本發(fā)明涉及實(shí)驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用雙波長(zhǎng)分光光度法測(cè)定芡實(shí)的支鏈淀粉含量的方法。

技術(shù)背景

芡實(shí),又名雞頭米,為睡蓮科芡屬一年生水生草本植物,有南北芡之分。南芡,主產(chǎn)于蘇州太湖水網(wǎng)地區(qū),是蘇州傳統(tǒng)的地方優(yōu)良水生作物,栽培歷史悠久。芡實(shí)以種子的種仁供食用,是傳統(tǒng)的營(yíng)養(yǎng)保健型食品。蘇州雞頭米刺很少，香氣濃郁、吃口軟糯。芡實(shí)種子內(nèi)的種仁可供食用，其含有豐富的淀粉、脂肪、鈣、磷等營(yíng)養(yǎng)成分。淀粉不是單純的分子，而是一種混合物，由二種不同類型的淀粉組成，一種是直鏈淀粉，一種是支鏈淀粉，兩者在結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及化學(xué)反應(yīng)活性上有較大差異。淀粉是芡實(shí)中含量最高的組分，其支鏈淀粉和支鏈淀粉含量比例對(duì)芡實(shí)品質(zhì)、吃口軟糯具有決定性影響。本發(fā)明對(duì)芡實(shí)中支鏈淀粉測(cè)定方法進(jìn)行了研究試驗(yàn)，根據(jù)支鏈淀粉遇碘形成純藍(lán)色復(fù)合物基團(tuán)，支鏈淀粉遇碘形成紫紅色復(fù)合物基團(tuán)的顯色特征，運(yùn)用雙波長(zhǎng)分光光度法進(jìn)行測(cè)定支鏈淀粉的含量。

發(fā)明具體內(nèi)容：

本發(fā)明的目的是提供一種芡實(shí)的支鏈淀粉含量的測(cè)定方法，所述測(cè)定方法可操作性強(qiáng)，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明具體的技術(shù)方案為：

一種芡實(shí)的支鏈淀粉含量的測(cè)定方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)溶液的圖譜繪制：取5ml支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)液于100ml燒杯中，加入50ml蒸餾水，用鹽酸溶液調(diào)pH至3.5左右，混勻，加入1ml的碘試劑，用蒸餾水定容至100ml，用1cm的比色皿在400nm-800nm波長(zhǎng)下掃描，繪制圖譜；

(2)支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：取支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)液0，5，10，15，20，25ml于100ml比色管中，加入50ml蒸餾水，用鹽酸溶液調(diào)pH至3.5左右，混勻，加入1ml的碘試劑，用蒸餾水定容至100ml，用1cm的比色皿在555nm和760nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，以ΔA＝A₅₅₅-A₇₆₀為縱坐標(biāo)，支鏈淀粉含量為橫坐標(biāo)，繪制支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(3)樣品中支鏈淀粉測(cè)定：取勻質(zhì)的樣品100mg左右于100ml燒杯中，加入10ml氫氧化鉀溶液，用封口膜封口，置于沸水浴加熱，不時(shí)地振搖，30min后取出，冷卻，用蒸餾水定容至100ml；過(guò)濾，取濾液待用，分別取兩份15ml濾液于100ml的比色管中，一份加入40ml的蒸餾水，用鹽酸溶液調(diào)pH至3.5左右，加入1ml的碘試劑，用蒸餾水定容至100ml，混勻，靜置15min，待測(cè)；另一份加入40ml蒸餾水，用鹽酸溶液調(diào)pH至3.5左右，加蒸餾水定容至100ml，混勻，靜置15min，待測(cè)；以零管為參比，用1cm比色皿測(cè)定檢測(cè)波長(zhǎng)下的吸光度值，即可得支鏈淀粉的含量。

進(jìn)一步的，所述步驟(2)中所述支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)液為0.5mg/ml。

進(jìn)一步的，所述步驟2所繪制的支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)曲線為ΔA＝0.0253x-0.0039，x為支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)液中支鏈淀粉的含量。

進(jìn)一步的，支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)液中支鏈淀粉的含量x＝0～12.5mg。

有益效果：

通過(guò)本發(fā)明提供的一種芡實(shí)的支鏈淀粉含量的測(cè)定方法，運(yùn)用雙波長(zhǎng)分光光度法進(jìn)行測(cè)定支鏈淀粉的含量，測(cè)定方法可操作性強(qiáng)，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，精密度試驗(yàn)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.51％，回收率在92.30％～103.60％之間。

附圖說(shuō)明：

下面結(jié)合示意圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說(shuō)明。

圖1為支鏈淀粉的掃描圖譜；

圖2為支鏈淀粉的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖；

具體實(shí)施方式：

為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合附圖及實(shí)施例，對(duì)發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。

