本實用新型涉及一種熒光定量光譜檢測系統(tǒng)，尤其涉及一種測試免疫層析檢測試紙條的熒光定量光譜檢測系統(tǒng)。
背景技術(shù)：
鈣衛(wèi)蛋白又叫MRP8/14，L1，(p8,14)，p34。構(gòu)成鈣衛(wèi)蛋白異聚體的兩種蛋白名稱：
S100A8，鈣粒蛋白A，MRP8(移動抑制因子相關(guān)蛋白8型)，CP-10(小鼠)；
S100A9，鈣粒蛋白B，MRP14(移動抑制因子相關(guān)蛋白14型)。
鈣衛(wèi)蛋白是一種鈣結(jié)合蛋白，主要由嗜中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞分泌。糞便中的鈣衛(wèi)蛋白是腫瘤性和炎癥性腸胃疾病的標(biāo)志物。
由于很難區(qū)分腸易激綜合征和慢性腸炎疾病，因此要經(jīng)常對病人進(jìn)行結(jié)腸窺鏡檢查。而鈣衛(wèi)蛋白檢測能夠很好區(qū)分這兩種疾病。糞便中鈣衛(wèi)蛋白水平與克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎的組織學(xué)、內(nèi)窺鏡檢查具有顯著一致性，也和腸炎疾病的檢測金標(biāo)準(zhǔn)——糞便中銦-111標(biāo)記的嗜中性粒細(xì)胞分泌物具有極高相關(guān)性。由于檢測銦-111標(biāo)記的嗜中性粒細(xì)胞的成本較高(住院治療、同位素分析和處理)且病人暴露于放射性環(huán)境下，不建議對兒童和孕婦采用該方法。
鈣衛(wèi)蛋白水平提高預(yù)示著相應(yīng)疾病的復(fù)發(fā)，是一個比CRP,ESR,HB更好的標(biāo)志物。將上述標(biāo)志物與結(jié)腸直腸癌的標(biāo)準(zhǔn)便潛血檢測比較后發(fā)現(xiàn)，糞便中鈣衛(wèi)蛋白檢測在診斷上更具優(yōu)勢：如果糞便中鈣衛(wèi)蛋白水平很低，極大程度上說明未患有器官性腸道疾病。
檢測糞便中鈣衛(wèi)蛋白水平有助于：
急性炎癥的標(biāo)志物
評估腸胃炎癥程度
監(jiān)測克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎或息肉摘除后病人狀況
進(jìn)行糞便檢查時區(qū)分腸炎疾病(克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎)和腸易激綜合征
目前鈣衛(wèi)蛋白檢測方法有：
1.金標(biāo)法：該法具有快速簡便,易觀察的特點。但是靈敏度不高。
2.酶聯(lián)免疫吸附法：該測定方法靈敏度較高，適合專業(yè)人員批量檢測，但比較復(fù)雜，需要專業(yè)人員操作，時間較長。
3.熒光酶聯(lián)免疫分析法該測定方法靈敏度較高，適合專業(yè)人員批量檢測，但比較復(fù)雜，需要專業(yè)人員操作，時間較長。
目前的測定方法為鈣衛(wèi)蛋白免疫層析試紙條(膠體金法)，采用膠體金作為標(biāo)記抗體的載體，來檢測人糞便中的鈣衛(wèi)蛋白，該方法采用的是定性的方法，只能給出陰性和陽性判斷，無法給出明確的定量結(jié)果，而且采用膠體金，靈敏度低?；蛘卟捎眉S便鈣衛(wèi)蛋白檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)，采用酶標(biāo)記抗體的載體，來檢測人糞便中的鈣衛(wèi)蛋白，但是該方法操作比較復(fù)雜，需要專業(yè)人員操作，時間較長?；蛘卟捎眉S便鈣衛(wèi)蛋白檢測試劑盒(熒光酶聯(lián)免疫法)，采用酶標(biāo)記抗體的載體，來檢測人糞便中的鈣衛(wèi)蛋白，但是，該方法也是操作比較復(fù)雜，需要專業(yè)人員操作，時間較長。目前市面上還沒有鈣衛(wèi)蛋白定量免疫熒光層析快速檢測試紙條的產(chǎn)品。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本實用新型的目的是克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種免疫層析檢測試紙條的熒光定量光譜檢測系統(tǒng)，本系統(tǒng)能實現(xiàn)對糞便樣品的定量檢測，檢測時間短，靈敏度高，精密度高。
