一種測定降鈣素原的試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及醫(yī)學及生物化學技術(shù)領域，具體來說是一種測定降鈣素原的試劑盒。本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有技術(shù)中定降鈣素原檢測過程操作復雜、以及測定準確度低的問題，本發(fā)明所采用雙試劑，先將含有抗人類風濕因子抗體的試劑R1與樣本相混合，使得樣本中的類風濕因子抗原與試劑R1中的抗人類風濕因子抗體結(jié)合形成抗原抗體復合物，以達到將類風濕因子抗原清除的目的；再將含有乳膠包被抗人降鈣素原抗體的試劑R2與上述樣本混合，降鈣素原抗原發(fā)生特異性結(jié)合，形成不溶性的聚苯乙烯微球?抗原?聚苯乙烯微球顆粒復合物乳濁液，產(chǎn)生一定的濁度，在一定波長下進行濁度測定，即可測得樣本中被檢測降鈣素原的含量。本發(fā)明具有準確度高、無污染、操作方便等優(yōu)點。
【專利說明】
一種測定降鈣素原的試劑盒
技術(shù)領域
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)學及生物化學技術(shù)領域，具體來說是一種測定降鈣素原的試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002] 降鈣素原(PCT)是一種蛋白質(zhì)，當嚴重細菌、真菌、寄生蟲感染以及膿毒癥和多臟 器功能衰竭時它在血漿中的水平升高。自身免疫、過敏和病毒感染時PCT不會升高。局部有 限的細菌感染、輕微的感染和慢性炎癥不會導致其升高。細菌內(nèi)毒素在誘導過程中擔任了 至關重要的作用。
[0003] PCT反映了全身炎癥反應的活躍程度。影響PCT水平的因素包括被感染器官的大小 和類型、細菌的種類、炎癥的程度和免疫反應的狀況。PCT水平的升高出現(xiàn)在嚴重休克、全身 性炎癥反應綜合征和多器官功能紊亂綜合征，即使沒有細菌感染或細菌性病灶。但是，在這 些病例中PCT水平通常低于那些有細菌性病灶的患者。從腸道釋放細胞因子或細菌移位可 能引起誘導。
[0004] PCT來自定位于第11號染色體上（11ρ15, 4)的單拷貝基因，該基因由2800個堿 基對組成，含6個外顯子和5個內(nèi)含子。轉(zhuǎn)錄后在甲狀腺濾泡旁細胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)翻譯成降 鈣素原前體，包括N端84個氨基酸、活性降鈣素和降鈣蛋白三部分。降鈣素原前體在內(nèi)源 多肽酶作用下剪掉nPro-CT端單一序列，生成116氨基酸的PCT，分子量約為13kD，PCT 和降鈣素具有一個相同的32個氨基酸的序列。PCT是無激素活性的降鈣素前肽物質(zhì)。正常代 謝時，甲狀腺C細胞分泌并產(chǎn)生有激素活性的降鈣素。PCT在健康個體中的濃度非常低（〈 O.lng /ml )，并且在活體內(nèi)外都是非常穩(wěn)定的蛋白，半衰期大約20~24h。
[0005] PCT在內(nèi)毒素等細胞因子誘導下，2~3h開始增加，LPS后2h血漿中可檢測到， 6~8h體內(nèi)濃度快速升高，12~48h到達峰值，2~3d后恢復正常。隨后有研究表明，PCT 是由細菌內(nèi)毒素、TNF-a、IL-6等因素作用于肝、脾、腎、肺的神經(jīng)內(nèi)分泌細胞或特殊細胞而 產(chǎn)生。動物實驗證明，PCT可能是一種次級炎癥因子，本身不直接參與啟動膿毒血癥反應， 但可放大并加重膿毒血癥病理過程。
[0006] 目前檢測降鈣素原的方法有很多，主要有放射免疫法、化學發(fā)光、膠體金法。放射 免疫法會產(chǎn)生放射性物質(zhì)，造成放射性環(huán)境污染;化學發(fā)光成品較高，且需要檢測的儀器較 為昂貴;膠體金法檢測速度快，但只能定性或者半定量，檢測結(jié)果不精確。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明針對上述問題公開了一種測定降鈣素原的試劑盒，克服了成本高、有污染、 以及測定準確度低的問題。
