專利名稱：Glp-1受體激動(dòng)劑和胃泌素的肽綴合物及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明尤其涉及某些肽綴合物和所述綴合物在治療多種疾病或異常(包括糖尿病(I型和/或2型)和糖尿病相關(guān)疾病或異常)中的用途。本申請(qǐng)要求美國(guó)專利No. 61/395，119和No. 61/470, 170的優(yōu)先權(quán)，它們的說(shuō)明書均通過(guò)整體引用并入本文。
背景技術(shù)：
糖尿病(尤其是I型和2型糖尿病)以及肥胖癥(被認(rèn)為是引起尤其是2型糖尿病的主要原因)是日益加重的全球性健康問(wèn)題?？捎晌粗委煹奶悄虿∫鸬募膊『筒“Y包·括心血管和外周動(dòng)脈疾病、微血管和大血管并發(fā)癥、中風(fēng)以及可能的某些類型的癌癥。糖尿病的特征在于血液葡萄糖水平的生理調(diào)節(jié)有缺陷，可導(dǎo)致糖尿病的病癥是胰β -細(xì)胞量和功能的減少或損失，伴隨內(nèi)源性膜島素廣生的減少或損失，和/或膜島素抵抗(對(duì)胰島素的敏感性降低)，即內(nèi)源性胰島素產(chǎn)生對(duì)血液葡萄糖水平進(jìn)行足夠調(diào)節(jié)的能力的降低或損失。胃腸粘膜應(yīng)答于腸中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的存在和吸收而分泌降低血液葡萄糖水平的多種激素。這些包括胰高血糖素樣肽-1 (glucagon-like peptide-1, GLP-1)、葡萄糖依賴性促膜島素妝(glucose-dependent insulinotropicpeptide, GIP)和分泌素。由加工胰高血糖素原(180個(gè)氨基酸的肽)的組織產(chǎn)生GLP-1 [參見(jiàn)，例如，0rsk()V, Diabetologia35 :701-711 (1992)][參見(jiàn)，例如，Drucker, Diabetes47 159-169(1998)]。胰高血糖素原的全部序列包含胰高血糖素的29個(gè)氨基酸序列，GLP-1的36或37個(gè)氨基酸序列以及胰高血糖素樣肽-2(GLP-2 ;促腸肽(intestinotrophicpeptide))的34個(gè)氨基酸序列。人GLP-1 (7_37)的氨基酸序列為HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAffLVKGRG(SEQ I D NO :114)。經(jīng)鑒定GLP-1具有許多功能。它是在正常人中增強(qiáng)葡萄糖刺激的胰島素分泌的激素(因此屬于稱為腸促胰島素激素的一類激素)。另外，GLP-1降低胰高血糖素濃度，延遲胃排空，刺激胰島素(原)的生物合成并且增強(qiáng)胰島素敏感性[參見(jiàn)，例如，Nauck, Horm. Metab. Res. 47 :1253-1258 (1997) ]。GLP-1 還在葡萄糖耐量降低(impairedglucosetolerance)的對(duì)象中增強(qiáng)胰β_細(xì)胞感應(yīng)和應(yīng)答(通過(guò)胰島素分泌)于葡萄糖的能力[參見(jiàn)，例如，Byrne, Eur. J. Clin.1nvest. 28 :72-78 (1998)]。人中 GLP-1 的促胰島素作用增加葡萄糖消失速率并且減少內(nèi)源性葡萄糖產(chǎn)生，這部分上由于胰島素水平的增力口，部分上由于胰島素敏感性的增強(qiáng)[參見(jiàn)，例如，D' Alessio, Eur. J. Clin.1nvest. 28 72-78(1994)]。然而，體內(nèi)天然GLP-1的短半衰期在將該激素開發(fā)成藥物嘗試中成為主要的藥理學(xué)挑戰(zhàn)。在人和大鼠中，GLP-1被二肽基肽酶IV(DPP-1V)迅速地降解成作為內(nèi)源性GLP-1受體拮抗劑的GLP-1 (9-36)酰胺。已經(jīng)提出了數(shù)個(gè)解決該問(wèn)題的策略，一些是使用DPP-1V的抑制劑，而另一些則使用GLP-1 (7-36)酰胺的DPP-1V抗性類似物。所謂的毒蜥外泌肽(Exendin)是另一類降低血液葡萄糖水平的肽，它們與 GLP-1 (7-36)有一些序列相似性(53 % )[參見(jiàn)，例如，Goke 等，J. Biol. Chem. 268 19650-19655(1993)]。毒蜥外泌肽發(fā)現(xiàn)于毒蜥科(Helodermatidae)物種(珠蜥)的唾液中。毒蜥外泌肽_3存在于珠毒蜥(Heloderma horridum)(墨西哥珠蜥)的唾液中，而毒蜥外泌肽-4存在于希拉毒蜥(Heloderma suspectum)(希拉蜥蜴)的唾液中。在2位和3位上與毒蜥外泌肽-3不同的毒蜥外泌肽-4的氨基酸序列為HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2(SEQ ID NO :115)。已報(bào)道毒蜥外泌肽-4對(duì)分離的大鼠胰島瘤細(xì)胞是強(qiáng)GLP-1受體激動(dòng)劑[Goke等，loc. cit. ]。W099/07404公開了在糖尿病db/db小鼠中系統(tǒng)性施用毒蜥外泌肽_4使血液葡萄糖水平降低40 %，還報(bào)道在糖尿病ob/ob小鼠中每日一次腹膜內(nèi)注射毒蜥外泌肽-4有長(zhǎng)期降低血液葡萄糖的作用[Grieg等，Diabetologia42 :45-50 (1999) ] US5, 424，286和W098/05351公開了毒蜥外泌肽_3、毒蜥外泌肽-4和毒蜥外泌肽激動(dòng)劑可用于治療糖尿病，用于減少胃運(yùn)動(dòng)和延遲胃排空，以及用于預(yù)防高血糖癥，W098/30231還公開了它們可用于減少食物攝取。肽激素胃泌素(Gastrin)由胃粘膜細(xì)胞和十二指腸G細(xì)胞分泌，該激素在人體中的主要生理作用是刺激胃酸(即HCl)分泌和幫助胃運(yùn)動(dòng)。胃泌素的其他確定作用包括刺激細(xì)胞生長(zhǎng)，一些證據(jù)表明胃泌素可在胰島新生中起作用，即促進(jìn)胰島中分泌胰島素的β -細(xì)胞的生長(zhǎng)[例如，參見(jiàn)，Korc, Μ.，]. Clin.1nvest. ,92 :1113-1114 (1993) ；Rooman 等Diabetes51 =686-690 (2002)]，從而有助于調(diào)節(jié)血液葡萄糖。胃泌素與另一種胃腸肽激素(膽囊收縮素(CCK))具有共同的受體。受體CCK-AR和CCK-B R對(duì)胃泌素和CCK變體具有不同的親和性。CCK-A R (或CCK Rl)主要作為硫酸化CCK的受體，而CCK-B R(或CCK R2)與CCK和胃泌素二者結(jié)合程度相同。由于在血漿中胃泌素比CCK水平更高，所以CCK-B R被認(rèn)為是“胃泌素受體” [Foucaud等Reg. Peptides145 :17-23(2008)]ο在結(jié)合配體后CCK-B R可起始數(shù)個(gè)細(xì)胞內(nèi)通路，這被認(rèn)為是CCK多種生理學(xué)作用的原因。CCK-B R的主要下游通路是MAPK(促分裂素原活化蛋白激酶(mitogen activatedprotein kinase))或 ERK(細(xì)胞外調(diào)節(jié)激酶(extra-cellular regulated kinase))通路，該通路也被數(shù)個(gè)生長(zhǎng)激素活化。這是胃泌素的細(xì)胞增殖作用的重要特性。由于CCK-B R在胰中表達(dá)，因此胃泌素能在該組織中促進(jìn)細(xì)胞增殖和胰島新生。在人中，胃泌素主要以三種形式出現(xiàn)，即胃泌素34、胃泌素17和胃泌素14(對(duì)應(yīng)所述序列中氨基酸的總數(shù))。還鑒定了胃泌素6。通過(guò)切割C末端酰胺化的胃泌素34產(chǎn)生較短的形式；因而胃泌素17由胃泌素34C末端最后17個(gè)殘基(對(duì)應(yīng)胃泌素原(55-71))組成，胃泌素14由胃泌素34C末端最后14個(gè)殘基(對(duì)應(yīng)胃泌素原(58-71))組成，胃泌素6僅由胃泌素34C末端最后6個(gè)殘基(對(duì)應(yīng)胃泌素原￠6-71))組成。胃泌素的酰胺化形式高親和性地結(jié)合至CCK-B R并且發(fā)揮細(xì)胞增殖功能。在人胃泌素17中，N末端氨基酸殘基是焦谷氨酸(PyroGlu)殘基。酰胺化的C末端6個(gè)氨基酸是重要的胃泌素受體結(jié)合殘基。W02005/072045特別公開對(duì)于已證明“GLP-1激動(dòng)劑”或“胃泌素化合物”對(duì)其有治療效果的病癥和/或疾病，認(rèn)為“GLP-1激動(dòng)劑”和“胃泌素化合物”的組合在它們的預(yù)防和/或治療中有益效果。W02007/095737特別公開對(duì)于已證明“毒蜥外泌肽激動(dòng)劑”或“胃泌素化合物”對(duì)其有治療效果的病癥和/或疾病，認(rèn)為“毒蜥外泌肽激動(dòng)劑”和“胃泌素化合物”的類似組合在它們的預(yù)防和/或治療中有益效果。在W02005/072045中給出的數(shù)據(jù)[來(lái)源于使用非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠的研究，該小鼠廣泛地用作人I型糖尿病的動(dòng)物模型]似乎表明，與單獨(dú)使用所研究的“GLP-1激動(dòng)劑”(或“胃泌素化合物”)時(shí)的效果相比，其中描述的某些“GLP-1激動(dòng)劑”/ “胃泌素化合物”組合對(duì)于使急性糖尿病NOD小鼠的血液葡萄糖水平正?；删哂杏幸嫘Ч?。W02007/095737中給出的數(shù)據(jù)[同樣來(lái)源于使用非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠的研究]似乎表明，與單獨(dú)使用所研究的“毒蜥外泌肽激動(dòng)劑”(或“胃泌素化合物”)時(shí)的效果相比，其中描述的某些“毒蜥外泌肽激動(dòng)劑” / “胃泌素化合物”組合對(duì)于使急性糖尿病NOD小鼠中的血液葡萄糖和胰島素水平正?；删哂杏幸嫘Чc單獨(dú)使用“GLP-1受體激動(dòng)劑”時(shí)的效果相比，其中描述的某些“GLP-1受體激動(dòng)劑”/胃泌素組合對(duì)于誘導(dǎo)胰島細(xì)胞再生可具有有益效果。W02005/072045和W02007/095737還公開了形成這樣的綴合物的可能性，其包含“GLP-1激動(dòng)劑”或“毒蜥外泌肽激動(dòng)劑”(分別地)與“胃泌素化合物”任選地通過(guò)中間接 頭或間隔物彼此共價(jià)偶聯(lián)或連接(即綴合)。作為合適的間隔物提及的是單糖或二糖、氨基酸、硫酸酯、琥珀酸酯、乙酸酯或者包含一種或更多種這種部分的寡聚聚合間隔物或接頭。還描述了可制備所研究類型的綴合物的預(yù)期方法。然而，在相應(yīng)國(guó)際申請(qǐng)?zhí)峤粫r(shí)，在所述文獻(xiàn)中沒(méi)有提供制備數(shù)據(jù)或其他數(shù)據(jù)以證實(shí)所研究類型的任何綴合物實(shí)際上已被制備并表征，或?qū)ζ渖飳W(xué)/生理學(xué)特性或活性進(jìn)行了測(cè)試。還可注意，W02005/072045或W02007/095737 二者都沒(méi)有提供任何體內(nèi)、體外或其他數(shù)據(jù)以證實(shí)其中分別描述的和使用的“GLP-1激動(dòng)劑”/ “胃泌素化合物”或“毒蜥外泌肽激動(dòng)劑”/ “胃泌素化合物”組合在治療例如2型糖尿病中可有益。發(fā)明概述現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，與將兩種單獨(dú)的所研究肽組合的治療活性相比，包含兩種共價(jià)偶聯(lián)或連接的肽部分的某些綴合物在治療例如糖尿病(I型和/或2型糖尿病)或多種其他糖尿病相關(guān)的疾病或異常中可出乎意料地顯示出高治療活性。在一個(gè)大的方面中，本發(fā)明提供了 GLP-1受體激動(dòng)劑和胃泌素(尤其是在15位具有選自LeU、Nle、Phe和Thr的替換的胃泌素)的肽綴合物。更特別地，本發(fā)明提供了毒蜥外泌肽-4和胃泌素的肽綴合物以及GLP-1和胃泌素的肽綴合物。因此在第一方面中，本發(fā)明提供了具有式I的肽綴合物R1-Z-L-Y-R2 (I)其中R1為H、Cy烷基、乙酰基、甲酰基、苯甲?；蛉阴；籖2 為 OH 或 NH2 ；Z包含具有以下序列的毒蜥外泌肽-4 (1-39) (Exendin-4 (1-39))序列或其類似物ZaHis-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-1le-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(SEQ ID NO :115)L是任選的接頭部分；以及Y包含具有以下序列的胃泌素17序列或其類似物Ya
Gln-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ala-Tyr-Gly-Trp-Y15-Asp-Phe (SEQ IDNO 116)其中Y15 選自 Leu、Nle、Phe 和 Thr0本發(fā)明還提供了肽綴合物，其中(i)相對(duì)于毒蜥外泌肽-4的序列，Za在多至10個(gè)位置上具有替換和/或包含I至12個(gè)氨基酸的C末端截短；和/或(ii)相對(duì)于胃泌素17的序列，Ya相對(duì)于胃泌素17(GaStrinl7)的序列在多至5個(gè)位置上具有替換和/或包含I至13個(gè)氨基酸的N末端截短。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了肽綴合物，其中
