本發(fā)明屬于藥物分析領(lǐng)域，具體涉及一種建立兒瀉停藥物制劑的指紋圖譜的方法。

背景技術(shù)：

兒瀉停顆粒是由茜草藤、烏梅和甘草三種藥材制成的中藥復(fù)方制劑，具有清熱燥濕、固腸止瀉的作用，能夠用于治療濕熱內(nèi)蘊型小兒腹瀉。自1999年批準(zhǔn)上市銷售至今，兒瀉停顆粒由于其療效確切、質(zhì)量穩(wěn)定、使用安全，深受臨床醫(yī)生及消費者好評；2011年兒瀉停顆粒的臨床再評價表明，其治療兒童急性腹瀉療效好、且安全性高，可以作為兒童腹瀉用藥的首要選擇。

目前，兒瀉停顆粒通過國家藥品標(biāo)準(zhǔn)新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)第40冊收載的標(biāo)準(zhǔn)號WS3-160(Z-16)-2002(Z)的標(biāo)準(zhǔn)來進(jìn)行質(zhì)量控制，即：通過測定原料藥之一甘草中的甘草酸含量對兒瀉停顆粒進(jìn)行質(zhì)量控制。

然而，由于兒瀉停顆粒的原料藥包括茜草藤、烏梅和甘草三種藥材，所含的化學(xué)成分的種類眾多、且各化學(xué)成分的含量差異較大，僅僅通過化學(xué)成分中的一種—甘草酸的含量測定來對兒瀉停顆粒的質(zhì)量進(jìn)行檢測和控制，不能從整體上全面反映兒瀉停顆粒的質(zhì)量，進(jìn)而導(dǎo)致質(zhì)量檢測結(jié)果可能缺乏客觀性和準(zhǔn)確性，從而無法保證兒瀉停顆粒臨床用藥的有效性和安全性。

因而，建立一種能夠全面地、快速地檢測兒瀉停顆粒的質(zhì)量的方法，對于其全面質(zhì)量檢測和整體質(zhì)量控制具有重要意義。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是現(xiàn)有的兒瀉停顆粒的質(zhì)量檢測方法不能從整體上全面反映兒瀉停顆粒的質(zhì)量、進(jìn)而導(dǎo)致質(zhì)量檢測結(jié)果可能缺乏客觀性和準(zhǔn)確性、從而無法保證兒瀉停顆粒臨床用藥的安全性和有效性的問題，進(jìn)而提供一種建立兒瀉停藥物制劑的指紋圖譜的方法。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的：

一種建立兒瀉停藥物制劑的指紋圖譜的方法，該方法包括如下步驟：

(1)取待測兒瀉停藥物制劑1.0～5.0重量份，精密稱定，精密加入體積分?jǐn)?shù)為10％～100％的甲醇水溶液或乙醇水溶液25～100體積份，稱定重量，超聲提取10～60分鐘，放冷，過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；

(2)精密稱取甘草苷對照品，加甲醇制成每1體積份含0.00005～0.00050重量份的溶液，搖勻，作為對照品A溶液；

精密稱取甘草酸銨對照品，加甲醇制成每1體積份含0.00005～0.00050重量份的溶液，搖勻，作為對照品B溶液；

(3)色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A、以體積分?jǐn)?shù)為0.1％的磷酸水溶液為流動相B按照如下程序進(jìn)行梯度洗脫：0min，A：B為10％：90％；0～0.1min，A：B為10％：90％→19％：81％；0.1min，A：B為19％：81％；0.1～8min，A：B為19％：81％；8min，A：B為19％：81％；8～15min，A：B為19％：81％→20％：80％；15min，A：B為20％：80％；15～50min，A：B為20％：80％→50％：50％；50min，A：B為50％：50％；50～60min，A：B為50％：50％→80％：20％；60min，A：B為80％：20％；60～65min，A：B為80％：20％；65min，A：B為80％：20％；65～66min，A：B為80％：20％→10％：90％；66min，A：B為10％：90％；66～70min，A：B為10％：90％；70min，A：B為10％：90％；檢測波長為235～239nm，柱溫25～40℃，流速為0.5～1.5mL/min；

