本實用新型涉及醫(yī)學領域，具體涉及一種免疫側(cè)向?qū)游鰴z測系統(tǒng)。

背景技術：

免疫側(cè)向?qū)游龇ㄆ湓硎菍⑻禺愋缘目贵w(抗原)先固定于硝酸纖維膜的某一區(qū)帶，當干燥的硝酸纖維膜一端浸入樣品(尿液、血清、血漿、全血或其他樣品)后，由于毛細管作用，樣品將沿著該膜向前移動，當移動至固定有抗體(抗原)的區(qū)域時，樣品中相應的抗原(抗體)即與該抗體(抗原)發(fā)生特異性結(jié)合，若用免疫膠體金可使該區(qū)域顯示一定的顏色，肉眼觀察或用相應的讀數(shù)儀實現(xiàn)特異性的免疫診斷。若用熒光標記物，需要配套讀數(shù)儀來完成數(shù)據(jù)采集，處理，驗算得出相應的定量濃度值。

然而隨著社會的發(fā)展，目前的檢測檢測系統(tǒng)的靈敏度、精密度和準確度都已經(jīng)不能達到現(xiàn)有的需要。

技術實現(xiàn)要素：

本實用新型實施例提供了一種免疫側(cè)向?qū)游鰴z測系統(tǒng)，大大提高了檢測的靈敏度、精密度和準確度。

本實用新型實施例還提供了一種免疫側(cè)向?qū)游鰴z測系統(tǒng)的制備方法。

本實用新型實施例還提供了一種免疫側(cè)向?qū)游鰴z測系統(tǒng)的應用。

本實用新型實施例提供了一種免疫側(cè)向?qū)游鰴z測系統(tǒng)，包括底板，其包括近樣品端和遠樣品端；所述的底板上由近樣品端到遠樣品端依次設置有樣品墊，所述的樣品墊上設置有加樣孔，硝酸纖維素膜和吸水墊；所述的硝酸纖維素膜上設置有質(zhì)控帶和檢測帶，所述的質(zhì)控帶設置在所述的檢測帶與樣品墊之間；所述的質(zhì)控帶為生物素-親和素體系或與鼠抗體不同種屬的質(zhì)控體系；所述的硝酸纖維素膜上設置有用來采集數(shù)據(jù)的觀察窗。

進一步的，所述的樣品墊與硝酸纖維素膜之間設置有標記物墊。

進一步的，所述的與鼠抗體不同種屬的質(zhì)控體系采用羊抗雞IgY包被，雞IgY標記。

進一步的，所述的生物素-親和素體系由親和素或鏈霉親和素包被到硝酸纖維素膜上得到。

另一方面，本實用新型實施例還提供了一種免疫側(cè)向?qū)游鰴z測系統(tǒng)的制備方法，包括如下步驟：

(1)將第一抗體或抗原包被到硝酸纖維素膜上；同時將對照試劑包被到硝酸纖維素膜上；

(2)制備標記物：將第二抗體或抗原進行標記后噴點在測試管、小瓶、吸頭、針筒內(nèi)、卡塞混樣槽、樣品墊、標記物墊或硝酸纖維素膜得到所述的標記物；

(3)制備樣品墊；

(4)組裝所述的免疫側(cè)向?qū)游鰴z測系統(tǒng)：在底板上依次固定樣品墊，硝酸纖維素膜和吸水墊；所述的硝酸纖維素膜上設置有質(zhì)控帶和檢測帶，所述的質(zhì)控帶設置在所述的檢測帶與樣品墊之間；所述的質(zhì)控帶為生物素-親和素體系或與鼠抗體不同種屬的質(zhì)控體系；所述的硝酸纖維素膜上設置有用來采集數(shù)據(jù)的觀察窗。

進一步的，所述的步驟(1)具體包括如下步驟：

將所述的抗體或抗原用包被緩沖液稀釋到0.1-5.0mg/ml，包被到所述硝酸纖維素膜上，干燥備用；所述的包被緩沖液為0.01-0.1M的磷酸緩沖液加1-10％(重量體積比，比如3％即3克溶質(zhì)溶解于100ml溶劑內(nèi)為3％)的蔗糖作為保護劑。