Za是具有式IIa的肽綴合物His-Z2-Z3-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Z9-Z10-Zll-Z12-Z13-Z14-Glu-Z16-Z17-Zl8-Z19-Z20-Z21-Z22-Z23-Z24-Z25-Z26-Z27-Z28-Z29-Z30-Z31-Z32-Z33-Z34-Z35-Z36-Z37-Z38-Z39(IIa)其中Z2 選自 Gly、Ala、Ser、Aib、Thr、Leu 和 lie ；Z3 選自 Glu 和 Asp ；Z9 選自 Asp 和 Glu ；ZlO 選自 Leu、Val、Ile 和 Ala ;Zll 選自 Ser 和 Aib ；Z12 選自 Ser、Gin、Arg、Cys、Lys、Glu 和 Orn ；Z13 選自 Arg、SerΛ Gin、Tyr 和 Glu ；Z14 選自 Gly、Cys、Phe、Tyr、Trp、Lys、Met、Leu、Nle 和 lie ；Z16 選自 Asp、Gly、Aib、Glu、Lys 和 Cys ；Z17 選自 Glu、Cys、Lys、Ser 和 Gln ；Z18 選自 Ala 和 Aib ；Z19 選自 Val、Leu、Ile 和 Ala ;Z20 選自 Arg、Lys、Cys、Orn 和 Glu ；Z21 選自 Leu 和 Glu;Z22 選自 Phe 和 Ala ；Z23 選自 Ile 和 Leu ；Z24 選自 Glu、Cys、Lys、Ala 和 Arg ；Z25 選自 Trp、Cys、Lys 和 Phe ；Z26 選自 Leu 和 Ile ;Z27 選自 lie、VaK Gin、Lys、Cys、Arg 和 Orn ；Z28 選自 Asn、Ser、Asp、Aib、Gin、Lys、Cys、Arg、Tyr、bAla、Glu、Orn 和 Leu，或缺失;Z29 選自 Gly、Aib 和 bAla，或缺失；Z30 選自 Gly、Cys、Lys 和 Arg，或缺失；Z31 選自 Pro、Ser 和 Asp，或缺失；
Z32選自Ser和Lys，或缺失；Z33 為 Ser，或缺失；Z34選自Gly和Lys，或缺失；Z35 為 Ala，或缺失；Z36 為 Pro，或缺失；·
Z37 為 Pro，或缺失；Z38 為 Pro，或缺失；Z39 為 Ser，或缺失；L為具有式IIb的肽序列L1-L2-L3-L4 (IIb)其中LI 選自 Ser> Ala、Lys> Orn> bAla、8Aoc、DBF、Peg3、Cys 和 Gin,或缺失；L2 選自 Ser> Ala、Lys> Orn> bAla、8Aoc、DBF、Peg3、Cys 和 Gin,或缺失；L3 選自 Ser> Ala、Lys> Orn> bAla、8Aoc、DBF、Peg3、Cys 和 Gin,或缺失；L4 選自 Ser> Ala、Lys> Orn> bAla、8Aoc、DBF、Peg3、Cys 和 Gin,或缺失；Ya為具有式IIc的肽序列Yl-Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Yg-Y10-Yl1-Yl2-Y13-Y14-Y15-Asp-Yl7(IIc)其中Yl 為 Gln，或缺失；Y2 為 Gly，或缺失；Y3 為 Pro，或缺失；Y4 為 Trp，或缺失；Y5 為 Leu，或缺失；Y6 為 Glu，或缺失；Y7 為 Glu，或缺失；Y8 為 Glu，或缺失；Y9 為 Glu，或缺失；YlO 為 Glu，或缺失；Yll 為 Ala，或缺失；Y12選自Ala和Tyr，或缺失；Y13選自Gly和Ala，或缺失；Y14 選自 Trp、Phe、INal 和 Met ;Y15 選自 Leu、Nle、Phe 和 Thr ；以及Y17選自Phe和3_ (3_吡啶基)-丙氨酸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了肽綴合物，其中Za是具有式IIIa的肽序列His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Z9-Leu-Ser-Z12-Z13-Z14-Glu-Z16-Glu-Ala-Val-Z20-Leu-Phe-1le-Z24—Z25-Leu-Z27-Z28(IIIa)其中
Z9 選自 Asp 和 Glu;Z12 選自 Lys、Arg 和 Orn ;Z13 選自 Gln 和 Tyr ；Z14 選自 Met 和 Leu ；Z16 選自 Glu、Cys 和 Lys ；Z20 選自 Arg、Lys 和 Orn ；Z24 選自 Lys 和 Glu ;Z25 選自 Trp、Lys、Cys 和 Phe ; Z27 選自 Lys、Arg 和 Orn ；Z28選自Asn和Asp，或缺失;L是具有式IIIb的肽序列Ll-L2-L3-L4-(IIIb)其中LI 選自 Orn、Peg3、Cys、Lys 和 Gln,或缺失；L2 選自 Orn、Peg3、Cys、Lys 和 Gln,或缺失；L3 選自 Orn、Peg3、Cys、Lys 和 Gln,或缺失；L4 選自 Orn、Peg3、Cys、Lys 和 Gln,或缺失；Ya是具有式IIIc的肽序列Y12-Y13-Y14-Y15-Asp-Y17 (IIIc)其中Y12選自Tyr和Ala，或缺失；Y13選自Gly和Ala，或缺失；Y14 選自 Trp、INal 和 Phe ;Y15 選自 Leu、Nle、Thr 和 Phe ;以及Y17選自Phe和3_ (3_吡啶基)-丙氨酸。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了肽綴合物，其中Za是具有式IVa的肽序列His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Z9-Leu-Ser-Z12-Gln-Met-Glu-Z16-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-1le-Glu-Trp-Leu-Z27-Z28 (IVa)其中Z9 選自 Glu 和 Asp;Z12 選自 Lys 和 Orn ;Z16 選自 Glu 和 Lys ;Z27 選自 Lys 和 Orn ；Z28選自Asn和Asp，或缺失；L是具有式IVb的肽序列L1-L2-L3-L4(IVb)其中LI 選自 Orn> Peg3、Cys、Lys 和 Gln,或缺失；
L2 選自 Orn、Peg3、Cys、Lys 和 Gin,或缺失；L3 選自 Orn> Peg3、Cys、Lys 和 Gin,或缺失；L4 選自 Orn> Peg3、Cys、Lys 和 Gin,或缺失；Ya是具有式IVc的肽序列YI2-YI3-Trp-Leu-Asp-Phe(IVc)其中Y12為Tyr，或缺失；以及Y13 為 Gly，或缺失。·在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了肽綴合物，其中Za為具有式Va的肽序列HiS-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Z9-Leu-Ser-ZI2-Tyr-Leu-Glu-Z16-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-1le-Glu-Phe-Leu-Z27-Z28(Va)其中Z9 選自 Glu 和 Asp ；Z12 選自 Lys 和 Orn ；Z16 選自 Glu 和 Lys ；Z27 選自 Lys 和 Orn ；Z28選自Asn和Asp，或缺失；L為具有式Vb的肽序列L1-L2-L3-L4 (Vb)其中LI 選自 Orn、Peg3、Cys、Lys 和 Gln,或缺失；L2 選自 Orn、Peg3、Cys、Lys 和 Gln,或缺失;L3 選自 Orn、Peg3、Cys、Lys 和 Gln,或缺失；L4 選自 Orn、Peg3、Cys、Lys 和 Gln,或缺失;Ya為具有式Vc的肽序列YI2-YI3-Trp-Leu-Asp-Phe(Vc)其中Y12為Tyr，或缺失；以及Y13 為 Gly，或缺失。另外，本發(fā)明提供了肽綴合物，其中所述式I的肽序列包含一個(gè)或更多個(gè)分子內(nèi)橋。另外，本發(fā)明提供了肽綴合物，其中所述分子內(nèi)橋在兩個(gè)氨基酸殘基的側(cè)鏈之間形成，所述兩個(gè)氨基酸殘基被式I的線性氨基酸序列中的3個(gè)氨基酸分隔開。在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了肽綴合物，其中所述分子內(nèi)橋在殘基對(duì)X和x+3、x+4、x+5等的側(cè)鏈之間形成。在另一個(gè)特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了肽綴合物，其中所述分子內(nèi)橋?yàn)閮?nèi)酰胺環(huán)。在又一個(gè)特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了肽綴合物，其中所述分子內(nèi)橋涉及殘基對(duì)，其中Z12 為 Lys 并且 Z16 為 Glu ；Z12 為 Glu 并且 Z16 為 Lys ；Z16 為 Glu 并且 Z20 為 Lys ；Z16 為 Lys 并且 Z20 為 Glu ；Z20 為 Glu 并且 Z24 為 Lys ；Z20 為 Lys 并且 Z24 為 Glu。在本發(fā)明的另一方面中，提供了具有式VI的肽綴合物R1-X-L-Y-R2 (VI) 其中R1為H、CV4烷基、乙?；?、甲?；⒈郊柞；蛉阴；?；R2 為 OH 或 NH2;X包含具有以下序列的GLP-1 (7-36)序列或其類似物XaHis-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-AIa-Ala-Lys-Glu-Phe-1le-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg(SEQ ID NO 114)L是包含多至4個(gè)天然或非天然氨基酸或者其組合的接頭，或者缺失；Y包含具有以下序列的胃泌素-17序列或其類似物YaGln-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ala-Tyr-Gly-Trp-Yl5-Asp-Phe其中Y15 選自 Leu、Nle、Phe 和 Thr。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供肽綴合物，其中(i)相對(duì)于GLP-1的序列，Xa在多至5個(gè)位置上具有替換和/或包含I至2個(gè)氨基酸的C末端截短；和/或(ii)相對(duì)于胃泌素17的序列，Ya相對(duì)于胃泌素17的序列在多至5個(gè)位置上具有替換和/或包含I至13個(gè)氨基酸的N末端截短。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了肽綴合物，其中Xa為具有式VIIa的肽序列His-X8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-X26-Glu-Phe-1le-Ala-Trp-Leu-Val-X34-Gly-X36(VIIa)其中X8 選自 Ala、Aib 和 Gly ；X26 選自 Arg 和 Lys ；X34 選自 Arg 和 Lys ；X36 選自 Arg 和 Lys ；L為具有式VIIb的肽序列L1-L2-L3-L4 (VIIb)其中LI 選自 Serλ Ala、Lys、Orn、bAla、8Aoc、DBF、Peg3、Cys、Gln 或缺失；L2 選自 Serλ Ala、Lys、Orn、bAla、8Aoc、DBF、Peg3、Cys、Gln 或缺失；L3 選自 Serλ Ala、Lys、Orn、bAla、8Aoc、DBF、Peg3、Cys、Gln 或缺失；L4 選自 Serλ Ala、Lys、Orn、bAla、8Aoc、DBF、Peg3、Cys、Gln 或缺失；Ya為具有式VIIc的肽序列Yl-Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Y9-Y10-Yll-Y12-Y13-Y14-Y15-Asp-Y17 (VIIc)
其中Yl為Gln或缺失；Y2為Gly或缺失；Y3為Pro或缺失；Y4為Trp或缺失；Y5為L(zhǎng)eu或缺失；
Y6為Glu或缺失；Y7為Glu或缺失；Y8為Glu或缺失；Y9為Glu或缺失；YlO 為 Glu 或缺失；Yll 為 Ala 或缺失；Y12 選自 Ala、Tyr 或缺失；Y13 選自 Gly、Ala 或缺失；Y14 選自 Trp、PheUNal 和 Met ；Y15 選自 Leu、Nle、Phe 和 Thr ;以及Y17選自Phe和3_ (3_吡啶基)-丙氨酸。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了肽綴合物，其中Xa為具有式VIIIa的肽序列His-X8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-X26-Glu-Phe-1le-Ala-Trp-Leu-Val-X34-Gly-X36(VIIla)其中X8 選自 Ala、Aib 和 Gly ;X26 選自 Arg 和 Lys ；X34 選自 Arg 和 Lys ；X36 選自 Arg 和 Lys ；L為具有式VIIIb的肽序列L1-L2-L3-L4(VIIIb)其中LI 選自 Peg3、Orn> Cys> Lys> Gln 或缺失；L2 選自 Ser、Ala、Orn> Cys> Lys> Gln 或缺失；L3 選自 Lys、Ala、Cys> Orn> Gln 或缺失；L4 選自 Lys> Orn> Ala、Peg3、Cys> Lys> Gln 或缺失；Ya為具有式VIIIc的肽序列Y12-Y13-Y14-Y15-Asp-Phe (VIIIc)其中Y12 選自 Tyr、Ala 或缺失；Y13 選自 Gly、Ala 或缺失；Y14 選自 Trp 和 Phe ；以及
