本發(fā)明涉及分析化學檢測領域，涉及一種氫化可的松的快速檢測方法。
背景技術：
近年來，人們對健康和藥物安全的愈來愈重視，由于保健品、中成藥大部分來源于天然物質，療效溫和，具有較高安全性，在哮喘等慢性疾病的治療中受到國內外患者的青睞，但其存在起效慢或效果不明顯的缺點。為謀取暴利，部分不法分子利用人們急于見效的心理，在沒有經過任何藥理和毒理研究的情況下，在其中隨意非法添加起效快、療效確切的化學藥物具有止咳作用的化學藥品，目前常見的有茶堿、地塞米松等。保健品、中成藥的化學成分非常復雜，不同廠家工藝不統(tǒng)一，不能與化學藥品一樣進行全程檢測，非法添加添加的化學藥物不易被識別，極具隱蔽性和欺騙性。消費者在不知情的情況下長期服用，極易誘發(fā)不良反應，使健康受到不同程度的危害，嚴重者甚至可導致死亡。
氫化可的松(Hydrocortisone，HC)屬腎上腺皮質激素類藥，在臨床上廣泛使用，是我國產量最大的激素類藥物。氫化可的松的作用主要是抗炎、免疫抑制、抗毒作和抗休克等。目前報道的主要不良反應為過敏性休克、糖皮質激素停藥綜合征等，對人體危害很大。由于氫化可的松止咳起效快速顯著，且便宜易得，具有被非法添加到止咳類保健品、食品和中成藥中的風險，因此亟需開發(fā)快速、可靠的氫化可的松的檢測方法，以保障人民群眾的飲食用藥安全。
目前，國家藥品監(jiān)督管理局批準的檢查中成藥中非法添加氫化可的松的快速檢查為薄層色譜法（TLC法）和液相二級質譜法（LC-MS/MS法），對操作人員的要求較高，不利于在基層部門廣泛開展，人們需要一種操作簡單、速度較快、成本較低的檢測方法，以便快速鑒別出保健品、食品、中成藥中是否添加氫化可的松。利用化學反應的快速鑒別法，以其成本低、反應迅速、現(xiàn)象易觀察、操作步驟簡單等優(yōu)點得到很多人的重視，非常適合在基層尤其是偏遠地區(qū)的推廣。本發(fā)明針對目前市場上的大部分保健品、食品、中成藥提供一種準確快速的氫化可的松非法添加的檢測方法，以滿足檢驗及監(jiān)管的需要。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明針對現(xiàn)有技術中氫化可的松檢測中存在的檢測要求高、成本高、不夠快速和靈活的缺點，提供一種氫化可的松的快速檢測方法，具有分析成本低、不需要對照品及較大型分析儀器、專屬性強、靈敏度高、檢驗結果正確率高等優(yōu)點，適用于中成藥、保健食品和食品中是否添加氫化可的松的現(xiàn)場快速檢測。
氫化可的松化學名為11β，17α，21-三羥基孕甾-4-烯-3,20-二酮，白色或幾乎白色結晶性粉末，無臭。初無味，隨后又持續(xù)的苦味；遇光易變質。不溶于水。在強堿性條件下能將四氮唑鹽定量地還原為有色甲臜(formazan)，呈色，因此利用四氮唑比色反應可以快速鑒別氫化可的松。但中成藥、保健食品和食品中成分復雜，有大量有色物質(如植物色素等)，他們中有些能溶于有機溶劑，而有些則可溶于水，如不分離，則會嚴重干擾快速檢測方法的顯色反應的觀察，難以得出正確的判斷結果。
本發(fā)明是通過如下技術方案實現(xiàn)的：
一種氫化可的松的快速檢測方法，檢測步驟為：
（1）取待測樣品，加入鹽酸溶液，振搖，再加乙酸乙酯，振搖，離心或靜置使分層；
