本發(fā)明涉及化學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種穿心蓮片中有效成分含量的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

穿心蓮片主要成分為穿心蓮，輔料是淀粉、硬脂酸鎂。在穿心蓮中有四種內(nèi)酯成分：去氧穿心蓮內(nèi)酯、穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯。穿心蓮內(nèi)酯和總內(nèi)酯是臨床普遍使用的成分，其主要藥理學(xué)活性為抗過(guò)敏，抗HIV病毒，抗炎癥和抗感染作用。穿心蓮?fù)ǔＲ云鋬?nèi)含穿心蓮內(nèi)酯為標(biāo)準(zhǔn)，一般是4～6%。因此，準(zhǔn)確測(cè)定穿心蓮片有效成分——穿心蓮內(nèi)酯的含量，是正確評(píng)價(jià)穿心蓮片質(zhì)量的重要指標(biāo)。

目前，缺少一種操作簡(jiǎn)便、精密、穩(wěn)定性好的穿心蓮片中穿心蓮內(nèi)酯有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定方法，能夠快速、準(zhǔn)確地測(cè)定及評(píng)價(jià)穿心蓮片的質(zhì)量。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種精密度高、穩(wěn)定性好的穿心蓮片中有效成分含量的檢測(cè)方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種穿心蓮片中有效成分含量的檢測(cè)方法，包括以下步驟：

（1）取穿心蓮片10片，除去包衣，研細(xì)，得穿心蓮粉末；精確稱(chēng)取穿心蓮粉末0.02～0.5g得樣品，將樣品放入熱解杯中；

（2）對(duì)樣品進(jìn)行快速熱解，熱解溫度為85～95℃，熱解時(shí)間為3～5min，得到熱解后的樣品；

（3）往熱解后的樣品中加入10ml甲醇，稱(chēng)定重量，經(jīng)超聲脫氣處理后放涼，用甲醇補(bǔ)足至原重量，搖勻后過(guò)濾，得供試品溶液；

（4）采用高效液相色譜法對(duì)供試品溶液進(jìn)行測(cè)定；

（5）根據(jù)測(cè)定的色譜數(shù)據(jù)，定性樣品中有效成分的色譜峰，并獲得樣品中有效成分的相對(duì)含量。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述的步驟（3）中，超聲脫氣處理功率為280～300W，頻率為35kHz，時(shí)間為30～35min。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述的步驟（4）中，高效液相色譜的工作條件為：色譜柱選用十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，尺寸為4.60×250mm，填料粒徑為5μm；流動(dòng)相由流動(dòng)相A、流動(dòng)相B和流動(dòng)相C按照一定的體積百分比組成，其中流動(dòng)相A為0.1%甲酸，流動(dòng)相B為乙腈，流動(dòng)相C為水，采用梯度洗脫程序：0～3min，A、30～60%，B、30～60%，C、10～30%；3～8min，A、25%，B、65%，C、10%；8～12min，A、65%，B、25%，C、10%；流速0.5～1.0ml/min；柱溫40～45℃；進(jìn)樣量10μL。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述的水為雙蒸水。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述的步驟（5）中，有效成分的色譜峰的定性采用NIST軟件的自動(dòng)匹配計(jì)算。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述的步驟（5）中，有效成分的相對(duì)含量采用面積歸一化方法進(jìn)行計(jì)算。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明先對(duì)樣品進(jìn)行熱裂解，再利用高效液相色譜法得到色譜數(shù)據(jù)，通過(guò)對(duì)該色譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析、計(jì)算，測(cè)定得到的穿心蓮片中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，且試驗(yàn)時(shí)間短，精密度高、所需樣品量少，實(shí)現(xiàn)了穿心蓮片中有效成分含量的快速和準(zhǔn)確檢測(cè)，適用于穿心蓮片的質(zhì)量控制。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