Y15 選自 Leu、Thr 和 Phe。在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了肽綴合物，其中Xa為具有式IXa的肽序列His-X8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-X26-Glu-Phe-1le-Ala-Trp-Leu-Val-X34-Gly-X36(IXa)其中X8 選自 Ala、Aib 和 Gly ;X26 選自 Arg 和 Lys ；
X34 選自 Arg 和 Lys ；X36 選自 Arg 和 Lys ；L為具有式IXb的肽序列L1-L2-L3-L4(IXb)其中LI 選自 Orn> Peg3、Cys> Lys 和 Gln 或缺失；L2 選自 Orn> Peg3、Cys > Lys 和 Gln 或缺失；L3 選自 Orn> Peg3、Cys > Lys 和 Gln 或缺失；L4 選自 Orn> Peg3、Cys > Lys 和 Gln 或缺失；Ya為具有式IXc的肽序列Y12-Y13-Trp-Leu-Asp-Phe (IXc)其中Y12為Tyr或缺失；以及Y13 為 Gly 或缺失。在又一個(gè)特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了肽綴合物，其中至少一個(gè)Lys或Cys還與未脂取代基綴合。本發(fā)明的又一個(gè)方面涉及具有下式的肽綴合物或者其可藥用鹽或溶劑化物毒蜥外泌肽-4(l-39)-Peg3-Peg3-[Glnl，Leul5]胃泌素17，(I)毒蜥外泌肽-4(l_39)-[Glnl，Leul5]胃泌素17，(2)毒蜥外泌肽-4(l-39)-K_[Glnl，Leul5]胃泌素17，(3)毒蜥外泌肽-4(l_39)-AAA-[Glnl，Leul5]胃泌素I7，(4)毒蜥外泌肽-4(l-39)-SKK_[Glnl，Leul5]胃泌素17，(5)毒蜥外泌肽-4(l-39)-Peg3-SKK_[Glnl，Leul5]胃泌素17，(6)毒蜥外泌肽-4(l-39)-8Aoc-SKK_[Glnl，Leul5]胃泌素17，(7)毒蜥外泌肽-4(l-39)-DBF-SKK_[Glnl，Leul5]胃泌素17，(8)毒蜥外泌肽-4(l-39)-8Aoc-8Aoc-[Glnl，Leul5]胃泌素 17，(9)毒蜥外泌肽-4(l_39)-[Leu4]胃泌素6，(10)毒蜥外泌肽-4(1-39)-1(-[1^114](胃泌素6，(I I)毒蜥外泌肽-4(1-39)-AAA-[Leu4]胃泌素 6，(12)毒蜥外泌肽-4(1-39)-SKK-[Leu4]胃泌素 6，(13)毒蜥外泌肽-4(l-39)-Peg3-SKK-[Leu4]胃泌素6，(14)V6
(CS)9 崖[^^]]-)HS-dga-(9S-z) Pcfro[22ε〇]
(CS)‘9 崖[^^]]-)HS-30V8-(9S-z) Pcfro[ιζ￡θ]
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/ ΓΛ N6 r\m IM 「TTimlττ / r> η χ N τ Λν/ Υ m I , Idvfr-fWΓ ■ λ- λ
或GLP-1 (7-36)-8Aoc-8Aoc_[Leu4]胃泌素 6，(54)其中，每個(gè)毒晰外泌妝-4 (1-39)、毒晰外泌妝-4 (1-28)和GLP-1 (7-36)妝部分通過(guò)其C末端共價(jià)結(jié)合(S卩，連接或偶聯(lián))至各自綴合物分子的剩余部分，每個(gè)[Glnl，Leul5]胃泌素17和[Leu4]胃泌素6肽部分通過(guò)其N末端共價(jià)結(jié)合(即，連接或偶聯(lián))至各自綴合物分子的剩余部分。在一個(gè)特定的方面中，可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)合成方法、通過(guò)使用重組表達(dá)系統(tǒng)或通過(guò)任何其他合適的方法來(lái)制造本發(fā)明的肽綴合物。因此，所述綴合物可以以多種方式合成，包括例如以下方法(a)通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)固相法或液相法逐步或通過(guò)片段組裝來(lái)合成肽綴合物，并且分離和純化肽綴合物終產(chǎn)物； (b)在宿主細(xì)胞中表達(dá)編碼肽綴合物的核酸構(gòu)建體，并從宿主細(xì)胞培養(yǎng)物中回收表達(dá)產(chǎn)物；或(C)進(jìn)行編碼肽綴合物的核酸構(gòu)建體的無(wú)細(xì)胞體外表達(dá)，并回收表達(dá)產(chǎn)物；或者通過(guò)方法(a)、(b)或(C)的任意組合來(lái)獲得肽綴合物片段，隨后連接所述片段以獲得肽綴合物，并回收肽綴合物。本發(fā)明的又一些方面為治療多種病癥、疾病或異常[包括糖尿病(I型和2型)以及多種糖尿病相關(guān)病癥、疾病或異常]的方法，其包括施用本發(fā)明的肽綴合物(以游離形式或者以其可藥用鹽或溶劑化物的形式)以及包含本發(fā)明肽綴合物或者其可藥用鹽或溶劑化物的藥物組合物。在一個(gè)特定的方面中，本發(fā)明的肽綴合物還可用作藥劑用于治療胰島素抵抗、葡萄糖不耐受、糖尿病前期(pre-diabete)、空腹葡萄糖水平升高、I型和/或2型糖尿病、高血壓和/或血脂異常(或者這些代謝風(fēng)險(xiǎn)因素的組合)、動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis)、動(dòng)脈硬化(arteriosclerosis)、冠心病、外周動(dòng)脈疾病和中風(fēng)。它們還可用于預(yù)防體重增加、促進(jìn)體重降低、降低體重超重和/或治療肥胖癥(例如通過(guò)控制食欲、進(jìn)食、食物攝取、熱量攝取和/或能量消耗)(包括病態(tài)肥胖)以及相關(guān)疾病、異常和健康狀況(包括但不限于肥胖相關(guān)炎癥、肥胖相關(guān)膽囊病和肥胖引起的睡眠呼吸暫停)。本發(fā)明的肽綴合物對(duì)這些病癥的作用可以全部或部分地因?qū)w重的作用所致或與獨(dú)立于該作用。本發(fā)明的另一些方面將從以下的公開中顯而易見(jiàn)。


圖1.以100nmol/kg對(duì)小鼠靜脈內(nèi)(1. V.)和皮下(s. c.)施用之后相對(duì)于時(shí)間的平均血漿濃度(log-線性)。A :化合物33，B :化合物I。數(shù)據(jù)顯示為平均值土SD，η = 3/數(shù)據(jù)點(diǎn)。圖2.以IOOnmol化合物/kg的化合物33、74、76、77、78和80對(duì)小鼠s. c.施用之
后相對(duì)于時(shí)間的平均血漿濃度(log-線性)。η = 2/數(shù)據(jù)點(diǎn)。圖3表示施用⑴本發(fā)明化合物I [毒蜥外泌肽-4(l-39)-Peg3-Peg3-[Glnl，Leul5]胃泌素17;見(jiàn)下文]的三種濃度(1、10和50nmol/kg)、(ii)毒蜥外泌肽-4(1-39)和h[Leul5]胃泌素17肽(每種肽為1、10和50nmol/kg)的1:1加和組合物的三種對(duì)應(yīng)濃度和(iii)載劑之后在db/db糖尿病小鼠中總胰胰島素含量的數(shù)據(jù)(單位為yg)。圖4.小鼠中的Δ-血液葡萄糖。通過(guò)使用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)隨后進(jìn)行Dunn' s多重比較檢驗(yàn)來(lái)分析數(shù)據(jù)P < O. 001。分別比較化合物33、毒蜥外泌肽-4、毒蜥外泌肽-4 (1-39)和h[Leul5]胃泌素17的組合以及載劑；n =每組16至19。圖5.小鼠中的Δ血衆(zhòng)胰島素。通過(guò)使用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)隨后進(jìn)行Dunn' s多重比較檢驗(yàn)來(lái)分析數(shù)據(jù)P < O. 001。分別比較化合物33、毒蜥外泌肽-4、毒蜥外泌肽-4 (1-39)和h[Leul5]胃泌素17的組合以及載劑；n =每組16至19。圖6.小鼠中的胰胰島素含量。通過(guò)使用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)隨后進(jìn)行Dunn' s多重比較檢驗(yàn)來(lái)分析數(shù)據(jù)，Mp <0.01。分別比較化合物33、毒蜥外泌肽-4、毒蜥外泌肽-4(1-39)和h[Leul5]胃泌素17的組合以及載劑；n =每組16至19。
圖7.小鼠中的Δ-HbAlc。通過(guò)使用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)隨后進(jìn)行Dunn' s多重比較檢驗(yàn)來(lái)分析數(shù)據(jù)，Mp <0.01,***p<0. OOl0分別比較化合物33、毒蜥外泌肽-4、毒蜥外泌肽-4(1-39)和h[Leul5]胃泌素17的組合以及載劑；n =每組16至19。圖8.小鼠中的Δ-血衆(zhòng)C肽。通過(guò)使用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)隨后進(jìn)行Dunn' s多重比較檢驗(yàn)來(lái)分析數(shù)據(jù)Zp <0.05。分別比較化合物33、毒蜥外泌肽-4、毒蜥外泌肽-4(1-39)和h[Leul5]胃泌素17的組合以及載劑；n =每組16至19。圖9.在db/db小鼠中載入葡萄糖后通過(guò)曲線下面積(AUC)來(lái)測(cè)量SC施用毒蜥外泌肽-4、利拉魯肽(Liraglutide)或化合物33對(duì)葡萄糖耐量的作用。施用三種治療方案(A)預(yù)防，(B)治療或(C)假期(Holiday)。數(shù)據(jù)表示為具有SEM的平均值(η = 8至13/組)。統(tǒng)計(jì)通過(guò)二因素ANOVA然后進(jìn)行Bonferroni ' s事后檢驗(yàn)(post-test)比較數(shù)據(jù)*p < O. 05 ；**p < O. 01 ；***p < O. 001，相對(duì)于載劑。圖10.在db/db小鼠中SC施用毒蜥外泌肽_4、利拉魯肽或化合物33對(duì)8小時(shí)禁食血液葡萄糖的影響。施用三種治療方案(A)預(yù)防，(B)治療或(C)假期。數(shù)據(jù)表示為具有SEM的平均值(η = 8至13/組)。統(tǒng)計(jì)通過(guò)二因素ANOVA然后進(jìn)行Bonferroni , s事后檢驗(yàn)比較數(shù)據(jù)*P < O. 05 ；**p < 0.01 ；***p < O. 001，相對(duì)于載劑。圖11. SC施用毒蜥外泌肽-4、利拉魯肽或化合物33對(duì)(A)血漿C-肽、(B)血漿胰島素或(C)HbAlc(%)的最終(第93天)值的影響。數(shù)據(jù)表示為具有SEM的平均值(η =8至13/組)。統(tǒng)計(jì)通過(guò)單因素ANOVAKruskal-Wal I is檢驗(yàn)隨后進(jìn)行Dunn' s MC檢驗(yàn)比較數(shù)據(jù)< O. 001, **p < 0.01,*p < O. 05，相對(duì)于載劑。發(fā)明詳述如上文所述，本發(fā)明的一個(gè)方面涉及具有以下式的肽綴合物或者其可藥用鹽或溶劑化物毒蜥外泌肽-4(l-39)-Peg3-Peg3-[Glnl，Leul5]胃泌素17，(I)毒蜥外泌肽-4(l_39)-[Glnl，Leul5]胃泌素17，
(2)毒蜥外泌肽-4(1-39)-K-[Glnl，Leu 15]胃泌素 17，
(3)毒蜥外泌肽-4(l-39)-AAA-[Glnl，Leul5]胃泌素17，(4)
(5)
(10)
(11)
(12)
(13)
(14)
(15)
(16)
(17)
(18)
(19)
(20)
(21)
(22)
(26)
毒蜥外泌肽-4 (1-39)-SKK-[Glnl，Leul5]毒蜥外泌肽-4(l-39)-Peg3-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， 毒蜥外泌肽-4(l-39)-8Aoc-SKK-[Glnl，Leul 5]胃泌素 17， 毒蜥外泌肽-4 (1-39)-DBF-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17，毒蜥外泌肽-4(l-39)-8Aoc-8Aoc-[Glnl，Leul5]胃泌素 17，毒晰夕卜 泌月太-4(l_39)-[Leu4] f泌素17,(6)(7)(8)(9)素 6泌蜥外泌肽-4 (1- 3 9 ) - K - [ L e u 4 ]胃泌素6蜥外泌肽-4(l-39)-AAA-[Leu4]胃泌素蜥外泌肽-4(l-39)-SKK-[Leu4]毒蜥外泌肽-4 (1-39)-Peg3-SKK-[Leu4]毒蜥外泌肽-4(l-39)-Peg3_Peg3-[Leu4]毒蜥外泌肽-4(l-39)-8Aoc-SKK-[Leu4]毒蜥夕卜泌肽-4(l-39)-DBF-SKK-[Leu4]毒晰外泌妝 _4(l-39)-8Aoc_8Aoc-[Leu4]蜥外泌肽-4 (1-28) - [Glnl，Leul 5]蜥外泌肽-4(1-28)-K-[Glnl，Leu I 5]毒蜥外泌肽-4 (1-28)-AAA-[Glnl，Leul5]蜥外泌肽-4 (1-28)-SKK-[Glnl，Leul5]毒蜥外泌肽-4(l-28)-Peg3-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17，(23) 毒蜥外泌肽-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， 毒蜥外泌肽-4(l-28)-8Aoc-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， 毒蜥外泌肽-4 (1-28)-DBF-SKK-[Glnl，Leul 5]毒蜥外泌肽-4(l-28)-8Aoc-8Aoc-[Glnl，Leul 5]胃泌素 17， 毒蜥夕卜泌肽-4(l-28)-[Leu4] P泌素泌素泌素泌素泌素泌素泌素17泌素17泌素17泌素17(24)(25)泌素17,(27) 泌素6 ,(28)毒蜥外泌肽-4(l-28)-K-[Leu4]胃泌素6， (2g)毒蜥外泌肽-4(l-28)_AAA-[Leu41胃泌素 6，
