、莪術(shù)醇和吉馬酮8種成分對莪術(shù)二酮的相對校正因子；

供試品溶液中各待測成分的濃度由測定或計算得到的進樣質(zhì)量ms’和mx’經(jīng)換算得到。

本發(fā)明醒腦靜注射液中間體指梔子和郁金的水蒸氣蒸餾提取液，由于梔子、郁金中的揮發(fā)性成分并不穩(wěn)定，且莪術(shù)酮、莪術(shù)雙環(huán)烯酮、4-亞甲基-異佛爾酮等成分的對照品非常緊缺且價格昂貴，若采用常規(guī)的多個對照品外標定量測定方法，分析成本太高，本方法基于一測多評法，能準確且低成本地測定源于梔子和郁金的多指標成分含量的方法。

所述測定方法中，高效液相色譜儀測定的條件為：色譜柱：反相c18色譜柱；流動相：a相為磷酸水溶液，b相為乙腈；洗脫程序為線性梯度洗脫；流速：0.5～0.7ml/min；柱溫：35～45℃；檢測波長：異佛爾酮，238nm±2nm；4-亞甲基-異佛爾酮，275nm±2nm；莪術(shù)雙環(huán)烯酮，256nm±2nm；莪術(shù)烯醇，261nm±2nm；莪術(shù)二酮，220nm±2nm；莪術(shù)酮，274nm±2nm；莪術(shù)呋喃二烯酮，274nm±2nm；莪術(shù)醇，210nm±2nm；吉馬酮，210nm±2nm。

作為優(yōu)選，所述的流動相中，磷酸水溶液的質(zhì)量分數(shù)為0.05～0.2％。

作為優(yōu)選，所述的洗脫程序中，磷酸水溶液占流動相體積比為：0min，28～32％；10min，53～57％；24min，53～57％；24.1min，68～72％；35min，68～72％；40min，98～100％。

作為優(yōu)選，步驟(3)中，異佛爾酮、4-亞甲基-異佛爾酮、莪術(shù)雙環(huán)烯酮、莪術(shù)烯醇、莪術(shù)酮、莪術(shù)呋喃二烯酮、莪術(shù)醇、吉馬酮與莪術(shù)二酮間的相對校正因子分別為0.177±0.01、0.208±0.01、0.497±0.01、0.602±0.01、1.59±0.05、0.768±0.02、0.790±0.05、0.275±0.01。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

(1)本發(fā)明提供一種能夠準確測定醒腦靜注射液或其中間體中9種成分含量的高效液相色譜分析方法。既能對醒腦靜注射液中源于梔子的2個主要成分(異佛爾酮和4-亞甲基-異佛爾酮)進行定量測定，又能對源于郁金的7個主要成分(莪術(shù)雙環(huán)烯酮、莪術(shù)烯醇、莪術(shù)二酮、莪術(shù)酮、莪術(shù)呋喃二烯酮、莪術(shù)醇、吉馬酮)進行定量測定，可以更全面、準確地評價醒腦靜注射液或其中間體的質(zhì)量。

(2)本發(fā)明對流動相的組成、流動相流速、柱溫進行了大量篩選，確定采用優(yōu)選的色譜條件，可以同時保證9個指標成分在色譜分析中達到很好的分離。本發(fā)明通過紫外全波長掃描，確定9個指標成分合適的檢測波長，可以靈敏地檢測各指標成分。

(3)本發(fā)明基于一測多評法，利用待測成分間的相對校正因子，以莪術(shù)二酮單一對照品作為內(nèi)參物代替多個成分對照品進行定量，可用于解決對照品緊缺和檢測成本高的問題。本方法檢測成本低、實用性高，具有很好的應用前景和使用價值。

(4)對本發(fā)明提供的分析方法進行方法學驗證表明，該方法精密度、重復性、準確性、靈敏度均很好。本發(fā)明的測定結(jié)果通過外標定量法進行驗證，結(jié)果表明，本發(fā)明的測定結(jié)果與外標定量法相似度極高，可以準確靈敏地測定各指標成分。