進一步的，所述的樣品墊與硝酸纖維素膜之間設置有標記物墊，其標記物為乳膠熒光、時間分辨熒光、上轉(zhuǎn)移發(fā)光、量子點熒光、熒光染料或膠體金。

進一步的，制備樣品墊是用樣品處理液浸泡或噴點所述的樣品墊，干燥備用；所述的樣品處理液中Tris-CL的摩爾濃度為10-100mMol/l，所述的樣品處理液中按照質(zhì)量百分數(shù)計包括如下組分：0.1-2％的Casein，0.1-5％的BSA，0.05-1％的Tween-20，0.05％-0.5％的PEG，0.05％-1％的Tween-80，0.05％-0.5％的PVP，0.1％-1％的二水合檸檬酸酸鈉，1-10％的蔗糖。

再一方面，本實用新型實施例還提供一種免疫側(cè)向?qū)游鰴z測系統(tǒng)的應用，所述的免疫側(cè)向?qū)游鰴z測系統(tǒng)為上述的方法制備的檢測系統(tǒng)。

進一步的，將待檢測樣品稀釋后進行檢測；所述的稀釋選用的稀釋液為生理鹽水或樣品稀釋液，所述的樣品稀釋液中Tris-CL的摩爾濃度為10-100mMol/L，NaCl的質(zhì)量濃度為0.8-1％，Tween-20的質(zhì)量濃度為0.05-1％。

與現(xiàn)有技術相比，本實用新型免疫側(cè)向?qū)游鰴z測系統(tǒng)至少具有如下有益效果：

質(zhì)控帶與檢測帶位置互換，在檢測系統(tǒng)分總體長度不變的情況下，延長了加樣孔和檢測帶之間的距離，延長反應時間，提高靈敏度。如有些對靈敏度要求不高，可在相同靈敏度下，檢測系統(tǒng)做的更短、或者試劑用量減少，節(jié)省產(chǎn)品生產(chǎn)成本。同時，在粘稠樣品的定量測試中，質(zhì)控帶的數(shù)據(jù)更加準確和可控，從而提高產(chǎn)品的精密度和準確度。

采用與傳統(tǒng)質(zhì)控帶體系完全不同的體系，避免交叉反應。采用與鼠抗體種屬遠的雞IgY作為產(chǎn)品質(zhì)控帶體系，羊抗雞IgY包被，雞IgY標記(或采用生物素-親和素體系來作為質(zhì)控帶體系)；從而避免了交叉阻斷反應的情況方發(fā)生。

附圖說明

圖1為本實用新型中實施例1和2中的免疫側(cè)向?qū)游鰴z測系統(tǒng)結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2為本實用新型中實施例3中的免疫側(cè)向?qū)游鰴z測系統(tǒng)結(jié)構(gòu)示意圖。

具體實施方式

下面結(jié)合較佳實施例對本實用新型方案做進一步說明，應當理解，較佳實施例是為了方便本領域技術人員對本實用新型方案的理解，不作為本實用新型方案的限定。

膠體金免疫側(cè)向?qū)游龇椒ü倘挥兴膬?yōu)點如簡便、快速等；不過由于膠體金本身的特點導致靈敏度無法達到某些項目的臨床要求。進而衍生出免疫熒光法，其主要是在膠體金上述優(yōu)點的情況下，很好的彌補了膠體金方法的缺點，得到很好的靈敏度，成為現(xiàn)在即時檢驗(POCT)領域的首選方法。

但是即便使用更靈敏的熒光方法并配上相對應讀數(shù)儀去提高靈敏度，仍然無法到有些項目的要求。因為免疫側(cè)向?qū)游黾夹g既要求反應時間不能太長，過長無法達到即時檢驗的目的；又要求在某些項目靈敏度很高。眾所周知，免疫反應中起決定作用的是時間、溫度和離子強度，在保證反應緩沖液充分優(yōu)化的情況下，在室溫或37度左右反應時，唯有反應時間可以優(yōu)化，但是反應時間不能過長是即時檢驗的要求，同時過分延長反應時間也會導致樣品回流、本底加大等不利因素。除了靈敏度以外如果樣品是全血等粘稠的樣品的話，也會導致側(cè)向?qū)游鲈噭l的樣品隨固相膜由毛細血管作用移動的速度過慢，引起在規(guī)定時間內(nèi)樣品和所含標記物和被測物的復合物無法充分釋放，試劑反應無法完全充分，影響最后結(jié)果，特別是定值產(chǎn)品的結(jié)果。這樣會導致精密度不好，以及由于質(zhì)控帶數(shù)據(jù)不準確而導致檢測值不準，從而影響準確度、精密度。