(4)分別精密吸取供試品溶液、對照品A溶液和對照品B溶液5～20μL，注入高效液相色譜儀，測定，分別得到供試品溶液、對照品A溶液和對照品B溶液的液相色譜；

(5)利用國家藥典委員會中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)，對供試品溶液、對照品A溶液和對照品B溶液的液相色譜分別經(jīng)過數(shù)據(jù)導(dǎo)入、多點校正和數(shù)據(jù)匹配，即得指紋圖譜；

所述重量份與所述體積份的關(guān)系為g/mL。

優(yōu)選地，所述的建立兒瀉停藥物制劑的指紋圖譜的方法，該方法包括如下步驟：

(1)取待測兒瀉停藥物制劑1.0～2.0重量份，精密稱定，精密加入體積分?jǐn)?shù)為40％～80％的甲醇水溶液或乙醇水溶液25～50體積份，稱定重量，超聲提取20～30分鐘，放冷，過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；

(2)精密稱取甘草苷對照品，加甲醇制成每1體積份含0.00005～0.00015重量份的溶液，搖勻，作為對照品A溶液；

精密稱取甘草酸銨對照品，加甲醇制成每1體積份含0.00010～0.00030重量份的溶液，搖勻，作為對照品B溶液；

(3)色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A、以體積分?jǐn)?shù)為0.1％的磷酸水溶液為流動相B按照如下程序進(jìn)行梯度洗脫：0min，A：B為10％：90％；0～0.1min，A：B為10％：90％→19％：81％；0.1min，A：B為19％：81％；0.1～8min，A：B為19％：81％；8min，A：B為19％：81％；8～15min，A：B為19％：81％→20％：80％；15min，A：B為20％：80％；15～50min，A：B為20％：80％→50％：50％；50min，A：B為50％：50％；50～60min，A：B為50％：50％→80％：20％；60min，A：B為80％：20％；60～65min，A：B為80％：20％；65min，A：B為80％：20％；65～66min，A：B為80％：20％→10％：90％；66min，A：B為10％：90％；66～70min，A：B為10％：90％；70min，A：B為10％：90％；檢測波長為237nm，柱溫為30℃，流速為1.0mL/min；

(4)分別精密吸取供試品溶液、對照品A溶液和對照品B溶液5～15μL，注入高效液相色譜儀，測定，分別得到供試品溶液、對照品A溶液和對照品B溶液的液相色譜；

(5)利用國家藥典委員會中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)，對供試品溶液、對照品A溶液和對照品B溶液的液相色譜分別經(jīng)過數(shù)據(jù)導(dǎo)入、多點校正和數(shù)據(jù)匹配，即得指紋圖譜。

優(yōu)選地，所述的建立兒瀉停藥物制劑的指紋圖譜的方法，該方法包括如下步驟：

(1)取待測兒瀉停藥物制劑1.0重量份，精密稱定，精密加入體積分?jǐn)?shù)為50％～70％的甲醇水溶液或乙醇水溶液25體積份，稱定重量，超聲提取30分鐘，放冷，過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；

(2)精密稱取甘草苷對照品，加甲醇制成每1體積份含0.00010重量份的溶液，搖勻，作為對照品A溶液；

精密稱取甘草酸銨對照品，加甲醇制成每1體積份含0.00020重量份的溶液，搖勻，作為對照品B溶液；

(3)色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A、以體積分?jǐn)?shù)為0.1％的磷酸水溶液為流動相B按照如下程序進(jìn)行梯度洗脫：0min，A：B為10％：90％；0～0.1min，A：B為10％：90％→19％：81％；0.1min，A：B為19％：81％；0.1～8min，A：B為19％：81％；8min，A：B為19％：81％；8～15min，A：B為19％：81％→20％：80％；15min，A：B為20％：80％；15～50min，A：B為20％：80％→50％：50％；50min，A：B為50％：50％；50～60min，A：B為50％：50％→80％：20％；60min，A：B為80％：20％；60～65min，A：B為80％：20％；65min，A：B為80％：20％；65～66min，A：B為80％：20％→10％：90％；66min，A：B為10％：90％；66～70min，A：B為10％：90％；70min，A：B為10％：90％；檢測波長為237nm，柱溫為30℃，流速為1.0mL/min；

