本發(fā)明屬于疫苗檢測
技術領域：
，具體涉及一種豬瘟基因工程亞單位疫苗效力檢驗方法。
背景技術：
：豬瘟(slassicalswinefever，CFS)以出血和發(fā)熱為主要特征，呈急性或慢性經(jīng)過，是一種對豬危害性極大的傳染病，被國際獸疫局列為A類動物傳染病。目前使用的弱毒疫苗主要是中國豬瘟兔化弱毒疫苗、日本GPE疫苗和法國的Thireval疫苗。20世紀70年代后期，豬瘟的流行形式發(fā)生了很大變化。地區(qū)散發(fā)性流行及非典型豬瘟癥狀的發(fā)生，特別是近年來國內外應用單克隆抗體對C-株檢測時發(fā)現(xiàn)有不同的反應模式，豬瘟免疫屢屢失敗等，表明豬瘟病毒的抗原性可能存在著變異，從而有人對傳統(tǒng)弱毒疫苗提出了質疑。隨著傳代次數(shù)的增加和對不同細胞的適應性繁殖，疫苗毒株可能發(fā)生異質性或抗原漂移加之數(shù)十年來CSFV在大規(guī)模免疫接種壓力下可能出現(xiàn)抗原變異。這些情況都表明，現(xiàn)有的傳統(tǒng)疫苗已不能適應新形勢的需要，研究和開發(fā)新型豬瘟疫苗機是大勢所趨。分子生物學技術的興起和發(fā)展，為新型豬瘟疫苗的研究和開發(fā)奠定了基礎。基因缺失弱毒疫苗、亞單位疫苗和活載體疫苗是目前研究的熱點。豬瘟病毒基因工程亞單位疫苗屬于滅活疫苗，由于采用靶動物(豬)進行免疫攻毒，存在檢測周期長(約51天)，需要進行強毒(豬瘟病毒石門系)攻擊檢驗，急需建立一種替代動物或其他的效力檢驗方法用于滅活疫苗的效力檢驗，以解決縮短檢測周期，節(jié)約檢測成本，提高生物安全等問題。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)所要解決的技術問題是針對現(xiàn)有技術存在的不足，而提供一種豬瘟病毒基因工程亞單位疫苗效力檢驗方法，可替代用豬進行免疫攻毒的效力檢驗，從而縮短檢測周期，并減少成本，從而彌補現(xiàn)有亞單位疫苗效力檢驗的空白。為了實現(xiàn)上述技術目的，本發(fā)明采用如下技術方案：本發(fā)明的豬瘟基因工程亞單位疫苗效力檢驗方法，包括以下步驟：1)取健康的易感家兔作為檢驗對象，按照體重、性別隨機分為對照組和免疫組，免疫組至少設有2個平行組；2)對免疫組家兔進行注射，注射待檢測的豬瘟基因工程亞單位疫苗，而對照組的家兔不注射任何物質；注射疫苗的家兔和對照組的家兔按照正常飼養(yǎng)方式飼養(yǎng)；3)步驟2)注射疫苗19日后，免疫組和對照組的家兔每日測溫一次；21日后，免疫組和對照組的家兔均注射脾淋源豬瘟活疫苗，注射疫苗后每6小時測溫一次，共測72小時；4)根據(jù)步驟3)注射脾淋源豬瘟活疫苗前后家兔體溫的變化，判定豬瘟基因工程亞單位疫苗是否達到保護作用，家兔體溫變化不超過1℃時判定為達到保護作用。優(yōu)選的，步驟1)中，所述的易感家兔，為豬瘟病毒ELISA抗體為陰性的家兔。優(yōu)選的，步驟1)中，所述的易感家兔，體重為1.5-3.0kg。優(yōu)選的，步驟1)中，所述的對照組不設平行組；所述的免疫組設有平行組，每個平行組設立的家兔只數(shù)與對照組相同。優(yōu)選的，步驟2)中，所述的豬瘟基因工程亞單位疫苗為293T-E2疫苗。本發(fā)明的方法在對豬瘟病毒基因工程亞單位疫苗進行效力檢測時，可用家兔來替代豬進行免疫攻毒的效力檢驗，由于檢驗動物家兔易獲得，節(jié)約檢驗成本，且檢驗周期短(約24天)，不涉及用豬瘟強毒攻擊，生物安全性高。具體實施方式本發(fā)明采用健康易感家兔免疫豬瘟基因工程亞單位疫苗，免疫后一定時間攻毒，通過兔體反應熱判定疫苗的免疫效果，從而有效的節(jié)約檢驗成本，且縮短了檢驗周期。