根據(jù)上述分析，可以發(fā)現(xiàn)選用合適的質(zhì)控帶體系就可以避免交叉反應，從而可以將質(zhì)控帶和檢測帶位置互換，從而實現(xiàn)了在保持現(xiàn)有檢測系統(tǒng)長度的同時，延長了加樣孔和檢測帶的距離，從而提高靈敏度、精準度和準確度。

本實用新型方法的原理：本方法創(chuàng)造性的將質(zhì)控帶位置和檢測帶位置互換，使質(zhì)控帶位于檢測帶和加樣孔之間；來換取檢測帶位置與加樣孔之間的距離延長，距離延長可以延長反應時間，從而在產(chǎn)品總長度不變的情況下提高產(chǎn)品靈敏度。如有些對靈敏度要求不高，可在相同靈敏度下，試劑條做的更短、或者試劑用量減少，節(jié)省產(chǎn)品生產(chǎn)成本。

原先無法將位置互換是由于質(zhì)控帶一般采用羊抗鼠，這個會和標記抗體形成反應，影響檢測帶讀數(shù)值。或者采用種屬相近的羊抗兔-兔抗體方法，此方法雖然一般情況下不會直接影響反應，但是由于種屬過近，還是容易和一些鼠抗體或多或少的交叉反應，影響產(chǎn)品性能。

下面是具體實施例：

實施例1(無標記物墊，標記物在測試管內(nèi)，有樣本稀釋液)

包被抗體：將人心型脂肪酸結(jié)合蛋白(HFABP)檢測抗體1用包被緩沖液稀釋成固定濃度(2.0mg/ml)，對照試劑1(羊抗雞IgY)稀釋成固定濃度(2.0mg/ml)，采用BioDot公司的XYZ3060將上述兩個液體包被到賽多利斯硝酸纖維素膜140(NC膜)上，其中質(zhì)控帶位于檢測帶和加樣孔之間，37℃干燥箱干燥4小時，備用。包被緩沖液為0.01Mol/l的磷酸緩沖液(PBs)加3％的蔗糖作為保護劑。

標記抗體：將人心型脂肪酸結(jié)合蛋白(HFABP)檢測抗體2和對照試劑2(雞IgY)用乳膠熒光標記，儲存在儲存液內(nèi)，備用，(50mMol/l Tris，0.5％BSA，pH 7.8)。

標記物準備：將上述標記抗體按所需濃度噴點5微升體積在測試管，進行干燥備用。

樣品墊制備：將樣品處理液按所需濃度浸泡或噴點在樣品墊內(nèi)或上，干燥備用。處理液組成如下：50mMol/l Tris-CL，0.5％Casein，0.5％BSA，0.1％Tween-20，0.05％PEG，0.1％Tween-80，0.05％PVP，0.3％二水合檸檬酸酸鈉，2％蔗糖。

其中，BSA：牛血清白蛋白，Casein：酪蛋白，Tris-CL：三羥甲基氨基甲烷鹽酸緩沖液，PEG：聚乙二醇，Tween-20：吐溫20，Tween-80：吐溫80，PVP：聚乙烯吡咯烷酮，0.5％為重量體積比，即0.5克溶質(zhì)溶解于100ml溶劑內(nèi)。

樣品稀釋液分裝：將50mMol/l Tris-CL，0.9％NaCl，0.1％Tween-20，3.0％BSA，分裝到大瓶(5ml-50ml)內(nèi)，備用。

組裝試劑條：將包被好所需試劑的硝酸纖維素膜和已處理好的樣品墊以及吸水墊按照模具黏貼在一起，并切成所需寬度試劑條，一般為4mm寬度。剪切好的試劑條組裝到相應的卡塞(Cassette)內(nèi)，卡塞在樣品墊上方有加樣孔，卡塞在硝酸纖維素膜上方有觀察窗，用于數(shù)據(jù)采集。用普通吸頭吸取樣品稀釋液(樣品稀釋液為多人份混合，即一盒產(chǎn)品一大瓶樣品稀釋液)到已經(jīng)點好熒光物質(zhì)的測試管內(nèi)，再加樣品，反復吹打數(shù)次，溶解熒光物質(zhì)，并與樣品中被測物之間免疫反應。再加到卡塞加樣孔內(nèi)，15分鐘讀取數(shù)據(jù)?；蛘呦燃訕悠返揭呀?jīng)點好熒光物質(zhì)的測試管內(nèi)，再加樣品稀釋液，反復吹打數(shù)次，溶解熒光物質(zhì)，并與樣品中被測物之間免疫反應。再加到卡塞加樣孔內(nèi)，由于毛細血管作用向前側(cè)向?qū)游觯?5分鐘時讀取數(shù)據(jù)。