本實用新型是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的：一種免疫層析檢測試紙條的熒光定量光譜檢測系統(tǒng)，包括熒光光源系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、用于將所述檢測系統(tǒng)的信息進(jìn)行定量并顯示其結(jié)果的自動軟件分析控制系統(tǒng)以及定量鈣衛(wèi)蛋白免疫層析檢測試裝置，
所述定量鈣衛(wèi)蛋白免疫層析檢測試裝置包括定量鈣衛(wèi)蛋白免疫層析檢測試紙條、塑料上殼和塑料下殼；
所述定量鈣衛(wèi)蛋白免疫層析檢測試紙條包括試紙條底襯、樣品墊、標(biāo)記墊、硝酸纖維素膜及吸水紙，紙條底襯設(shè)于試紙條整體底端，所述樣品墊、標(biāo)記墊、硝酸纖維膜、吸水紙依次搭接并附著在底襯上；所述硝酸纖維素膜上設(shè)有包被羊抗兔IgG抗體的質(zhì)控區(qū)和抗鈣衛(wèi)蛋白單克隆抗體的檢測區(qū)兩條相互平行的包被區(qū)，檢測區(qū)靠近標(biāo)記墊端，質(zhì)控區(qū)靠近吸水紙端；所述標(biāo)記墊為內(nèi)含有鈣衛(wèi) 蛋白單克隆抗體和熒光膠乳的復(fù)合物以及兔IgG抗體和熒光膠乳的復(fù)合物的標(biāo)記墊；
所述定量鈣衛(wèi)蛋白免疫層析檢測試紙條可拆卸地組裝在由塑料上殼和塑料下殼扣合而成的塑料外殼中，塑料上殼設(shè)有加樣孔和結(jié)果顯示窗，加樣孔對應(yīng)于所述樣品墊，結(jié)果顯示窗對應(yīng)于所述的質(zhì)控區(qū)和檢測區(qū)；
所述熒光光源系統(tǒng)設(shè)置有照射在所述定量鈣衛(wèi)蛋白免疫層析檢測試紙條的檢測區(qū)的單色激發(fā)光，檢測區(qū)通過反應(yīng)凝聚的熒光膠乳在所述單色激發(fā)光的作用下發(fā)射出可被所述檢測系統(tǒng)捕獲的熒光信號；
所述檢測系統(tǒng)包括將所述熒光信號放大的光電倍增管、將經(jīng)過光電倍增管放大后的熒光信號轉(zhuǎn)換為電信號的固態(tài)檢測器及將電信號輸出的電信號讀出電路，所述電信號讀出電路與所述自動軟件分析控制系統(tǒng)相連。
所述的硝酸纖維素膜為爬速在95s～140s/cm的硝酸纖維素膜。
本實用新型的優(yōu)點是：1.檢測時間短，只需15min。2.靈敏度高:采用熒光膠乳標(biāo)記抗體，可使鈣衛(wèi)蛋白的靈敏度達(dá)到50ug/g。3.精密度高:優(yōu)化了整個試紙條的結(jié)構(gòu)，使用樣品墊拼接標(biāo)記墊的方法，改善了均一性。
附圖說明
圖1為本實用新型實施例定量鈣衛(wèi)蛋白免疫層析檢測試紙條的結(jié)構(gòu)示意圖。
圖中附圖標(biāo)記含義：1、紙條底襯；2、硝酸纖維素膜；3、樣品墊；4、吸水紙；5、標(biāo)記墊；6、質(zhì)控區(qū)；7、檢測區(qū)。
具體實施方式
下面結(jié)合附圖和具體實施方式對本實用新型的內(nèi)容做進(jìn)一步詳細(xì)說明。
實施例
參閱圖1，為一種免疫層析檢測試紙條的熒光定量光譜檢測系統(tǒng)，包括熒光光源系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、用于將所述檢測系統(tǒng)的信息進(jìn)行定量并顯示其結(jié)果的自動軟件分析控制系統(tǒng)以及定量鈣衛(wèi)蛋白免疫層析檢測試裝置，