[0008] 本發(fā)明解決上述技術(shù)問題提供的技術(shù)方案是:一種測定降鈣素原的試劑盒，該試 劑盒由試劑R1和試劑R2雙液體組分組成，所述的試劑R1為加有抗人類風濕因子抗體、無機 鹽離子、防腐劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑和加速劑的緩沖液； 作為優(yōu)選，所述的試劑R2為加有乳膠包被抗人降鈣素原抗體、無機鹽離子、穩(wěn)定劑、防 腐劑的緩沖液。所述的緩沖液為Tri s緩沖液、MOPS緩沖液、PBS緩沖液、MES緩沖液、甘氨酸緩 沖液中的一種或多種組合而成。所述的無機鹽離子為氯化鈉、氯化鉀、硫酸鉀中的一種或多 種組合而成。所述的加速劑為聚乙二醇-2000、聚乙二醇-6000、聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯 烷酮中的一種或幾種。所述的穩(wěn)定劑為牛血清白蛋白、甘油、蔗糖、海藻糖、EDTA中的一種或 多種組合而成。
[0009] 作為優(yōu)選方案，所述的防腐劑為苯酚、苯甲酸鈉、疊氮鈉中的一種或多種組合而 成。所述的表面活性劑為吐溫系列、聚氧乙烯苯基醚、聚氧乙烯月桂醚系列中的一種或多種 組合而成。
[0010] 作為優(yōu)選方案，所述的乳膠包被抗人降鈣素原抗體含有功能部位的完整抗體或抗 體片段，或為兔抗人多克隆抗體或羊抗人多克隆抗體，或為兔抗人單克隆抗體或羊抗人單 克隆抗體；所述的乳膠包被抗人降鈣素原抗體的粒徑在40~500nm之間。
[0011] 作為優(yōu)選方案，所述的試劑盒中彼此獨立的試劑R1和試劑R2雙液體組分，它們包 括的成分及相應含量為： 試劑R1: Tris緩沖液 30~130 mmol/L 氯化鈉 100~300 mmol/L 聚乙二醇-6000 10-40 g/L EDTA 10~70 mmol/L 吐溫-80 0.5-1.5 mL/L 疊氮鈉 0.4~0.9 g/L 抗人類風濕因子抗體 0.2~1.8 g/L 其溶劑為純化水。
[0012] 試劑R2: Tris緩沖液 50~150 mmol/L 牛血清白蛋白 14~56 g/L 氯化鈉 40~180 mmol/L 疊氮鈉 0.4~0.9 g/L 乳膠包被抗人降鈣素原單克隆抗體 2~6 g/L 其溶劑為純化水。
[0013] 作為優(yōu)選方案，所述的試劑盒的的制備和使用方法包括以下步驟： (a)按照下列組分含量配制好R1試劑： Tris緩沖液 30~130 mmol/L 氯化鈉 100~300 mmol/L 聚乙二醇-6000 10-40 g/L EDTA 10-70 mmol/L 吐溫-80 0.5-1.5 mL/L 疊氮鈉 0.4~0.9 g/L 抗人類風濕因子抗體 0.2~1.8 g/L 其溶劑為純化水。
[0014] (b)按照下列組分含量配制好R2試劑： Tris緩沖液 50~150 mmol/L 牛血清白蛋白 14~56 g/L 氯化鈉 40~180 mmol/L 疊氮鈉 0.4~0.9 g/L 乳膠包被抗人降鈣素原單克隆抗體 2~6 g/L 其溶劑為純化水。
[0015] (C)將待測樣本與試劑R1和試劑R2混合，使其充分反應，進一步優(yōu)選的，試劑R1與試 劑R2的體積比為3 :1，待測樣本與試劑R1和試劑R2的總體積的體積比在1:10到1:50之間。
[0016] (d)用全自動生化分析儀測定反應后的吸光度差值； (e)根據(jù)吸光度變化值計算出樣本中的降鈣素原的值。
