本發(fā)明屬于分析檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種產(chǎn)品中5種松香酸的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的分析方法。

背景技術(shù)：

松香具有粘合、防腐、絕緣等優(yōu)良的特性,被廣泛地應(yīng)用在膠粘劑、塑料、涂料、油墨、造紙和醫(yī)藥等領(lǐng)域。在日常的消費(fèi)品中，松香可能存在肥皂、紙張、涂料以及使用膠黏劑和塑料的各種鞋、玩具等產(chǎn)品。松香被大量使用的同時，其危害性也逐漸被人們發(fā)現(xiàn)和關(guān)注。松香濃蒸汽可引起頭疼、昏眩、咳嗽、氣喘等急性中毒癥狀。曾有報導(dǎo)指出，樹脂酸對魚的毒性為0.44μg/mL。毒理學(xué)研究表明松香酸可導(dǎo)致人體肺泡上皮細(xì)胞溶解，脫氫松香酸對人體紅細(xì)胞、多核白細(xì)胞有毒性作用，Asako Ozaki等發(fā)現(xiàn)脫氫松香酸和松香酸具有損傷DNA的活性，Yasushi Kamaya等研究了松香酸、脫氫松香酸對大型水蚤生長的影響，發(fā)現(xiàn)二者對水蚤的生長有一定的限制作用。研究表明，松香是全球十大皮膚過敏源物質(zhì)，長時間暴露在焊接釋放出的松香煙霧可引起職業(yè)性哮喘，根據(jù)歐盟的分類法規(guī)，松香大于1％的產(chǎn)品將標(biāo)識為R43(即能引起皮膚過敏)。

松香是一種無定形透明玻璃狀固體樹脂，主要成分是樹脂酸，占總質(zhì)量85％～90％,另外還有少量的脂肪酸和中性物質(zhì)。目前國內(nèi)外研究報道的對人體過敏的松香主要為樅酸(abietic acid)、新樅酸(Neoabietic acid)、左旋海松酸、海松酸(Pimaric acid)和脫氫樅酸(Dehydroabietic acid)5種。5種松香酸的CAS號、結(jié)構(gòu)式如下所示：

有關(guān)松香酸含量的檢測技術(shù)研究包括松香產(chǎn)品質(zhì)量分析以及某些產(chǎn)品中松香酸的含量分析。對于松香品質(zhì)的鑒定，已有國家標(biāo)準(zhǔn)，但該標(biāo)準(zhǔn)不涉及松香中各樹脂酸的測定。魏福祥等采用紅外光譜法定量測定了彈性體以及松香、液體石蠟混合物中松香酸的含量，但該方法檢出限低，受基體干擾大，不能滿足各類消費(fèi)品中松香酸含量測定的要求。由于松香酸的毒性作用，某些產(chǎn)品中摻入或殘留的松香酸含量的檢測方法研究也引起了人們關(guān)注。對于松香酸中各種樹脂酸含量的測定，通?？刹捎帽由V法、氣相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法、高效液相色譜法、液質(zhì)聯(lián)用法等方法。這些方法存在兩個方面的不足：一、檢測方法只涉及松香酸中的樅酸和脫氫松香酸兩種物質(zhì)，而松香酸包含多種物質(zhì)，檢測覆蓋面不足；二，松香酸廣泛存在于各種日常消費(fèi)品中，如鞋材中的膠黏劑、紙張、松香皂、油墨等。而報道的文獻(xiàn)中主要集中在沉香、松香及紙制品中。為了保護(hù)消費(fèi)者的身體健康和生命安全，應(yīng)對國外貿(mào)易技術(shù)壁壘，提前做好技術(shù)儲備工作，保證產(chǎn)品正常出口，維護(hù)社會穩(wěn)定促進(jìn)經(jīng)濟(jì)社會建設(shè)具有積極作用，有必要制定產(chǎn)品中松香酸的檢測方法。