定量鈣衛(wèi)蛋白免疫層析檢測試裝置包括定量鈣衛(wèi)蛋白免疫層析檢測試紙條、塑料上殼和塑料下殼；
定量鈣衛(wèi)蛋白免疫層析檢測試紙條包括試紙條底襯1、樣品墊3、標(biāo)記墊5、硝酸纖維素膜2及吸水紙4，紙條底襯1設(shè)于試紙條整體底端，樣品墊3、標(biāo)記墊5、硝酸纖維素膜2、吸水紙4依次搭接并附著在底襯上；硝酸纖維素膜2上設(shè)有包被羊抗兔IgG抗體的質(zhì)控區(qū)6和抗鈣衛(wèi)蛋白單克隆抗體的檢測區(qū)7兩條相互平行的包被區(qū)，檢測區(qū)7靠近標(biāo)記墊5端，質(zhì)控區(qū)6靠近吸水紙4端；標(biāo)記墊5為內(nèi)含有鈣衛(wèi)蛋白單克隆抗體和熒光膠乳的復(fù)合物以及兔IgG抗體和熒光膠乳的復(fù)合物的標(biāo)記墊5；熒光膠乳的微球體的直徑為0.1μm～1μm；
定量鈣衛(wèi)蛋白免疫層析檢測試紙條可拆卸地組裝在由塑料上殼和塑料下殼扣合而成的塑料外殼中，塑料上殼設(shè)有加樣孔和結(jié)果顯示窗，加樣孔對應(yīng)于樣品墊3，結(jié)果顯示窗對應(yīng)于的質(zhì)控區(qū)6和檢測區(qū)7；
熒光光源系統(tǒng)設(shè)置有照射在定量鈣衛(wèi)蛋白免疫層析檢測試紙條的檢測區(qū)7的單色激發(fā)光，檢測區(qū)7通過反應(yīng)凝聚的熒光膠乳在單色激發(fā)光的作用下發(fā)射出可被檢測系統(tǒng)捕獲的熒光信號；熒光膠乳的顆粒受激發(fā)后發(fā)射的波長為180nm～800nm，
檢測系統(tǒng)包括將熒光信號放大的光電倍增管、將經(jīng)過光電倍增管放大后的熒光信號轉(zhuǎn)換為電信號的固態(tài)檢測器及將電信號輸出的電信號讀出電路，電信號讀出電路與自動軟件分析控制系統(tǒng)相連。自動軟件分析控制系統(tǒng)處理該電信號后，在顯示屏上顯示結(jié)果，實現(xiàn)對樣本的精確定量。
定量鈣衛(wèi)蛋白檢測免疫層析試紙條的制備：
(1)膜的選擇：硝酸纖維素膜2為爬速在95s～140s/cm的硝酸纖維素膜2。
(2)包被膜的選擇：包被膜為：首先，制備質(zhì)控區(qū)6和檢測區(qū)7：用包被緩沖液稀釋能與待檢人糞便鈣衛(wèi)蛋白特異結(jié)合的抗鈣衛(wèi)蛋白單克隆抗體，并將稀釋后的抗鈣衛(wèi)蛋白單克隆抗體劃線于硝酸纖維素膜2從而形成檢測區(qū)7；用包被緩沖液稀釋能與待檢人糞便鈣衛(wèi)蛋白特異結(jié)合的羊抗兔IgG抗體，并將稀釋后的羊抗兔IgG抗體劃線于硝酸纖維素膜2從而形成質(zhì)控區(qū)6；檢測區(qū)7與質(zhì)控區(qū)6平行；然后，將包被好的硝酸纖維素膜2置于濕度小于30％的40～50℃的烘箱，干燥24～36h后，于2℃～30℃密封干燥平衡3天以上形成包被膜，封袋備用。包被緩沖液含有5％蔗糖和0.05M、pH7.4的PBS，包被緩沖液用0.22μm濾膜過濾，置于4℃?zhèn)溆?，有效?0天。檢測區(qū)7上用包被緩沖液稀釋的能與待檢人糞便鈣衛(wèi)蛋白特異結(jié)合的抗鈣衛(wèi)蛋白單克隆抗體的濃度為0.75-1mg/mL， 劃線于硝酸纖維素膜22上的用量為0.12μL/mm；質(zhì)控區(qū)6上用標(biāo)記緩沖液稀釋的能與待檢人糞便鈣衛(wèi)蛋白特異結(jié)合的羊抗兔IgG抗體的濃度為0.75-1mg/mL，劃線于硝酸纖維素膜22上的用量為0.12μL/mm。