[0017] 作為優(yōu)選方案，所述的乳膠包被抗人降鈣素原抗體的配制方法如下： (a) 將粒徑為80nm的膠乳顆粒，用50 mmol/L的MES緩沖液稀釋膠乳顆粒到4.0 g/L，每 mL溶液中加入EDAC 1.0 mg，室溫反應2小時，在離心機內(nèi)20000 rpm轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去 上清，將沉淀懸浮于50 mmol/L的MES緩沖液中，超聲分散； (b) 將步驟(a)的產(chǎn)物在離心機內(nèi)20000 rpm轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，棄上清，將沉淀懸浮于50 mmol/L的MES緩沖液中，使得膠乳顆粒最終濃度為4g/L，超聲分散，邊攪拌邊加入等體積的含 抗人降鈣素原抗體的MES稀釋液，混合攪拌，室溫反應2小時，膠乳顆粒最終濃度為4.0 g/L。
[0018] (C)將步驟(b)的產(chǎn)物在離心機內(nèi)20000 rpm轉(zhuǎn)速離心30分鐘，棄上清，沉淀懸浮于 50 mmol/L的MES緩沖液中，膠乳顆粒最終濃度為4.0 g/L，然后超聲分散，加入BSA，4°C封閉 過夜;離心去上清，用步驟(b)制得的分散液溶解膠乳顆粒，使膠乳顆粒終濃度為4.0 g/L， 超聲分散后制得乳膠包被抗人降鈣素原抗體。
[0019] 本發(fā)明所采用的膠乳增強免疫比濁法的反應原理是:先將含有抗人類風濕因子抗 體的試劑R1與樣本相混合，在37°c下孵育5分鐘，使得樣本中的類風濕因子抗原與試劑R1中 的抗人類風濕因子抗體結(jié)合形成抗原抗體復合物，并凝集成大顆粒，以達到將類風濕因子 抗原清除的目的。同時試劑R1中所含的EDTA與樣本中的金屬離子螯合，除去金屬離子的干 擾;再將含有乳膠包被抗人降鈣素原抗體的試劑R2與上述中去除過類風濕因子和金屬離子 的樣本中相應的降鈣素原抗原發(fā)生特異性結(jié)合，在加速劑作用下形成不溶性的聚苯乙烯微 球-抗原-聚苯乙烯微球顆粒復合物乳濁液，產(chǎn)生一定的濁度，其濁度高低與樣本中的降鈣 素原抗原濃度成正比關系，在一定波長下進行濁度測定，即可測得樣本中被檢測降鈣素原 的含量。
[0020] 樣本中降鈣素原(PCT)的活性(ng/mL)= 式中：△ At以空白管吸光度作對照的樣品管吸光度值 Δ As以空白管吸光度作對照的校準管吸光度值 Cs校準液中PCT的濃度 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有檢測靈敏度更高，檢測準確性更好，不產(chǎn)生環(huán)境污染物等 優(yōu)點，另外檢測也比較方便。
[0021]
【附圖說明】： 圖1為使用實施例1中試劑盒與化學發(fā)光法的檢測結(jié)果對比。
[0022] 圖2為使用實施例2中試劑盒與化學發(fā)光法的檢測結(jié)果對比。
【具體實施方式】
[0023] 以下結(jié)合具體實施例進一步說明，但本發(fā)明并不僅限于這些實施例。 [0024] 實施例1 本發(fā)明的試劑盒包括彼此獨立的試劑R1和試劑R2雙液體組分，其中 試劑R1: Tris緩沖液 80 mmol/L 氯化鈉 200 mmol/L 聚乙二醇-6000 25 g/L EDTA 40 mmol/L 吐溫-80 1.0 mL/L 疊氮鈉 〇.7g/L 抗人類風濕因子抗體 1.0 g/L 其溶劑為純化水。
[0025] 試劑 R2: Tris緩沖液 100 mmol/L 牛血清白蛋白 35 g/L 氯化鈉 110 mmol/L 疊氮鈉 0.65 g/L 乳膠包被抗人降鈣素原單克隆抗體4g/L 其溶劑為純化水。
[0026] 實施例2 試劑R1: MES緩沖液 80 mmol/L 氯化鈉 200 mmol/L 聚乙二醇-8000 25 g/L EDTA 40 mmol/L 吐溫-80 1.0 mL/L 疊氮鈉 〇.7g/L 抗人類風濕因子抗體 1.0 g/L 其溶劑為純化水。
[0027] 試劑 R2: MES緩沖液 100 mmol/L 牛血清白蛋白 35 g/L 氯化鈉 110 mmol/L 疊氮鈉 0.65 g/L 乳膠包被抗人降鈣素原單克隆抗體4g/L 其溶劑為純化水。