CN201310144917公開一種畜禽表皮中松香酸含量的分析方法，涉及畜禽表皮中松香酸的分析方法，屬于分析測試領(lǐng)域。在屠宰加工后的生畜禽的表皮樣品中加入稀堿溶液，經(jīng)提取、固相萃取凈化后，取得濾過液，再將濾過液采用高效液相色譜-紫外法(HPLC-UV)進(jìn)行分析。該方法無法檢測分離5種松香酸，具有一定的局限性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種產(chǎn)品中5種松香酸的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的分析方法，該方法采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的方法測定4類產(chǎn)品中5種松香酸的含量；該方法優(yōu)化了液相色譜的流動相，檢測步驟少，測試結(jié)果準(zhǔn)確，能快速的檢測出松香酸的含量，抗干擾性強(qiáng)，能有效檢測5種松香酸。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

產(chǎn)品中5種松香酸的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的分析方法，其特征在于，具體檢測步驟為：i)樣品的處理：稱取待測樣品，置于管狀硬質(zhì)玻璃提取器中，加入第一提取溶劑，第一次超聲提取，過濾；樣品中再加入第二提取溶劑，第二次超聲提取，過濾，將兩次過濾的濾液合并后進(jìn)行濃縮，加入定容溶劑溶解后在容量瓶中定容，取樣品溶液經(jīng)有機(jī)濾膜過濾后，提取液待用；

ii)將步驟i)所得提取液用HPLC-MS進(jìn)行測定，選擇兩級質(zhì)譜的特定離子對，比較試樣和標(biāo)樣色譜峰的保留時間進(jìn)行定性，以峰面積外標(biāo)法定量。

進(jìn)一步地，所述高效液相色譜檢測的液相色譜條件為：

液相色譜柱：Waters Atlantis T3，100×2.1mm，3μm；

流動相：乙腈和0.3％乙酸水溶液的混合溶液，流量為0.3mL·min^-1；

進(jìn)樣量為5uL，波長為200nm、240nm、280nm，柱溫40℃。

進(jìn)一步地，所述質(zhì)譜檢測的質(zhì)譜條件為：

a)離子源：電噴霧離子源(ESI+)；

b)離子模式：正離子模式

c)檢測方式：多反應(yīng)離子監(jiān)測(MRM)；

d)定性離子對：m/z 303.2/148.9和m/z 303.2/123.0(樅酸)；m/z 303.2/148.9和m/z303.2/123.0(新樅酸)；m/z 303.2/148.9和m/z 303.2/123.0(左旋海松酸)；m/z 303.2/148.9和m/z 303.2/123.0(海松酸)；m/z 301.2/172.9和m/z 301.2/240.0(脫氫松香酸)；

j)定量離子對：m/z 303.2/257.6(樅酸)；m/z 303.2/257.6(新樅酸)；m/z 303.2/257.6(左旋海松酸)；m/z 303.2/257.6(海松酸)；m/z 301.2/172.9(脫氫松香酸)；

k)干燥氣溫度：325℃；

l)干燥氣流速：10L/min；

m)霧化氣壓力：40Psi；

n)電噴霧電壓：4000V；

o)離子源溫度：100℃；

p)毛細(xì)管出口電壓和碰撞電壓如下表1：

進(jìn)一步地，所述容量瓶為25mL，樣品稱取1g。

進(jìn)一步地，所述第一提取溶劑為5～15mL；所述第二提取溶劑為5～15mL。

進(jìn)一步地，所述第一次超聲提取和第二次超聲提取的時間均為10～30min。

進(jìn)一步地，所述第一次超聲提取和第二次超聲提取的超聲波輸出功率均為50～80％。

進(jìn)一步地，所述第一次超聲提取和第二次超聲提取的溫度均為40～80℃。

更進(jìn)一步地，所述第一次超聲提取和第二次超聲提取的時間均為30min。

更進(jìn)一步地，所述第一次超聲提取和第二次超聲提取的超聲波輸出功率均為80％。

更進(jìn)一步地，所述第一次超聲提取和第二次超聲提取的溫度均為60℃。

進(jìn)一步地，所述待測樣品為經(jīng)過預(yù)處理的膠黏劑、紙張、松香皂或油墨。

更進(jìn)一步地，所述膠黏劑為鞋類部件的膠黏劑、熱熔膠樣品、液態(tài)膠黏劑。更進(jìn)一步地，所述膠黏劑為309膠黏劑，熱熔膠，乳膠，以及使用膠水的鞋類部件如鞋底襯中的膠合部位、鞋面的膠合部位、鞋后跟的膠合部位，鞋底的膠合部位。更進(jìn)一步地，所述紙張為瓦楞原紙、白卡紙等。更進(jìn)一步地，所述油墨為快干涼膠印刷油墨。