(4)分別精密吸取供試品溶液、對照品A溶液和對照品B溶液10μL，注入高效液相色譜儀，測定，分別得到供試品溶液、對照品A溶液和對照品B溶液的液相色譜；

(5)利用國家藥典委員會中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)，對供試品溶液、對照品A溶液和對照品B溶液的液相色譜分別經(jīng)過數(shù)據(jù)導(dǎo)入、多點校正和數(shù)據(jù)匹配，即得指紋圖譜。

進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的建立兒瀉停藥物制劑的指紋圖譜的方法，以250mm×4.6mm、5μm的Techmate C18-ST或250mm×4.6mm、5μm的島津VP-ODS為色譜柱。

進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的建立兒瀉停藥物制劑的指紋圖譜的方法，所述藥物制劑為片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、蜜煉丸劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、口服液體制劑或注射制劑。

進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的建立兒瀉停藥物制劑的指紋圖譜的方法，所述藥物制劑為顆粒劑。

進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的建立兒瀉停藥物制劑的指紋圖譜的方法，所述兒瀉停藥物制劑的原料藥組成為茜草藤、烏梅和甘草。

進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的建立兒瀉停藥物制劑的指紋圖譜的方法，所述兒瀉停藥物制劑的指紋圖譜中，共有特征峰為：1號峰、2號峰甘草苷、3號峰甘草酸銨、4號峰、5號峰、6號峰、7號峰和8號峰；以2號峰為內(nèi)參照峰，各峰號的相對保留時間分別為：1號峰0.916±0.046、2號峰1.0、3號峰2.024±0.101、4號峰2.097±0.105、5號峰2.153±0.108、6號峰2.378±0.119、7號峰3.333±0.167和8號峰3.512±0.176。

進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的建立兒瀉停藥物制劑的指紋圖譜的方法，所述兒瀉停藥物制劑的指紋圖譜中，各峰號的相對保留時間分別為：1號峰0.916、2號峰1.0、3號峰2.024、4號峰2.097、5號峰2.153、6號峰2.378、7號峰3.333和8號峰3.512。

本發(fā)明還提供上述的方法在兒瀉停藥物制劑的質(zhì)量檢測和質(zhì)量控制中的應(yīng)用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的上述技術(shù)方案具有如下優(yōu)點：

(1)本發(fā)明建立兒瀉停藥物制劑的指紋圖譜的方法，以兒瀉停藥物制劑為檢測對象，建立了針對該藥物制劑的指紋圖譜的方法，獲得了較為全面的圖譜信息，確認(rèn)了共有特征峰1號峰、2號峰甘草苷、3號峰甘草酸銨、4號峰、5號峰、6號峰、7號峰和8號峰；選擇2號峰為內(nèi)參照峰，確定了兒瀉停藥物制劑的共有特征峰1號峰、3號峰甘草酸銨、4號峰、5號峰、6號峰、7號峰和8號峰的相對保留時間，且結(jié)合該指紋圖譜中的多個色譜峰的信息，能夠全面地、快速地檢測兒瀉停藥物制劑的質(zhì)量，有利于其全面質(zhì)量檢測和整體質(zhì)量控制，從而有助于提高該藥物臨床用藥的有效性和安全性。

(2)本發(fā)明建立兒瀉停藥物制劑的指紋圖譜的方法，具有穩(wěn)定性高、精密度高、重復(fù)性好等優(yōu)點，可以用于兒瀉停藥物制劑的生產(chǎn)過程監(jiān)測和質(zhì)量控制中，從而可以確保兒瀉停藥物制劑質(zhì)量的穩(wěn)定性和均一性，從而有助于提高該藥物臨床用藥的有效性和安全性。

附圖說明

為了使本發(fā)明的內(nèi)容更容易被清楚的理解，下面根據(jù)本發(fā)明的具體實施例并結(jié)合附圖，對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，其中：