附圖說明

圖1為實施例1中混合對照品的高效液相色譜圖；

圖2為實施例1中梔子和郁金水蒸氣蒸餾提取液的高效液相色譜圖；

圖3為實施例2中醒腦靜注射液的高效液相色譜圖。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例進一步闡明本發(fā)明，應理解這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，在閱讀了本發(fā)明之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員對本發(fā)明的各種等價形式的修改均落于本申請所附權(quán)利要求所限定的范圍。

實施例1

一種醒腦靜注射液中間體中多指標成分含量的測定方法，該方法包括以下步驟：

(1)梔子和郁金水蒸氣蒸餾提取液的制備

梔子、郁金藥材分別粉碎、過篩至20～80目，各取30g粉末，加蒸餾水1500ml，進行水蒸氣蒸餾至蒸餾液體積為1000ml時停止蒸餾，即得梔子和郁金水蒸氣蒸餾提取液。

(2)供試品溶液的制備

直接將步驟(1)得到的梔子和郁金水蒸氣蒸餾提取液(即醒腦靜注射液生產(chǎn)過程中的中間體)作為供試品溶液，無前處理和稀釋。

(3)對照品溶液的制備

精密稱取21.67mg異佛爾酮、12.90mg4-亞甲基-異佛爾酮、13.73mg莪術(shù)雙環(huán)烯酮、16.82mg莪術(shù)烯醇、16.25mg莪術(shù)二酮、10.32mg莪術(shù)酮、12.00mg莪術(shù)呋喃二烯酮、11.11mg莪術(shù)醇、16.11mg吉馬酮9種成分的對照品，分別加質(zhì)量分數(shù)為80％甲醇水溶液溶解并定容至250、50、50、50、50、5、25、50、50ml，制成單一對照品儲備液；

然后分別精密吸取上述各成分的單一對照品儲備液240、295、330、930、1250、120、250、200、146μl，混合后加質(zhì)量分數(shù)為20％甲醇水溶液稀釋定容至25ml，得到異佛爾酮、4-亞甲基-異佛爾酮、莪術(shù)雙環(huán)烯酮、莪術(shù)烯醇、莪術(shù)二酮、莪術(shù)酮、莪術(shù)呋喃二烯酮、莪術(shù)醇、吉馬酮濃度分別為0.834、3.04、3.62、12.5、16.2、9.91、4.80、1.78、1.88μg/ml的混合對照品溶液，于4℃保存，備用。

(4)相對校正因子的測定

以莪術(shù)二酮為內(nèi)參物(以符號s表示)，ms是其進樣質(zhì)量，as是內(nèi)參物進樣質(zhì)量為ms時測得的峰面積，fs＝ms/as是其校正因子。對于其他待測成分(以符號x表示)，mx是x成分的進樣質(zhì)量，ax是x成分進樣質(zhì)量為mx時測得的峰面積，fx＝mx/ax是x成分的校正因子。x成分與s成分間的相對校正因子fx/s的計算公式為fx/s＝fx/fs＝(mx×as)/(ms×ax)。

取步驟(3)制備得到的混合對照品溶液，進樣50μl進行高效液相色譜分析，得到混合對照品溶液的高效液相色譜圖(如圖1所示)，圖1中，檢測波長：0～15.5min，238nm；15.5～19min，275nm；19～20min，256nm；20～24min，261nm；24～26min，220nm；26～30.5min，274nm；30.5min后，210nm)，峰1：異佛爾酮；峰2：4-亞甲基-異佛爾酮；峰3：莪術(shù)雙環(huán)烯酮；峰4：莪術(shù)烯醇；峰5：莪術(shù)二酮；峰6：莪術(shù)酮；峰7：莪術(shù)呋喃二烯酮；峰8：莪術(shù)醇；峰9：吉馬酮。