進(jìn)一步地，所述紙張包括紙制品。

進(jìn)一步地，所述預(yù)處理的膠粘劑的處理過程如下：對于鞋類部件的膠黏劑，其通過將使用膠水粘合的鞋類部件，用刀刮起材料中的膠黏劑；若無法刮起，或者量不足，則直接取鞋類部件檢測；

對于熱熔膠樣品，將樣品剪成約1mm×1mm的小碎片后檢測；

對于液態(tài)膠黏劑，將膠黏劑倒在玻璃平板上，自然晾干，剪成約1mm×1mm的小碎片后檢測。

進(jìn)一步地，所述預(yù)處理紙張的處理過程為：將紙張進(jìn)行剪碎成約1mm×1mm的小碎片即可用于檢測。

進(jìn)一步地，所述預(yù)處理松香皂的處理過程為：將松香皂進(jìn)行剪碎成約1mm×1mm的小碎片即可用于檢測。

進(jìn)一步地，所述預(yù)處理油墨的處理過程為：油墨材料在玻璃板上自然晾干后，剪碎；印刷制品用刮刀刮下，若無法刮下，則直接連基體材料一同處理。

進(jìn)一步地，所述步驟i)中第一提取溶劑為叔丁基甲醚、水、乙腈、乙酸乙酯、二氯甲烷、丙酮、甲醇、甲醇-水的混合溶劑(V/V＝75/25)、乙腈-0.3％乙酸水溶液(V/V＝65/35)、乙腈-0.3％乙酸水溶液(V/V＝55/45)、乙腈-0.3％乙酸水溶液(V/V＝75/25)。

進(jìn)一步地，所述步驟i)中第二提取溶劑為叔丁基甲醚、水、乙腈、乙酸乙酯、二氯甲烷、丙酮、甲醇、甲醇-水的混合溶劑(V/V＝75/25)、乙腈-0.3％乙酸水溶液(V/V＝65/35)、乙腈-0.3％乙酸水溶液(V/V＝55/45)、乙腈-0.3％乙酸水溶液(V/V＝75/25)。

進(jìn)一步地，所述步驟i)中定容溶劑為叔丁基甲醚、水、乙腈、乙酸乙酯、二氯甲烷、丙酮、甲醇、甲醇-水的混合溶劑(V/V＝75/25)、乙腈-0.3％乙酸水溶液(V/V＝65/35)、乙腈-0.3％乙酸水溶液(V/V＝55/45)、乙腈-0.3％乙酸水溶液(V/V＝75/25)或乙腈-水的混合溶劑(V/V＝75/25)。

進(jìn)一步地，所述乙腈和0.3％乙酸水溶液的混合溶液為乙腈-0.3％乙酸水溶液(V/V＝65/35)、乙腈-0.3％乙酸水溶液(V/V＝55/45)或乙腈-0.3％乙酸水溶液(V/V＝75/25)。

進(jìn)一步地，所述過濾采用脫脂棉過濾。

進(jìn)一步地，所述有機(jī)濾膜是孔徑為0.45μm或0.22μm的聚四氟乙烯有機(jī)濾膜。

進(jìn)一步地，所述5種松香酸為樅酸、新樅酸、左旋海松酸、海松酸和脫氫松香酸。

進(jìn)一步地，所述濃縮為真空減壓濃縮或氮?dú)獯蹈蓾饪s。

本發(fā)明的有益效果

本發(fā)明分別研究了鞋材用膠黏劑、紙張、松香皂和油墨等4類產(chǎn)品中5種松香酸的檢測方法，該方法采用超聲波輔助溶劑對樣品進(jìn)行萃取，經(jīng)萃取液濃縮后進(jìn)行HPLC-MS/MS檢測，所建方法具有良好的重復(fù)性和回收率，檢測限低于50μg/kg，能有效滿足各類產(chǎn)品中5種松香酸的測試要求。