（2）取離心液或上層溶液，加入氫氧化鈉溶液，振搖，離心或靜置使分層；
（3）將氫氧化鈉溶液滴在白色滴板上，滴加氯化三苯四氮唑試液，混合均勻，滴加步驟（2）得到的離心液或上層溶液，觀察顏色變化。
步驟（1）中，取膠囊劑的內容物、片劑或顆粒劑（1/3～1次口服劑量），研細，有利于目標物氫化可的松溶解；若片劑為有色包衣，應除去有色包衣，減小色素干擾結果的判定；若供試品為口服溶液，取3ml（1/3～1次口服劑量）試驗。
步驟（1）中，鹽酸溶液為水溶液，濃度為0.5～1mol/L，優(yōu)選lmol/L。
步驟（1）中選擇的有機萃取液乙酸乙酯，為普通化學試劑,實驗中分別用乙醚、氯仿進行了試驗，在堿性條件下，乙醚、氯仿乳化嚴重，不利于與水相分層，乙醚揮發(fā)性更強，氯仿更不利于環(huán)保，本試驗優(yōu)化萃取液為乙酸乙酯。
步驟（2）、（3）中，氫氧化鈉溶液為水溶液，濃度為0.5～1mol/L，優(yōu)選lmol/L。
步驟（3）中，氯化三苯四氮唑試液為氯化三苯四氮唑的無水乙醇溶液，濃度為0.5%。
步驟（3）中1mol/L氫氧化鈉溶液：取氫化可的松5mg，加1mol/L鹽酸溶液5ml，振搖1min，再加乙酸乙酯5ml，強烈振搖2-4min，離心使分層，取上層溶液，置具塞離心管中，加等體積的1mol/L氫氧化鈉溶液，振搖1min，離心，上層液作為供試品溶液，本試驗優(yōu)化1mol/L氫氧化鈉溶液用量1滴（20～40μl）。
步驟（3）中供試品溶液溶液和氯化三苯四氮唑試液用量的優(yōu)化。
取氫化可的松5mg，加1mol/L鹽酸溶液5ml，振搖1min，再加乙酸乙酯5ml，強烈振搖2-4min，離心使分層，取上層溶液，置具塞離心管中，加等體積的1mol/L氫氧化鈉溶液，振搖1min，離心，上層液作為供試品溶液，本試驗優(yōu)化氯化三苯四氮唑試液和供試品溶液的用量均為5滴。
步驟（3）中實驗反應溫度和觀測時間：
本試驗在常溫條件下，陽性反應在20秒后開始，能夠觀測到試劑顏色逐漸變紅，2分鐘后顏色不再加深。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比，有益效果如下：
（1）待測樣品通過提取、洗滌、與氯化三苯四氮唑溶液和強堿溶液反應顯色三步即可檢出樣品中是否含有氫化可的松，且所用提取液、洗滌液、檢測劑均為普通的化學試劑，操作簡便，分析成本低；
（2）待測樣品經預處理后再與檢測劑反應，可以排除相關因素的的干擾，更有利于對溶液顏色的觀察，對樣品中是否有氫化可的松做出更準確地判斷；
（3）本發(fā)明的檢測方法中，所用提取液、洗滌液、萃取液、檢測劑的專屬性強，通過提取、洗滌、萃取過程中三次利用不同物質溶解性差異分離除去干擾物質，使顯色反應的靈敏度提高、檢測結果正確率高、顯色反應迅速，現(xiàn)象明顯，適用于現(xiàn)場快速檢測,氫化可的松最小檢出限0.3mg。
具體實施方式
下面結合具體實施例進一步描述本發(fā)明，在不脫離本發(fā)明上述技術思想情況下，根據(jù)本領域普通技術知識和慣用手段做出的各種替換或變更，均包括在本發(fā)明的范圍內。
實施例1:片劑的檢測
試劑配制：提取液為乙酸乙酯；1mol/L鹽酸溶液：取鹽酸9ml，加水適量使成100ml，搖勻；1mol/L氫氧化鈉溶液：取氫氧化鈉4g，加水100ml，振搖使溶解；氯化三苯四氮唑試液：取氯化三苯四氮唑0.5g，加無水乙醇使溶解為100ml。