圖1為本發(fā)明實驗例1中對照品A溶液的液相色譜圖；

圖2為本發(fā)明實驗例1中兒瀉停顆粒供試品溶液(批號：1511481)的液相色譜圖；

圖3為本發(fā)明實驗例1中10批兒瀉停顆粒供試品溶液導(dǎo)入指紋圖譜相似度計算軟件后導(dǎo)出的疊加色譜圖；

圖4為本發(fā)明實驗例1中建立的兒瀉停顆粒的指紋圖譜。

具體實施方式

實施例1

本實施例建立兒瀉停顆粒的指紋圖譜的方法，包括如下步驟：

(1)取待測兒瀉停顆粒1.0g，精密稱定，精密加入體積分?jǐn)?shù)為70％的乙醇水溶液25mL，稱定重量，超聲提取30分鐘，放冷，過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；

(2)精密稱取甘草苷對照品，加甲醇制成每1mL含0.00010g的溶液，搖勻，作為對照品A溶液；

精密稱取甘草酸銨對照品，加甲醇制成每1mL含0.00020g的溶液，搖勻，作為對照品B溶液；

(3)色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以250mm×4.6mm、5μm的Techmate C18-ST為色譜柱，以乙腈為流動相A、以體積分?jǐn)?shù)為0.1％的磷酸水溶液為流動相B按照如下程序進(jìn)行梯度洗脫：0min，A：B為10％：90％；0～0.1min，A：B為10％：90％→19％：81％；0.1min，A：B為19％：81％；0.1～8min，A：B為19％：81％；8min，A：B為19％：81％；8～15min，A：B為19％：81％→20％：80％；15min，A：B為20％：80％；15～50min，A：B為20％：80％→50％：50％；50min，A：B為50％：50％；50～60min，A：B為50％：50％→80％：20％；60min，A：B為80％：20％；60～65min，A：B為80％：20％；65min，A：B為80％：20％；65～66min，A：B為80％：20％→10％：90％；66min，A：B為10％：90％；66～70min，A：B為10％：90％；70min，A：B為10％：90％；檢測波長為237nm，柱溫30℃，流速為1.0mL/min；

(4)分別精密吸取供試品溶液、對照品A溶液和對照品B溶液10μL，注入高效液相色譜儀，測定，分別得到供試品溶液、對照品A溶液和對照品B溶液的液相色譜；

(5)利用國家藥典委員會中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)，對供試品溶液、對照品A溶液和對照品B溶液的液相色譜分別經(jīng)過數(shù)據(jù)導(dǎo)入、多點校正和數(shù)據(jù)匹配，即得指紋圖譜。

實施例2

本實施例建立兒瀉停顆粒的指紋圖譜的方法，包括如下步驟：

(1)取待測兒瀉停顆粒1.0g，精密稱定，精密加入體積分?jǐn)?shù)為80％的甲醇水溶液或乙醇水溶液25mL，稱定重量，超聲提取30分鐘，放冷，過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；

(2)精密稱取甘草苷對照品，加甲醇制成每1mL含0.00005g的溶液，搖勻，作為對照品A溶液；

精密稱取甘草酸銨對照品，加甲醇制成每1mL含0.00010g的溶液，搖勻，作為對照品B溶液；

(3)色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以250mm×4.6mm、5μm的Techmate C18-ST為色譜柱，以乙腈為流動相A、以體積分?jǐn)?shù)為0.1％的磷酸水溶液為流動相B按照如下程序進(jìn)行梯度洗脫：0min，A：B為10％：90％；0～0.1min，A：B為10％：90％→19％：81％；0.1min，A：B為19％：81％；0.1～8min，A：B為19％：81％；8min，A：B為19％：81％；8～15min，A：B為19％：81％→20％：80％；15min，A：B為20％：80％；15～50min，A：B為20％：80％→50％：50％；50min，A：B為50％：50％；50～60min，A：B為50％：50％→80％：20％；60min，A：B為80％：20％；60～65min，A：B為80％：20％；65min，A：B為80％：20％；65～66min，A：B為80％：20％→10％：90％；66min，A：B為10％：90％；66～70min，A：B為10％：90％；70min，A：B為10％：90％；檢測波長為237nm，柱溫為30℃，流速為1.0mL/min；