(3)標(biāo)記墊5為：首先，噴涂熒光標(biāo)記的復(fù)合物：用標(biāo)記緩沖液稀釋鈣衛(wèi)蛋白單克隆抗體和熒光膠乳的復(fù)合物以及兔IgG抗體和熒光膠乳的復(fù)合物等兩種復(fù)合物，并將稀釋后的兩種復(fù)合物按照稀釋后的鈣衛(wèi)蛋白單克隆抗體和熒光膠乳的復(fù)合物：稀釋后的兔IgG抗體和熒光膠乳的復(fù)合物為1:3的體積比例混合形成混合液，再使用噴金設(shè)備，按照0.06MPA、3.0ul/mm這些參數(shù)將混合液噴到玻璃纖維上；然后，將噴涂好的玻璃纖維置于濕度小于30％的40～50℃的烘箱，干燥24～36h后，于2℃～30℃密封干燥平衡3天以上形成標(biāo)記墊5，封袋備用。標(biāo)記墊5緩沖液含有5％蔗糖、1％BSA、0.5％Tween-20和0.05M、pH8.0的PBS，標(biāo)記墊5緩沖液用0.22μm濾膜過濾，置于4℃?zhèn)溆?，有效?0天。鈣衛(wèi)蛋白單克隆抗體和熒光膠乳的復(fù)合物以及兔IgG抗體和熒光膠乳的復(fù)合物等兩種復(fù)合物為熒光標(biāo)記的復(fù)合物，所述的熒光乳膠為共價活化的熒光膠乳，共價活化的方法為：超聲波處理熒光膠乳微球體30秒后，調(diào)節(jié)熒光膠乳微球體濃度為1.0×1012～1.0×1013個/mL，10000～15000xg離心10分鐘，離心后收集沉淀物用蒸餾水或者100mM pH6.0磷酸鈉溶液溶解，并利用200W的超聲波處理30秒；先加入50μL的100mg/ml的EDC，震蕩混勻，再加入50μLl的50mg/mL的N-羥基硫代琥珀酰亞胺(Sμlfo-NHS)，震蕩混勻；室溫孵育30分鐘后10000～15000xg、離心5～15分鐘，沉淀用100mM、pH5.0～6.0的檸檬酸緩沖液溶解，放置在2～8℃條件下備用。熒光標(biāo)記的復(fù)合物的制備方法為：將活化后的熒光膠乳用200W的超聲波處理30秒后，按照50μg標(biāo)記抗體/100μl熒光膠乳的比例加入標(biāo)記抗體，所述的標(biāo)記抗體為鈣衛(wèi)蛋白單克隆抗體或羊抗兔IgG抗體，混勻后室溫攪拌反應(yīng)2小時，離心洗滌3次，每次10000～15000xg、離心10分鐘，沉淀用PBS-TBN溶解并用100W的超聲波處理30秒，用PBS-TBN恢復(fù)離心前體積，形成鈣衛(wèi)蛋白單克隆抗體和熒光膠乳的復(fù)合物或兔IgG抗體和熒光膠乳的復(fù)合物，4℃保存?zhèn)溆?。熒光乳膠標(biāo)記的鈣衛(wèi)蛋白單克隆抗體的濃度為0.5～1mg/mL，在稀釋時按10％～20％的稀釋比進(jìn)行稀釋；步驟C中，熒光乳膠標(biāo)記的羊抗兔IgG抗體的濃度為1～2mg/mL，在稀釋時按5％～10％的稀釋比進(jìn)行稀釋。
(4)樣品墊3為：首先，噴涂樣品墊3處理液：使用噴金設(shè)備，按照0.06MPA、 3.5ul/mm這些參數(shù)，將樣品墊3處理液噴到玻璃纖維上；然后，將噴涂好的樣品墊3置于濕度小于30％的40～50℃的烘箱，干燥24～36h后，于2℃～30℃密封干燥平衡3天以上形成樣品墊3，封袋備用。樣品墊3處理液含有1％BSA、0.5％Tween-20、0.05M、pH8.5的Tris、1％PVP和1％NaCl，樣品墊3處理液置于4℃?zhèn)溆?，有效?0天。
本實用新型的有益效果：
1.定量檢測：定量檢測糞便中的鈣衛(wèi)蛋白。檢測范圍是50～2100ug/g。
2.檢測時間：檢測時間短，只需15min。
3.靈敏度:采用熒光膠乳標(biāo)記抗體，可使鈣衛(wèi)蛋白的靈敏度達(dá)到50ug/g。
4.精密度:優(yōu)化了整個試紙條的結(jié)構(gòu)，使用樣品墊3拼接標(biāo)記墊5的方法，改善了均一性。
上列詳細(xì)說明是針對本實用新型可行實施例的具體說明，該實施例并非用以限制本實用新型的專利范圍，凡未脫離本實用新型所為的等效實施或變更，均應(yīng)包含于本案的專利范圍中。