本發(fā)明涉及生物化學制劑技術領域,特別是涉及一種時間分辨熒光微球標記肌紅蛋白抗體的保存液。
背景技術:
在急性心肌損傷時,肌紅蛋白(MYO)最先被釋放到血液中,在癥狀出現(xiàn)2-3小時后,血中肌紅蛋白(MYO)可超出正常上限,9-12小時達到峰值,24-36小時后恢復。MYO陽性雖不能確診AMI,但可用于早期排除AMI診斷的重要指標,如MYO陰性,則基本排除心肌梗死。針對檢測準確性、穩(wěn)定性而最后進行測試用到的標抗稀釋液是其中關鍵的一步。
時間分辨熒光生化分析技術是基于稀土熒光配合物特殊的熒光性質而建立起來的,時間分辨熒光測定技術是利用稀土配合物具有長壽命熒光這一特點,在樣品被脈沖光激發(fā)后、熒光信號采集前,根據(jù)樣品中所包含的熒光物質熒光壽命的不同引入一定的延遲時間(delay time),待短壽命的背景熒光完全淬滅后,再對長壽命的特異性熒光信號進行測定,采用時間分辨熒光測定技術可以有效消除來自樣品、試劑、儀器等的短壽命非特異性熒光的干擾,從而極大地提高熒光檢測的靈敏度。但是熒光微球的穩(wěn)定性對后續(xù)的檢測步驟起著關鍵的作用,如果熒光微球保存不當,就會導致后續(xù)檢測無法進行,影響到最終檢測試劑的效能,給試劑檢測帶來嚴重的風險。
時間分辨熒光微球標記肌紅蛋白抗體(以下簡稱標記抗體)保存液對維持標記抗體在液體中的穩(wěn)定,使其不產(chǎn)生沉淀至關重要,目前尚沒有見到的標記抗體保存液的報道。
技術實現(xiàn)要素:
基于此,本發(fā)明的目的是提供一種用于保存時間分辨熒光微球標記肌紅蛋白抗體的保存液。
具體的技術方案如下:
一種時間分辨熒光微球標記肌紅蛋白抗體的保存液,包括如下質量百分比的組分:
4-羥乙基哌嗪乙磺酸:0.1%-1.5%,氯化鈉:1.0%-3.0%,氯化鉀:0.3%-0.8%、乙二胺四乙酸二鈉:0.08%-0.9%,十二烷基磺酸鈉:0.01%-0.06%,牛血清白蛋白:0.1%-3.0%,葡聚糖:0.05%-0.5%,曲拉通:0.02%-0.2%,吐溫-20:0.01%-0.05%,防腐劑:0.02%-0.1%,水:余量;
調節(jié)pH至8.0-9.0。
在其中一些實施例中,該保存液包括如下質量百分比的組分:0.6%-1.2%,氯化鈉:1.0%-1.5%,氯化鉀:0.5%-0.7%、乙二胺四乙酸二鈉:0.08%-0.2%,十二烷基磺酸鈉:0.03%-0.05%,牛血清白蛋白:0.1%-0.5%,葡聚糖:0.1%-0.3%,曲拉通:0.02%-0.15%,吐溫-20:0.02%-0.05%,防腐劑:0.02%-0.05%,水:余量;
調節(jié)pH至8.0-9.0。
在其中一些實施例中,十二烷基磺酸鈉:曲拉通:吐溫-20的質量比為1.5-2.5:2-4:1。
在其中一些實施例中,十二烷基磺酸鈉:曲拉通:吐溫-20的質量比為1.5:2.5:1。
在其中一些實施例中,所述葡聚糖的分子量為8000-12000。
在其中一些實施例中,所述葡聚糖的分子量為10000。
在其中一些實施例中,所述曲拉通為曲拉通x-100。
在其中一些實施例中,所述防腐劑為procline。
本發(fā)明的原理及優(yōu)點:
由于時間分辨熒光微球標記肌紅蛋白抗體容易沉淀,造成抗體活性不高,且容易失活。微球的表面帶有大量的正電荷,形成一層正電荷層以維持整個微球在溶液體系中的穩(wěn)定,當抗體標記到微球表面后會破壞微球表面的電荷層從而導致微球表面不穩(wěn)定,容易產(chǎn)生集聚并最終形成沉淀,使其失去效果。本發(fā)明中通過添加適量的多種類的表面活性劑(十二烷基磺酸鈉、曲拉通、吐溫-20等),并按照一定的比例添加,由于表面活性劑在一定的濃度時能排列成球狀、棒狀、束狀、層狀/板狀等結構,實現(xiàn)對微球的包裹,對微球起到穩(wěn)定的作用。且表面活性劑帶有一定的正電荷,對微球表面電荷起到一定的補充,使得微球能穩(wěn)定的存在溶液中。
上述保存液,使用原材料成本低,容易獲取,為該類熒光微球的保存提供一個比較穩(wěn)定的微環(huán)境。
附圖說明
圖1為實施例1的保存液和對比例保存液保存當天的檢測結果對比圖;
圖2為實施例1的保存液和對比例保存液保存1個月后的檢測結果對比圖。
具體實施方式
為了便于理解本發(fā)明,下面將對本發(fā)明進行更全面的描述。但是,本發(fā)明可以以許多不同的形式來實現(xiàn),并不限于本文所描述的實施例。相反地,提供這些實施例的目的是使對本發(fā)明的公開內容的理解更加透徹全面。