(4)分別精密吸取供試品溶液、對照品A溶液和對照品B溶液20μL，注入高效液相色譜儀，測定，分別得供試品溶液、對照品A溶液和對照品B溶液的液相色譜；

(5)利用國家藥典委員會中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)，對供試品溶液、對照品A溶液和對照品B溶液的液相色譜分別經(jīng)過數(shù)據(jù)導(dǎo)入、多點校正和數(shù)據(jù)匹配，即得指紋圖譜。

實施例3

本實施例建立兒瀉停顆粒的指紋圖譜的方法，包括如下步驟：

(1)取待測兒瀉停顆粒2.0g，精密稱定，精密加入體積分?jǐn)?shù)為40％的甲醇水溶液或乙醇水溶液50mL，稱定重量，超聲提取20分鐘，放冷，過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；

(2)精密稱取甘草苷對照品，加甲醇制成每1mL含0.00015g的溶液，搖勻，作為對照品A溶液；

精密稱取甘草酸銨對照品，加甲醇制成每1mL含0.00030g的溶液，搖勻，作為對照品B溶液；

(3)色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以250mm×4.6mm、5μm的Techmate C18-ST為色譜柱，以乙腈為流動相A、以體積分?jǐn)?shù)為0.1％的磷酸水溶液為流動相B按照如下程序進(jìn)行梯度洗脫：0min，A：B為10％：90％；0～0.1min，A：B為10％：90％→19％：81％；0.1min，A：B為19％：81％；0.1～8min，A：B為19％：81％；8min，A：B為19％：81％；8～15min，A：B為19％：81％→20％：80％；15min，A：B為20％：80％；15～50min，A：B為20％：80％→50％：50％；50min，A：B為50％：50％；50～60min，A：B為50％：50％→80％：20％；60min，A：B為80％：20％；60～65min，A：B為80％：20％；65min，A：B為80％：20％；65～66min，A：B為80％：20％→10％：90％；66min，A：B為10％：90％；66～70min，A：B為10％：90％；70min，A：B為10％：90％；檢測波長為237nm，柱溫30℃，流速為1.0mL/min；

(4)分別精密吸取供試品溶液、對照品A溶液和對照品B溶液10μL，注入高效液相色譜儀，測定，分別得到供試品溶液、對照品A溶液和對照品B溶液的液相色譜；

(5)利用國家藥典委員會中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)，對供試品溶液、對照品A溶液和對照品B溶液的液相色譜分別經(jīng)過數(shù)據(jù)導(dǎo)入、多點校正和數(shù)據(jù)匹配，即得指紋圖譜。

實施例4

本實施例建立兒瀉停顆粒的指紋圖譜的方法，包括如下步驟：

(1)取待測兒瀉停顆粒1.5g，精密稱定，精密加入體積分?jǐn)?shù)為60％的甲醇水溶液或乙醇水溶液35mL，稱定重量，超聲提取25分鐘，放冷，過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；

(2)精密稱取甘草苷對照品，加甲醇制成每1mL含0.00010g的溶液，搖勻，作為對照品A溶液；

精密稱取甘草酸銨對照品，加甲醇制成每1mL含0.00020g的溶液，搖勻，作為對照品B溶液；

(3)色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以250mm×4.6mm、5μm的Techmate C18-ST為色譜柱，以乙腈為流動相A、以體積分?jǐn)?shù)為0.1％的磷酸水溶液為流動相B按照如下程序進(jìn)行梯度洗脫：0min，A：B為10％：90％；0～0.1min，A：B為10％：90％→19％：81％；0.1min，A：B為19％：81％；0.1～8min，A：B為19％：81％；8min，A：B為19％：81％；8～15min，A：B為19％：81％→20％：80％；15min，A：B為20％：80％；15～50min，A：B為20％：80％→50％：50％；50min，A：B為50％：50％；50～60min，A：B為50％：50％→80％：20％；60min，A：B為80％：20％；60～65min，A：B為80％：20％；65min，A：B為80％：20％；65～66min，A：B為80％：20％→10％：90％；66min，A：B為10％：90％；66～70min，A：B為10％：90％；70min，A：B為10％：90％；檢測波長為237nm，柱溫為30℃，流速為1.0mL/min；

