本發(fā)明屬于黃芩苷的提取領(lǐng)域，尤其是一種ase法提取黃芩中黃芩苷的方法。

背景技術(shù)：

2010年版藥典方法中記載的制備供試品溶液的方法為：取本品中粉約0.3g，精密稱定，加70％乙醇40ml，加熱回流3小時，放冷，濾過，濾液置100ml量瓶中，用少量70％乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)?，洗液濾人同一量瓶中，加70％乙醇至刻度，搖勻。精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

該方法回流時間長，且對技術(shù)人員的專業(yè)水平要求較高。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對上述不足，本發(fā)明旨在提供一種ase法提取黃芩中黃芩苷的方法，該方法提取效果好且耗時短、重復(fù)性好。

為了實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)效果，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是這樣的：一種ase法提取黃芩中黃芩苷的方法，依次包括下述步驟：

步驟1：將黃芩樣品粉碎，過篩，取0.3g與1g石英砂混合；

步驟2：將所得的混合物裝于放有濾膜的ase萃取池中，加石英砂至與池口平行；

步驟3：用70％乙醇萃取，結(jié)束后，將萃取液用70％乙醇定容至50ml，離心，取上清液，即得。

優(yōu)選地，步驟3所述的萃取參數(shù)為：壓力為1500psi，溫度為120℃，萃取時間為5min，循環(huán)次數(shù)為3次，沖洗體積為100％，吹掃時間為100s。

優(yōu)選地，步驟2所述的ase萃取池的體積為10ml。

優(yōu)選地，步驟3所述的離心參數(shù)為：離心速度為15000r/min，離心時間為3min。

本發(fā)明與傳統(tǒng)方法相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)：

本發(fā)明曾對快速溶劑萃取使用的溶劑進(jìn)行考察，《中國藥典》使用70％乙醇回流3小時。本實(shí)驗(yàn)選用甲醇、乙醇、70％乙醇作為提取溶劑進(jìn)行了溶劑考察，結(jié)果顯示甲醇與乙醇提取后黃芩苷含量與2015年版《中國藥典》含量下降，原因可能是黃芩苷的極性大，故采用與藥典一致的提取溶劑70％乙醇。

70％乙醇的熔沸點(diǎn)較高，快速溶劑萃取(以下簡稱ase)提取原理：a:提高溫度降低溶劑的黏度，減少溶劑進(jìn)入樣品基體的阻止，增加了溶劑進(jìn)入樣品基體的擴(kuò)散，降低溶劑和樣品基體之間的表面張力，使溶劑溶解待測物的容量增加；b:萃取液體的沸點(diǎn)隨壓力升高而提高，從而使溶劑在高溫高壓下仍保持在液態(tài)(液體對溶質(zhì)的溶解能力遠(yuǎn)大于氣體對溶質(zhì)的溶解能力)。故我們選擇采用120℃，提取5min，提取3次，即可達(dá)到與藥典含量接近，更多的提取時間、溫度、次數(shù)對結(jié)果已經(jīng)無明顯影響。最終確定最佳提取工藝組合為提取溫度120℃，提取時間5min，提取次數(shù)3次。

附圖說明

圖1為以黃芩苷對照品的濃度(mg/ml)-峰面積進(jìn)行的線性回歸圖；

圖2為黃芩苷對照品的色譜圖；

圖3為采用藥典方法提取所得的供試品溶液的色譜圖；

圖4為采用ase法萃取所得的供試品溶液的色譜圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施方式，對本發(fā)明的權(quán)利要求做進(jìn)一步說明，但不構(gòu)成對本發(fā)明的任何限制，任何在本發(fā)明的權(quán)利要求保護(hù)范圍內(nèi)所做的有限次修改，仍在本發(fā)明的權(quán)利要求保護(hù)范圍內(nèi)。

實(shí)施例1

1、儀器設(shè)備及試劑

1.1儀器：

電子分析天平(xa205du)、ase350快速溶劑萃取儀(美國dionex公司)、thermou3000uhplc液相色譜儀。

1.2試劑：

水：符合gb/t6682規(guī)定的一級水；

乙醇(ch4o)：色譜純(液相色譜用)；

石英砂：粒徑2mm。

2、方法

2.1供試品溶液的制備

2.1.12010年版藥典方法：

取本品中粉約0.3g，精密稱定，加70％乙醇40ml，加熱回流3小時，放冷，濾過，濾液置100ml量瓶中，用少量70％乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)匆簽V人同一量瓶中，加70％乙醇至刻度，搖勻。精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.1.2快速溶劑萃取法(ase)制備供試品方法：