色譜圖積分得到莪術(shù)二酮和其他各待測成分的峰面積，并以公式fx/s＝(mx×as)/(ms×ax)分別計算各待測成分與莪術(shù)二酮間的相對校正因子，異佛爾酮、4-亞甲基-異佛爾酮、莪術(shù)雙環(huán)烯酮、莪術(shù)烯醇、莪術(shù)酮、莪術(shù)呋喃二烯酮、莪術(shù)醇和吉馬酮8種成分對于莪術(shù)二酮的相對校正因子分別為0.177、0.209、0.497、0.600、1.54、0.750、0.842、0.269。

(5)樣品中多指標成分的測定

取步驟(2)的供試品溶液，進樣50μl注入高效液相色譜儀進行測定，得到梔子和郁金水蒸氣蒸餾提取液的高效液相色譜圖(如圖2所示)，圖2中，檢測波長：0～15.5min，238nm；15.5～19min，275nm；19～20min，256nm；20～24min，261nm；24～26min，220nm；26～30.5min，274nm；30.5min后，210nm)，峰1：異佛爾酮；峰2：4-亞甲基-異佛爾酮；峰3：莪術(shù)雙環(huán)烯酮；峰4：莪術(shù)烯醇；峰5：莪術(shù)二酮；峰6：莪術(shù)酮；峰7：莪術(shù)呋喃二烯酮；峰8：莪術(shù)醇；峰9：吉馬酮，色譜圖積分得到莪術(shù)二酮和其他各待測成分的峰面積。

供試品溶液中莪術(shù)二酮的進樣質(zhì)量ms’由莪術(shù)二酮對照品以外標定量法測定得到，供試品溶液中其他待測成分的進樣質(zhì)量mx’由公式mx’＝fx/s×ms’×(ax’/as’)計算得到。此公式中的as’和ax’是對供試品溶液分析測得的內(nèi)參物和其他待測成分的峰面積，fx/s是步驟(3)測得的各待測成分與莪術(shù)二酮間的相對校正因子。由測定或計算得到的進樣質(zhì)量ms’和mx’，除以進樣體積，計算得到樣品中各待測成分的濃度，結(jié)果如下：異佛爾酮0.851μg/ml，4-亞甲基-異佛爾酮3.22μg/ml，莪術(shù)雙環(huán)烯酮3.60μg/ml，莪術(shù)烯醇10.3μg/ml，莪術(shù)二酮13.2μg/ml，莪術(shù)酮9.89μg/ml，莪術(shù)呋喃二烯酮4.46μg/ml，莪術(shù)醇1.07μg/ml，吉馬酮2.04μg/ml。

(6)步驟(4)和步驟(5)所用的高效液相色譜參數(shù)如下：

儀器：waterse2695高效液相色譜儀；

色譜柱：迪馬鉆石c18色譜柱(5μm，250×4.6mm)；

流動相：質(zhì)量分數(shù)0.1％磷酸水溶液-乙腈；

洗脫程序為線性梯度洗脫，0.05％～0.2％磷酸水溶液占流動相體積比為：0min，30％；10min，55％；24min，55％；24.1min，70％；35min，70％；40min，100％；

流速：0.6ml/min；

柱溫：40℃；

檢測波長：異佛爾酮，238nm；4-亞甲基-異佛爾酮，275nm；莪術(shù)雙環(huán)烯酮，256nm；莪術(shù)烯醇，261nm；莪術(shù)二酮，220nm；莪術(shù)酮，274nm；莪術(shù)呋喃二烯酮，274nm；莪術(shù)醇，210nm；吉馬酮，210nm。

(7)本發(fā)明方法的方法學考察結(jié)果如下：

(7.1)線性關(guān)系考察

精密吸取步驟(3)制備得到的異佛爾酮、4-亞甲基-異佛爾酮、莪術(shù)雙環(huán)烯酮、莪術(shù)烯醇、莪術(shù)二酮、莪術(shù)酮、莪術(shù)呋喃二烯酮、莪術(shù)醇、吉馬酮單一對照品儲備液240、295、330、930、1250、120、250、200、175μl，混合后加質(zhì)量分數(shù)為20％甲醇水溶液稀釋定容至5ml，制成9種成分濃度分別為4.17、15.2、18.1、62.6、81.2、49.5、24.0、8.89、11.3μg/ml的混合對照品溶液。按步驟(6)中的色譜條件分別進樣1、2、5、10、20、50μl進行測定，記錄相應的峰面積。以各成分濃度(μg/ml)乘以進樣體積(μl)得到被測成分進樣質(zhì)量(ng)作為自變量x，以峰面積作為因變量y，進行線性回歸。9種成分的回歸方程和線性范圍如表1所示。結(jié)果表明，9個成分在考察的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