(4)分別精密吸取供試品溶液、對照品A溶液和對照品B溶液15μL，注入高效液相色譜儀，測定，分別得供試品溶液、對照品A溶液和對照品B溶液的液相色譜；

(5)利用國家藥典委員會中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)，對供試品溶液、對照品A溶液和對照品B溶液的液相色譜分別經(jīng)過數(shù)據(jù)導(dǎo)入、多點校正和數(shù)據(jù)匹配，即得指紋圖譜。

實施例5

本實施例建立兒瀉停顆粒的指紋圖譜的方法與實施例1的區(qū)別僅在于：供試品溶液的制備步驟中，以體積分?jǐn)?shù)為50％的乙醇水溶液為提取溶劑，其余實驗條件和實驗操作均與實施例1相同。

實施例6

本實施例建立兒瀉停顆粒的指紋圖譜的方法與實施例1的區(qū)別僅在于：供試品溶液的制備步驟中，以體積分?jǐn)?shù)為60％的乙醇水溶液為提取溶劑，其余實驗條件和實驗操作均與實施例1相同。

實施例7

本實施例建立兒瀉停顆粒的指紋圖譜的方法，包括如下步驟：

(1)取待測兒瀉停顆粒1.0g，精密稱定，精密加入體積分?jǐn)?shù)為100％的甲醇水溶液或乙醇水溶液25mL，稱定重量，超聲提取60分鐘，放冷，過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；

(2)精密稱取甘草苷對照品，加甲醇制成每1mL含0.00005g的溶液，搖勻，作為對照品A溶液；

精密稱取甘草酸銨對照品，加甲醇制成每1mL含0.00005g的溶液，搖勻，作為對照品B溶液；

(3)色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以250mm×4.6mm、5μm的Techmate C18-ST為色譜柱，以乙腈為流動相A、以體積分?jǐn)?shù)為0.1％的磷酸水溶液為流動相B按照如下程序進(jìn)行梯度洗脫：0min，A：B為10％：90％；0～0.1min，A：B為10％：90％→19％：81％；0.1min，A：B為19％：81％；0.1～8min，A：B為19％：81％；8min，A：B為19％：81％；8～15min，A：B為19％：81％→20％：80％；15min，A：B為20％：80％；15～50min，A：B為20％：80％→50％：50％；50min，A：B為50％：50％；50～60min，A：B為50％：50％→80％：20％；60min，A：B為80％：20％；60～65min，A：B為80％：20％；65min，A：B為80％：20％；65～66min，A：B為80％：20％→10％：90％；66min，A：B為10％：90％；66～70min，A：B為10％：90％；70min，A：B為10％：90％；檢測波長為239nm，柱溫40℃，流速為1.5mL/min；

(4)分別精密吸取供試品溶液、對照品A溶液和對照品B溶液20μL，注入高效液相色譜儀，測定，分別得到供試品溶液、對照品A溶液和對照品B溶液的液相色譜；

(5)利用國家藥典委員會中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)，對供試品溶液、對照品A溶液和對照品B溶液的液相色譜分別經(jīng)過數(shù)據(jù)導(dǎo)入、多點校正和數(shù)據(jù)匹配，即得指紋圖譜。

實施例8

本實施例建立兒瀉停顆粒的指紋圖譜的方法，包括如下步驟：

(1)取待測兒瀉停顆粒5.0g，精密稱定，精密加入體積分?jǐn)?shù)為10％的甲醇水溶液或乙醇水溶液100mL，稱定重量，超聲提取10分鐘，放冷，過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；