[0028] 實施例3 試劑盒的制備和使用方法 1、乳膠包被抗人降鈣素原單克隆抗體的制備： (a) 將粒徑為80nm的膠乳顆粒，用50 mmol/L的MES緩沖液稀釋膠乳顆粒到4.0 g/L，每 mL溶液中加入EDAC 1.0 mg，室溫反應2小時，在離心機內(nèi)20000 rpm轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去 上清，將沉淀懸浮于50 mmol/L的MES緩沖液中，超聲分散； (b) 將步驟(a)的產(chǎn)物在離心機內(nèi)20000 rpm轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，棄上清，將沉淀懸浮于 50 mmol/L的MES緩沖液中，使得膠乳顆粒最終濃度為4g/L，超聲分散，邊攪拌邊加入等體積 的含抗人降鈣素原抗體的MES稀釋液，混合攪拌，室溫反應2小時，膠乳顆粒最終濃度為4.0 g/L〇
[0029] (c)將步驟(b)的產(chǎn)物在離心機內(nèi)20000 rpm轉(zhuǎn)速離心30分鐘，棄上清，沉淀懸浮于 50 mmol/L的MES緩沖液中，膠乳顆粒最終濃度為4.0 g/L，然后超聲分散，加入BSA，4°C封閉 過夜;離心去上清，用步驟(b)制得的分散液溶解膠乳顆粒，使膠乳顆粒終濃度為4.0 g/L， 超聲分散后制得乳膠包被抗人降鈣素原抗體。
[0030] 2、按照下列組分含量配制好試劑： (a)按照下列組分含量配制好R1試劑： Tris緩沖液 80 mmol/L 氯化鈉 200 mmol/L 聚乙二醇-6000 25 g/L EDTA 40 mmol/L 吐溫-80 1.0 mL/L 疊氮鈉 〇.7g/L 抗人類風濕因子抗體 1.0 g/L 其溶劑為純化水。
[0031] (b)按照下列組分含量配制好R2試劑： Tris緩沖液 100 mmol/L 牛血清白蛋白 35 g/L 氯化鈉 110 mmol/L 疊氮鈉 0.65 g/L 乳膠包被抗人降鈣素原單克隆抗體4g/L 其溶劑為純化水。
[0032] 3、全自動生化分析儀參數(shù)設置 (a) 檢測溫度:37°C; (b) 檢測波長:主波長600nm; (c) 反應時間：10min，其中，孵育時間5min，加入試劑R2后立即測定讀取吸光度 Al，5min后讀取吸光度A2,計算吸光度變化ΔΑ = A2-A1 ; (d) 反應方向：正反應； 4、檢測步驟 (a) 取224μ1試劑R1與4μ1待測樣本混勻； (b) 將混勻后的溶液在37°C的條件下孵育5min; (c) 加入56μ1試劑R2,立即測定讀取吸光度Al，5min后讀取吸光度A2,計算吸光度變化 Δ A = A2-A1；
(d) 樣本中類樣本中降鈣素原(PCT)的活性（ 〔ng/mL)計算出樣本 中的降鈣素原的活度。
[0033] 實施例4 試劑盒的制備和使用方法 1、將粒徑為80nm的膠乳顆粒，用50 mmol/L的MES緩沖液稀釋膠乳顆粒到4.0 g/L，每mL 溶液中加入EDAC 1.0 mg，室溫反應2小時，在離心機內(nèi)20000 rpm轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上 清，將沉淀懸浮于50 mmol/L的MES緩沖液中，超聲分散;然后在離心機內(nèi)20000 rpm轉(zhuǎn)速下 離心30分鐘，棄上清，將沉淀懸浮于50 mmol/L的MES緩沖液中，使得膠乳顆粒最終濃度為 4g/L，超聲分散，邊攪拌邊加入等體積的含抗人降鈣素原抗體的MES稀釋液，混合攪拌，室溫 反應2小時，膠乳顆粒最終濃度為4.0 g/L制得分散溶液。然后在離心機內(nèi)20000 rpm轉(zhuǎn)速離 心30分鐘，棄上清，沉淀懸浮于50 mmol/L的MES緩沖液中，膠乳顆粒最終濃度為4.0 g/L，然 后超聲分散，加入BSA，4°C封閉過夜。離心去上清，用制得的分散液溶解膠乳顆粒，使膠乳顆 粒終濃度為4.0 g/L，再次超聲分散后制得乳膠包被抗人降鈣素原抗體。
[0034] 2、按照下列組分含量配制好試劑： (a)按照下列組分含量配制好R1試劑： MES緩沖液 80 mmol/L 氯化鈉 200 mmol/L 聚乙二醇-8000 25 g/L EDTA 40 mmol/L 吐溫-80 1.0 mL/L 疊氮鈉 〇.7g/L 抗人類風濕因子抗體 1.0 g/L 其溶劑為純化水。