表1.線性關(guān)系考察結(jié)果

(7.2)精密度、重復性、穩(wěn)定性考察

取步驟(2)制備得到的同一份供試品溶液，按步驟(6)中的色譜條件重復進樣6次，按步驟(5)測得9個成分濃度的rsd如表2所示。結(jié)果表明，精密度良好。

由于建立的分析方法沒有供試品前處理和稀釋過程，所以重復性試驗考察方式為取步驟(1)得到的同一份梔子-郁金蒸餾液，裝到6個進樣瓶中作為供試品溶液按步驟(6)中的色譜條件分別進樣分析，按步驟(5)測得9個成分濃度的rsd如表2所示。結(jié)果表明，重復性良好。

取步驟(2)制備得到的供試品溶液，在常溫下放置0、1、2、4、8、12小時后按步驟(6)中的色譜條件進樣，按步驟(5)測得9個成分濃度的rsd如表2所示。結(jié)果表明，9個成分在常溫下12小時內(nèi)穩(wěn)定。

表2.精密度、重復性、穩(wěn)定性考察結(jié)果

(7.3)加樣回收率考察

按步驟(1)和步驟(2)分別制備得到6份供試品溶液，按步驟(5)測定9種成分的濃度。分別取6份供試品溶液各0.4ml，精密加入步驟(3)得到的對照品溶液0.4ml混勻，按步驟(5)測定9種成分濃度，并計算各成分的加樣回收率。測定結(jié)果如表3所示，加樣回收率在95.3～105.4％范圍內(nèi)，表明該方法的準確度良好。

表3.加樣回收率(％)考察結(jié)果

(8)本發(fā)明方法與外標法測定結(jié)果比較

以外標法對步驟(5)中的同一份供試品溶液進行測定，得到各待測成分濃度如下：異佛爾酮0.853μg/ml，4-亞甲基-異佛爾酮3.24μg/ml，莪術(shù)雙環(huán)烯酮3.61μg/ml，莪術(shù)烯醇10.3μg/ml，莪術(shù)二酮13.2μg/ml，莪術(shù)酮9.75μg/ml，莪術(shù)呋喃二烯酮4.45μg/ml，莪術(shù)醇1.06μg/ml，吉馬酮2.01μg/ml。步驟(5)中本發(fā)明方法測定結(jié)果與外標法基本一致，相對偏差在2％以內(nèi)，表明本發(fā)明方法能準確且低成本地測定9種指標成分的含量。

實施例2

一種醒腦靜注射液中多指標成分含量的測定方法，該方法包括以下步驟：

(1)供試品溶液的制備

直接將醒腦靜注射液作為供試品溶液，無前處理和稀釋。

(2)對照品溶液的制備

精密稱莪術(shù)二酮的對照品16.25mg，加質(zhì)量分數(shù)為80％甲醇水溶液溶解并定容至50ml，制成對照品儲備液。然后精密吸取上述對照品儲備液1250μl，加濃度為30％甲醇水溶液稀釋定容至25ml，得到濃度為16.2μg/ml的莪術(shù)二酮對照品溶液，于4℃保存，備用。