實(shí)施例

如圖1所示：一種芡實(shí)的支鏈淀粉含量的測(cè)定方法，包括以下步驟：

1實(shí)驗(yàn)方法

1.1支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)溶液的圖譜繪制

取5ml的支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)液于100ml燒杯中，加入50ml的蒸餾水，用鹽酸溶液調(diào)pH至3.5左右，混勻，加入1ml的碘試劑，用蒸餾水定容至100ml。用1cm的比色皿在400nm-800nm波長(zhǎng)下掃描，繪制圖譜。

1.2.支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

取支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)液(0.5mg/ml)0，5，10，15，20，25ml于100ml比色管中，加入50ml的蒸餾水，用鹽酸溶液調(diào)pH至3.5左右，混勻，加入1ml的碘試劑，用蒸餾水定容至100ml。用1cm的比色皿在555nm和760nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，以ΔA＝A₅₅₅-A₇₆₀為縱坐標(biāo)，支鏈淀粉含量為橫坐標(biāo)，繪制支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2樣品中支鏈淀粉測(cè)定

取勻質(zhì)的樣品100mg左右于100ml燒杯中，加入10ml氫氧化鉀溶液，用封口膜封口，置于沸水浴加熱，不時(shí)地振搖，30min后取出，冷卻，用蒸餾水定容至100ml。過(guò)濾，取濾液待用。分別取兩份15ml濾液于100ml的比色管中，一份加入40ml蒸餾水，用鹽酸溶液調(diào)pH至3.5左右，加入1ml的碘試劑，用蒸餾水定容至100ml，混勻，靜置15min，待測(cè)。另一份加入40ml蒸餾水，用鹽酸溶液調(diào)pH至3.5左右，加蒸餾水定容至100ml，混勻，靜置15min，待測(cè)。以零管為參比，用1cm比色皿測(cè)定檢測(cè)波長(zhǎng)下的吸光度值。

2結(jié)果與討論

2.1測(cè)定波長(zhǎng)的確定

支鏈淀粉與碘作用生成紫紅色基因,直鏈淀粉與碘作用產(chǎn)生純藍(lán)色基團(tuán)。根據(jù)雙波長(zhǎng)比色原理，若試樣溶液在兩個(gè)波長(zhǎng)處均有吸收，則兩個(gè)波長(zhǎng)處的吸光度差值與溶液中待測(cè)物質(zhì)的濃度成正比。取支鏈淀粉和支鏈淀粉掃描液在400nm-800nm波長(zhǎng)下掃描，然后在同一坐標(biāo)中繪制，見圖1。根據(jù)上述原理和掃描的圖譜，確定支鏈淀粉的測(cè)定雙波長(zhǎng)為555nm和760nm。

2.2支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

以零管為參比，采用雙波長(zhǎng)法測(cè)定555nm和760nm下的吸光度，結(jié)果數(shù)據(jù)如表1。以支鏈淀粉含量為橫坐標(biāo)，以ΔA＝A₅₅₅-A₇₆₀為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖2。根據(jù)線性回歸，所得曲線為ΔA＝0.0253x-0.0039，相關(guān)系數(shù)R²＝0.9995，運(yùn)用此法具有良好的線性回歸。

表1支鏈淀粉含量與吸光度

2.3精密度實(shí)驗(yàn)

分別取支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)液(0.5mg/ml)5ml，加入50ml的蒸餾水，用鹽酸溶液調(diào)pH至3.5左右，混勻，加入1ml的碘試劑，用蒸餾水定容至100ml。用1cm的比色皿連續(xù)測(cè)定10次，結(jié)果表明，支鏈淀粉含量相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差1.51％。測(cè)定數(shù)據(jù)結(jié)果見表2。

表2支鏈淀粉精密度測(cè)定數(shù)據(jù)結(jié)果

2.4回收率實(shí)驗(yàn)

在已經(jīng)芡實(shí)樣品中分別加入不同量的支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照本實(shí)驗(yàn)方法來(lái)測(cè)定樣品加標(biāo)回收率，測(cè)試結(jié)果見表3。

表3樣品中支鏈淀粉加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明，支鏈淀粉加標(biāo)回收率在92.3％～103.6％，該方法具有較好的準(zhǔn)確性。

2.5結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用雙波長(zhǎng)分光光度法測(cè)定芡實(shí)中支鏈淀粉含量，試驗(yàn)表明，供試液中支鏈淀粉在0～12.5mg之間線性關(guān)系良好，精密度試驗(yàn)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差1.51％，回收率在92.30％～103.60％之間。結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)方法可操作性強(qiáng)，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確。

以上所述僅為發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。企圖據(jù)以對(duì)本發(fā)明作任何形式上之限制，是以，凡有在相同之發(fā)明精神下所作有關(guān)本發(fā)明之任何修飾或變更，皆仍應(yīng)包括在本發(fā)明意圖保護(hù)之范疇。