[0035] (b)按照下列組分含量配制好R2試劑： 試劑R2: MES緩沖液 100 mmol/L 牛血清白蛋白 35 g/L 氯化鈉 110 mmol/L 疊氮鈉 0.65 g/L 乳膠包被抗人降鈣素原單克隆抗體4g/L 其溶劑為純化水。
[0036] 3、全自動生化分析儀參數(shù)設置 (a)檢測溫度:37°C; (b) 檢測波長:主波長600nm; (c) 反應時間：10min，其中，孵育時間5min，加入試劑R2后立即測定讀取吸光度 Al，5min后讀取吸光度A2,計算吸光度變化ΔΑ = A2-A1 ; (d) 反應方向：正反應； 4、檢測步驟 (a) 取224μ1試劑R1與4μ1待測樣本混勻； (b) 將混勻后的溶液在37°C的條件下孵育5min; (c) 加入56μ1試劑R2,立即測定讀取吸光度Al，5min后讀取吸光度A2,計算吸光度變化 Δ A = A2-A1； (d) 樣本中類樣本中降鈣素原(PCT)的活性
（ng/mL)計算出樣本 中的降鈣素原的活度。
[0037] 參照附圖1，附圖1為用實施例1所制得的一種測定降鈣素原的試劑盒多次測定不 同樣本中降鈣素原的測定結(jié)果，以及在同等條件下與化學發(fā)光法測定結(jié)果的對比分析。從 相關性實驗結(jié)果可見，本試劑盒與化學發(fā)光檢測結(jié)果相關性很好，相關方程y=l.0457 x+ 0.0265，R2=0.9922，從結(jié)果可以看出本試劑盒結(jié)果準確性可靠，相關性良好，可以應用于降 鈣素原(PCT)的檢測。
[0038] 參照附圖2,附圖2為用實施例2所制得的一種測定降鈣素原的試劑盒多次測定不 同樣本中降鈣素原的測定結(jié)果，以及在同等條件下與化學發(fā)光法測定結(jié)果的對比分析。從 相關性實驗結(jié)果可見，本試劑盒與化學發(fā)光檢測結(jié)果相關性很好，相關方程y=〇.7381x+ 0.06，R 2=0.9933,從結(jié)果可以看出本試劑盒結(jié)果準確性可靠，相關性良好，可以應用于降鈣 素原(PCT)的檢測。
【主權(quán)項】
1. 一種測定降鈣素原的試劑盒，該試劑盒由試劑R1和試劑R2雙液體組分組成，其特征 在于:所述的試劑R1為加有抗人類風濕因子抗體、無機鹽離子、防腐劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑 和加速劑的緩沖液;所述的試劑R2為加有乳膠包被抗人降鈣素原抗體、無機鹽離子、穩(wěn)定劑 、防腐劑的緩沖液。2. 如權(quán)利要求1所述的一種測定降鈣素原的試劑盒，其特征在于:所述的緩沖液為Tris 緩沖液、MOPS緩沖液、PBS緩沖液、MES緩沖液、甘氨酸緩沖液中的一種或多種組合而成;所述 的無機鹽離子為氯化鈉、氯化鉀、硫酸鉀中的一種或多種組合而成;所述的加速劑為聚乙二 醇-2000、聚乙二醇-6000、聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯烷酮中的一種或幾種;所述的穩(wěn)定劑 為牛血清白蛋白、甘油、蔗糖、海藻糖、EDTA中的一種或多種組合而成。3. 如權(quán)利要求1所述的一種測定降鈣素原的試劑盒，其特征在于：所述的防腐劑為苯 酚、苯甲酸鈉、疊氮鈉中的一種或多種組合而成;所述的表面活性劑為吐溫系列、聚氧乙烯 苯基醚、聚氧乙烯月桂醚系列中的一種或多種組合而成。4. 如權(quán)利要求1所述的一種測定降鈣素原的試劑盒，其特征在于:所述的乳膠包被抗人 降鈣素原抗體含有功能部位的完整抗體或抗體片段，或為兔抗人多克隆抗體或羊抗人多克 隆抗體，或為兔抗人單克隆抗體或羊抗人單克隆抗體;所述的乳膠包被抗人降鈣素原抗體 的粒徑在40~500nm之間。