(30)毒蜥外泌肽-4(l-28)-SKK_[Leu4]胃泌素6，
(31)毒蜥外泌肽-4(1-28) -Peg3_SKK-[Leu4]胃泌素 6，
(32)毒蜥外泌肽-4(l-28)-Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素6,
(33)毒蜥外泌肽-4( 1-28) -8AOC-SKK-[Leu4]胃泌素 6，
(34)毒蜥外泌肽-4( 1-28) -DBF-SKK-[Leu4]胃泌素 6，
(35)毒蜥外泌肽-4(1-28)-8Aoc-8Aoc-[Leu4]胃泌素 6，
(36)GLP-l(7-36)-[Glnl, Leul 5]胃 泌 素 17，
(37)GLP-l(7-36)-K_[Glnl，Leul5]胃泌素 17，(38)GLP-l(7-36)_AAA-[Glnl，Leul5]胃泌素 17，(39)GLP-1 (7-36) -SKK-[Glnl, Leul5]Gastrinl7,(40)GLP-1 (7-36)-Peg3-SKK_[Glnl，Leul5]胃泌素 17，(41)GLP-1 (7-36)-Peg3-Peg3_[Glnl，Leul5]胃泌素 17，(42)GLP-1 (7-36)-8Aoc-SKK_[Glnl，Leul5]胃泌素 17，(43)GLP-1 (7-36)-DBF-SKK-[Glnl，Leul 5]胃泌素 17，(44)GLP-1 (7-36)-8Aoc-8Aoc-[Glnl，Leul5]胃泌素 17，(45)GLP-1 (7-36) - [Leu4]胃 泌 素 6，
(46)GLP-1 (7-36) - K- [Leu4]胃 泌 素 6，
(47)GLP-1 (7-36) - AAA-[Leu4]胃 泌 素 6，
(48)GLP-1 (7-36) - SKK-[Leu4]胃 泌 素 6，
(49)GLP-l(7-36)-Peg3-SKK_[Leu4]胃泌素 6，(50)GLP-l(7-36)-Peg3-Peg3_[Leu4]胃泌素 6，(51)GLP-l(7-36)-8Aoc-SKK_[Leu4]胃泌素 6，(52)GLP-l(7-36)-DBF-SKK_[Leu4]胃泌素 6(53)
或
GLP-1 (7-36)-8Aoc-8Aoc_[Leu4]胃泌素 6，(54)
其中，每個(gè)毒蜥外泌肽-4(1-39)、毒蜥外泌肽-4(1-28)和GLP-1 (7_36)肽部分通過(guò)其C末端共價(jià)連接至各自綴合物分子的其余部分，每個(gè)[Glnl，Leul5]胃泌素17和 [Leu4]胃泌素6肽部分通過(guò)其N末端共價(jià)連接至各自綴合物分子的其余部分。在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及具有以下式的肽綴合物或者其可藥用鹽或溶劑化
毒蜥外泌肽-4(1-28) -Peg3-Peg3-[Leu3]胃泌素 5
(55)毒蜥外泌肽-4(1-28)-Peg3-Peg3-[Alal, Leu4]胃泌素 6
(56)毒蜥外泌肽-4(l-28)-Peg3-Peg3_[Ala2,Leu4]胃泌素 16
(57)毒蜥外泌肽|t -4(l-27)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6
(58)毒蜥外泌肽|t -4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu2]胃泌素4
(59)[Leul4]毒蜥外泌肽-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6
(60)
毒蜥外泌肽-4(l-28)-Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素 6 (61)[Orn27]毒蜥外泌肽-4(l-28)-Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素 6 (62)[Phe25]毒蜥外泌肽-4(l-28)-Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素 6 63)[Asp28]毒蜥外泌肽-4(l-28)-Peg3-Peg3_[Leu4]胃泌素 6
(64)[Tyrl3]毒蜥外泌肽-4(l-28)-Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素 6
(65)
毒蜥外泌肽-4(l-28)-Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素 6
(66)毒蜥外泌肽-4 ( 1 - 2 8 ) - P e g 3 - [ L e u 4 ]胃 泌素6
(67)毒蜥外泌肽-4 ( 1 - 2 8 ) - [ L e u 4 ]胃 泌 素6
(68)毒蜥外泌肽-4 ( 1 - 2 7 ) - [ L e u 4 ]胃 泌 素1 1
(69)毒蜥外泌肽-4 ( 1 - 2 7 ) - P e g 3 - [ L e u 4 ]胃 泌素6
(70)0420]毒蜥夕卜泌肽-4 ( 1 - 2 7 ) - P e g 3 - [ L e u 3 ]胃 泌素5
(71)毒蜥夕卜泌月太-4 ( 1 - 2 6 ) - P e g 3 - [ L e u 3 ]胃 泌素5
(72)毒蜥夕卜 泌肽4 ( 1 - 2 7 ) - P e g 3 - [ L e u 2 ]胃 泌素4
(73)[Tyrl3, Leul 4]毒蜥外泌肽-4(l_27)-Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素 6
(74)[Tyrl3, Phe25]毒蜥外泌肽-4(1-27)寸683- 683-0^沾]胃泌素6
(75)[Leul4, Phe25]毒蜥外泌 Jft-4(l_27)-Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素6
(76)[Tyrl3, Leul4, Phe25]毒蜥外泌肽 ~4 (1-27) -Peg3-Peg3- [Leu4]胃泌素 6
(77)側(cè)鏈-環(huán)([Lysl2, Glul6]毒蜥外泌肽-4(1-28)-卩683-卩683-0^沾]胃泌素6
(78)側(cè)鏈-環(huán)([Glul6, Lys20]毒蜥外泌肽-4(1-28)-卩683-卩683-0^沾]胃泌素6
(79)側(cè)鏈-環(huán)([Lys20, Glu24]毒蜥外泌肽-4(1-28)-卩683-卩683-0^沾]胃泌素6
(80)[Lysl6]毒蜥外泌肽-4(l-28)-Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素 6 (81)毒蜥夕卜泌月太-4(1-28)-Peg3-K-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 (82)毒 蜥 夕卜 泌 肽-4 ( 1 - 2 8 ) - [ T h r 4 ]胃 泌 素6
(83)毒 蜥 夕卜 泌 肽-4 ( 1 - 2 8 ) - [ P h e 4 ]胃 泌 素6
(84)[Leul4]毒蜥夕卜泌肽 _4(l_28)-[lNal3,Leu4 胃泌素 6
(85)[ L e u 1 4 ]毒蜥夕卜泌月太-4 ( 1 - 2 8 ) - [ N 1 e 4 ]胃泌素6
(86)[Leul4]毒蜥外泌肽 _4(l_28)-[Leu4, [3-(3-Pyridyl)-Ala]6]胃泌素 6
(87)[Glu9, Leul4, Phe25, Tyrl3]毒蜥外泌月太-4(1-27)-卩6§3-卩6§3-[し6じ4]胃泌素6
(88)[Leul4, Phe25, Tyrl3]毒蜥外泌月太-4(1-27)-卩6§3-卩6§3-[し6じ4，Phe3]胃泌素6 (89)[Glu9,Leul4,Phe25,Tyrl3]毒蜥外泌月太-4(1-27)-卩6§3-卩6§3-[し6じ4，卩1^3]胃泌素6
(91)
素6
素6
素 6
(95)
(96)
(97)
(98)
(99)
(100)
(101)
(102)
(103)
(104)
(105)
(I 06)
(107)
(108)
(109)(90)[Arg27, Leul4, Phe25, Tyrl3]毒蜥外泌肽-4 (1-27)-Peg3_[Leu4]胃泌素 6[Argl2, 27，Leul4，Lysl6, Phe25, Tyrl3]毒蜥外泌肽-4 (1-27) -Peg3_[Leu4]胃泌 (g2)[Argl2, 27，Leul4，Lys20, Phe25, Tyrl3]毒蜥外泌肽-4 (1-27) -Peg3_[Leu4]胃泌(93)[Argl2, 27，Leul4，Lys24, Phe25, Tyrl3]毒蜥外泌肽-4 (1-27) -Peg3_[Leu4]胃泌(94)[Argl2, Leul4, Phe25, Tyrl3]毒蜥外泌肽-4 (1-27)-Peg3_[Leu4]胃泌素 6[G[G[G[G[G[G[G[G[Gu9, Leul4, Phe25, Tyru9, Leul4, Phe25, Tyru9, Leul4, Phe25, Tyru9, Leul4, Phe25, Tyru9, Leul4, Phe25, Tyru9, Leul4, Phe25, Tyru9, Leul4, Phe25, Tyru9, Leul4, Phe25, Tyru9, Leul4, Phe25, Tyr3]毒蜥外泌肽-4(l-27)-[Leu2]胃泌素3]毒蜥外泌肽-4(l-27)-Peg3-[Leu2]胃泌素43]毒蜥外泌肽-4(l-27)-0rn-Peg3-[Leu2]胃泌素 43]毒蜥外泌肽 4(l-27)-Peg3-0rn-[Leu2]胃泌素 43]毒蜥外泌肽-4 (1-27) -Orn-Orn- [Leu2]胃泌素 43]毒蜥外泌肽-4(l-27)-[Leu4]胃泌素63]毒蜥外泌肽-4(l-27)-Peg3-[Leu4]胃泌素63]毒蜥外泌肽-4(l-27)-0rn-Peg3-[Leu4]胃泌素 63]毒蜥外泌肽-4(l-27)-Peg3-0rn-[Leu4]胃泌素 3[Glu9, Leul4, Phe25, Tyrl3]毒蜥外泌肽-4(1-27)-0rn_0rn-[Leu4]胃泌素 6[Lys (十六?；?異 Glu)34]GLP-1(7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6[Arg34, Lys (十六?；?異 Glu) 26] GLP-1 (7-37) -Peg3_Peg3- [Leu4]胃泌素 6[Arg26, 34，Lys (十六?；?異 Glu) 36] GLP-1 (7-37) -Peg3_Peg3- [Leu4]胃泌素 6[Lys (十六?；?異 Glu)26]GLP-1(7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6
[Arg26,34, Gly8, -ys (十六?；?異 Glu) 36]GLP_1 (7-37)-Peg3_Peg3-
[ L e u 4 ]胃泌素6 (110)
[Aib8, Arg34, Lys (十六?；?異 Glu) 26]GLP-1 (7-37) -Peg3_Peg3-
[ L e u 4 ]胃泌素6 (111)
[Aib8，Arg34] GLP-1 (7-37)-Peg3-Peg3_ [Leu4]胃泌素 6 (112)
[Arg34]GLP-l(7-37)-Peg3-Peg3_[Leu4]胃泌 素 6 (113)
本發(fā)明肽綴合物的以上式(使用用于所研究多種肽部分的常規(guī)和廣泛使用縮寫/ 名稱進(jìn)行書寫[即毒蜥外泌肽-4 (1-39)、毒蜥外泌肽-4 (1-28)和GLP-1 (7_36)])可以如下以常規(guī)全氨基酸序列形式進(jìn)行書寫(接頭部分用粗體突出)
(SEQ ID NO I) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS- Peg3.Peg3-QGPffLEEEEEAYGffLDF-NH2
(SEQ IDNO 2)H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSQGPWLEEEEEAYGWLD F-NH2 (無(wú)接頭)
(SEQ ID NO 3) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS- κ. QGPffLEEEEEAYGffLDF-NH2
(SEQ ID NO 4) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS- AAA QGPffLEEEEEAYGffLDF-NH2
(SEQ ID NO 5) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS- SKK-QGPffLEEEEEAYGffLDF-NH2
(SEQ ID NO 6) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS- Peg3-SKK· QGPffLEEEEEAYGffLDF-NH2
(SEQ ID NO 7) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAP PPS- saoc-SKK-QGPffLEEEEEAYGffLDF-NH2