(3)樣品中多指標成分的測定

取步驟(1)和步驟(2)得到的供試品溶液和莪術(shù)二酮對照品溶液，分別進樣50μl進行高效液相色譜分析，得到醒腦靜注射液的高效液相色譜圖(如圖3所示)和莪術(shù)二酮對照品溶液的高效液相色譜圖，圖3中，檢測波長：0～15.5min，238nm；15.5～19min，275nm；19～20min，256nm；20～24min，261nm；24～26min，220nm；26～30.5min，274nm；30.5min后，210nm)，峰1：異佛爾酮；峰2：4-亞甲基-異佛爾酮；峰3：莪術(shù)雙環(huán)烯酮；峰4：莪術(shù)烯醇；峰5：莪術(shù)二酮；峰6：莪術(shù)酮；峰7：莪術(shù)呋喃二烯酮；峰8：莪術(shù)醇；峰9：吉馬酮，色譜圖積分得到醒腦靜注射液中各待測成分的峰面積及莪術(shù)二酮對照品溶液中莪術(shù)二酮的峰面積。

供試品溶液中莪術(shù)二酮的進樣質(zhì)量ms’由莪術(shù)二酮對照品溶液以外標定量法測定得到，供試品溶液中其他待測成分的進樣質(zhì)量mx’由公式mx’＝fx/s×ms’×(ax’/as’)計算得到。

異佛爾酮、4-亞甲基-異佛爾酮、莪術(shù)雙環(huán)烯酮、莪術(shù)烯醇、莪術(shù)酮、莪術(shù)呋喃二烯酮、莪術(shù)醇和吉馬酮8種成分對于莪術(shù)二酮的相對校正因子在本發(fā)明方法的開發(fā)過程中已測定，具體測定過程可參考實施例1的步驟(4)，測定結(jié)果分別為0.176、0.207、0.496、0.600、1.59、0.756、0.802、0.276，可直接使用。

由測定或計算得到的進樣質(zhì)量ms’和mx’，除以進樣體積，計算得到樣品中各待測成分的濃度，結(jié)果如下：異佛爾酮0.600μg/ml，4-亞甲基-異佛爾酮0.854μg/ml，莪術(shù)雙環(huán)烯酮2.64μg/ml，莪術(shù)烯醇5.42μg/ml，莪術(shù)二酮9.77μg/ml，莪術(shù)酮5.71μg/ml，莪術(shù)呋喃二烯酮1.63μg/ml，莪術(shù)醇1.23μg/ml，吉馬酮1.49μg/ml。

(4)步驟(3)所用的高效液相色譜參數(shù)如下：

儀器：安捷倫1200高效液相色譜儀；

色譜柱：akzonobelkromasilc18(5μm，250×4.6mm)；

流動相：質(zhì)量分數(shù)0.1％磷酸水溶液-乙腈；

洗脫程序為線性梯度洗脫，0.1％磷酸水溶液占流動相體積比為：0min，30％；10min，55％；24min，55％；24.1min，70％；35min，70％；40min，100％；

流速：0.6ml/min；

柱溫：40℃；

檢測波長：異佛爾酮，238nm；4-亞甲基-異佛爾酮，275nm；莪術(shù)雙環(huán)烯酮，256nm；莪術(shù)烯醇，261nm；莪術(shù)二酮，220nm；莪術(shù)酮，274nm；莪術(shù)呋喃二烯酮，274nm；莪術(shù)醇，210nm；吉馬酮，210nm。

(5)本發(fā)明方法與外標法測定結(jié)果比較

以外標法對步驟(3)中的同一份供試品溶液進行測定，得到各待測成分濃度如下：異佛爾酮0.601μg/ml，4-亞甲基-異佛爾酮0.858μg/ml，莪術(shù)雙環(huán)烯酮2.64μg/ml，莪術(shù)烯醇5.45μg/ml，莪術(shù)二酮9.77μg/ml，莪術(shù)酮5.72μg/ml，莪術(shù)呋喃二烯酮1.66μg/ml，莪術(shù)醇1.24μg/ml，吉馬酮1.47μg/ml。步驟(3)中本發(fā)明方法測定結(jié)果與外標法基本一致，相對偏差在2％以內(nèi)，表明本發(fā)明方法能準確且低成本地測定9種指標成分的含量。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發(fā)明的保護范圍。