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測定降鈣素原的試劑盒，其特征在于:所述的彼此獨立的 試劑R1和試劑R2雙液體組分，包括的成分及相應含量為： 試劑R1: Tris緩沖液 30~130 mmol/L 氯化鈉 100~300 mmol/L 聚乙二醇-6000 10-40 g/L EDTA 10~70 mmol/L 吐溫-80 0.5-1.5 mL/L 疊氮鈉 0.4~0.9 g/L 抗人類風濕因子抗體 0.2~1.8 g/L 其溶劑為純化水； 試劑R2: Tris緩沖液 50~150 mmol/L 牛血清白蛋白 14~56 g/L 氯化鈉 40~180 mmol/L 疊氮鈉 0.4~0.9 g/L 乳膠包被抗人降鈣素原單克隆抗體 2~6 g/L 其溶劑為純化水。6. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種測定降鈣素原的試劑盒，其特征在于:所述的試劑盒的的 制備和使用方法包括以下步驟： (a)按照下列組分含量配制好R1試劑： Tris緩沖液 30~130 mmol/L 氯化鈉 100~300 mmol/L 聚乙二醇-6000 10-40 g/L EDTA 10~70 mmol/L 吐溫-80 0.5-1.5 mL/L 疊氮鈉 0.4~0.9 g/L 抗人類風濕因子抗體 0.2~1.8 g/L 其溶劑為純化水； (b) 按照下列組分含量配制好R2試劑： Tris緩沖液 50~150 mmol/L 牛血清白蛋白 14~56 g/L 氯化鈉 40~180 mmol/L 疊氮鈉 0.4~0.9 g/L 乳膠包被抗人降鈣素原單克隆抗體 2~6 g/L 其溶劑為純化水； (c) 將待測樣本與試劑R1混合，使其充分反應； (d )將步驟(c )的混合產(chǎn)物中加入試劑R2; (e) 用全自動生化分析儀測定反應后的吸光度差值； (f) 根據(jù)吸光度變化值計算出樣本中的降鈣素原的值。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種測定降鈣素原的試劑盒的制備和使用方法，其特征在于： 步驟(c)中所述的試劑R1與試劑R2的體積比為3 :1。8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種測定降鈣素原的試劑盒的制備和使用方法，其特征在于： 步驟(c)中所述的待測樣本與試劑R1和試劑R2的總體積的體積比在1:10到1:50之間。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測定降鈣素原的試劑盒，其特征在于:所述的乳膠包被抗 人降鈣素原抗體的配制方法如下： (a) 將粒徑為80nm的膠乳顆粒，用50 mmol/L的MES緩沖液稀釋膠乳顆粒到4.0 g/L，每 mL溶液中加入EDAC 1.0 mg，室溫反應2小時，在離心機內(nèi)20000 rpm轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去 上清，將沉淀懸浮于50 mmol/L的MES緩沖液中，超聲分散； (b) 將步驟(a)的產(chǎn)物在離心機內(nèi)20000 rpm轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，棄上清，將沉淀懸浮于 50 mmol/L的MES緩沖液中，使得膠乳顆粒最終濃度為4g/L，超聲分散，邊攪拌邊加入等體積 的含抗人降鈣素原抗體的MES稀釋液，混合攪拌，室溫反應2小時，膠乳顆粒最終濃度為4.0 g/L, (c) 將步驟(b)的產(chǎn)物在離心機內(nèi)20000 rpm轉(zhuǎn)速離心30分鐘，棄上清，沉淀懸浮于50 mmo 1 /L的MES緩沖液中，膠乳顆粒最終濃度為4.0 g/L，然后超聲分散，加入BSA，4°C封閉過 夜;離心去上清，用步驟(b)制得的分散液溶解膠乳顆粒，使膠乳顆粒終濃度為4.0 g/L，超 聲分散后制得乳膠包被抗人降鈣素原抗體。
【文檔編號】G01N33/68GK106018816SQ201610359610
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月27日
【發(fā)明人】蔡曉輝, 莊慶華, 吳錚, 徐運
【申請人】安徽伊普諾康生物技術(shù)股份有限公司