下面結合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明。實施例1：一種豬瘟基因工程亞單位疫苗效力檢驗方法，包括以下步驟：(1)取健康的易感(瘟病毒ELISA抗體均為陰性)家兔(體重為1.5-3.0kg)作為檢驗對象，按照體重、性別，將20只家兔隨機分為4組，每組5只，3組作為免疫組，分別免疫201401、201402、201403批豬瘟病毒基因工程亞單位疫苗(293T-E2)，1組作為對照組；(2)對免疫組家兔的頸部進行皮下靜脈注射，注射豬瘟病毒基因工程亞單位疫苗(293T-E2)(0.2ml/只)，而對照組的家兔不注射任何物質；注射疫苗的家兔和對照組的家兔按照正常飼養(yǎng)方式飼養(yǎng)；(3)步驟(2)注射疫苗19日后，免疫組和對照組的家兔每日測溫一次；21日后，免疫組和對照組的家兔均兔耳靜脈注射脾淋源豬瘟活疫苗(1.0ml/只)，注射疫苗后每6小時測溫一次，共測72小時；(4)根據(jù)步驟(3)注射脾淋源豬瘟活疫苗前后家兔體溫的變化，判定豬瘟病毒基因工程亞單位疫苗(293T-E2)是否達到保護作用，家兔體溫變化不超過1℃時判定為達到保護作用。結果如表1所示：表2：豬瘟病毒基因工程亞單位疫苗(293T-E2)對家兔的保護作用分組動物種類動物數(shù)量保護率不保護率201401批免疫組家兔5只100％0％201402批免疫組家兔5只100％0％201403批免疫組家兔5只100％0％對照組家兔5只0％100％由表1、表2可知，家兔注射豬瘟病毒基因工程亞單位疫苗(293T-E2)免疫后21日，再次被病毒攻擊后，3批疫苗免疫家兔均無體溫反應，保護率達到100％，而對照組5只家兔在攻毒后30小時，體溫開始升高1.0℃以上，稽留12小時以上，保護率為0。實施例2：實施例1中所述的豬瘟基因工程亞單位疫苗(293T-E2)效力檢驗方法，以豬進行免疫攻毒的效力檢驗時：取健康易感(瘟病毒PCR檢測陰性，ELISA抗體為陰性)的35-60日齡豬20頭，隨機分成4組，每組5頭；1-3組為免疫組，各頭頸部肌肉注射201401、201402、201403批豬瘟病毒基因工程亞單位疫苗(293T-E2)1.0ml/頭；第4組為對照組。免后35日，所有豬注射豬瘟病毒石門系強毒1.0ml/頭；攻毒前2日每日測量豬體溫兩次，攻毒后日測溫兩次，共測16日，觀察攻毒豬的臨床表現(xiàn)(眼結膜炎、食欲下降或食欲廢絕、便秘和腹瀉交替出現(xiàn)、精神沉郁)。根據(jù)攻毒前2日及攻毒后測溫和臨床觀察綜合判定，體溫變化不超過1℃時且無臨床表現(xiàn)判定為達到保護作用。結果如表表3、表4、表5所示：表3：攻毒豬臨床觀察和剖檢統(tǒng)計表注：“√”表示出現(xiàn)此癥狀或有體溫反應；“-”表示無此癥狀或無體溫反應。表5：豬瘟基因工程亞單位疫苗(293T-E2)對30-60日齡豬保護作用分組動物種類動物數(shù)量保護率不保護率201401批免疫組30-60日齡豬5頭100％0％201402批免疫組30-60日齡豬5頭100％0％201403批免疫組30-60日齡豬5頭100％0％對照組30-60日齡豬5頭0％100％上述的結果表明，3批疫苗免疫豬后，用強毒攻擊，測溫16日體溫未見明顯變化，臨床未見眼結膜炎、精神沉郁等癥狀，均健活，保護率均為100％，對照組攻毒后5/5發(fā)病，5/5死亡。根據(jù)以上試驗結果可見，用家兔進行免疫攻毒和用豬進行免疫攻毒結果是一致的。上述實例只是為說明本發(fā)明的技術構思以及技術特點，并不能以此限制本發(fā)明的保護范圍。凡根據(jù)本發(fā)明的實質所做的等效變換或修飾，都應該涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內。當前第1頁1 2 3