(2)精密稱取甘草苷對照品，加甲醇制成每1mL含0.00050g的溶液，搖勻，作為對照品A溶液；

精密稱取甘草酸銨對照品，加甲醇制成每1mL含0.00050g的溶液，搖勻，作為對照品B溶液；

(3)色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以250mm×4.6mm、5μm的島津VP-ODS為色譜柱，以乙腈為流動相A、以體積分?jǐn)?shù)為0.1％的磷酸水溶液為流動相B按照如下程序進(jìn)行梯度洗脫：0min，A：B為10％：90％；0～0.1min，A：B為10％：90％→19％：81％；0.1min，A：B為19％：81％；0.1～8min，A：B為19％：81％；8min，A：B為19％：81％；8～15min，A：B為19％：81％→20％：80％；15min，A：B為20％：80％；15～50min，A：B為20％：80％→50％：50％；50min，A：B為50％：50％；50～60min，A：B為50％：50％→80％：20％；60min，A：B為80％：20％；60～65min，A：B為80％：20％；65min，A：B為80％：20％；65～66min，A：B為80％：20％→10％：90％；66min，A：B為10％：90％；66～70min，A：B為10％：90％；70min，A：B為10％：90％；檢測波長為235nm，柱溫25℃，流速為0.5mL/min；

(4)分別精密吸取供試品溶液、對照品A溶液和對照品B溶液5μL，注入高效液相色譜儀，測定，分別得供試品溶液、對照品A溶液和對照品B溶液的液相色譜；

(5)利用國家藥典委員會中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)，對供試品溶液、對照品A溶液和對照品B溶液的液相色譜分別經(jīng)過數(shù)據(jù)導(dǎo)入、多點校正和數(shù)據(jù)匹配，即得指紋圖譜。

實驗例1

1、儀器與試藥

儀器包括：高效液相色譜儀：戴安UItiMate3000高效液相色譜儀；色譜柱：Techmate C18-ST(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱；紫外檢測器；萬分之一天平(Sartorius BS224S)，十萬分之一天平(Precisa XR205SM DR)；超聲波發(fā)生器：(昆山超聲KQ-700DE 40KHz 280W)；

試藥包括：乙腈為色譜純(德國Merk公司)，水為超純水(電阻率18.2mΩ.cm)，其他試劑均為分析純；兒瀉停藥物制劑(序號1-10)由華潤三九醫(yī)藥股份有限公司提供。

2、流動相的梯度洗脫程序

表1流動相的梯度洗脫程序

3、兒瀉停顆粒指紋圖譜的建立

按如下方法建立兒瀉停顆粒的指紋圖譜：

取兒瀉停藥物制劑對照品甘草苷溶液(對照品A溶液)和甘草酸銨溶液(對照品B溶液)、以及10個批次經(jīng)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)檢測合格的兒瀉停顆粒粉末(批號:1312473、11511474、1511475、1511476、1511477、1511478、1511479、1511480、1511481、1511482)制備供試品溶液，按照實施例1的方法建立兒瀉停顆粒的指紋圖譜。

對照品A溶液的液相色譜圖、批號為1511481兒瀉停顆粒供試品溶液的液相色譜圖、10批兒瀉停顆粒供試品溶液導(dǎo)入指紋圖譜相似度計算軟件后導(dǎo)出的疊加色譜圖和建立的兒瀉停顆粒的指紋圖譜分別如圖1-4所示。

采用藥典委員會編制的指紋圖譜相似度評價軟件中“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)2004版”，生成對照特征圖譜。

由圖4可知，兒瀉停顆粒的指紋圖譜中有8個共有特征峰，依次標(biāo)號為1、2、3、4、5、6、7、8，經(jīng)過對照品溶液比對，其中2號峰為甘草苷，3號峰為甘草酸銨，選取其中的甘草苷作為內(nèi)參照峰(S峰)，以參照峰的相對保留時間為1，計算其他各峰的相對保留時間，結(jié)果見表2。

表2 10批兒瀉停顆粒共有峰相對保留時間

由表2可知，1～8號峰的平均相對保留時間為：0.916、1.000、2.024、2.097、2.153、2.378、3.333、3.512，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均≤0.055％。按照保留時間偏差不大于±5％的原則，將保留時間規(guī)定為：

