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一種檢測(cè)禽蛋中膽固醇含量的酶比色法的制作方法

文檔序號(hào):12657012閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種檢測(cè)禽蛋中膽固醇含量的酶比色法,其特征在于,包括如下步驟:

步驟1:制備待分析試液;

步驟2:繪制膽固醇溶液的吸光度隨濃度變化的標(biāo)準(zhǔn)變化曲線;

步驟3:在待分析試液中加入顯色劑,進(jìn)行顯色反應(yīng),測(cè)量其吸光度;

步驟4:根據(jù)待分析試液的吸光度與所述標(biāo)準(zhǔn)變化曲線計(jì)算待分析試液的膽固醇含量;

其中,所述步驟1具體包括:

步驟1.1:制備禽蛋樣品,并對(duì)其進(jìn)行皂化;

步驟1.2:對(duì)皂化后的所述禽蛋樣品進(jìn)行萃取,得到萃取液;

步驟1.3:將所述萃取液制備成待分析試液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)禽蛋中膽固醇含量的酶比色法,其特征在于:所述步驟1.1中,所述禽蛋樣品為全蛋樣品,所述全蛋樣品的制備過(guò)程包括:選取禽蛋,去掉蛋殼,將蛋黃和蛋清充分混勻。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)禽蛋中膽固醇含量的酶比色法,其特征在于:所述步驟1.1中,所述禽蛋樣品為蛋黃樣品,所述蛋黃樣品的制備過(guò)程包括:選取禽蛋,去掉蛋殼和蛋清,用濾紙吸干蛋黃表面的蛋清,再將蛋黃充分混勻。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的檢測(cè)禽蛋中膽固醇含量的酶比色法,其特征在于:所述步驟1.1中,對(duì)所述禽蛋樣品進(jìn)行皂化的過(guò)程包括:取禽蛋樣品1.00-2.00g,并加入皂化劑,在60-70℃的溫水中水浴50-70min;

其中,所述皂化劑由體積為5-15mL、濃度為600g/L的氫氧化鉀溶液和體積為15-25mL的甲醇混合組成。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測(cè)禽蛋中膽固醇含量的酶比色法,其特征在于:所述步驟1.2中,將皂化后的所述禽蛋樣品冷卻至室溫,加入15-25mL水,加入萃取劑萃取,得到萃取液。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測(cè)禽蛋中膽固醇含量的酶比色法,其特征在于:所述步驟1.2中,得到所述萃取液后,還向所述萃取液加入濃度為50g/L的氯化鈉溶液3-4mL,再將所述萃取液水洗至酸堿中性。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測(cè)禽蛋中膽固醇含量的酶比色法,其特征在于:所述步驟1.3中,將所述萃取液轉(zhuǎn)至雞心瓶中,在45-55℃的溫水中水浴旋轉(zhuǎn)蒸干,用無(wú)水乙醇溶解定容至10mL,制得待分析試液。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)禽蛋中膽固醇含量的酶比色法,其特征在于:所述步驟2中,配置一系列已知濃度的膽固醇溶液,加入所述顯色劑并進(jìn)行顯色反應(yīng),分別測(cè)量其吸光度,并繪制膽固醇溶液的吸光度隨膽固醇濃度標(biāo)準(zhǔn)變化曲線。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)禽蛋中膽固醇含量的酶比色法,其特征在于:所述步驟2和步驟3中,所述顯色劑包含80~100U/L膽固醇酯酶、40~60U/L膽固醇氧化酶、1000~1500U/L過(guò)氧化物酶、170.0-175mg膽酸鈉、10.0-10.5mg 4-氨基安替比林、30.0-35.0mg苯酚和280.0-320mg聚乙二醇辛基苯基醚的濃度為0.3mol/L的磷酸鹽緩沖溶液,且所述顯色反應(yīng)的顯色時(shí)間為10-20min,顯色溫度為35-40℃。

10.根據(jù)權(quán)利要求1至9任一項(xiàng)所述的檢測(cè)禽蛋中膽固醇含量的酶比色法,其特征在于:所述步驟4中,根據(jù)待分析試液的吸光度在所述標(biāo)準(zhǔn)變化曲線上讀取待分析液中膽固醇的濃度,并根據(jù)待分析液中膽固醇濃度計(jì)算待分析試液的膽固醇含量,具體公式為:

<mrow> <mi>X</mi> <mo>=</mo> <mfrac> <mrow> <mi>c</mi> <mo>&times;</mo> <mi>V</mi> <mo>&times;</mo> <mn>100</mn> </mrow> <mi>m</mi> </mfrac> </mrow>

其中,X表示待分析液中膽固醇含量,單位為mg/100g;C表示由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的待分析試液中膽固醇的濃度,單位為mg/mL;V表示待分析試液的體積,單位為mL;M表示待分析試液的質(zhì)量,單位為g。

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