本發(fā)明涉及一種中藥材檢測(cè)分析技術(shù)，特別涉及一種附子中生物堿含量了檢測(cè)方法，屬于中藥材技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

附子為毛莨科植物烏頭Aconitum carmichaeli Debx.的子根，習(xí)稱“泥附子”，多年生草本。附子通常為多個(gè)子根連接生長(zhǎng)在一起，表皮茶褐色至棕褐色，平滑，無(wú)皺紋，周?chē)辛鰻钔黄穑瑝K根下部有大量細(xì)小須根。通常在7-8月份進(jìn)行采挖，采挖得到的附子為泥附子。

附子中的活性成分包括了大量的烏頭總堿，具有很強(qiáng)的鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛作用，但是其中的雙酯型生堿物堿毒性很大，臨床上中毒量和治療量很接近。目前如何合理運(yùn)用烏頭總堿開(kāi)發(fā)新的藥物是對(duì)于附子應(yīng)用開(kāi)發(fā)的關(guān)鍵所在，現(xiàn)有的一些研究對(duì)于附子的毒性降低控制提出了改善方案。

但是改善方案在降低雙酯型生物堿的含量了的同時(shí)需要準(zhǔn)確的確定附子中的生物堿的總含量，才能知道附子中的雙酯型生物堿的毒性降低的效果是否合適，即對(duì)于藥效成分的烏頭總堿的含量的計(jì)算需要評(píng)估。

現(xiàn)有技術(shù)中，對(duì)于烏頭總堿的檢測(cè)分析方法，主要是薄層色譜鑒別法，對(duì)于烏頭總堿的含量只能得出一個(gè)大致的數(shù)據(jù)情況，并不能準(zhǔn)備的定量分析，特別是對(duì)于雙酯型生物堿的含量降低無(wú)法準(zhǔn)確的評(píng)估，導(dǎo)致對(duì)于附子中雙酯型生物堿的降低毒性的研究受到了限制。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中對(duì)附子中烏頭總堿檢測(cè)和定量分析所存在的上述不足，提供一種附子中生物堿含量測(cè)試方法。本發(fā)明方法提高附子中的總生物堿的含量了測(cè)試精確度，使得對(duì)于附子中雙酯型生物堿的降低毒性研究能夠更進(jìn)一步。同時(shí)對(duì)于不同的附子炮制方法也有很好的指導(dǎo)意義。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供了以下技術(shù)方案：

一種附子中總生物堿含量測(cè)定分析方法，包括以下步驟：

（1）取附子鮮品適量粉碎，稱取10-40克，轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加入乙醚和三氯甲烷的混合溶液200-400ml，搖勻，加入氨試液10-20ml，振搖5-20分鐘，靜置4-18小時(shí)。

（2）將步驟1處理得到的溶液過(guò)濾，濾渣用乙醚萃取1-3次，合并濾液和萃取液，蒸干，得到殘?jiān)?/p>

（3）將步驟2所得到的殘?jiān)?，加入乙醚和三氯甲烷的混合溶?-10ml，蒸干，再加低分子醇5ml溶解，精密加入0.01mol/L的硫酸滴定液、水15ml和甲基紅指示液3滴，用0.02mol/L氫氧化鈉滴定液滴定至黃色。每1mL硫酸滴定液相當(dāng)于12.9mg的烏頭堿。

本發(fā)明的測(cè)試方法中按鮮品計(jì)算，含生物堿以烏頭堿（C34H47NO11）計(jì)，不得少于0.2%。

進(jìn)一步，本發(fā)明中應(yīng)用的乙醚和三氯甲烷的混合溶液中兩者的體積比為2:1~1:1?；旌先芤旱臉O性更適合對(duì)于附子中的烏頭堿的分離提取。

進(jìn)一步，步驟1中附子鮮品的取用量為10-20克。

進(jìn)一步，錐形瓶的容積500ml-1000ml。

進(jìn)一步，步驟2中，過(guò)濾的時(shí)候應(yīng)用的篩網(wǎng)的目數(shù)為80-200目。

進(jìn)一步，步驟2中，混合溶液萃取的時(shí)候使用的溶液的量為100-200ml。

進(jìn)一步，步驟3中，乙醚和三氯甲烷的混合溶液中兩者的體積比為1:1~1:3。

進(jìn)一步，所述低分子醇是甲醇、乙醇、丙醇、丁醇中的一種或幾種，優(yōu)選使用甲醇或乙醇。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果：

1. 本發(fā)明檢測(cè)分析附子中的生物堿的方法相對(duì)于現(xiàn)用技術(shù)而言，采用了滴定法進(jìn)行測(cè)試，具有簡(jiǎn)單容易實(shí)現(xiàn)的特點(diǎn)，方便不同的種植戶實(shí)地檢驗(yàn)。

2. 本發(fā)明的附子生物堿檢測(cè)分析方法，對(duì)于附子的提取過(guò)程較為充分，能夠完全的提取釋放出附子中的生物堿成分，對(duì)于提高附子檢測(cè)分析結(jié)果的準(zhǔn)確性具有很大的幫助。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合試驗(yàn)例及具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例，凡基于本發(fā)明內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。本發(fā)明中未特別說(shuō)明的百分比均為重量百分比。