待測樣品：通痹片（煙臺渤海制藥集團有限公司生產，批號：131101，規(guī)格0.3g，LC-MS/MS方法測定本品不含氫化可的松）
檢測方法，步驟為：取5片，除去著色包衣，研細，取0.5g，置具塞離心管中，加1mol/L鹽酸溶液5ml，振搖1min，再加乙酸乙酯5ml，強烈振搖3min，離心使分層，取上層溶液，加等體積的1mol/L氫氧化鈉溶液，振搖1min，離心使分層，上層液作為供試品溶液；取1mol/L氫氧化鈉溶液1滴，置白色瓷點滴板上，加氯化三苯四氮唑試液5滴，混合均勻，加供試品溶液5滴，顏色呈陰性反應（不顯紅色）。
結果分析：本品不含氫化可的松，結果與實際相符。
實施例2：模擬陽性片劑樣品的檢測
試劑配制：提取液為乙酸乙酯；1mol/L鹽酸溶液：取鹽酸9ml，加水適量使成100ml，搖勻；1mol/L氫氧化鈉溶液：取氫氧化鈉4g，加水100ml，振搖使溶解；氯化三苯四氮唑試液：取氯化三苯四氮唑0.5g，加無水乙醇使溶解為100ml。
待測樣品：通痹片（煙臺渤海制藥集團有限公司生產，批號：131101，規(guī)格0.3g），取5片，除去著色包衣，加氫化可的松10mg。
檢測方法，步驟為：取5片，除去著色包衣，加氫化可的松10mg，研細，取0.5g，置具塞離心管中，加1mol/L鹽酸溶液5ml，振搖1min，再加乙酸乙酯5ml，強烈振搖3min，離心使分層，取上層溶液，加等體積的1mol/L氫氧化鈉溶液，振搖1min，離心使分層，上層液作為供試品溶液；取1mol/L氫氧化鈉溶液1滴，置白色瓷點滴板上，加氯化三苯四氮唑試液5滴，混合均勻，加供試品溶液5滴，顏色呈陽性反應（顯紅色）。
結果分析：本品為加入氫化可的松的模擬陽性樣品，結果檢出氫化可的松，結果與實際相符。
實施例3: 糖漿的檢測
待測樣品：強力批把露（濰坊天陽藥業(yè)有限公司生產，批號：160401，規(guī)格180ml/瓶，LC-MS/MS方法測定本品不含氫化可的松）
檢測方法，步驟為：取3ml，置具塞離心管中，加0.5mol/L鹽酸溶液5ml，振搖1min，再加乙酸乙酯5ml，強烈振搖3min，離心使分層，取上層溶液，加等體積的0.5mol/L氫氧化鈉溶液，振搖1min，離心使分層，上層液作為供試品溶液；取0.5mol/L氫氧化鈉溶液1滴，置白色瓷點滴板上，加氯化三苯四氮唑試液5滴，混合均勻，加供試品溶液5滴，顏色呈陰性反應（不顯紅色）。
結果分析：本品不含氫化可的松，結果與實際相符。
實施例4: 模擬陽性糖漿樣品的檢測
待測樣品：強力批把露（濰坊天陽藥業(yè)有限公司生產，批號：160401，規(guī)格180ml/瓶；取3ml，加氫化可的松2mg）
檢測方法，步驟為：取加入氫化可的松2mg 的口服溶液3ml，置具塞離心管中，加0.5mol/L鹽酸溶液5ml，振搖1min，再加乙酸乙酯5ml，強烈振搖3min，離心使分層，取上層溶液，加等體積的0.5mol/L氫氧化鈉溶液，振搖1min，離心使分層，上層液作為供試品溶液；取0.5mol/L氫氧化鈉溶液1滴，置白色瓷點滴板上，加氯化三苯四氮唑試液5滴，混合均勻，加供試品溶液5滴，顏色呈陽性反應（顯紅色）。