樣品經(jīng)粉碎機(jī)粉碎，過三號篩，精密稱定0.3g，與1g石英砂混合均勻，待用，移入到預(yù)先放好過濾膜的10ml萃取池中再加入適量石英砂，輕輕振搖使之與池口在同一水平線上，擰緊萃取池上蓋。萃取結(jié)束后，把萃取液轉(zhuǎn)移于50ml容量瓶中，用70％乙醇稀釋至刻度，在15000r/min下離心3min，取上清液，進(jìn)入lc測定。

2.2對照品溶液的制備：

取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，即得。

2.3ase萃取條件：

壓力為1500psi，溫度為120℃，萃取時間為5min，循環(huán)次數(shù)為3次，沖洗體積為100％，吹掃時間為100s。

2.4色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：

a)儀器：thermo雙三元液相(u-3000)no.5121；

b)色譜柱：thermosyncronisc18，3*100mm，3μm；

c)柱溫：40℃；

d)流速：0.5ml/min；

e)流動相：：甲醇-0.1％磷酸(47:53)；

f)檢測波長：280nm；

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；理論板數(shù)按補(bǔ)骨脂素峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。

2.5測定法：

照高效液相色譜法(通則0512)測定；

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各2μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.6標(biāo)準(zhǔn)限值要求：

本品按干燥品計(jì)算，含黃芩苷(c21h18o11)不得少于9.0％。

2.7計(jì)算(外標(biāo)法)：

式中cr—對照品溶液濃度，單位為微克每升(mg/l)；

ax—供試品的峰面積；

ar—對照品峰面積。

注意：

使用前萃取池底部應(yīng)拆卸清理干凈，否則容易引起壓力不穩(wěn)；

萃取池底部的濾紙應(yīng)在密封圈內(nèi)，否則引起滲漏；

萃取池裝樣時松緊適中，太松容易導(dǎo)致提取液過多；

開機(jī)前檢查氣瓶氣壓是否達(dá)到1mpa；

使用結(jié)束后清理干凈，萃取池要及時晾干(容易生銹)。

3、結(jié)果

3.1線性關(guān)系

取黃芩苷對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加70％乙醇制成每1ml含黃芩苷0.2852mg的溶液，然后分別精密吸取該溶液0.5μl、0.8μl、1μl、2μl、5μl進(jìn)入lc測定，并依照上述方法測定，結(jié)果詳見表1。

以濃度(mg/ml)-峰面積進(jìn)行線性回歸，求得回歸方程：y＝6021.6316x-32.5278，r²＝1.0000。黃芩苷在0.1426～1.426mg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，詳見圖1。

表1線性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.2重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

取相同批號的樣品(批號：1510077)0.3g，共4份，精密稱定，按ase提取方法提取供試品溶液，進(jìn)樣量為1μl，以上述的色譜條件平行試驗(yàn)，測得樣品中黃芩苷的含量見表2，rsd為0.01％，結(jié)果表明ase提取方法重復(fù)性良好。

表2重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.3樣品含量測定結(jié)果(3批)

表3樣品含量測定結(jié)果

3.4色譜測定

圖2為黃芩苷對照品的色譜圖；圖3為采用藥典方法提取所得的供試品溶液的色譜圖；圖4為采用ase法萃取所得的供試品溶液的色譜圖。

4、討論：

4.1ase提取溶劑的選擇：

本發(fā)明曾對快速溶劑萃取使用的溶劑進(jìn)行考察，《中國藥典》使用70％乙醇回流3小時。本實(shí)驗(yàn)選用甲醇、乙醇、70％乙醇作為提取溶劑進(jìn)行了溶劑考察，結(jié)果顯示甲醇與乙醇提取后黃芩苷含量與2015年版《中國藥典》含量下降，原因可能是黃芩苷的極性大，故采用與藥典一致的提取溶劑70％乙醇。

4.2ase提取條件的優(yōu)化

70％乙醇的熔沸點(diǎn)較高，快速溶劑萃取(以下簡稱ase)提取原理：a:提高溫度降低溶劑的黏度，減少溶劑進(jìn)入樣品基體的阻止，增加了溶劑進(jìn)入樣品基體的擴(kuò)散，降低溶劑和樣品基體之間的表面張力，使溶劑溶解待測物的容量增加；b:萃取液體的沸點(diǎn)隨壓力升高而提高，從而使溶劑在高溫高壓下仍保持在液態(tài)(液體對溶質(zhì)的溶解能力遠(yuǎn)大于氣體對溶質(zhì)的溶解能力)。故我們選擇采用120℃，提取5min，提取3次，即可達(dá)到與藥典含量接近，更多的提取時間、溫度、次數(shù)對結(jié)果已經(jīng)無明顯影響。最終確定最佳提取工藝組合為提取溫度120℃，提取時間5min，提取次數(shù)3次。

以上所述的僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡在本發(fā)明的精神和原則范圍內(nèi)所做的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的餓保護(hù)范圍內(nèi)。