實(shí)施例1

本發(fā)明實(shí)施例中，一種穿心蓮片中有效成分含量的檢測(cè)方法，包括以下步驟：

（1）取穿心蓮片10片，除去包衣，研細(xì)，得穿心蓮粉末；用十萬(wàn)分之一分析天平精確稱(chēng)取穿心蓮粉末0.1g得樣品，將樣品放入熱解杯中；

（2）對(duì)樣品進(jìn)行快速熱解，熱解溫度為90℃，熱解時(shí)間為4min，得到熱解后的樣品；

（3）往熱解后的樣品中加入10ml甲醇，稱(chēng)定重量，經(jīng)DD80型超聲脫氣機(jī)超聲脫氣處理后放涼，用甲醇補(bǔ)足至原重量，搖勻后過(guò)濾，得供試品溶液；甲醇為一級(jí)色譜純（產(chǎn)地：天津四友精細(xì)化學(xué)品有限公司出品），超聲脫氣處理功率為285W，頻率為35kHz，時(shí)間為32min；

（4）采用高效液相色譜法對(duì)供試品溶液進(jìn)行測(cè)定；LC-10ATvp日本島津高效液相色譜儀，SPD-10Avp紫外檢測(cè)器，美國(guó)制造P/N（7725i）手動(dòng)進(jìn)樣器，浙江大學(xué)N-2000數(shù)據(jù)工作站，柱溫箱；高效液相色譜的工作條件為：色譜柱選用十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，尺寸為4.60×250mm，填料粒徑為5μm；流動(dòng)相由流動(dòng)相A、流動(dòng)相B和流動(dòng)相C按照一定的體積百分比組成，其中流動(dòng)相A為0.1%甲酸，流動(dòng)相B為乙腈，流動(dòng)相C為雙蒸水，采用梯度洗脫程序：0～3min，A、40%，B、40%，C、20%；3～8min，A、25%，B、65%，C、10%；8～12min，A、65%，B、25%，C、10%；流速0.65ml/min；柱溫42℃；進(jìn)樣量10μL；甲酸、乙腈均為分析純?cè)噭?/p>

（5）根據(jù)測(cè)定的色譜數(shù)據(jù)，采用NIST軟件的自動(dòng)匹配計(jì)算定性樣品中有效成分的色譜峰，并采用面積歸一化方法進(jìn)行計(jì)算獲得樣品中有效成分的相對(duì)含量。

1、精密度試驗(yàn)

取同一份樣品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算穿心蓮內(nèi)酯峰面積的RSD＝0.48%，脫水穿心蓮內(nèi)酯的峰面積RSD＝0.29%，表明該方法精密度良好。

2、穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，于0、2、4、8、l2、24h測(cè)定。結(jié)果24h內(nèi)穿心蓮內(nèi)酯的峰面積RSD＝0.47%（n＝6），脫水穿心蓮內(nèi)酯的峰面積RSD＝0.29%（n＝6），表明本品穩(wěn)定性良好。

3、重現(xiàn)性試驗(yàn)

取同一批樣品粉末6份，按上述方法測(cè)定，測(cè)得穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯的平均含量分別為23.5mg/g、49.9mg/g，RSD分別為1.12%、1.14%。

4、回收率試驗(yàn)

對(duì)照品溶液：各取穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品、脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品（穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品、脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品均從中國(guó)藥物生物制品檢定所購(gòu)買(mǎi)）適量，加甲醇制成含穿心蓮內(nèi)酯16.7g/ml和脫水穿心蓮內(nèi)酯10.1g/ml的對(duì)照品混合溶液，即得。

取上述已知含量的樣品粉末0.05g，精密稱(chēng)定，精密加入穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品溶液（0.84mg/ml）1ml，脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品溶液（1.03mg/ml）2ml，同法處理，按上述色譜條件進(jìn)樣，分別于272nm、288nm處測(cè)定吸收度，穿心蓮內(nèi)酯平均回收率為99.93%，RSD為1.02%，脫水穿心蓮內(nèi)酯平均回收率為99.63%，RSD為1.13%。

對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實(shí)施例的細(xì)節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。因此，無(wú)論從哪一點(diǎn)來(lái)看，均應(yīng)將實(shí)施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求而不是上述說(shuō)明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。

此外，應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說(shuō)明書(shū)按照實(shí)施方式加以描述，但并非每個(gè)實(shí)施方式僅包含一個(gè)獨(dú)立的技術(shù)方案，說(shuō)明書(shū)的這種敘述方式僅僅是為清楚起見(jiàn)，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)將說(shuō)明書(shū)作為一個(gè)整體，各實(shí)施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實(shí)施方式。