技術(shù)特征：

1.基于液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)測定肉類食品中多種植物源性成分的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、標(biāo)準(zhǔn)植物樣品的制備；

S2、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測以及標(biāo)準(zhǔn)植物成分特征多肽的篩選；

S3、待測肉類食品的前處理；

S4、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測肉類食品中的特征多肽，并與標(biāo)準(zhǔn)植物成分的特征多肽進行比較，從而判定對應(yīng)的植物源性成分。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S1具體如下：

S11、提取標(biāo)準(zhǔn)植物樣品總蛋白：稱取1-5g磨碎的標(biāo)準(zhǔn)植物樣品粉末，加入5-25mL提取液，超聲提取30min，然后離心，取上清液；

S12、還原及烷基化：取50-250μL上清液，加入50mmol/L二硫蘇糖醇溶液10-50μL，56℃振蕩反應(yīng)1h，然后降至室溫，加入100mmol/L碘乙酰胺溶液20-100μL，暗處反應(yīng)30min，再加入50mmol/L二硫蘇糖醇溶液15-75μL，暗處反應(yīng)15min；

S13、酶切：向上述反應(yīng)體系中加入25mmol/L Tris-HCl，pH 8.0緩沖溶液750-2000μL，然后加入20μg胰蛋白酶，調(diào)節(jié)pH為8.0，37℃反應(yīng)過夜；向上述酶解液中加入TFA調(diào)pH值小于2終止反應(yīng)，并加入1mL水，所得溶液用于過柱除鹽；

S14、過柱除鹽：，將S13所得溶液用C₁₈固相萃取柱除鹽，收集洗脫液過濾后，準(zhǔn)備上機；

S11中所述提取液為0.05mol/L Tris-HCl+7mol/L尿素+2mol/L硫脲，pH 8.0。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，S11中超聲的條件為：超聲功率200W，超聲頻率40KHz；冰水浴條件下進行；離心的條件為：4℃，12000r/min離心20min。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，S14中依次用乙腈、50％乙腈/水、0.1％TFA活化C₁₈固相萃取柱，將S13所得溶液上樣，再依次用0.1％TFA，0.5％乙酸清洗，最后用1mL 60％乙腈+0.5％乙酸洗脫，收集的洗脫液經(jīng)0.22μm濾膜過濾。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S2利用Easy nLC 1000液相色譜系統(tǒng)和Q Exactive HF質(zhì)譜儀檢測并篩選各種標(biāo)準(zhǔn)植物樣品中的特征多肽，具體如下：

色譜條件：C₁₈色譜柱2.1mm×100mm，填料粒徑1.9μm；流動相：A相0.1％FA/H₂O，B相0.1％FA/CAN；色譜梯度為：0～0.2min，3％～10％B；0.2～16min，10％～40％B；16～17min，40％～80％B；17.5～18.5min，80％～3％B；18.5～25min，3％B；進樣量為10μL，每個樣品至少采集三次數(shù)據(jù)；

質(zhì)譜條件：噴霧電壓3500V；鞘氣38Arb；輔氣15Arb；離子傳輸管溫度275℃；離子源霧化溫度380℃；離子源溫度380℃；碰撞氣為1.5mTorr；Q1和Q3分辨率均為0.7；

質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析：用Maxquant對各種標(biāo)準(zhǔn)植物樣品進行非標(biāo)記定量分析，檢索NCBI數(shù)據(jù)庫，設(shè)置peptides不超過4，sequence length于140-600之間，sequence coverage不超過40％，unique peptides不超過4，其他參數(shù)設(shè)置為默認(rèn)，獲得相對特異性多肽，即各種標(biāo)準(zhǔn)植物樣品的特征多肽。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S3具體如下：

S31、提取待測肉類食品樣品總蛋白：將待測樣品剪碎或分割成小塊，向1-5g樣品中加入5-25mL提取液，超聲提取30min，然后離心，取上清液；

S32、還原及烷基化：取50-250μL上清液，加入50mmol/L二硫蘇糖醇溶液10-50μL，56℃振蕩反應(yīng)1h，然后降至室溫，加入100mmol/L碘乙酰胺溶液20-100μL，暗處反應(yīng)30min，再加入50mmol/L二硫蘇糖醇溶液15-75μL，暗處反應(yīng)15min；

S33、酶切：向上述反應(yīng)體系中加入25mmol/L Tris-HCl，pH 8.0緩沖溶液750-2000μL，然后加入20μg胰蛋白酶，調(diào)節(jié)pH為8.0，37℃反應(yīng)過夜；向上述酶解液中加入TFA調(diào)pH值小于2終止反應(yīng)，并加入1mL水，所得溶液用于過柱除鹽；

S34、過柱除鹽：，將S33所得溶液用C₁₈固相萃取柱除鹽，收集洗脫液過濾后，準(zhǔn)備上機；

S31中所述提取液為0.05mol/L Tris-HCl+7mol/L尿素+2mol/L硫脲，pH 8.0。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，S31中超聲的條件為：超聲功率200W，超聲頻率40KHz；冰水浴條件下進行；離心的條件為：4℃，12000r/min離心20min；S34中依次用乙腈、50％乙腈/水、0.1％TFA活化C₁₈固相萃取柱，將S13所得溶液上樣，再依次用0.1％TFA，0.5％乙酸清洗，最后用1mL 60％乙腈+0.5％乙酸洗脫，收集的洗脫液經(jīng)0.22μm濾膜過濾。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S4采用液質(zhì)聯(lián)用三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀進行檢測，具體如下：

色譜條件：C₁₈色譜柱2.1mm×100mm，填料粒徑1.9μm；流動相：A相0.1％FA/H₂O，B相0.1％FA/CAN；色譜梯度為：0～0.2min，3％～10％B；0.2～16min，10％～40％B；16～17min，40％～80％B；17.5～18.5min，80％～3％B；18.5～25min，3％B；進樣量為10μL，每個樣品至少采集三次數(shù)據(jù)；

質(zhì)譜條件：噴霧電壓3500V；鞘氣38Arb；輔氣15Arb；離子傳輸管溫度275℃；離子源霧化溫度380℃；離子源溫度380℃；碰撞氣為1.5mTorr；Q1和Q3分辨率均為0.7；

通過對待測樣品的特征多肽進行母離子掃描以及MRM掃描，根據(jù)保留時間，多個定性離子匹配以及豐度信息，與標(biāo)準(zhǔn)植物成分的特征多肽進行比較，從而判定待測樣品中含有的植物源性成分。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項所述的方法，其特征在于，所述植物包括大豆、豌豆、小麥、玉米、花生。

10.基于權(quán)利要求1-9任一項所述方法獲得的不同植物源性成分的特征多肽，其特征在于，大豆、花生的多肽信息分別如下：