除非另有定義,本文所使用的所有的技術和科學術語與屬于本發(fā)明的技術領域的技術人員通常理解的含義相同。本文中在本發(fā)明的說明書中所使用的術語只是為了描述具體的實施例的目的,不是旨在于限制本發(fā)明。本文所使用的術語“和/或”包括一個或多個相關的所列項目的任意的和所有的組合。
實施例1
一種時間分辨熒光微球標記肌紅蛋白抗體的保存液,由如下步驟制備而得:
首先稱取葡聚糖1.5g,溶解到500g的水溶液中,在60度下攪拌1h,然后超聲10min,冷卻到室溫后,稱取4-羥乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)6g,氯化鈉(NaCl)10g,氯化鉀(KCL)5g、乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)0.9g、十二烷基磺酸鈉(SDS)0.3g、牛血清白蛋白(BSA)10g,曲拉通X-100 0.5g,吐溫-200.2g,Procline 0.5g,水補足至1000g,混合均勻,調節(jié)pH到8.5,即得到時間分辨熒光微球標記肌紅蛋白抗體保存液。
實施例2
一種時間分辨熒光微球標記肌紅蛋白抗體的保存液,由如下步驟制備而得:
首先稱取葡聚糖1g,溶解到500g的水溶液中,在60度下攪拌1h,然后超聲10min,冷卻到室溫后,稱取4-羥乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)8g,氯化鈉(NaCl)14g,氯化鉀(KCL)5g、乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)0.8g、十二烷基磺酸鈉(SDS)0.5g、牛血清白蛋白(BSA)15g,曲拉通X-100 0.8g,吐溫-20 0.2g,Procline 0.5g,水補足至1000g,混合均勻,即得到時間分辨熒光微球標記肌紅蛋白抗體保存液。
對比例1
圖1和2中所示其它保存液1的配方為:氯化鈉(NaCl):0.8%,氯化鉀(KCl):0.02%,磷酸二氫鉀(KH2PO4):0.02%,十二水合磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)2.9%。
對比例2
圖1和2中所示其它保存液2的配方為:葡聚糖:0.1%,4-羥乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)0.8%,氯化鈉(NaCl)1.4%,氯化鉀(KCL)0.5%、乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)0.08%、聚乙烯吡咯烷酮0.05%、牛血清白蛋白(BSA)15g,曲拉通X-405 0.08%,吐溫-80 0.02%,Procline 0.5g
對比例3
圖1和2中所示其它保存液3的配方為:首先稱取葡聚糖1g,溶解到500g的水溶液中,在60度下攪拌1h,然后超聲10min,冷卻到室溫后,稱取4-羥乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)8g,氯化鈉(NaCl)14g,氯化鉀(KCL)5g、乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)0.8g、十二烷基磺酸鈉(SDS)2.0g、牛血清白蛋白(BSA)15g,曲拉通X-100 0.08g,吐溫-20 1.0g,Procline 0.5g,水補足至1000g,混合均勻,即得其它保存液3。
應用試驗
使用實施例1得到的保存液與對比例保存液對標記抗體進行保存,檢測結果如圖1和2所示。
使用相同的標記流程對微球進行標記,標記抗體為采購的商品化的肌紅蛋白(MYO)單克隆抗體,將標記好的抗體分別保存在兩種溶液中,檢測時使用相同的溶液并且稀釋到相同的工作濃度進行檢測。圖1表示當天保存后的抗體進行檢測,圖2表示使用4種保存液分別保存微球30天后再進行檢測的效果。從圖2的結果可知,實施例1的保存液保存微球30天后抗體依然保持活性。
以上所述實施例的各技術特征可以進行任意的組合,為使描述簡潔,未對上述實施例中的各個技術特征所有可能的組合都進行描述,然而,只要這些技術特征的組合不存在矛盾,都應當認為是本說明書記載的范圍。
以上所述實施例僅表達了本發(fā)明的幾種實施方式,其描述較為具體和詳細,但并不能因此而理解為對發(fā)明專利范圍的限制。應當指出的是,對于本領域的普通技術人員來說,在不脫離本發(fā)明構思的前提下,還可以做出若干變形和改進,這些都屬于本發(fā)明的保護范圍。因此,本發(fā)明專利的保護范圍應以所附權利要求為準。