本發(fā)明涉及農(nóng)藥安全性評價領(lǐng)域，具體涉及一種玉米中農(nóng)藥殘留污染的檢驗方法。
背景技術(shù)：
煙嘧磺隆系日本石原產(chǎn)業(yè)公司發(fā)現(xiàn)，1987-1988年與杜邦公司聯(lián)合開發(fā)的磺酰脲類除草劑品種，它以商品名Accent1991年在美國銷售，1996年注冊用于甜玉米。煙嘧磺隆進入我國已有十余年，由于其用量低，效果好，很受歡迎。
該藥劑是內(nèi)吸傳導型磺酰脲類除草劑，可通過植物莖葉及根部吸收并迅速在木質(zhì)部和韌皮部傳導，通過抑制乙酰乳酸合成酶的活性，阻礙支鏈氨基酸的合成，從而影響植物細胞分裂，使雜草停止生長，最終死亡。雜草吸收藥劑后會很快停止生長，一般在施藥后4～5天出現(xiàn)毒害癥狀，受害癥狀為心葉變黃、失綠，葉梢、葉鞘紫紅色。一年生雜草20天左右死亡，6葉以上多年生闊葉雜草受抑制，停止生長，高劑量可致死。
但是隨著除草劑煙嘧磺隆的廣泛應用，近年來煙嘧磺隆對當茬作物藥害和殘留藥害比較突出。某些地區(qū)施用煙嘧磺隆后，一些玉米常規(guī)種植品種產(chǎn)生了較嚴重的藥害。玉米3～5期葉噴施煙嘧磺隆后5～10d玉米心葉褪綠、變黃，或葉片出現(xiàn)不規(guī)則的褪綠斑。有的葉片卷縮成筒狀，葉緣皺縮，心葉牛尾狀，不能正常抽出。玉米生長受到抑制，植株矮化，并且可能產(chǎn)生部分叢生、次生莖。藥害輕的可恢復正常生長，嚴重的影響產(chǎn)量。
殘留除草劑對后茬敏感作物的危害是長殘留除草劑使用中的一個突出問題。土壤中殘留除草劑咪草煙、二甲戊樂靈、闊草清、煙嘧磺隆等除草劑已經(jīng)對后茬敏感作物造成了危害。土壤中殘留除草劑藥害的安全性評價對后茬作物的種植具有重要意義。
評價除草劑對作物安全性可以使用生物測定和化學方法。生物測定周期長，耗時?；瘜W方法具有快速靈敏的優(yōu)點。然而，由于土壤理化性質(zhì)(pH，有機質(zhì)含量等)不同，不同土壤中除草劑具有不同的生物有效性，傳統(tǒng)的基于總濃度測定并計算獲得的植物毒性指標(EC50或IC50)通常因土壤類型不同而不同，相互之間不具可比性。因此，開發(fā)一種能直接測定對植物有效濃度的化學方法，建立能獲得對不同土壤具有可比性的殘留除草劑植物毒性評價方法，對準確快速預測土壤中殘留除草劑對后茬作物的危害具有重要的現(xiàn)實意義。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供了一種玉米中農(nóng)藥殘留污染的檢驗方法，能快速預測土壤中煙嘧磺隆的植物毒性。
一種玉米中農(nóng)藥殘留污染的檢驗方法，包括：
(1)將一組濃度呈梯度分布的煙嘧磺隆溶液噴灑在一組試驗土壤中，噴灑后在試驗土壤上播種玉米；
(2)噴灑后1天收集所有土壤的原位孔隙水，測定原位孔隙水中的煙嘧磺隆濃度；培養(yǎng)若干天后，測定玉米株高；最后擬合得到玉米株高和所述原位孔隙水中煙嘧磺隆濃度的劑量效應曲線方程和玉米株高抑制率為50％時的原位孔隙水中煙嘧磺隆濃度IC50；
(3)測定待測土壤原位孔隙水中的煙嘧磺隆濃度，根據(jù)所述的劑量效應曲線方程預測該種土壤種植玉米的株高抑制率。
玉米株高抑制率為50％即指噴灑煙嘧磺隆后的土壤中種植的玉米株高為空白對照組玉米株高的一半。
步驟(1)中所述試驗土壤噴灑煙嘧磺隆后含水量為土壤最大持水量的70～75％。
土壤最大持水量又稱土壤飽和持水量，即土壤全部孔隙充滿水時所保持的水量，步驟(1)中試驗土壤的含水量通過控制噴灑煙嘧磺隆溶液的量來控制，同時設(shè)置空白對照組，空白對照組土壤的含水量通過噴灑與煙嘧磺隆溶液用量相同的水來控制。
步驟(1)中所述噴灑有煙嘧磺隆的試驗土壤中煙嘧磺隆的濃度在0.25～16mg/kg之間呈梯度增長，在控制種植玉米的土壤的含水量滿足試驗要求的前提下通過調(diào)整煙嘧磺隆溶液中煙嘧磺隆的濃度，使試驗土壤中煙嘧磺隆的濃度在0.25～16mg/kg之間呈梯度增長，一般呈兩倍梯度增長，即所述試驗土壤中煙嘧磺隆的濃度設(shè)置為0.25、0.5、1、2、4、8和16mg/kg。