(SEQ ID NO 8) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS- DBP-SKK-QGPffLEEEEEAYGffLDF-NH2
(SEQ ID NO 9) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS- 8Aoe-aAoc QGPffLEEEEEAYGffLDF-NH2
(SEQ ID NO :10)H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSYGWLDF_NH2 (無(wú)接頭)
(SEQID NO :11)H_HGEGTFTSDLSKQM EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-K-YGWLDF-NH2
(SEQ ID NO 12)H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS- aaa. YGffLDF-NH2
(SEQ ID NO : 13) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS_SKK.YGWLDF-NH2
(SEQ ID NO 14) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS- PegS-SKK -YGffLDF-NH2
(SEQ ID NO 15) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS- Peg3-Peg3-YGffLDF-NH2
(SEQ ID NO 16) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS- 8Aoc-SKK-YGffLDF-NH2
(SEQ ID NO 17) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS- DBF-SKK-YGffLDF-NH2
(SEQ ID NO 18) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS- 8Aoc-8Aoc-YGffLDF-NH2
(SEQID NO 19) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEffLKNQGPffLEEEEEAYGffLDF-NH2 (無(wú)接頭)
QGPffLEEEEEAYGffLDF-NH224) H-HGEGTFTSDLSKQM EEEAVRLFIEffLKN- Peg3-Peg3- (SEQ ID NO20)H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEffLKN-K-QGPffLEEEEEAYGffLDF-NH2 (SEQ ID NO 21)H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEffLKN-aaa-QGPffLEEEEEAYGffLDF-NH2 (SEQ ID NO 22)H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEffLKN-SKK-QGPffLEEEEEAYGffLDF-NH2 (SEQ ID NO 2 3) H-HGEG TFT SD L SK QME EE A VRLF I E WLKN- Pega-SKK-
(SEQ ID NO ； QGPffLEEEEEAYGffLDF-NH2
(SEQ ID NO QGPffLEEEEEAYGffLDF-NH2
(SEQ ID NO QGPffLEEEEEAYGffLDF-NH2
(SEQ ID NO QGPffLEEEEEAYGffLDF-NH225) H-HGEG TFT SD L S KQME EE A V RLF I E WLKN- BAoc-SKK-26) H-HGEGTFT SD L SKQMEEEAVRLF I EWLKN- OBF-SKK-27) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLF IEWLKN- sAoc-1Aoc-
無(wú)接頭)
(SEQID NO :28)H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-YGWLDF-NH2 (無(wú)接頭)(SEQID NO 29) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEffLKN- K. YGffLDF-NH2(SEQID NO 30) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLF IEffLKN-減辠 YGffLDF-NH2(SEQID NO 31)H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEffLKN-SKK· YGffLDF-N H2(SEQID NO 32)H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEffLKN-Peg3~SKK- YGffLDF-NH2(SEQID NO 33)H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEffLKN-Pegl-PegS- YGWLDF-NH2(SEQID NO 34) H-HGEGTFTSDLSKQM EEEAVRLFI EffLKN- 8Aoc-SKK- YGffLDF-NH2(SEQI D NO 35)H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEffLKN-DBF-SKK- YGWLDF-NH2(SEQID NO 36)H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEffLKN-8Aoi>8Aoe- YGffLDF-NH2(seqid no :37)h-haegtftsdvssylegqaakefiawlvkgrqgpwleeeeeaygwldf-nh2((SEQ ID NO 38)H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-K-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEQ ID NO 39)H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEF IAffLVKGR-嫩· QGPffLEEEEEAYGffLDF-NH2
(SEQ ID NO 4 0 ) H-H AE G T F T S D V S S Y LE G Q A AKE F I Aff L VKG R- sm, QGPffLEEEEEAYGffLDF-NH2
(SEQ I D NO 41) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAffLVKGR- PegS-SKK-QGPffLEEEEEAYGffLDF-NH2
(SEQ ID NO 42) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAffLVKGR- Peg3.Peg3-QGPffLEEEEEAYGffLDF-NH2
(SEQ ID NO 43) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAffLVKGR- gAoc-SKK-QGPffLEEEEEAYGffLDF-NH2
(SEQ I D NO 44) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAffLVKGR- DBF-SKK-QGPffLEEEEEAYGffLDF-NH2
(SEQ ID NO 45) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEF IAffLVKGR- 8Aoc-eAoc-QGPffLEEEEEAYGffLDF-NH2
(SEQ ID NO :46) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRYGWLDF-NH2 (無(wú)接頭)
(SEQID NO 47) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAffLVKGR- K. YGffLDF-NH2
(SEQ I D NO :48) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAffLVKGR- MA. YGffLDF-NH2
(SEQ ID NO :49) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAffLVKGR- SKK- YGffLDF-NH2
(SEQ ID NO 50) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAffLVKGR- Peg3-SKK- YGWLDF-NH2
(SEQ ID NO :51)H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAffLVKGR-Peg3-Peg3- YGWLDF-NH2
(SEQ ID NO :52) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAffLVKGR- 8Ack>SKK- YGffLDF-NH2
(SEQ ID NO :53) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAffLVKGR- DBF-SKK- YGffLDF-NH2
(SEQ I D NO :54) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAffLVKGR- eAoc-SAoc- YGffLD F-NH2
(SEQ ID NO 55)H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEffLKN-PeiS-Peg1-GWLDF-NH2
(SEQ ID NO 56) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEffLKN- Peg3-Peg3- AGWLDF-NH2
(SEQ ID NO :57) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEffLKN- Peg34 eg3. YAffLDF-N H2
(SEQ ID NO :58) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEffLK- Peg3-Peg3- YGffLDF-N H2
(SEQ ID NO 59) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEffLKN- Peg3-Pee3- WLDF-NH2
(SEQ ID NO :60) H-HGEGTFTSDLSKQLEEEAVRLFIEffLKN- PegS-Peg3- YGffLD F-NH2
(SEQ ID NO 61) H-HGEGTFTSDLS-Orn-QM EEEAVRLFIEWLKN- Pefll-PegS- YGWLDF-NH2
(SEQ ID NO :62) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWL-Orn-N-Peg3-P_3-YGWLDF-NH2
(SEQ ID NO 63) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEFLKN- Peg3-Peg3- YGffLDF-N H2
(SEQ ID NO :64) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEffLKD- Peg3-Peg3- YGWLDF-NH2
(SEQ ID NO 65) H-HGEGTFTSDLSKYMEEEAVRLFIEffLKN- Peg3-Peg3- YGWLDF-NH2
(SEQ ID NO :66) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAV-Orn-LFIEffLKN- Peg3-Peg3· YGWLDF-NH2
(SEQ ID NO :67) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEffLKN- Peg3- YGWLDF-NH2
(SEQ ID NO 68)H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNYGWLDF-NH2
(SEQ I D NO 69)H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKEEEEAYGWLDF-NH2
(SEQ ID NO :70)H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEffLK- Peg3- YGWLDF-NH2
(SEQ ID NO 71) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEffLK- Peg3- GWLDF-NH2
(SEQ ID NO :72) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEffL- Peg3- GffLDF-N H2
