1.一種基于超高效液相色譜-軌道阱高分辨質(zhì)譜的小鼠血液中香豆素及其代謝物的測(cè)定方法，其特征在于：通過樣品的采集及前處理、收集血液樣品于離心管中，加入內(nèi)標(biāo)溶液，沉淀蛋白混勻離心后，采用超高效液相色譜-軌道阱高分辨質(zhì)譜UPLC-Orbitrap HRMS分析檢測(cè)小鼠血液中香豆素及其代謝物，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果測(cè)定香豆素及其代謝物并繪制相應(yīng)的時(shí)間-濃度曲線進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)分析，具體包括一些步驟：
a、樣品采集：小鼠通過腹腔注射CYP2A5探針?biāo)幬锵愣顾厝芤汉笱郾{取血約0.5 mL，置于1.5 mL離心管中，立即于4 ℃、6000 rpm下離心10 min；
b、樣品前處理：取100 μL上清血清至1.5 mL離心管內(nèi)，加入20 μL濃度為100 ng/mL的內(nèi)標(biāo)溶液以及280 μL乙腈，渦旋30 s以充分混勻，超聲10 min，于4 ℃、12 000 rpm下離心10 min，取上清液，用0.22 μm有機(jī)相針式濾器過濾，裝入色譜瓶中待測(cè)；
c、標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制：使用甲醇溶解、乙腈定容，配制一系列濃度的香豆素、7-羥基香豆素的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；
d、定量分析：使用超高效液相色譜-軌道阱高分辨質(zhì)譜（UPLC-Orbitrap HRMS）對(duì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行分析，得到線性回歸方程，再對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行測(cè)定測(cè)得分析物與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值，代入一元線性回歸方程，求得樣品中目標(biāo)物的含量；
色譜條件： Agilent Zorbax Eclipse XDB–C18色譜柱，規(guī)格150 mm×2.1 mm，3.5 μm；柱溫25 ℃，進(jìn)樣量2 μL，流速0.2 mL/min；流動(dòng)相A：0.1%甲酸水溶液，B:乙腈，A:B=70:30；
質(zhì)譜條件：使用Q-Exactive軌道阱高分辨質(zhì)譜系統(tǒng)的電加熱噴霧離子源，噴霧電壓3.5 kV，毛細(xì)管加熱溫度320 ℃，加熱器溫度300 ℃，鞘氣流速1.67 L/min，輔助氣流速1 L/min；掃描采用Full MS/ddMS2正離子模式，一級(jí)全掃描范圍200±100 amu，分辨率7×104，離子最大注入時(shí)間50 ms，自動(dòng)增益控制1×106；使用數(shù)據(jù)依賴掃描為二級(jí)掃描模式，分辨率為1.75×104，自動(dòng)增益控制1×105，最大注入時(shí)間50 ms，歸一化碰撞能量60%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于：所述內(nèi)標(biāo)為4-甲基傘形酮。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于：所述混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配置方法具體如下：香豆素、7-羥基香豆素、4-甲基傘形酮分別使用甲醇溶解，乙腈定容配制濃度為100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，加入小鼠空白血清，配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，其中的7-羥基香豆素和香豆素的濃度依次為0.2、0.5、1、2、5、10、20、50、100、200、500、1 000 ng/mL，內(nèi)標(biāo)4-甲基傘形酮的濃度始終為5 ng/mL。