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一種重組人溶菌酶的反相高效液相色譜分析方法與流程

文檔序號:12713635閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種重組人溶菌酶的反相高效液相色譜分析方法,其特征在于它由下述步驟組成:

(1)將重組人溶菌酶標準品溶解于質(zhì)量濃度為0.9%的氯化鈉超純水溶液中,配制成重組人溶菌酶標準品溶液,采用反相高效液相色譜對標準品溶液進行分析,色譜分析條件:色譜柱為C18反相色譜柱,填料為孔徑20~50nm、粒徑2~10μm的十八烷基硅烷鍵合硅膠,流動相A是氯化鈉質(zhì)量濃度為0.9%、三氟乙酸體積濃度為0.1%的超純水溶液,流動相B是乙腈與超純水體積比為6:4的混合液且混合液中含有質(zhì)量濃度為0.9%的氯化鈉和體積濃度為0.1%的三氟乙酸,進行梯度洗脫,流動相梯度A:B由(90~0):(10~100)到(50~0):(50~100),檢測波長為280nm,流速為1mL/分鐘;繪制色譜主峰面積隨重組人溶菌酶濃度變化的標準曲線;

(2)將待測重組人溶菌酶樣品溶解于質(zhì)量濃度為0.9%的氯化鈉超純水溶液中,用濾膜過濾,收集濾液,采用反相高效液相色譜對濾液進行分析,色譜分析條件與步驟(1)相同;

(3)根據(jù)步驟(2)得到的色譜主峰面積,結(jié)合步驟(1)確定的標準曲線的線性方程即可得到待測重組人溶菌酶樣品中重組人溶菌酶的濃度。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組人溶菌酶的反相高效液相色譜分析方法,其特征在于:在步驟(1)中,所述的流動相梯度選擇0到30分鐘A:B由55:45到5:95。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的重組人溶菌酶的反相高效液相色譜分析方法,其特征在于:在步驟(1)中,所述的填料為孔徑30nm、粒徑5μm的十八烷基硅烷鍵合硅膠。

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