表1為本實施例中本方法與對照組的檢測結(jié)果數(shù)據(jù)對比。

表1

由表1可以看出，在做人心型脂肪酸結(jié)合蛋白(HFABP)項目時，由于位置調(diào)整，靈敏度明顯的提高(無論是檢測帶數(shù)值還是熒光值，在濃度3.3ng/ml和0ng/ml之間比值都差1.5倍，即本方法靈敏度可以調(diào)高至少1.5倍)。

實施例2(無標記物墊，標記物在吸頭內(nèi)，有樣本稀釋液)

包被抗體：將C反應蛋白(CRP)檢測抗體1用包被緩沖液稀釋成固定濃度(0.5mg/ml)，對照試劑1(羊抗雞IgY)稀釋成固定濃度(2.0mg/ml)，采用BioDot公司的XYZ3060將上述兩個液體包被到賽多利斯硝酸纖維素膜(NC)上，其中質(zhì)控帶位于檢測帶和加樣孔之間，37℃干燥箱干燥4小時，備用。包被緩沖液為0.01Mol/l的磷酸緩沖液(PBs)加3％的蔗糖作為保護劑。

標記抗體：將C反應蛋白(CRP)檢測抗體2和對照試劑2(雞IgY)用乳膠熒光標記，儲存在儲存液內(nèi)，備用，(50mMol/l Tris，0.5％BSA，pH 7.8)。

標記物準備：將上述標記抗體按所需濃度噴點5微升體積到吸頭內(nèi)壁內(nèi)，進行干燥備用。

樣品墊制備：將樣品處理液按所需濃度浸泡或噴點在樣品墊內(nèi)或上，干燥備用。處理液組成如下：50mMol/l Tris-CL，0.5％Casein，0.5％BSA，0.1％Tween-20，0.05％PEG，0.1％Tween-80，0.05％PVP，0.3％二水合檸檬酸酸鈉，2％蔗糖。

其中：BSA：牛血清白蛋白，Casein：酪蛋白，Tris-CL：三羥甲基氨基甲烷鹽酸緩沖液，PEG：聚乙二醇，Tween-20：吐溫20，Tween-80：吐溫80，PVP：聚乙烯吡咯烷酮，0.5％為重量體積比，即0.5克溶質(zhì)溶解于100ml溶劑內(nèi)。

樣品稀釋液分裝：將50mMol/l Tris-CL，0.9％NaCl，0.1％Tween-20，3％BSA，分裝反應緩沖液小瓶內(nèi)(0.2ml-3ml)，備用。

組裝試劑條：將包被好所需試劑的硝酸纖維素膜和已處理好的樣品墊以及吸水墊按照模具黏貼在一起，并切成所需寬度試劑條，一般為4mm寬度。剪切好的試劑條組裝到相應的卡塞(Cassette)內(nèi)，卡塞在樣品墊上方有加樣孔，卡塞在硝酸纖維素膜上方有觀察窗，用于數(shù)據(jù)采集。用具有標記物熒光物質(zhì)的吸頭吸取樣品到反應緩沖液小瓶內(nèi)，反復吹打數(shù)次，溶解熒光物質(zhì)，并與樣品中被測物之間免疫反應。再加到卡塞加樣孔內(nèi)，由于毛細血管作用向前側(cè)向?qū)游觯?/p>

3分鐘時讀取數(shù)據(jù)。表2為本實施例中本方法與現(xiàn)有技術的檢測結(jié)果對比表。

表2

由表2可以得出，在做C反應蛋白(CRP)項目時，由于位置調(diào)整，靈敏度明顯的提高(解釋：無論是檢測帶數(shù)值還是熒光值，在濃度0.0315mg/L和0mg/L之間比值都差1.5倍以上，即本方法靈敏度可以調(diào)高至少1.5倍)。

實施例1和2制備的免疫側(cè)向?qū)游鰴z測系統(tǒng)結(jié)構(gòu)示意圖如圖1所示，其中，檢測系統(tǒng)包括PVC膠板1，PVC膠板上由左到右依次設置有樣品墊2，其上有加樣孔(圖中未示出)；硝酸纖維素膜3，其上設置有質(zhì)控帶5、檢測帶6和觀察窗(圖中未示出)；吸水墊4。

