本發(fā)明涉及乳膠試劑盒的一種制備方法，尤其涉及MMP3試劑盒制備用。
背景技術：
：膠乳顆粒增強比濁法（particle-enhancedturbidimetricimmunoassay,PETIA）是近年來出現(xiàn)的一種較為穩(wěn)定、準確的體液蛋白均相免疫比濁檢測方法。PETIA法大體分為兩種。一種是散射比濁檢測法；另一種是透射比濁檢測法。這兩種方法的基本原理非常相似，都是在高分子膠乳微球的表面交聯(lián)抗體，當交聯(lián)有抗體的微球與抗原結合后，在短時間內會迅速聚集在一起，改變了反應液的散光性能或透光性能。而且，反應液散光性能或透光性能（即吸光度）的改變與被測抗原的濃度有較強的相關性,在一定范圍內可以反映被測抗原的濃度。PETIA檢測方法是在均相反應體系中進行抗原、抗體反應及結果的測定?？乖?、抗體反應后，直接測定反應液的吸光度值，省卻了ELISA法反復孵育和洗板等煩瑣操作步驟，幾分鐘就能獲得結果，省時省力。此外，納米免疫比濁法操作步驟的簡化也相應地避免了許多人為操作因素和試劑、環(huán)境等外界因素的干擾，穩(wěn)定性和重復性都較好，能較真實地反映被測物質的含量。免疫比濁法的靈敏度雖然比ELISA法差一些，但足于檢測到健康人血漿中許多標志蛋白的下限值，可完全滿足臨床檢測要求?；|金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMP)是一類結構中含Zn2+和Ca2+的蛋白水解酶類,主要參與細胞外基質的代謝.它們在血管形成、傷口愈合、腫瘤浸潤和纖維化等方面起著重要的作用,因此備受關注。其中MMP3為基質分解素類,可降解蛋白多糖、層粘連蛋白、纖維連接蛋白和Ⅳ型膠原,包括MMP3、MMP7和MMP10。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術的不足，通過優(yōu)化MMP3試劑盒中試劑R1與R2的制備工藝，降低試劑的本底與提高試劑的線性范圍，達到提升MMP3試劑盒性能的目的。本發(fā)明的具體技術方案是：一種MMP3試劑盒的制備方法，包括由MMP3試劑R1的制備和MMP3試劑R2的制備組成；其中，MMP3試劑R1的配方：甘氨酸6g/L；氯化鈉8.22g/L；曲拉通X-1001.0ml/L；BSA1.5g/L；聚乙二醇20000約6.0g/L；疊氮鈉1g/L；其中，MMP3試劑R2的配方：HEPES20g/L；氯化鈉3g/L；BSA0.5g/L；乳膠1.4g/L；抗人MMP-3小鼠單克隆抗體I57.15mg/L；抗人MMP-3小鼠單克隆抗體Ⅱ57.15mg/L；將制備好的R1試劑與R2試劑組裝在一起構成MMP3試劑盒。進一步的，所述試劑R1中，每升R1中甘氨酸的添加量在1g~10g之間；每升R1中曲拉通的添加量在0.5g~5ml之間；每升R1中PEG20000的添加量在1g~10g之間。進一步的，所述試劑R2中，每升R2中HEPES的添加量在5g~30g之間；每升R2中乳膠的添加量在0.5g~5g之間；每升R2中抗人MMP-3小鼠單克隆抗體I的添加量在10mg~100mg之間。有益效果本發(fā)明在制備試劑R1時，調節(jié)因子用聚乙二醇20000代替普通的聚乙二醇6000即能達到相同的效果又能有效降低試劑本底起到了改善試劑盒性能的作用，在制備試劑R2時，活化劑HEPES代替常規(guī)的MES緩沖液，使包被效率提高，改善了試劑的線性范圍，進一步完善了試劑盒的性能。具體實施方式下面對本發(fā)明做進一步描述：MMP3試劑R1的制備：甘氨酸6g/L；氯化鈉8.22g/L；曲拉通X-1001.0ml/L；BSA1.5g/L；聚乙二醇20000約5.0g/L；疊氮鈉1g/L。根據(jù)上述配方，計算并準確稱量各組分所需用量，在不斷攪拌的情況下依次加入稱量好的物料，充分混勻即可。本發(fā)明用PEG20000代替常規(guī)的PEG6000既能達到相同的實驗效果又能降低試劑本底。PEG20000數(shù)據(jù)MMP(ng/L)吸光度吸光度R1R208101003583552007907804001930192080041004080160058205816PEG6000數(shù)據(jù)MMP(ng/L)吸光度吸光度R1R201011211004003852008988804002030208080042504380160059205986從實驗數(shù)據(jù)看100/200/400/800/1600各濃度點的吸光度差異不大，本發(fā)明用PEG20000代替PEG6000后試劑本底降了很多，優(yōu)化了試劑盒性能。MMP3試劑R2的制備：HEPES20g/L氯化鈉3g/LBSA0.5g/L乳膠1.4g/L抗人MMP-3小鼠單克隆抗體I57.15mg/L抗人MMP-3小鼠單克隆抗體Ⅱ57.15mg/L根據(jù)上述配方，計算并準確稱量各組分所需用量，按照如下步驟進行制備：1.活化取HEPESbuffer（pH=7.4）于離心管中，取乳膠于上述離心管內并混勻，然后將離心管放在恒溫水浴箱里震動活化20分鐘，溫度23℃，轉速130rpm/min。本發(fā)明采用活化劑HEPES緩沖液代替常規(guī)的MES緩沖液，使包被效率提高，改善了試劑的線性范圍，進一步完善了試劑盒的性能。2.包被活化時間20分鐘到了后向離心管里加入兩種抗體并將離心管放在恒溫水浴箱里震動包被120分鐘，溫度37℃，轉速130rpm/min。3.離心，清洗包被時間結束后開始離心。離心結束后傾倒上清液加入抗體清洗液（HEPESbuffer（pH=7.4））并再次離心，離心結束后傾倒上清液加入封閉液（HEPESbuffer（pH=7.4）加入BSA）。離心條件設置為：溫度=9℃；轉速=15000RPM；時間=15分鐘。4.封閉將加有封閉液的離心管放在水浴箱里水浴加熱振蕩60分鐘，溫度42℃，轉速117rpm/min。5.離心，定容封閉60分鐘結束后開始離心，離心結束后傾倒上清液加入儲存液（HEPESbuffer（pH=7.4）加入氯化鈉）并超聲分散，分散好的液體就是包被好的MMP3試劑R2。HEPES活化液數(shù)據(jù)MMP(ng/L)吸光度吸光度R1R208101003583552007907804001530152080031003080160061206116MES活化液數(shù)據(jù)MMP(ng/L)吸光度吸光度R1R2028401003083152006906804001330132080021002080160033203316從實驗數(shù)據(jù)看，用MES做活化液的話，100/200/400/800/1600各濃度點的吸光度后面有點上不去了，本發(fā)明用HEPES做活化液的話，100/200/400/800/1600各濃度點的吸光度上升很快，線性比較好。當前第1頁1 2 3