1號峰：0.916±0.046；2號峰：1.0；

3號峰：2.024±0.101；4號峰：2.097±0.105；

5號峰：2.153±0.108；6號峰：2.378±0.119；

7號峰：3.333±0.167；8號峰：3.512±0.176。

4、方法學(xué)驗證

4.1精密度考察

取同一重復(fù)性項下的兒瀉停顆粒粉末(批號：1511481)，按實施例1的供試品溶液制備方法制備供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，得到6個色譜圖，以參照物甘草苷保留時間為1計算其他特征峰的相對保留時間，記錄各共有色譜峰的相對保留時間和相對峰面積，并計算各共有色譜峰的相對保留時間和相對峰面積的RSD值，精密度考察實驗結(jié)果如表3和表4所示。

表3精密度考察的相對保留時間數(shù)據(jù)

表4精密度考察的相對峰面積數(shù)據(jù)

由表3和表4可知，各共有色譜峰的相對保留時間RSD<2％，相對峰面積RSD<2％，說明該方法的精密度良好。

4.2重復(fù)性考察

取同一批號的供試品(批號：1511481)6份，分別按實施例1的供試品溶液制備方法制備供試品溶液，并進(jìn)行高效液相色譜測定，記錄各共有色譜峰的相對保留時間和相對峰面積，并計算各共有色譜峰的相對保留時間和相對峰面積的RSD值，重復(fù)性考察實驗結(jié)果如表5和表6所示。

表5重復(fù)性考察的相對保留時間數(shù)據(jù)

表6重復(fù)性考察的相對峰面積數(shù)據(jù)

由表5和表6可知，各共有色譜峰的相對保留時間RSD<2％，相對峰面積RSD<2％，說明該方法的重復(fù)性較好。

4.3穩(wěn)定性考察

取同一重復(fù)性項下的供試品溶液(批號：1511481)，按實施例1的方法分別在0h、2h、4h、8h、12h、24h進(jìn)行檢測，記錄各共有色譜峰的相對保留時間和相對峰面積，并計算各共有色譜峰的相對保留時間和相對峰面積的RSD值，穩(wěn)定性考察實驗結(jié)果如表7和表8所示。

表7穩(wěn)定性考察的相對保留時間數(shù)據(jù)

表8穩(wěn)定性考察的相對峰面積數(shù)據(jù)

由表7和表8可知，24h內(nèi)兒瀉停顆粒各共有色譜峰的相對保留時間RSD<2％，相對峰面積RSD<2％，說明該方法的穩(wěn)定性較好。

綜上，采用本發(fā)明的方法建立的兒瀉停顆粒的指紋圖譜的精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性均較好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，能較全面的反映兒瀉停顆粒的質(zhì)量。

5、兒瀉停顆粒的質(zhì)量檢測

樣品批號：1604471、1604473(由合肥華潤神鹿藥業(yè)有限公司提供)；

供試品溶液的制備：取1604471、1604473各1.0g，精密稱定，精密加入體積分?jǐn)?shù)為70％的乙醇水溶液25mL，稱定重量，超聲提取30分鐘，放冷，過濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；

對照品溶液的制備：精密稱取甘草苷對照品5mg至50mL容量瓶中，加甲醇超聲溶解并定容至刻度搖勻，即得對照品A溶液；

精密稱取甘草酸銨對照品10mg至50mL容量瓶中，加甲醇超聲溶解并定容至刻度搖勻，即得對照品B溶液；

色譜條件：同實施例1；

高效液相分析：分別精密吸取等量的供試品溶液和對照品溶液注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件記錄70min，即得各供試品溶液和對照品溶液的液相色譜圖。在待測樣品中找到與指紋圖譜對應(yīng)的8個特征峰，以對照品甘草苷保留時間為1計算其他特征峰的相對保留時間，計算結(jié)果如表9所示。

表9批號為1604471、1604473樣品的特征峰的相對保留時間

由表9可知，批號為1604471、1604473樣品的特征峰的相對保留時間均在規(guī)定的保留時間范圍內(nèi)，說明該兩批兒瀉停顆粒的質(zhì)量檢測符合要求。

顯然，上述實施例僅僅是為清楚地說明所作的舉例，而并非對實施方式的限定。對于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可以做出其它不同形式的變化或變動。這里無需也無法對所有的實施方式予以窮舉。而由此所引伸出的顯而易見的變化或變動仍處于本發(fā)明創(chuàng)造的保護(hù)范圍之中。