結果分析：本品為加入氫化可的松的模擬陽性樣品，結果檢出氫化可的松，結果與實際相符。
實施例5: 顆粒的檢測
試劑配制：提取液為乙酸乙酯；1mol/L鹽酸溶液：取鹽酸9ml，加水適量使成100ml，搖勻；1mol/L氫氧化鈉溶液：取氫氧化鈉4g，加水100ml，振搖使溶解；氯化三苯四氮唑試液：取氯化三苯四氮唑0.5g，加無水乙醇使溶解為100ml。
待測樣品：小兒肺熱咳喘顆粒（上海醫(yī)藥集團青島國風藥業(yè)有限公司生產，批號：160304，規(guī)格3g/袋，LC-MS/MS方法測定本品不含氫化可的松）。
檢測方法，步驟為：取1袋，研細，取0.5g，置具塞離心管中，加1mol/L鹽酸溶液5ml，振搖1min，再加乙酸乙酯5ml，強烈振搖3min，離心使分層，取上層溶液，加等體積的1mol/L氫氧化鈉溶液，振搖1min，離心使分層，上層液作為供試品溶液；取1mol/L氫氧化鈉溶液1滴，置白色瓷點滴板上，加氯化三苯四氮唑試液5滴，混合均勻，加供試品溶液5滴，顏色呈陰性反應（不顯紅色）。
結果分析：本品不含氫化可的松，結果與實際相符。
實施例6: 模擬陽性顆粒樣品的檢測
試劑配制：提取液為乙酸乙酯；1mol/L鹽酸溶液：取鹽酸9ml，加水適量使成100ml，搖勻；1mol/L氫氧化鈉溶液：取氫氧化鈉4g，加水100ml，振搖使溶解；氯化三苯四氮唑試液：取氯化三苯四氮唑0.5g，加無水乙醇使溶解為100ml。
待測樣品：小兒肺熱咳喘顆粒（上海醫(yī)藥集團青島國風藥業(yè)有限公司生產，批號：160304，規(guī)格3g/袋），每袋樣品中加入氫化可的松10mg。
檢測方法，步驟為：取加入氫化可的松10mg的1袋樣品，研細，取0.5g，置具塞離心管中，加1mol/L鹽酸溶液5ml，振搖1min，再加乙酸乙酯5ml，強烈振搖3min，離心使分層，取上層溶液，加等體積的1mol/L氫氧化鈉溶液，振搖1min，離心使分層，上層液作為供試品溶液；取1mol/L氫氧化鈉溶液1滴，置白色瓷點滴板上，加氯化三苯四氮唑試液5滴，混合均勻，加供試品溶液5滴，顏色呈陽性反應（顯紅色）。
結果分析：本品為加入氫化可的松的模擬陽性樣品，結果檢出氫化可的松，結果與實際相符。
檢出限試驗
1) 取氫化可的松10mg，加乙酸乙酯10ml溶解，分別精密量取0（1號樣品）、0.1（2號樣品）、,0.3（3號樣品）、0.5（4號樣品）、1（5號樣品）和2ml（6號樣品），分別置具塞離心管中，氮氣吹干，加1mol/L鹽酸溶液5ml，振搖1min，再加乙酸乙酯5ml，強烈振搖2min，離心使分層；
2)取1)上層溶液，置具塞離心管中，加等體積的1mol/L氫氧化鈉溶液，振搖1min，離心。
3)取1mol/L氫氧化鈉溶液1滴，置白色瓷點滴板上，加0.5%氯化三苯四氮唑無水乙醇試液5滴，混合均勻，加2) 上層溶液5滴，3、4、5和6號樣品2分鐘內溶液顏色變紅色。本試驗氫化可的松最小檢出限0.3mg。
上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受實施例的限制，其它任何未背離本發(fā)明的精神實質與原理下所做的改變、修飾、組合、替代、簡化均應為等效替換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內。