在使用waters T3色譜柱分離5種松香酸時，液相色譜的最優(yōu)化條件為：流動相為乙腈：水＝65:35，流速為0.3mL/min，質(zhì)譜檢測的定量離子對分別為：m/z 303.2/257.6(樅酸)；m/z 303.2/257.6(新樅酸)；m/z 303.2/257.6(左旋海松酸)；m/z 303.2/257.6(海松酸)；m/z 301.2/172.9(脫氫松香酸)。

在20ug/L至1000.0ug/L范圍內(nèi)，5種松香酸的線性相關(guān)系數(shù)均大于0.995；膠黏劑、紙張、松香皂、油墨等4類物質(zhì)中5種松香酸的測定低限低至50ug/kg，4類產(chǎn)品方法回收率在86％～109％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)在8.0％以內(nèi)，表明方法具有良好的重復(fù)性和可靠性。

本發(fā)明提供的操作方法簡單，可操作性強(qiáng)，精密度高，重現(xiàn)性好，有效保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，檢測限低，成本低，適合工業(yè)應(yīng)用。

附圖說明

圖1是不同流動相比例下各種松香酸的分離圖；

圖2是5種松香酸的光譜圖；

圖3是正模式下樅酸和脫氫樅酸的總離子流圖和質(zhì)譜圖。

圖中，(A)樅酸，(B)新樅酸，(C)左旋海松酸，(D)海松酸，(E)脫氫松香酸。

具體實(shí)施方式

儀器與試劑

樅酸，純度98.0％，美國Chroma Dex公司；新樅酸，純度99.0％，加拿大Sigma公司；海松酸，純度≧98.0％，加拿大Sigma公司；左旋海松酸，純度≧98.0％，加拿大Sigma公司；脫氫松香酸，純度≧98.0％，加拿大Toronto Research Chemicals公司。

乙腈、甲醇、叔丁基甲醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、丙酮均為色譜純，美國M-TEDIA公司；水為超純水。

Agilent 6460B高效液相色譜質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國安捷倫公司；

KQ-500E型數(shù)控超聲波清洗器，輸出功率：420W，頻率：40kHz，昆山超聲儀器公司；

聚四氟乙烯有機(jī)系濾膜，孔徑0.22μm；

聚四氟乙烯有機(jī)系濾膜，孔徑0.22μm，上海興業(yè)凈化材料廠；

管狀硬質(zhì)玻璃提取器，60mL，配聚四氟乙烯旋蓋，德國CNW科技公司。

為使本領(lǐng)域技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式對本發(fā)明作進(jìn)一步描述。

檢測條件的優(yōu)化

1、樣品提取條件的優(yōu)化

為減少操作步驟，獲得盡可能高的提取效率，采用超聲波輔助溶劑提取樣品。針對膠黏劑、紙張、松香皂和油墨等4中產(chǎn)品的提取溶劑進(jìn)行了考察，分別考察了乙酸乙酯、叔丁基甲醚、二氯甲烷、丙酮、甲醇、乙腈、甲醇-水的混合溶劑(V/V＝75/25)、乙腈-0.3％乙酸水溶液的混合溶劑的提取效果，比較五種溶劑對樣品的提取效率。在綜合考慮提取效率、提取溶劑毒性和提取溶劑的沸點(diǎn)的前提下，膠黏劑中以叔丁基甲醚為最佳提取溶劑；紙張以甲醇-水的混合溶劑(V/V＝75/25)為最佳提取溶劑；松香皂以乙腈-0.3％乙酸水溶液(V/V＝65/35)為最佳提取溶劑；油墨以乙酸乙酯為最佳提取溶劑。

2、色譜條件的優(yōu)化

(1)色譜柱的選擇：分別考察了Eclipse Plus C18,2.1mm×50mm×1.8μm和Waters Atlantis T3，100×2.1mm，3μm兩種類型的色譜柱對分離效果。通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)采用Waters Atlantis T3，100×2.1mm，3μm，對目標(biāo)物質(zhì)的保留效果好，可將各松香酸分離，取得理想的分離效果。

