本發(fā)明涉及一種獸醫(yī)生物技術領域，具體地說是豬圓環(huán)病毒2型抗體快速檢測層析試紙條及其制備方法，重點用于豬圓環(huán)病的抗體監(jiān)測。

背景技術：
豬圓環(huán)病毒(PCV)有2個血清型：PCV1和PCV2，其中PCV1對豬的致病性較低，廣泛存在于正常豬群和豬源細胞中；而PCV2對豬的危害性極大，能引起多種疾病綜合征，如豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征、皮炎與腎病綜合征、繁殖障礙等。此外，該病能對養(yǎng)豬業(yè)產生多系統(tǒng)、多階段、全方位的危害，造成直接或間接的損失。為了更好的控制豬圓環(huán)病，就必須及時了解并掌握豬場PCV2(豬圓環(huán)病毒2型)的感染情況，而且，新型疫苗的效力檢測，也需要簡單快速的測定方法作為配套檢測技術。目前，常見的PCV2抗體檢測方法有間接免疫熒光(IIF)、免疫過氧化物酶單層細胞試驗(IPMA)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)等。ELISA包括競爭ELISA、間接ELISA、抗原捕獲ELISA等。IIF和IPMA較為經(jīng)典，但對操作要求很高，不便于大量樣品檢測，ELISA操作簡單可靠，特異性好，但需要借助昂貴的儀器。表位是抗原分子中決定抗原特異性的特殊化學基團，也是T細胞受體/B細胞受體和抗體特異結合的基本單位，在抗原中起著關鍵性作用。在機體的免疫系統(tǒng)中，免疫細胞通常難以借助其表面受體識別整個蛋白質分子，僅識別抗原分子上的抗原決定簇，也就是說抗體的特異性是針對抗原表位而不是針對完整的抗原分子的?？乖砦皇敲庖咴乖缘奈镔|基礎，抗原表位的研究對病原的診斷具有重要的意義。

技術實現(xiàn)要素：
針對現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明旨在提供一種豬圓環(huán)病毒2型抗體快速檢測層析試紙條及其制備方法，實現(xiàn)快速有效地對豬群PCV2血清抗體進行檢測。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案：豬圓環(huán)病毒2型抗體快速檢測層析試紙條，包括支撐層、加樣層、檢測層和吸收層；還包括金標蛋白釋放墊，所述金標蛋白釋放墊包埋有膠體金標記的重組蛋白G；所述檢測層上設置有檢測帶和質控帶，檢測帶固定有豬圓環(huán)病毒2型核衣殼蛋白上的優(yōu)勢抗原表位肽，質控帶固定有ProteinG免疫兔血清純化后的IgG；所述優(yōu)勢抗原表位肽序列為ORF2上的氨基酸區(qū)段113-147aa的基因片段。上述的豬圓環(huán)病毒2型抗體快速檢測層析試紙條的制備方法包括如下步驟：S1制備所述優(yōu)勢抗原表位肽；S2制備ProteinG免疫兔血清純化后的IgG；S3膠體金顆粒的制備，并采用膠體金標記重組蛋白G并用玻璃膜吸附，得到金標蛋白釋放墊；S4制備檢測層，步驟S1制備得到的優(yōu)勢抗原表位肽和步驟S2制備得到的ProteinG免疫兔血清純化后的IgG分別用硝酸纖維膜包被并分別得到檢測帶和質控帶，構成檢測層；S5將加樣層、金標蛋白釋放墊、檢測層和吸收層設于支撐層上。需要說明的是，所述步驟S1的方法具體為：1.1)根據(jù)ORF2上的氨基酸區(qū)段113-147aa的基因片段，設計并合成1對引物：ORF2-EF：5’-GCGGATCCCAGGGTGACAGGGGAGTGGGCT-3’ORF2-ER：5’-GCCTCGAGTTAGCGGGAGGAGTAGTTTACA-3’；引物中分別引入BamHI和XhoI酶切位點；1.2)以ORF2上的氨基酸區(qū)段113-147aa的基因片段為模板，利用步驟1.1)設計得到的引物對進行PCR處理；1.3)將ORF2上的氨基酸區(qū)段113-147aa的基因片段在pGEX-4T-1中進行克隆，得到的陽性重組質粒命名為pGEX-ORF2-C；1.4)將步驟1.3)得到的重組質粒pGEX-ORF2-C轉化大腸桿菌BL21(DE3)菌株中誘導表達，將表達后的蛋白命名為GST-ORF2-C；1.5)谷胱甘肽親和層析柱層析法純化GST-ORF2-C，即得優(yōu)勢抗原表位肽。進一步需要說明的是，步驟1.2)中，PCR反應條件為：94℃2min；94℃20s，60℃20s，72℃30s，30個循環(huán)；72℃延伸10min；16℃保存。進一步需要說明的是，步驟1.3)具體方法為：DNA快速連接酶連接，連接體系為：10×ligasebuffer1μl，酶切純化的目的基因片段5μl，載體pGEX-4T-11μl，T4DNA快速連接酶1μl，雙蒸水補足10μl，室溫連接15min；將連接產物轉化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細胞，鋪LB平板于37℃培養(yǎng)過夜，挑取單克隆菌落進行PCR鑒定，并測序正確，陽性重組質粒命名為pGEX-ORF2-C。進一步需要說明的是，步驟1.4)中，誘導表達的條件為：在含100μg/mL氨芐青霉素的LB培養(yǎng)基中，37℃，250rpm培養(yǎng)攜帶重組質粒pGEX-ORF2-C的大腸桿菌BL21(DE3)菌株，直至菌液的OD600值介于0.6-0.8，加入IPTG至終濃度為0.1mM，繼續(xù)培養(yǎng)3小時，離心收集細菌沉淀；用pH7.4的PBS洗滌，用80μlPBS懸浮菌體，與20μl的5×SDS裂解緩沖液混合，煮沸變性5分鐘；利用蛋白質電泳裝置進行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳：分離膠的丙烯酰胺濃度為10％，將只含載體的大腸桿菌BL21(DE3)菌株同樣誘導做陰性對照，0.25％考馬斯亮蘭染色；最終得到GST-ORF2-C，即優(yōu)勢抗原表位肽。進一步需要說明的是，步驟1.5)具體步驟為：用1×PBS懸浮細菌沉淀并超聲處理10min，每超聲10s就間歇10s，離心取上清，與經(jīng)1×PBS平衡的谷胱甘肽瓊脂糖凝膠在室溫振蕩混合30min，將混合物轉移至層析柱中，用1×PBS清洗柱子，用谷胱甘肽洗脫緩沖液洗脫融合蛋白。需要說明的是，步驟S2的具體為：2.1)用proteinG采用多點注射法免疫陰性家兔2只，每隔2周加強免疫1次，共進行3次，最后一次免疫10天后采血；2.2)將4℃過夜沉淀的全血4000r/min離心10min，取上清即為血清；將20ml血清中加入20ml生理鹽水，再加入10ml的飽和(NH4)2SO4溶液，使之成20％(NH4)2SO4溶液，邊加邊攪拌，充分混合，靜置30m...