所述原位孔隙水采用離心過濾收集。具體為：取土壤在21～25℃下離心力8000×g離心80min。直接取所述土壤放入超濾離心管內(nèi)部的過濾裝置中，在上述條件下過濾，得到所述原位孔隙水，方法簡單，方便快捷。
所述原位孔隙水中煙嘧磺隆的測定采用高效液相色譜，方便快捷，只需設(shè)置好高效液相色譜的檢測條件和標樣，就能快速的一一檢測出原位孔隙水中煙嘧磺隆的濃度，高效液相色譜的檢測條件為：色譜柱：4.6mm(id)×250mm，Eclipse XDB-C18，粒徑5μm；流動相：乙腈：水(0.1％甲酸)＝35:65；流速：1mL/min；檢測波長：240nm；進樣量：20μL；柱溫：30℃。以煙嘧磺隆為標樣。
步驟(1)中所述玉米的種植條件為：溫度25±1℃，光周期14～16h/d，光照強度350～400μE/m2/s，濕度為75～85％。試驗組和對照組在同樣的種植條件中培養(yǎng)，其培養(yǎng)時間可以可根據(jù)檢測需要進行調(diào)整，一般培養(yǎng)14～16天。
本發(fā)明的有益效果：
本發(fā)明以煙嘧磺隆為目標除草劑，采用離心過濾裝置直接分離土壤原位孔隙水并采用HPLC測定其中的煙嘧磺隆濃度，以原位孔隙水中煙嘧磺隆濃度為基準建立適用于不同類型土壤的殘留煙嘧磺隆對玉米毒性評價方法。該方法操作簡單，快速，根據(jù)煙嘧磺隆在一種土壤中的劑量效應曲線和未知土壤中原位孔隙水濃度，能快速預測未知土壤中煙嘧磺隆的植物毒性。
具體實施方式
為了便于本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，下面將結(jié)合實施例對本發(fā)明進行進一步描述。
實施例1
(1)土壤采集
5種土壤采自浙江蕭山、金華、華家池校區(qū)、江西南昌和黑龍江省伊春市，均為0～20cm表層土，采集的新鮮土壤，風干后過2mm篩置于常溫下(20～25℃)備用。
(2)土壤處理
稱取200g干重的各種土壤于塑料盆中，用塑料噴壺噴灑一定量煙嘧磺隆水溶液，攪拌使煙嘧磺隆和土壤充分混勻，使土壤含水量為最大持水量的70％，最終含水量分別為：蕭山土24％；金華土22％；江西土24％；華家池土28％；黑龍江土30％。
根據(jù)生物測定預備試驗，煙嘧磺隆在不同土壤中的添加濃度為：蕭山土壤0，0.25，0.5，1，2，4mg/kg；江西、金華、華家池土壤0，0.5，1，2，4，8mg/kg；黑龍江土壤0，1，2，4，8，16mg/kg。處理土壤轉(zhuǎn)移到體積約為0.5L花盆后，用錫箔紙覆蓋后于25℃平衡24h。
(3)植物生物測定
將5粒發(fā)芽的玉米種子均勻地種植于花盆中，種植深度約為1cm，再用處理土壤覆蓋種子。種植玉米的花盆放置于人工氣候培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)條件為溫度(25±1)℃，光周期16h:8h(光照∶黑暗)，光照強度為350μE/m2/s，濕度為80％，培養(yǎng)14天。
(4)土壤原位孔隙水濃度測定
取土樣20.0g放入超濾離心管內(nèi)部的過濾裝置中，在離心力，21℃條件下離心(8000×g，80min)收集原位孔隙水直接用于高效液相色譜檢測。
進一步地，用logistic曲線擬合發(fā)現(xiàn)，煙嘧磺隆對玉米株高抑制率與原位孔隙水中煙嘧磺隆濃度的相關(guān)性較土壤中煙嘧磺隆總濃度顯著提高，由此表明原位孔隙水中煙嘧磺隆濃度代表土壤中對植物有效的除草劑濃度，可以用來檢測土壤中殘留的藥害。
根據(jù)煙嘧磺隆在一種土壤中對玉米株高的抑制曲線圖和未知土壤中原位孔隙水濃度，能快速預測未知土壤中煙嘧磺隆的植物毒性。例如根據(jù)蕭山、金華、江西和華家池土壤中原位孔隙水濃度和玉米株高抑制率計算劑量效應方程為Y＝1.69x-0.24，Y為概率值，x為濃度對數(shù)，根據(jù)方程預測黑龍江土壤中玉米株高抑制率為：3.60％、8.10％、20.47％、43.04％、68.99％，測定值為：7.98％、13.07％、19.75％、37.91％和71.62％，預測準確率較高。
上述方法檢測的是土壤中煙嘧磺隆對玉米株高的毒性，還可以檢測對玉米發(fā)芽率、鮮重等的毒性。