(2)流動相及洗脫條件的選擇：

不同的流動相對目標(biāo)物質(zhì)的分離效果及色譜峰形通常有顯著影響。分別采用甲醇-水、乙腈-水體系進(jìn)行條件的選擇，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)流動相采用甲醇-水或者乙腈-水作為流動相時，5種目標(biāo)物質(zhì)均無法出峰，即目標(biāo)物質(zhì)無法形成穩(wěn)定的正離子模式。當(dāng)在流動相中加入一定的乙酸，5種目標(biāo)物質(zhì)出現(xiàn)色譜圖，隨著乙酸濃度的提高，目標(biāo)物質(zhì)的峰面積增加，當(dāng)乙酸濃度達(dá)到0.3％時后，目標(biāo)物質(zhì)的峰面積趨于平緩。太低的pH值會影響色譜柱壽命，因此選擇乙酸濃度為0.3％。圖1為乙腈-0.3％乙酸水溶液比例分別為55:45、65:35和75:25時各種松香酸的分離情況。流動相比例為55:45時，樣品出峰時間長，峰型特別寬，海松酸和樅酸完全重疊，達(dá)不到分析目的；當(dāng)流動相比例為64:36到68:32之間時，目標(biāo)物質(zhì)出峰時間也還是較長，但是脫氫松香酸、新樅酸、左旋海松酸能完成分離，海松酸和樅酸能部分分離，可以進(jìn)行定量分析；當(dāng)流動相比例大等于68:32時，目標(biāo)物質(zhì)出峰時間變短，海松酸和樅酸完全重疊，變成一個峰，無法分析。因此選擇流動相為乙腈-0.3％乙酸水溶液的混合溶劑(V/V＝65/35)。

流速影響峰面積：考察流速對目標(biāo)物質(zhì)分離情況的影響。當(dāng)流動相流速小于0.25mL/min時，目標(biāo)物質(zhì)出峰時間長，峰型寬；當(dāng)流動相流速大于0.4mL/min時，海松酸和新樅酸完全重疊，脫氫松香酸、新樅酸峰面積變小，可能是流速過大，影響了母離子的離子化效率。因此流速選擇0.3mL/min。

(3)吸收峰的選擇：具體如圖2所示，圖2為5種松香酸的光譜圖。光譜圖顯示，樅酸最大吸收波長在241nm處，在265nm以上和200nm以下幾乎無吸收峰；新樅酸最大吸收波長在254nm處，在280nm以上和200nm以下幾乎無吸收峰；左旋海松酸最大吸收波長在274nm，在240nm以下吸收峰較小。海松酸和脫氫松香酸最大吸收波長為200左右nm，在240nm以上幾乎無吸收峰。

由于這些物質(zhì)為同分異構(gòu)體，相互之間無法完全分離，因此本發(fā)明在后續(xù)的實(shí)施例中在吸收波長選擇中沒有選擇各種物質(zhì)的最佳吸收波長：樅酸和新樅酸選擇240nm，在此波長處可以避免左旋海松酸和異海松酸的干擾，而左旋海松酸選擇280nm，在此波長處可以避免新樅酸和樅酸的干擾，而海松酸和脫氫松香酸選擇200nm，在此波長處可以避免樅酸、新樅酸和海松酸的干擾。

3、質(zhì)譜測定條件的優(yōu)化

由于樣品種類繁多，為保證分析測定的準(zhǔn)確性，選擇采用液相色譜‐串聯(lián)質(zhì)譜(LC‐MS/MS)對松香酸進(jìn)行測定。分別考察了電噴霧正、負(fù)兩種離子化方式，實(shí)驗(yàn)顯示，ESI+模式下，樅酸、新樅酸、左旋海松酸、海松酸均出現(xiàn)303.1的準(zhǔn)分子離子峰，脫氫松香酸出現(xiàn)301.4的準(zhǔn)分子離子峰。采用Product Ion SIM模式對5種松香酸進(jìn)行研究。圖3中(a)和(b)分別為樅酸和脫氫松香酸的總離子流圖，圖3(c)和(d)分別為樅酸和脫氫松香酸的質(zhì)譜圖。從圖3中可見，樅酸的碎片離子可以選擇257.6，123.1,148.9等；脫氫松香酸的碎片離子可以選擇172.9，240.0等選擇合適的毛細(xì)管出口電壓(Fragmentor)和碰撞能量(collision energy)，可以找到傳輸效率最佳的母離子和響應(yīng)最好的選擇離子。

