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一種胃泌素釋放肽前體化學發(fā)光免疫檢測試劑盒及其制備方法與流程

文檔序號:12611611閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種胃泌素釋放肽前體化學發(fā)光免疫檢測試劑盒,所述試劑盒包括:胃泌素釋放肽前體單克隆抗體包被的-納米磁微球、化學發(fā)光標記物、化學發(fā)光底物液、胃泌素釋放肽前體定標品。

2.根據(jù)權利要求1所述的試劑盒,其特征在于,所述胃泌素釋放肽前體單克隆抗體包被的固相載體為磁微粒。

3.根據(jù)權利要求1所述的試劑盒,其特征在于,所述胃泌素釋放肽前體單克隆抗體包被的固相載體為羧基化的粒徑為0.05-1um磁微粒。

4.根據(jù)權利要求1所述的試劑盒,其特征在于,所述化學發(fā)光標記物為吖啶酯、吖啶酯磺酰胺、吖啶酯甲苯磺酰胺、吖啶酯對甲基磺酰胺、吖啶酯三氟甲基磺酰胺。

5.根據(jù)權利要求1所述的試劑盒,其特征在于,所述化學發(fā)光標記物優(yōu)選吖啶酯。

6.根據(jù)權利要求1所述的試劑盒,其特征在于,所述化學發(fā)光底物液包括化學發(fā)光激發(fā)液、化學發(fā)光預激發(fā)液。

7.根據(jù)權利要求1所述的試劑盒,其特征在于,所述化學發(fā)光預激發(fā)液為質(zhì)量分數(shù)0.005% ~ 0.5%的雙氧水(H2O2)溶液,激發(fā)液為0.005mol/L ~ 0.025mol/L的氫氧化鈉(NaOH)溶液。

8.根據(jù)權利要求1所述的試劑盒,其特征在于,所述胃泌素釋放肽前體定標品為用標準品緩沖液將胃泌素釋放肽前體配制成濃度為0 ng/mL、5 ng/mL、40ng/mL、200 ng/mL、1000 ng/mL、5000ng/mL,4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

9.根據(jù)權利要求1所述的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒的制備方法,其特征在于包括胃泌素釋放肽前體單克隆抗體包被的磁微粒的制備、胃泌素釋放肽前體衍生物標記的吖啶酯的制備、化學發(fā)光底物液的制備、胃泌素釋放肽前體定標品的制備。

10.根據(jù)權利要求1和權利要求9所述試劑盒的制備方法,其特征在于包括以下步驟:

1)胃泌素釋放肽前體單克隆抗體包被的磁微粒的制備:

取羧基化的納米磁珠懸浮液,磁分離去上清, MES緩沖液重懸,加入EDC水溶液,活化磁珠表面羧基,加入胃泌素釋放肽前體單克隆抗體,室溫下混懸2-10 h,磁分離,去除上清, Tris緩沖液重懸,得到胃泌素釋放肽前體單克隆抗體包被的磁微粒;可選的,羧基化納米磁珠直徑為0.1μm ~ 2.0μm;MES緩沖液濃度為10mM ~ 100mM,pH 5.5 ~ 8.5;

2)胃泌素釋放肽前體衍生物標記的吖啶酯的制備:

取胃泌素釋放肽前體衍生物,加入碳酸鹽緩沖液,混勻,然后加入吖啶酯混勻,室溫下避光反應,1-2 h后取出,離心脫鹽柱脫鹽處理,脫鹽過程中首先分別用純凈水及TBS緩沖液進行處理,最后加入得到的胃泌素釋放肽前體衍生物標記的吖啶酯溶液,收集離心管中的液體至保存管得到胃泌素釋放肽前體衍生物標記的吖啶酯;

3)胃泌素釋放肽前體定標品的制備:

用標準品緩沖液將胃泌素釋放肽前體配置成濃度為0 ng/mL、5 ng/mL、40ng/mL、200 ng/mL、1000 ng/mL、5000ng/mL,分裝凍干,4 ℃保存?zhèn)溆茫?/p>

4)化學發(fā)光預激發(fā)液的制備:

量取1.0升純化水,依次加入0.5 ~100uL質(zhì)量分數(shù)為20%的雙氧水(H2O2)、0.5 ~ 5克防腐劑、0.5 ~ 5克表面活性劑,搖勻后避光存放;可選的,防腐劑為商品化疊氮化鈉、PC300,表面活性劑為吐溫20、吐溫80、Triton X100、Triton 405;

5)化學發(fā)光激發(fā)液的制備:

量取1.0升純化水,依次加入0.2 ~ 1克氫氧化鈉、0.5 ~ 5克防腐劑、0.5 ~ 5克表面活性劑,搖勻后避光存放;可選的,防腐劑為商品化疊氮化鈉、PC300,表面活性劑為吐溫20、吐溫80、Triton X100、Triton 405。

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