實施例3.(有標記物墊，包被試劑為抗原，無樣品稀釋液)

包被抗體：將HCV(丙型肝炎)檢測抗原1用包被緩沖液稀釋成固定濃度(3.0mg/ml)，對照試劑1(鏈霉親合素SA)稀釋成固定濃度(2.0mg/ml)，采用BioDot公司的XYZ3060將上述兩個液體包被到硝酸纖維素膜(NC膜)上，其中質(zhì)控帶位于檢測帶和加樣孔之間，37℃干燥箱干燥4小時。包被緩沖液為0.01Mol/l的磷酸緩沖液(PBs)加3％的蔗糖作為保護劑。

標記抗體：將HCV(丙型肝炎)檢測抗原2和對照抗體2(BSA-Biotin)用膠體金標記，儲存在金標儲存液內(nèi)，(50mMol/l Tris，0.5％BSA，pH 7.8),

標記物墊制備：將上述標記抗體按所需濃度浸泡或噴點在金標墊內(nèi)或上，干燥，剪切備用?？捎谜舭l(fā)干燥、真空干燥或冷凍干燥。

樣品墊制備：將樣品處理液按所需濃度浸泡或噴點在金標墊內(nèi)或上，干燥備用?？捎谜舭l(fā)干燥、真空干燥或冷凍干燥。

處理液組成如下：50mM Tris-CL，0.5％Casein，0.5％BSA，0.1％Tween-20，0.05％PEG，0.1％Tween-80，0.05％PVP，0.3％二水合檸檬酸酸鈉，2％蔗糖。

縮寫：BSA：牛血清白蛋白，Casein：酪蛋白，Tris-CL：三羥甲基氨基甲烷鹽酸緩沖液，PEG：聚乙二醇，Tween-20：吐溫20，Tween-80：吐溫80，PVP：聚乙烯吡咯烷酮，Biotin生物素，SA鏈霉親合素。

組裝試劑條：將包被好所需抗體的硝酸纖維素膜(NC膜)、標記物墊、吸水墊以及樣品墊按照模具黏貼在一起，并切成所需寬度試劑條，一般為4mm寬度。剪切好的試劑條組裝到相應的卡塞(Cassette)內(nèi)，卡塞在樣品墊上方有加樣孔，卡塞在硝酸纖維素膜上方有觀察窗，用于數(shù)據(jù)采集。用普通吸頭吸取120微升體積樣品加到加樣孔內(nèi)，由于毛細血管作用向前側(cè)向?qū)游觯?5分鐘內(nèi)讀取數(shù)據(jù)。

15分鐘時讀取數(shù)據(jù)。表3為本實施例中本方法與現(xiàn)有技術的檢測結(jié)果對比表。

備注：膠體金結(jié)果目測，—：為陰性，+：為陽性，目測有淺淺的紅線，++：為陽性，目測有明顯的紅線。

由表3可以得出，在做丙型肝炎病毒(HCV)抗體診斷試劑(膠體金法)項目時，由于位置調(diào)整，靈敏度明顯的提高(解釋：校準品1:256稀釋濃度時，對照方法為陰性，所以靈敏度提高約2倍)。

實施例3制備的免疫側(cè)向?qū)游鰴z測系統(tǒng)結(jié)構(gòu)示意圖如圖2所示，其中，檢測系統(tǒng)包括PVC膠板1，PVC膠板上由左到右依次設置有樣品墊2，其上有加樣孔(圖中未示出)；標記物墊7；硝酸纖維素膜3，其上設置有質(zhì)控帶5、檢測帶6和觀察窗(圖中未示出)；吸水墊4。

以上實施例標記物熒光物質(zhì)的添加還可以采用以下方式：標記物質(zhì)點到卡塞上面的混樣槽內(nèi)；標記物質(zhì)點到吸頭內(nèi)壁上；標記物質(zhì)點到測試管內(nèi)；標記物質(zhì)點或浸泡到樣品墊。

本實用新型申請未盡之處，本領域技術人員可以根據(jù)現(xiàn)有知識來進行常規(guī)選擇，比如：干燥可采用蒸發(fā)干燥、真空干燥或冷凍干燥等。

以上所述，僅為本實用新型的具體實施方式，但本實用新型的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本技術領域的技術人員在本實用新型揭露的技術范圍內(nèi)，可輕易想到變化或替換，都應涵蓋在本實用新型的保護范圍之內(nèi)。因此，本實用新型的保護范圍應以所述權(quán)利要求的保護范圍為準。