(SEQ ID NO 73) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEffLK- Peg3- WLDF-NH2
(SEQ ID NO 74) H-HGEGTFTSDLSKYLEEEAVRLFI EffLK- PeS3-Peg3- YGWLDF-NH2
(SEQ ID NO 75)H-HGEGTFTSDLSKYMEEEAVRLFIEFLK-PeflS-Peg1- YGWLDF-NH2
(SEQID NO 76) H-HGEGTFTSDLSKQLEEEAVRLFIEFLK- Peg3-P<ig3- YGWLDF-NH2
(SEQ I D NO :77) H-HGEGTFTSDLSKYLEEEAVRLFIEFLK- Peg34>eg3- YGWLDF-NH2
(SEQ ID NO 78) H-HGEGTFTSDLS-K ()-QME-E ()-EAVRLFIEffLKN- Pe8S-PeiS-YGWLDF-NH2
(SEQ ID NO :79) H-HGEGTFTSDLSKQME-E () -EAV-K () -LFI EWLKN- PeS3-Pefl3. YGWLD F-NH2
(SEQ ID NO 80) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAV-K () -LF1-E () -WLKN- Pe33-Peg3· YGWLDF-NH2
(SEQID NO 81) H-HGEGTFTSDLSKQMEKEAVRLFIEffLKN- Peg3-Peg3- YGWLDF-NH2
(SEQ ID NO 82) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEffLKN- psg3-K-peg3- YGWLDF-NH2
(SEQ ID NO83)H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNYGWTDF-NH2
(SEQ ID NO84)H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFI EWLKNYGWFDF-NH2
(SEQ ID NO :85) H-HGEGTFTSDLSKQLEEEAVRLFIEffLKNYG-1 Nal-LDF- NH2
(SEQ ID NO 86) H-HGEGTFTSDLSKQLEEEAVRLFIEffLKNYGff- Nle. DF-NH2
(SEQ ID NO :87)H-HGEGTFTSDLSKQLEEEAVRLFIEWLKNYGWLD-3-(3_吡啶基)_丙氨?；鵠-NH2
(SEQ ID NO :88) H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK-Peg3-Peg3. YGWLDF-NH2
(SEQID NO 89) H-HGEGTFTSDLSKYLEEEAVRLFIEFLK- Peg3-Peg3- YGFLDF-NH2
(SEQ I D NO 90) H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFI EFLK-Peg3-Peg3-YGFLDF-N H2
(SEQ ID NO 91) H-HGEGTFTSDLSKYLEEEAVRLFIEFLR- Peg3- YGWLDF-NH2
(SEQ ID NO :92) H-HGEGTFTSDLSRYLEKEAVRLFIEFLR- PegS- YGffLD F-NH2
(SEQ ID NO 93) H-HGEGTFTSDLSRYLEEEAVKLFIEFLR- P*fl3- YGWLDF-N H2
(SEQ I D NO :94) H-HGEGTFTSDLSRYLEEEAVRLFIKFLR- Peg3· YGVWLDF-NH2
(SEQID NO 95) H-HGEGTFTSDLSRYLEEEAVRLFIEFLK- Peg3· YGWLDF-NH2
(SEQ ID NO96)H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLKWLDF-NH2
(SEQ ID NO :97) H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK- Peg3- WLDF-NH2
(SEQID NO 98) H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK- Orn-Pep- WLDF-NH2
(SEQ I D NO :99) H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK- Peg3-Orn- WLDF-NH2
(SEQ I D NO :1 00) H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK- 0m-Om- WLDF-NH2
(SEQ ID NO 101)H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLKYGWLDF-NH2
(SEQ ID NO102)H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK- Pe8S- YGWLDF-NH2
(SEQ ID NO 103) H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK- Orn-PegS- YGWLDF-NH2
(SEQ ID NO 104) H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK- Peg3-Om- YGWLDF-NH2(SEQ ID NO 105)H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK-0rn-0rn-YGWLDF-NH2
(SEQ ID NO : 106) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLV-K (十六?；?異 Glu) -GRG- Peg3-Peg3- YGWLDF-NH2
(SEQ ID NO : 107) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAA-K (十 Glu) -EFIAWLVRGRG- Peg3-Peg3- YGWLDF—NH2六?；?異
(SEQ ID NO : 108) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAREFIAWLVRG-K (十六?；?異 Glu) -G- PegS-PegS- YGWLDF-NH2
(SEQ ID NO : 109) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAA-K (十六?；?異 Glu) -EFIAWLVKGRG- PeaS-PefS- YGWLDF-NH2
(SEQ ID NO : 11 O) H-HGEGTFTSDVSSYLEGQAAREFIAffLVRG-K (十六?；?異 Glu) -G- Pegl-PegS- YGWLDF-NH2
(SEQID NO : 111) H-H-Aib-EGTFTSDVSSYLEGQAA-K (十六?；?異 Glu) -EFIAWLVRGRG- PegS-Pe8S- YGWLDF-NH2
(SEQ ID NO 112) H-H-Aib-EGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAffLVRGRG- PeflS-PegS-YGWLDF-NH2
(SEQID NO :113) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAffLVRGRG- Pei1-PegS- YGWLDF-NH2
其中，縮寫Peg3、8Aoc、DBF、INal、bAla、Orn、DPR、Dbu、Gaba 和 Aib 表不以下非天然氨基酸部分
Peg3 -NH-CH2-CH2-0-CH2-CH2-0-CH2-C (O)_ (衍生自 8-氛基-3,6- 二氧雜羊酸);
8Aoc -NH-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-C (O)-(衍生自 8_ 氨基辛酸);
DBF
INal :1_萘基丙氨酸
bAla β -丙氨酸
Gaba Y -氨基丁酸
Aib α -氨基-異丁酸
Dbu : 二氨基丁酸
DPR :二氨基丙酸
Orn :鳥氨酸
因此，關(guān)于接頭部分在本發(fā)明肽綴合物中的方向，接頭部分例如-Peg3-Peg3-表示化學(xué)部分
-Nh-CH2-CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-0-CH2-CH2-0-CH2-C(O)-,所述接頭部分左邊的-NH-...部分共價(jià)連接至所述肽綴合物的源自毒蜥外泌肽-4-或GLP-1-的部分，所述接頭部分右邊的..· -C(O)-部分共價(jià)連接至所述肽綴合物的源自胃泌素的部分。
關(guān)于其余的具體接頭部分，-K-表示賴氨酸氨基酸殘基，-AAA-表示-Ala-Ala-Ala-三肽殘基，-SKK-表示-Ser-Lys-Lys-三肽殘基。
在上述一些本發(fā)明肽綴合物中，應(yīng)理解，GLP-1 (7-36)肽序列部分來(lái)源于人 GLP-1 (hGLP-Ι)序列或是其類似物。
在上述另一些本發(fā)明肽綴合物中，應(yīng)理解，毒蜥外泌肽-4(1-39)肽序列部分來(lái)源于希拉毒蜥毒蜥外泌肽_4序列的序列或是其類似物。
同樣，綴合物中的[Glnl，Leul5]胃泌素17和[Leu4]胃泌素6部分來(lái)源于人胃泌[衍生自4-(2-氨基乙基)-6- 二苯并呋喃丙酸]素。
應(yīng)理解，SEQ ID NO 1等同于化合物1，SEQ ID NO 2等同于化合物2，等等。
應(yīng)理解，每一種單獨(dú)的上述肽綴合物I至54(即化合物I或化合物2或化合物 3...(等，直到化合物54))和以下公開的每一種單獨(dú)的其他肽綴合物55至113(參見(jiàn)實(shí)施例2中的表2和3)(即化合物55或化合物56...(等，直到化合物113))或者其可藥用鹽或溶劑化物構(gòu)成本發(fā)明另一個(gè)獨(dú)立的方面。
在本發(fā)明的上下文中，除非氨基酸以其全名提及(例如丙氨酸、精氨酸等)，否則它們以其常規(guī)的三字母和/或單字母縮寫(例如Ala或A為丙氨酸，Arg或R為精氨酸，等) 表不。
在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)“肽綴合物”指其中第一肽部分直接或經(jīng)連接(即橋連或間隔連接)化學(xué)部分通過(guò)共價(jià)化學(xué)鍵與第二肽部分結(jié)合(即，偶聯(lián)或連接)的分子。
本發(fā)明的化合物可在肽序列內(nèi)具有一個(gè)或更多個(gè)分子內(nèi)內(nèi)酰胺橋。列于表2的化合物中每個(gè)這種橋(由前綴“側(cè)鏈-環(huán)”表示)在包含羧酸的側(cè)鏈和另一個(gè)包含胺的側(cè)鏈之間形成。兩個(gè)氨基酸殘基通常被線性序列中的3個(gè)氨基酸分隔開。
在本發(fā)明的肽綴合物中，毒蜥外泌肽-4或Za與天然毒蜥外泌肽_4可有至少75 % 的同一性，例如，至少80、85、90或95%。
在本發(fā)明的肽綴合物中，胃泌素或Ya與天然胃泌素可有至少70%的同一性，例如， 至少75、80、85、9·0或95%。在本發(fā)明的肽綴合物中，GLP-1或Xa與天然GLP-1可有至少 85%的同一性，例如，至少90或95%。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明多肽可包含在
SEQ ID NO : 1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22， 23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40，41，42，43，44，45，46，47， 48，49，50，5152，53，54，55，56，57，58，59，60，61，62，63，64，65，66，67，68，69，70，71，72，73， 74，75，76，77，78，79，80，81，82，83，84，85，86，87，88，89，90，91，92，93，94，95，96，97，98， 99，100，101，102，103，104，105，106，107，108，109，110，111，112 和 113 中任一個(gè)給出的氨基酸序列，或者與一個(gè)或更多個(gè)所述序列有至少約80%、85%、90%、95%、97%、98%、 99%、99. 5%同一性的其功能性片段/變體或與其一個(gè)或更多個(gè)所述序列相比具有至多 20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2或I個(gè)氨基酸替換的其功能性片段/變體(有或沒(méi)有信號(hào)序列，有或沒(méi)有用另一殘基(如絲氨酸)替換一個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基)以及至少2個(gè)氨基酸長(zhǎng)度的其連續(xù)區(qū)段。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的多肽(i)與