實(shí)施例1

附子中總生物堿含量測(cè)定分析

（1）取附子鮮品適量粉碎，稱取20克，轉(zhuǎn)移到500ml錐形瓶中，加入乙醚和三氯甲烷（體積比=2:1）混合溶液200ml，搖勻，加入氨試液15ml，振搖10分鐘，靜置12小時(shí)。

（2）將步驟1處理得到的溶液過(guò)濾，濾渣用乙醚萃取3次，合并濾液和萃取液，蒸干，得到殘?jiān)?/p>

（3）將步驟2所得到的殘?jiān)?，加入乙醚和三氯甲烷（體積比=1:2）混合溶液5ml，蒸干，再加乙醇5ml溶解，精密加入0.01mol/L的硫酸滴定液、水15ml和甲基紅指示液3滴，用0.02mol/L氫氧化鈉滴定液滴定至黃色。每1mL硫酸滴定液相當(dāng)于12.9mg的烏頭堿，經(jīng)過(guò)計(jì)算，附子中烏頭堿含量為0.293%。

實(shí)施例2

附子中總生物堿含量測(cè)定分析

（1）取附子鮮品適量粉碎，稱取40克，轉(zhuǎn)移到500ml錐形瓶中，加入乙醚和三氯甲烷（體積比=1：1）混合溶液400ml，搖勻，加入氨試液20ml，振搖20分鐘，靜置10小時(shí)。

（2）將步驟1處理得到的溶液過(guò)濾，濾渣用乙醚萃取2次，合并濾液和萃取液，蒸干，得到殘?jiān)?/p>

（3）將步驟2所得到的殘?jiān)?，加入乙醚和三氯甲烷（體積比1:1）混合溶液5ml，蒸干，再加丙醇5ml溶解，精密加入0.01mol/L的硫酸滴定液、水15ml和甲基紅指示液3滴，用0.02mol/L氫氧化鈉滴定液滴定至黃色。經(jīng)過(guò)計(jì)算，附子中烏頭堿含量為0.301%。

實(shí)施例3

附子中總生物堿含量測(cè)定分析

（1）取附子鮮品適量粉碎，稱取20克，轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加入乙醚和三氯甲烷（體積比2:1）混合溶液300ml，搖勻，加入氨試液10ml，振搖5分鐘，靜置18小時(shí)。

（2）將步驟1處理得到的溶液過(guò)濾，濾渣用乙醚萃取1次，合并濾液和萃取液，蒸干，得到殘?jiān)?/p>

（3）將步驟2所得到的殘?jiān)?，加入乙醚和三氯甲烷（體積比1:2）混合溶液10ml，蒸干，再加乙醇5ml溶解，精密加入0.01mol/L的硫酸滴定液、水15ml和甲基紅指示液3滴，用0.02mol/L氫氧化鈉滴定液滴定至黃色。經(jīng)過(guò)計(jì)算，附子中烏頭堿含量為0.274%。

實(shí)施例4

附子中總生物堿含量測(cè)定分析

（1）取附子鮮品適量粉碎，稱取10克，轉(zhuǎn)移到1000ml錐形瓶中，加入乙醚和三氯甲烷（體積比2:1）混合溶液400ml，搖勻，加入氨試液20ml，振搖20分鐘，靜置4小時(shí)。

（2）將步驟1處理得到的溶液80目篩網(wǎng)過(guò)濾，濾渣用乙醚萃取3次，合并濾液和萃取液，蒸干，得到殘?jiān)?/p>

（3）將步驟2所得到的殘?jiān)?，加入乙醚和三氯甲烷（體積比1:3）混合溶液10ml，蒸干，再加甲醇5ml溶解，精密加入0.01mol/L的硫酸滴定液、水15ml和甲基紅指示液3滴，用0.02mol/L氫氧化鈉滴定液滴定至黃色。經(jīng)過(guò)計(jì)算，附子中烏頭堿含量為0.268%。

實(shí)施例5

附子中總生物堿含量測(cè)定分析

（1）取附子鮮品適量粉碎，稱取10克，轉(zhuǎn)移到1000ml錐形瓶中，加入乙醚和三氯甲烷（體積比2:1）混合溶液300ml，搖勻，加入氨試液15ml，振搖20分鐘，靜置12小時(shí)。

（2）將步驟1處理得到的溶液200目篩網(wǎng)過(guò)濾，濾渣用乙醚萃取2次，合并濾液和萃取液，蒸干，得到殘?jiān)?/p>

（3）將步驟2所得到的殘?jiān)?，加入乙醚和三氯甲烷（體積比1:1）混合溶液10ml，蒸干，再加乙醇8ml溶解，精密加入0.01mol/L的硫酸滴定液、水15ml和甲基紅指示液3滴，用0.02mol/L氫氧化鈉滴定液滴定至黃色。經(jīng)過(guò)計(jì)算，附子中烏頭堿含量為0.323%。