實(shí)施例1膠黏劑中松香酸的檢測

準(zhǔn)確稱取309膠黏劑樣品1g，置于管狀硬質(zhì)玻璃提取器中，加入10mL叔丁基甲醚，在60℃下進(jìn)行第一次超聲提取30min，過濾；樣品中再次加入3mL叔丁基甲醚，在60℃下進(jìn)行第二次超聲提取30min，過濾；將兩次過濾的濾液合并后進(jìn)行濃縮，加入乙腈-0.3％乙酸水溶液的混合溶劑(V/V＝65/35)在25mL容量瓶中進(jìn)行定容，取樣品溶液經(jīng)0.45μm有機(jī)濾膜過濾后，用HPLC-MS進(jìn)行測定，選擇兩級質(zhì)譜的特定離子對，按色譜峰的保留時間定性，以峰面積外標(biāo)法定量；

液相色譜條件：

液相色譜柱：Waters Atlantis T3，100×2.1mm,3μm；

流動相：乙腈：0.3％乙酸水溶液(V/V)＝65：35，流量為0.3mL·min-1；

進(jìn)樣量為5uL；波長為200nm、240nm、280nm，柱溫40℃；

質(zhì)譜條件為：

a)離子源：電噴霧離子源(ESI+)；

b)離子模式：正離子模式

c)檢測方式：多反應(yīng)離子監(jiān)測(MRM)；

d)定性離子對：m/z 303.2/148.9和m/z 303.2/123.0(樅酸)；m/z 303.2/148.9和m/z303.2/123.0(新樅酸)；m/z 303.2/148.9和m/z 303.2/123.0(左旋海松酸)；m/z 303.2/148.9和m/z 303.2/123.0(海松酸)；m/z 301.2/172.9和m/z 301.2/240.0(脫氫松香酸)；

j)定量離子對：m/z 303.2/257.6(樅酸)；m/z 303.2/257.6(新樅酸)；m/z 303.2/257.6(左旋海松酸)；m/z 303.2/257.6(海松酸)；m/z 301.2/172.9(脫氫松香酸)；

k)干燥氣溫度：325℃；

l)干燥氣流速：10L/min；

m)霧化氣壓力：40Psi；

n)電噴霧電壓：4000V；

o)離子源溫度：100℃；

p)毛細(xì)管出口電壓和碰撞電壓如下表1：

表1

具體檢測結(jié)果如表2所示。

實(shí)施例2紙張中松香酸的檢測

將紙張進(jìn)行剪碎成約1mm×1mm的小碎片，準(zhǔn)確稱取紙張樣品1g，置于管狀硬質(zhì)玻璃提取器中，加入10mL甲醇-水的混合溶劑(V/V＝75/25)，在60℃下進(jìn)行第一次超聲提取30min，過濾；樣品中再次加入10mL甲醇-水的混合溶劑(V/V＝75/25)，在60℃下進(jìn)行第二次超聲提取30min，過濾；將兩次過濾的濾液合并后進(jìn)行濃縮，加入乙腈-0.3％乙酸水溶液的混合溶劑(V/V＝65/35)溶解后在25mL容量瓶中進(jìn)行定容，取樣品溶液經(jīng)0.45μm有機(jī)濾膜過濾后，用HPLC-MS進(jìn)行測定，選擇兩級質(zhì)譜的特定離子對，按色譜峰的保留時間定性，以峰面積外標(biāo)法定量；