SEQ ID NO : 1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22， 23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40，41，42，43，44，45，46，47， 48，49，50，5152，53，54，55，56，57，58，59，60，61，62，6364，65，66，67，68，69，7071，72，73， 74，75，76，77，78，79，80，81，82，83，84，85，86，87，88，89，90，91，92，93，94，95，96，97，98， 99，100，101，102，103，104，105，106，107，108，109，110，111，112 和 113 中任一個(gè)或其部分具有至少99%的氨基酸序列同一性；或者(ii)包含
SEQ ID NO : 1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40，41，42，43，44，45，46，47，48，49，50，5152，53，54，55，56，57，58，59，60，61，62，63，64，65，66，67，68，69，70，71，72，73， 74，75，76，77，78，79，80，81，82，83，84，85，86，87，88，89，90，91，92，93，94，95，96，97，98， 99，100，101，102，103，104，105，106，107，108，109，110，111，112 和 113 中任一個(gè)的至少 31、 32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、 57、58、59或60個(gè)連續(xù)氨基酸；或(iii)兩者。
本發(fā)明上下文中的術(shù)語(yǔ)“可藥用鹽”(本發(fā)明肽綴合物的可藥用鹽)旨在表示對(duì)施用所述鹽的患者或?qū)ο鬅o(wú)害的鹽。其可以是適當(dāng)?shù)貜睦缢峒映甥}和堿式鹽中選擇的鹽。酸加成鹽的實(shí)例包括氯鹽、檸檬酸鹽和醋酸鹽。堿式鹽的實(shí)例包括其中陽(yáng)離子選自以下的鹽堿金屬陽(yáng)離子如鈉離子或鉀離子、堿土金屬陽(yáng)離子如鈣離子或鎂離子，以及取代的銨離子如N(Rj) (R2) (R3) (R4)+型離子(其中通常R1、R2、R3和R4獨(dú)立地表示氫、任選取代的 CV6烷基或任選取代的C2_6烯基)。相關(guān)的Cu烷基的實(shí)例包括甲基、乙基、1-丙基和2-丙基?？赡芟嚓P(guān)的C2_6稀基的實(shí)例包括乙稀基、1-丙稀基和2_丙稀基。另一些可藥用鹽的實(shí)例描述于 “Remington，sPharmaceutical Sciences，，，17 版，Alfonso R. Gennaro (編)， MarkPublishing Company, Easton, PA, U. S. A.，1985(及更新的版本)和 Encyclopaedia of Pharmaceutical Technology,第三版，James Swarbrick (編)，Informa Healthcare USA (Inc.)，NY, USA, 2007,以及 J. Pharm. Sc1. 66 :2(1977)。
本發(fā)明上下文中的術(shù)語(yǔ)“溶劑化物”指在溶質(zhì)(本文中為本發(fā)明的肽綴合物或其可藥用鹽)與溶劑之間形成的確定化學(xué)計(jì)量的復(fù)合物。這樣的溶劑可以是例如水、乙醇或其他通常為小分子的可藥用有機(jī)物，例如但不限于乙酸或乳酸。當(dāng)所述溶劑是水時(shí)，這樣的溶劑化物一般被稱為水化物。
本發(fā)明的另一方面涉及用作藥物的本發(fā)明肽綴合物或其可藥用 鹽。在又一方面， 所述藥物是在有此需要的對(duì)象中治療一種或更多種以下疾病或異常和相關(guān)病癥的藥物1 型糖尿病、2型糖尿病、糖尿病前期、胰島素抵抗綜合征、葡萄糖耐量降低(IGT)、與血液葡萄糖水平升高相關(guān)的疾病狀態(tài)、高血糖癥、高血壓、致動(dòng)脈粥樣化血脂異常、動(dòng)脈硬化(例如動(dòng)脈粥樣硬化)、冠心病、外周動(dòng)脈疾病、中風(fēng)、微血管病、胃病、代謝綜合征、癌癥(例如結(jié)腸癌)、炎性腸病(IBD)和腸易激綜合征(IBS)。
其他可能相關(guān)的這樣的疾病或異常包括肥胖癥、病態(tài)肥胖、肥胖相關(guān)炎癥、肥胖相關(guān)膽囊病和肥胖引起的睡眠呼吸暫停。
在又一方面，所述藥物為用于在有此需要的對(duì)象中誘導(dǎo)胰島新生(例如，用于促進(jìn)在胰島中新細(xì)胞的形成)的藥物。
在又一方面，所述藥物為用于在有此需要的對(duì)象中誘導(dǎo)胰島細(xì)胞的存活(例如，用于預(yù)防胰島中的β_細(xì)胞的損失)的藥物。
在又一方面，所述藥物為用于在有此需要的對(duì)象中預(yù)防胰島中細(xì)胞凋亡(例如，用于預(yù)防胰島中的β_細(xì)胞損失)的藥物。
在又一方面，所述藥物為用于在有此需要的對(duì)象中降低血液中血紅蛋白blAc (糖基化血紅蛋白，HblAc)水平的藥物。
本發(fā)明的又一方面涉及本發(fā)明肽綴合物在制造在有此需要的對(duì)象中治療一種或更多種以下病癥、疾病或異常的藥物中的用途1型糖尿病、2型糖尿病、糖尿病前期、胰島素抵抗綜合征、葡萄糖耐量降低(IGT)、與血液葡萄糖水平升高相關(guān)的疾病狀態(tài)、高血糖癥、高血壓、致動(dòng)脈粥樣化血脂異常、動(dòng)脈硬化(例如動(dòng)脈粥樣硬化)、冠心病、外周動(dòng)脈疾病、 中風(fēng)、微血管病、胃病、代謝綜合征、癌癥(例如結(jié)腸癌)、炎性腸病(IBD)和腸易激綜合征 (IBS)。
本發(fā)明的肽綴合物還可用于
制造用于在有此需要的對(duì)象中誘導(dǎo)胰島新生的藥物；
制造用于在有此需要的對(duì)象中預(yù)防胰島β -細(xì)胞凋亡的藥物；或
制造用于在有此需要的對(duì)象中降低血液血紅蛋白b IAc (糖基化血紅蛋白，HblAc) 水平的藥物。
其中，本發(fā)明的另一些方面為治療上述病癥、疾病或異常的相應(yīng)方法。因此，本發(fā)明的一個(gè)這種另外的方面涉及在有此需要的對(duì)象中治療一種或更多種下述疾病或異常的方法1型糖尿病、2型糖尿病、糖尿病前期、胰島素抵抗綜合征、葡萄糖耐量降低(IGT)、與血液葡萄糖水平升高相關(guān)的疾病狀態(tài)、高血糖癥、高血壓、致動(dòng)脈粥樣化血脂異常、動(dòng)脈硬化(例如動(dòng)脈粥樣硬化)、冠心病、外周動(dòng)脈疾病、中風(fēng)、微血管病、胃病、代謝綜合征、癌癥 (例如結(jié)腸癌)、炎性腸病(IBD)和腸易激綜合征(IBS)，所述方法包括向所述對(duì)象施用治療有效量的本發(fā)明肽綴合物或者其可藥用鹽或溶劑化物。
同樣，與本發(fā)明的治療方法可能相關(guān)的另一些病癥、疾病或異常包括肥胖癥、病態(tài)肥胖、肥胖相關(guān)炎癥、肥胖相關(guān)膽囊病和肥胖引起的睡眠呼吸暫停。
本發(fā)明的又一方面涉及在有此需要的對(duì)象中誘導(dǎo)胰島新生的方法，所述方法包括向所述對(duì)象施用治療有效量的本發(fā)明肽綴合物或者其可藥用鹽或溶劑化物。
本發(fā)明的又一方面涉及在有此需要的對(duì)象中促進(jìn)胰島細(xì)胞存活的方法，所述方法包括向所述對(duì)象施用治療有效量的本發(fā)明肽綴合物或者其可藥用鹽或溶劑化物。
本發(fā)明的又一方面涉及在有此需要的對(duì)象中減少或預(yù)防胰島細(xì)胞凋亡的方法，所述方法包括向所述對(duì)象施用治療有效量的本發(fā)明肽綴合物或者其可藥用鹽或溶劑化物。
本發(fā)明的又一方面涉及在有此需要的對(duì)象中降低血液血紅蛋白blAc(糖基化血紅蛋白，HblAc)水平的方法，所述方法包括向所述對(duì)象施用治療有效量的本發(fā)明肽綴合物或者其可藥用鹽或溶劑化物。
本發(fā)明的另一些方面涉及如下
在有此需要的對(duì)象中治療與血液葡萄糖水平升高相關(guān)的疾病狀態(tài)的方法；
在有此需要的對(duì)象中降低血液葡萄糖水平的方法；
在有此需要的對(duì)象中刺激胰島素釋放的方法；
用于在有此需要的對(duì)象中調(diào)節(jié)胃排空的方法；以及
用于在有此需要的對(duì)象中降低血漿脂質(zhì)水平的方法。
在本發(fā)明以上的每一種方法中，所述方法包括向所述對(duì)象施用治療有效量的本發(fā)明肽綴合物或者其可藥用鹽或溶劑化物。
在上述本發(fā)明的治療或其他治療干預(yù)方法的背景下所使用的術(shù)語(yǔ)“治療有效量” 指足以治愈、改善、緩解或部分抑制特定疾病、異常或病癥(是所述治療或其他治療干預(yù)的目的)的臨床表現(xiàn)的量。足以實(shí)現(xiàn)上述的量定義為治療有效量?？烧{(diào)整施用量和施用方法以實(shí)現(xiàn)最佳效力。針對(duì)給定目的有效的量尤其取決于疾病、異常或病癥(是特定治療或其他治療干預(yù)的目的)的嚴(yán)重程度，所述對(duì)象的體重和一般狀況，飲食，可能的同時(shí)用藥 (concurrent medication)以及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域技術(shù)人員公知的其他因素。確定最適于向人施用本發(fā)明肽綴合物或者其可藥用鹽或溶劑化物的適合劑量大小和給藥方案可參考本發(fā)明所獲得的結(jié)果，并可在恰當(dāng)設(shè)計(jì)的臨床試驗(yàn)中加以驗(yàn)證?？赏ㄟ^(guò)常規(guī)方法確定有效劑量和治療方案，一開始在實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物中使用低劑量，而后提高劑量的同時(shí)監(jiān)測(cè)效果，而且也系統(tǒng)地改變給藥方案。在確定針對(duì)給定對(duì)象的最佳劑量時(shí)臨床醫(yī)生可考慮多種因素。這些考慮因素是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。
在本文中所使用的術(shù)語(yǔ)“治療”指用于獲得有益或期望之臨床結(jié)果的方法。為本發(fā)明的目的，有益或期望之臨床結(jié)果(無(wú)論是可檢測(cè)的或不可檢測(cè)的)包括但不限于，緩解癥狀、減輕疾病程度、穩(wěn)定(即不惡化)疾病狀態(tài)、延遲或減緩疾病進(jìn)展、改善或緩和疾病狀態(tài)以及(部分或全部)緩解(remission)?！爸委煛边€可意指與未接受治療時(shí)的預(yù)期存活時(shí)間相比延長(zhǎng)存活。在一些實(shí)施方案中，“治療”可以是以預(yù)防病癥、疾病或異常的發(fā)生或改變其病理學(xué)為目的而進(jìn)行的干預(yù)。因此，“治療”可指治療性干預(yù)或者預(yù)防或阻止性措施兩者。因而需要治療的對(duì)象(例如，人)可以是已經(jīng)患所述疾病或異常的對(duì)象或者待預(yù)防異常的對(duì)象。因而術(shù)語(yǔ)“治療”包括與缺乏治療相比抑制或降低病理狀態(tài)或癥狀(例如，體重增加或高血糖)嚴(yán)重程度的增加，并不一定指相關(guān)疾病、異常或病癥的完全終止。
本發(fā)明上下文中所使用的術(shù)語(yǔ)“激動(dòng)劑”指活化所述受體類型的物質(zhì)(配體)。
本發(fā)明上下文中所使用的術(shù)語(yǔ)“GLP-1受體激動(dòng)劑”(有時(shí)稱為“GLP-1激動(dòng)劑”)指活化GL P-1受體如人GLP-1受體的物質(zhì)(配體)。活化人GLP-1受體的物質(zhì)包括天然GLP-1 肽激素GLP-1 (7-37)、GLP-1 (7-36)酰胺、胃泌酸調(diào)節(jié)素、毒蜥外泌肽_3、毒蜥外泌肽-4、胰高血糖素、胃泌素抑制肽(GIP)以及其功能性肽類似物和衍生物。
本發(fā)明上下文中所使用的術(shù)語(yǔ)“拮抗劑”指阻斷、中和或抵消針對(duì)所述受體類型具有激動(dòng)劑功能之另一物質(zhì)(配體)的作用的物質(zhì)(配體)。
在本發(fā)明的上下文中，在本發(fā)明上述多個(gè)方面提及的需要特定治療或其他治療干預(yù)的對(duì)象優(yōu)選為哺乳動(dòng)物，并且更特別地為人。
本發(fā)明的另一方面涉及藥物組合物，其包含本發(fā)明的肽綴合物或者其可藥用鹽或溶劑化物以及可藥用載體、賦形劑或載劑。
肽綴合物的合成
本發(fā)明肽綴合物可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)合成方法、通過(guò)使用重組表達(dá)系統(tǒng)或者通過(guò)任何其他合適的方法制造。因此，所述綴合物可以以多種方法合成，包括，例如包括以下方法
(a)通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)固相法或液相法逐步或通過(guò)片段組裝來(lái)合成肽綴合物，并分離和純化最終的肽綴合物產(chǎn)物；
(b)在宿主細(xì)胞中表達(dá)編碼肽綴合物的核酸構(gòu)建體，并從所述宿主細(xì)胞培養(yǎng)物中回收表達(dá)產(chǎn)物；或
(C)進(jìn)行編碼肽綴合物的核酸構(gòu)建體的無(wú)細(xì)胞體外表達(dá)，并回收表達(dá)產(chǎn)物；
或者通過(guò)方法(a)、(b)或(C)的任意組合來(lái)獲得肽綴合物片段，隨后連接所述片段以獲得肽綴合物，并回收所述肽綴合物。
可常常優(yōu)選的是通過(guò)固相或液相肽合成來(lái)合成本發(fā)明的綴合物。在這一點(diǎn)上，可參考 W098/11125 或尤其是 Fields,GB.等，"Principles andPractice of Solid-PhasePeptide Synthesis " ； in Synthetic Peptides, GregoryA. Grant (編)，Oxford University Press (第二版,2002)和本文的合成實(shí)施例。
