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一種毒死蜱分析測定試劑盒及其應(yīng)用的制作方法

文檔序號:12454103閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種毒死蜱分析測定試劑盒,其特征在于,所述試劑盒包含有:

毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)品、毒死蜱納米探針、毒死蜱酶標(biāo)膠體金復(fù)合探針、催化底物以及終止液;

所述毒死蜱納米探針由磁性納米粒子和毒死蜱完全抗原偶聯(lián)而成;

所述毒死蜱酶標(biāo)膠體金復(fù)合探針由抗毒死蜱抗體以及HRP包被膠體金顆粒得到;所述HRP與鏈霉親和素組成復(fù)合物,以生物素修飾的單鏈DNA為媒介包被至所述膠體金顆粒上。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒,其特征在于,所述毒死蜱完全抗原由毒死蜱和載體蛋白偶聯(lián)而成。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒,其特征在于,述載體蛋白為雞卵白蛋白。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒,其特征在于,所述磁性納米粒子的粒徑為18~22nm。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒,其特征在于,所述膠體金顆粒的粒徑為13~15nm。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒,其特征在于,所述抗毒死蜱抗體為單克隆抗體。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒,其特征在于,所述毒死蜱酶標(biāo)膠體金復(fù)合探針具體由以下方法制備得到:

1)、取膠體金溶液調(diào)pH至8.8~9.2后向其中加入抗毒死蜱抗體,攪拌混合,靜置25~35min;然后加入生物素修飾的單鏈DNA鏈,8~12℃靜置36~44h;再調(diào)整pH至7.3~7.5,加入NaCl至濃度0.08~0.12mol/L,8000~11000r/min離心8~12min,棄上清,得到含寡核苷酸的膠體金;

2)、用牛血清白蛋白濃度為0.8~1.2%的磷酸鹽緩沖溶液重懸所述含寡核苷酸的膠體金,孵育1~3h;再加入鏈霉親和素-HRP,室溫反應(yīng)1~3h,離心棄上清,得到所述毒死蜱酶標(biāo)膠體金復(fù)合探針。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的試劑盒,其特征在于:

在加入NaCl至既定濃度時,在120~180min內(nèi)分2~4次等量加入,每次間隔40~60min。

9.權(quán)利要求1~8任一項所述的毒死蜱分析測定試劑盒在毒死蜱定性定量分析中的應(yīng)用。

10.一種毒死蜱定性定量分析的方法,其特征在于,包括:

a)、將毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)品、提取與凈化后的待測樣品分別與等體積的毒死蜱酶標(biāo)膠體金復(fù)合探針和毒死蜱納米探針混合孵育;

b)、洗滌孵育產(chǎn)物并去雜化得到競爭復(fù)合物;

c)、使用催化底物與所述競爭復(fù)合物共孵育,然后加入終止液終止反應(yīng),酶標(biāo)儀測定;

d)、以毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo),各濃度所對應(yīng)的灰度抑制率為縱坐標(biāo),建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各樣品中的毒死蜱濃度。

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