液相色譜條件：

液相色譜柱：Waters Atlantis T3，100×2.1mm,3μm；

流動相：乙腈：0.3％乙酸水溶液(V/V)＝65：35，流量為0.3mL·min-1；

進(jìn)樣量為5uL；波長為200nm、240nm、280nm，柱溫40℃；

質(zhì)譜條件為：

a)離子源：電噴霧離子源(ESI+)；

b)離子模式：正離子模式

c)檢測方式：多反應(yīng)離子監(jiān)測(MRM)；

d)定性離子對：m/z 303.2/148.9和m/z 303.2/123.0(樅酸)；m/z 303.2/148.9和m/z303.2/123.0(新樅酸)；m/z 303.2/148.9和m/z 303.2/123.0(左旋海松酸)；m/z 303.2/148.9和m/z 303.2/123.0(海松酸)；m/z 301.2/172.9和m/z 301.2/240.0(脫氫松香酸)；

j)定量離子對：m/z 303.2/257.6(樅酸)；m/z 303.2/257.6(新樅酸)；m/z 303.2/257.6(左旋海松酸)；m/z 303.2/257.6(海松酸)；m/z 301.2/172.9(脫氫松香酸)；

k)干燥氣溫度：325℃；

l)干燥氣流速：10L/min；

m)霧化氣壓力：40Psi；

n)電噴霧電壓：4000V；

o)離子源溫度：100℃；

p)毛細(xì)管出口電壓和碰撞電壓如下表1；

具體檢測結(jié)果如表2所示。

實(shí)施例3松香皂中松香酸的檢測

將松香皂進(jìn)行剪碎成約1mm×1mm的小碎片，準(zhǔn)確稱取樣品1g，置于管狀硬質(zhì)玻璃提取器中，加入10mL乙腈-0.3％乙酸水溶液(V/V＝65/35)，在60℃下進(jìn)行第一次超聲提取30min，過濾；樣品中再次加入10mL乙腈-0.3％乙酸水溶液(V/V＝65/35)，在60℃下進(jìn)行第二次超聲提取30min，過濾；將兩次過濾的濾液合并后加入乙腈-0.3％乙酸水溶液的混合溶劑(V/V＝65/35)在容量瓶中進(jìn)行定容為25mL，取樣品溶液經(jīng)0.45μm有機(jī)濾膜過濾后，用HPLC-MS進(jìn)行測定，選擇兩級質(zhì)譜的特定離子對，按色譜峰的保留時間定性，以峰面積外標(biāo)法定量；

液相色譜條件：

液相色譜柱：Waters Atlantis T3，100×2.1mm,3μm；

流動相：乙腈：0.3％乙酸水溶液(V/V)＝65：35，流量為0.3mL·min-1；

進(jìn)樣量為5uL；波長為200nm、240nm、280nm，柱溫40℃；

質(zhì)譜條件為：

a)離子源：電噴霧離子源(ESI+)；

b)離子模式：正離子模式

c)檢測方式：多反應(yīng)離子監(jiān)測(MRM)；

d)定性離子對：m/z 303.2/148.9和m/z 303.2/123.0(樅酸)；m/z 303.2/148.9和m/z303.2/123.0(新樅酸)；m/z 303.2/148.9和m/z 303.2/123.0(左旋海松酸)；m/z 303.2/148.9和m/z 303.2/123.0(海松酸)；m/z 301.2/172.9和m/z 301.2/240.0(脫氫松香酸)；

j)定量離子對：m/z 303.2/257.6(樅酸)；m/z 303.2/257.6(新樅酸)；m/z 303.2/257.6(左旋海松酸)；m/z 303.2/257.6(海松酸)；m/z 301.2/172.9(脫氫松香酸)；

k)干燥氣溫度：325℃；

l)干燥氣流速：10L/min；

m)霧化氣壓力：40Psi；

n)電噴霧電壓：4000V；

o)離子源溫度：100℃；

p)毛細(xì)管出口電壓和碰撞電壓如下表1；

具體檢測結(jié)果如表2所示。

實(shí)施例4油墨中松香酸的檢測

將油墨材料在玻璃板上自然晾干后，剪碎；印刷制品用刮刀刮下，若無法刮下，則直接連基體材料一同處理，準(zhǔn)確稱取樣品1g，置于管狀硬質(zhì)玻璃提取器中，加入10mL乙酸乙酯，在60℃下進(jìn)行第一次超聲提取30min，過濾；樣品中再次加入10mL乙酸乙酯，在60℃下進(jìn)行第二次超聲提取30min，過濾；將兩次過濾的濾液合并后進(jìn)行濃縮，加入乙腈-0.3％乙酸水溶液的混合溶劑(V/V＝65/35)溶解后在25mL容量瓶中定容，取樣品溶液經(jīng)0.45μm有機(jī)濾膜過濾后，用HPLC-MS進(jìn)行測定，選擇兩級質(zhì)譜的特定離子對，按色譜峰的保留時間定性，以峰面積外標(biāo)法定量；

液相色譜條件：

液相色譜柱：Waters Atlantis T3，100×2.1mm,3μm；

流動相：乙腈：0.3％乙酸水溶液(V/V)＝65：35，流量為0.3mL·min-1；

進(jìn)樣量為5uL；波長為200nm、240nm、280nm，柱溫40℃；

質(zhì)譜條件為：

a)離子源：電噴霧離子源(ESI+)；

b)離子模式：正離子模式

c)檢測方式：多反應(yīng)離子監(jiān)測(MRM)；

d)定性離子對：m/z 303.2/148.9和m/z 303.2/123.0(樅酸)；m/z 303.2/148.9和m/z303.2/123.0(新樅酸)；m/z 303.2/148.9和m/z 303.2/123.0(左旋海松酸)；m/z 303.2/148.9和m/z 303.2/123.0(海松酸)；m/z 301.2/172.9和m/z 301.2/240.0(脫氫松香酸)；

j)定量離子對：m/z 303.2/257.6(樅酸)；m/z 303.2/257.6(新樅酸)；m/z 303.2/257.6(左旋海松酸)；m/z 303.2/257.6(海松酸)；m/z 301.2/172.9(脫氫松香酸)；

k)干燥氣溫度：325℃；

l)干燥氣流速：10L/min；

m)霧化氣壓力：40Psi；

n)電噴霧電壓：4000V；

o)離子源溫度：100℃；

p)毛細(xì)管出口電壓和碰撞電壓如下表1；

具體結(jié)果如表2所示：

表2不同樣品中松香酸的含量(mg/kg)

實(shí)施例5標(biāo)準(zhǔn)線性方程及檢出限

5種松香酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制：稱取適量的5種松香酸，用乙腈配成100ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，使用乙腈-0.3％乙酸水溶液的混合溶劑(V/V＝65/35)逐級稀釋成濃度為20.0ug/L，50.0ug/L，100.0ug/L，500.0ug/L，1000.0ug/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液，供液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析測定，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，在20.0～1000.0ug/L的濃度范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)均大于0.999，具體如表3所示。

于膠黏劑、紙張、松香皂、油墨等4種空白基質(zhì)中加入低濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照本發(fā)明實(shí)施例1～4所述處理方式進(jìn)行處理分析后，測試，采用Agilent6460自帶軟件的信噪比工具計算信噪比S/N，檢出限按照3倍信噪比計算，定量檢出限按照10倍信噪比計算，結(jié)果見表3。從表3中結(jié)果可知，在考慮基體干擾情況下，可將5種物質(zhì)脫氫松香酸、樅酸和新松酸定量檢出限設(shè)為50ug/kg。

表3方法的線性關(guān)系和檢出限

實(shí)施例6回收和精密度試驗(yàn)

選用膠黏劑、紙張、松香皂、油墨等4類產(chǎn)品空白樣品為基質(zhì)，加入濃度為20.0ug/L、100.0ug/L、1000.0ug/L三個不同濃度的5種松香酸的混合溶液，按本發(fā)明實(shí)施例1～4所述處理方式進(jìn)行處理分析后，平行測定5次，測回收率和精密度，結(jié)果見表4，從表4中結(jié)果可知，4類產(chǎn)品方法回收率在86％～109％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)在8.0％以內(nèi)，表明方法具有良好的重復(fù)性和可靠性。

表4方法的回收率和精密度(n＝5)

可以理解的是，以上實(shí)施方式僅僅是為了說明本發(fā)明的原理而采用的示例性實(shí)施方式，然而本發(fā)明并不局限于此。對于本領(lǐng)域內(nèi)的普通技術(shù)人員而言，在不脫離本發(fā)明的精神和實(shí)質(zhì)的情況下，可以做出各種變型和改進(jìn)，這些變型和改進(jìn)也視為被包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。