本發(fā)明化合物中的一個(gè)或更多個(gè)氨基酸側(cè)鏈可進(jìn)一步與親脂取代基綴合。親脂取代基可與氨基酸側(cè)鏈中的原子共價(jià)結(jié)合，或者作為替代地，可通過(guò)間隔物與氨基酸側(cè)鏈綴合。該氨基酸可以是肽Z的一部分或肽Y的一部分。
不希望受到理論的束縛，認(rèn)為親脂取代基結(jié)合血流中的白蛋白，從而保護(hù)本發(fā)明化合物免受酶降解，這可增強(qiáng)化合物的半衰期。所述間隔物(當(dāng)存在時(shí))用于在所述化合物和所述親脂取代基之間提供間隔。
親脂取代基可通過(guò)酯、磺酰酯、硫代酯、酰胺或磺酰胺與氨基酸側(cè)鏈或間隔物連接。因此，應(yīng)理解，優(yōu)選的親脂取代基包括酰基，磺酰基，形成酯、磺酰酯、硫代酯、酰胺或磺酰胺之一部分的N原子、O原子或S原子。
優(yōu)選地，親脂取代基中的?；c氨基酸側(cè)鏈或間隔物形成酰胺或酯的一部分。
親脂取代基可包含具有4至30個(gè)C原子的烴鏈。優(yōu)選地，它具有至少8或12個(gè) C原子，優(yōu)選地它具有24個(gè)或更少的C原子，或者20個(gè)或更少的C原子。烴鏈可以是線性的或有支鏈的，并且可以是飽和的或不飽和的。應(yīng)理解，烴鏈優(yōu)選地被這樣的部分所取代， 所述部分形成與氨基酸側(cè)鏈或間隔物的連接的一部分，例如酰基、磺酰基、N原子、O原子或 S原子。最優(yōu)選地，所述烴鏈被?；〈?，因而烴鏈可以是烷?；?例如棕櫚?；?、己酰基、 月桂?；?、肉豆蘧酰基或硬酯?；?的一部分。
因此，所述親脂取代基可具有下式
A可以是例如酰基、磺?；?、NH、N_烷基、O原子或S原子，優(yōu)選地為?；?。η為3至 29的整數(shù)，優(yōu)選地至少為7或至少為11，優(yōu)選地為23或更少，更優(yōu)選地為19或更少。
烴鏈可進(jìn)一步被取代。例如，其可被至多3個(gè)選自NH2、OH和COOH的取代基進(jìn)一步取代。如果烴鏈被進(jìn)一步取代，優(yōu)選地其僅被一個(gè)取代基進(jìn)一步取代。作為替代地或另外地，烴鏈可包含環(huán)烷烴或雜環(huán)烷烴，例如以下所示
優(yōu)選地，所述環(huán)烷烴或雜環(huán)烷烴為六元環(huán)。最優(yōu)選地，其為哌啶。
或者，親脂取代基可基于環(huán)戊烷并菲骨架，其可以是部分或完全不飽和的或者飽和的。骨架中的每個(gè)碳原子可被Me或OH取代。例如，所述親脂取代基可以是膽?；?(cholyl)、脫氧膽?；蚴戸；?Iithocholyl)。
如上所述，親脂取代基可通過(guò)間隔物綴合至氨基酸側(cè)鏈。當(dāng)存在時(shí)，間隔物連接至親脂取代基和氨基酸側(cè)鏈。間隔物可獨(dú)立地通過(guò)酯、磺酰酯、硫代酯、酰胺或磺酰胺與親脂取代基和氨基酸側(cè)鏈連接。因此，其可包含獨(dú)立地選自?；?、磺?；原子、O原子或S原子的兩個(gè)部分。所述間隔物可具有式
其中B和D各自獨(dú)立地選自?；⒒酋；?、NH、N-烷基、O原子或S原子，優(yōu)選地選自?；蚇H。優(yōu)選地，η為I至10的整數(shù)，優(yōu)選地為I至5的整數(shù)。所述間隔物還可被一個(gè)或多個(gè)選自以下的取代基進(jìn)一步取代=Ch烷基、Cch6烷基胺、Cch6烷基羥基和Cch6烷基羧基。
或者，所述間隔物可具有兩個(gè)或更多個(gè)上式的重復(fù)單元。對(duì)于每個(gè)重復(fù)單元，B、D 和η各自獨(dú)立地選擇。相鄰的重復(fù)單元可通過(guò)其各自的B和D部分彼此共價(jià)連接。例如， 相鄰重復(fù)單元的B和D部分可一起形成酯、磺酰酯、硫代酯、酰胺或磺酰胺。間隔物各端的游離B和D單元如上所述地連接至氨基酸側(cè)鏈和親脂取代基。
優(yōu)選地，所述間隔物具有5個(gè)或更少的、4個(gè)或更少的或者3個(gè)或更少的重復(fù)單元。 最優(yōu)選地，所述間隔物具有2個(gè)重復(fù)單元,或者為單個(gè)單元。
所述間隔物(或者間隔物的一個(gè)·或多個(gè)重復(fù)單元，如果其具有重復(fù)單元的話)可以是例如天然或非天然氨基酸。應(yīng)理解，對(duì)于具有官能化側(cè)鏈的氨基酸，B和/或D可以是氨基酸側(cè)鏈中的部分。所述間隔物可以是任何天然的或非天然的氨基酸。例如，間隔物(或者間隔物的一個(gè)或多個(gè)重復(fù)單元，如果其具有重復(fù)單元的話)可以是Gly、Pro、Ala、Val、 Leu、lie、Met、Cys、Phe、Tyr、Trp、His、Iys、Arg、Gin、Asn、a -Glu、γ -Glu、Asp、Ser、Thr、 Gaba、Aib、bAla、5_氨基戊?；?_氨基己?；?、7_氨基庚酰基、8_氨基辛?；?、9_氨基壬?；?0-氨基癸?；?br> 例如，所述間隔物可以是選自Y-Glu、Gaba、b-Ala和a-Gly的單個(gè)氨基酸。
所述親脂取代基可綴合至本發(fā)明化合物中的任何氨基酸側(cè)鏈。優(yōu)選地，所述氨基酸側(cè)鏈包括羧基、羥基、硫醇基、酰胺或胺基，用以與所述間隔物或親脂取代基形成酯、磺酰酯、硫代酯、酰胺或磺酰胺。例如，所述親脂取代基可綴合至Asn、Asp、Glu、Gin、His、Lys、 Arg、Ser、Thr、Tyr > Trp> Cys或Dbu> Dpr或Orn0優(yōu)選地,所述親脂取代基綴合至Lys或 Cys0然而，在本文提供的式中顯示為L(zhǎng)ys的任何氨基酸可在加入親脂取代基處被替換為 Dbu、Dpr 或 Orn0
親脂取代基和間隔物的實(shí)例在下式中顯示
本文中，來(lái)自本發(fā)明化合物(例如來(lái)自X)的Lys通過(guò)酰胺部分與Y-Glu(間隔物)共價(jià)連接。棕櫚?；ㄟ^(guò)酰胺部分與Y-Glu間隔物共價(jià)連接。
作為替代地或另外地，本發(fā)明化合物中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸側(cè)鏈可綴合至聚合部分，例如，用以提高溶解性和/或體內(nèi)(例如，血漿中)半衰期和/或生物利用度。還已知此類修飾降低治療性蛋白質(zhì)和肽的清除率(例如，腎清除率)。
所述聚合部分優(yōu)選為水溶性(兩親的或親水的)、無(wú)毒以及藥學(xué)上惰性的。合適的聚合部分包括聚乙二醇(PEG)、PEG的同聚物或共聚物、PEG的單甲基取代聚合物(mPEG)或聚氧乙烯甘油(POG) ο 參見(jiàn)，例如，Int. J. Hematology68 1 (1998) ；Bioconjugate Chem. 6 150(1995)以及 Crit. Rev. Therap. Drug Carrier Sys. 9 :249 (1992)。
其它合適的聚合部分包括聚氨基酸，如聚賴氨酸、聚天冬氨酸和聚谷氨酸(參見(jiàn)，例如，Gombotz 等，(1995)，Bioconjugate Chem.，卷 6 :332-351 ；Hudecz 等，(1992)， Bioconjugate Chem.,卷 3,49-57 ；Tsukada 等·(1984), J. Natl. Cancer Inst.,卷 73 : 721-729 ；以及 Pratesi 等(1985)，Br. J. Cancer,卷 52 :841-848)。
聚合部分可以是直鏈或有支鏈的。其可具有500至40，OOODa的分子量，例如500 至 10，OOODa,1000 至 5000Da、10，000 至 20，OOODa 或 20，000 至 40，OOODa0
化合物可包含兩個(gè)或更多個(gè)此類部分，在這種情況下所有這些部分的總分子量通常落在以上提供的范圍內(nèi)。
聚合部分可偶聯(lián)(或共價(jià)連接)至氨基酸側(cè)鏈的氨基、羧基或硫醇基。優(yōu)選的實(shí)例為Cys殘基的硫醇基和Lys殘基的ε -氣基,并且還可使用Asp和Glu殘基的竣基。
本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)了解可用于實(shí)施偶聯(lián)反應(yīng)的合適技術(shù)。例如，可采用從Nektar Therapeutics AL購(gòu)得的試劑通過(guò)馬來(lái)酰亞胺基連接將攜帶甲氧基的PEG部分偶聯(lián)至Cys 的硫醇基。還參見(jiàn)W02008/101017以及上述針對(duì)合適化學(xué)性質(zhì)的細(xì)節(jié)所引用的參考文獻(xiàn)。
治療用涂
以下，應(yīng)理解關(guān)于本發(fā)明肽綴合物的用途也涵蓋其可藥用鹽或溶劑化物的用途。
本發(fā)明肽綴合物可為代謝疾病或異常(包括糖尿病尤其是I型和/或2型糖尿病和可能的肥胖癥)提供有吸引力的治療選擇。
糖尿病包括特征為由胰島素分泌、胰島素作用缺陷或這二者所引起之高血糖癥的一組代謝疾病。糖尿病的急性癥狀包括尿產(chǎn)生過(guò)量、所導(dǎo)致的代償性口渴和流體攝取增多、 視力模糊、原因不明的體重降低、嗜睡和能量代謝改變。糖尿病的慢性高血糖癥與大血管和微血管并發(fā)癥相關(guān)，所述并發(fā)癥可導(dǎo)致多種器官(尤其是眼(尤其以糖尿病視網(wǎng)膜病的形式)、腎(以糖尿病性腎病的形式)、神經(jīng)(以糖尿病神經(jīng)病變的形式)、心臟和血管)的長(zhǎng)期損傷、功能障礙和在一些情況下的最終衰竭。根據(jù)致病特征，糖尿病分為I型糖尿病、2型糖尿病和妊娠糖尿病。
I型糖尿病占全部糖尿病病例的5至10%，它是由于分泌胰島素的胰細(xì)胞的自身免疫性破壞所引起的。
2型糖尿病占糖尿病病例的90至95%，它是一系列復(fù)雜代謝障礙的結(jié)果。2型糖尿病是內(nèi)源性胰島素產(chǎn)生和/或全身胰島素敏感性不足以將血漿葡萄糖水平保持為低于診斷閾值的結(jié)果。
妊娠糖尿病是指懷孕期間鑒定的任何程度的葡萄糖不耐受。
還發(fā)現(xiàn)了稱為糖尿病前期的病癥。其包括，例如空腹葡萄糖水平受損和葡萄糖耐量降低，它通常指在血液葡萄糖水平升高但低于所確立的糖尿病臨床診斷水平時(shí)發(fā)生的那些狀態(tài)。
較大比例的2型糖尿病和糖尿病前期對(duì)象由于很普遍地具有其他代謝風(fēng)險(xiǎn)因素而具有更大的發(fā)病和死亡風(fēng)險(xiǎn)，所述風(fēng)險(xiǎn)因素包括腹部肥胖癥(腹內(nèi)部器官周圍的脂肪組織過(guò)多)、致動(dòng)脈粥樣化血脂異常(血脂異常包括高甘油三酯水平、低HDL膽固醇水平和/ 或高LDL膽固醇水平，其促使斑塊在動(dòng)脈壁中形成)、血壓升高(高血壓)、血栓前狀態(tài)(例如血液中存在高水平的纖維蛋白原或纖溶酶原激活物抑制因子-1)和促炎癥狀態(tài)(例如， 血液中C反應(yīng)蛋白升高)。
相反，肥胖癥使得例如糖尿病前期、2型糖尿病、某些類型的癌癥、阻塞性睡眠呼吸暫停和膽囊病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加。
血脂異常與心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān)。高密度脂蛋白(HDL)是有臨床重要性的， 因?yàn)檠獫{HDL濃度與動(dòng)脈粥樣硬化性疾病風(fēng)險(xiǎn)之間存在負(fù)相關(guān)性。存儲(chǔ)于動(dòng)脈粥樣硬化斑中的大多數(shù)膽固醇來(lái)自低密度脂蛋白(LDL)，因此LDL濃度的升高與動(dòng)脈粥樣硬化密切相關(guān)。HDL/LDL比率是評(píng)估動(dòng)脈粥樣硬化、尤其是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的臨床風(fēng)險(xiǎn)的指標(biāo)。
不希望受到任何特定理論的束縛，認(rèn)為本發(fā)明肽綴合物可出乎意料地將上述 GLP-1受體激動(dòng)劑與胃泌素肽的的生理作用組合，該組合方式使得所觀察到的活性可顯著大于使用單獨(dú)肽組分的相應(yīng)加和性(非綴合)組合所觀察到的。因此認(rèn)為本發(fā)明的肽綴合物在治療糖尿病前期、糖尿病(尤其是I型和/或2型糖尿病)以及糖尿病相關(guān)病癥、疾病或異常(如以上所述那些)方面尤其有益，包括進(jìn)行治療從而促進(jìn)胰島β_細(xì)胞形成(胰島新生)從而產(chǎn)生胰島素，這對(duì)調(diào)節(jié)血液葡萄糖濃度有益。因此，本發(fā)明的肽綴合物尤其在限制或抑制I型和/或2型糖尿病疾病進(jìn)展中可具有價(jià)值。
本發(fā)明的肽還可用于促進(jìn)胰島中細(xì)胞的存活和抑制其凋亡。GLP-1和胃泌素的作用包括作用于β_細(xì)胞增殖和成熟，而且防止β_細(xì)胞凋亡并增強(qiáng)新生，因此本發(fā)明肽的作用可包括此類作用和其對(duì)改善胰島素和葡萄糖調(diào)節(jié)的作用。
本發(fā)明的肽綴合物還可用作藥劑用于治療胰島素抵抗、葡萄糖不耐受、糖尿病前期、空腹葡萄糖水平升高、I型和/或2型糖尿病、高血壓和/或血脂異常(或者這些代謝風(fēng)險(xiǎn)因素的組合)、動(dòng)脈粥樣硬化、動(dòng)脈硬化、冠心病、外周動(dòng)脈疾病和中風(fēng)。它們還可用于預(yù)防體重增加、促進(jìn)體重降低、減少過(guò)多體重和/或治療肥胖癥(例如通過(guò)控制食欲、進(jìn)食、食物攝取、熱量攝取和/或能量消耗)(包括病態(tài)肥胖)以及相關(guān)疾病、異常和健康狀況(包括但不限于肥胖相關(guān)炎癥、肥胖相關(guān)膽囊病和肥胖引起的睡眠呼吸暫停)。本發(fā)明的肽綴合物對(duì)這些病癥的作用可以全部或部分地由它們對(duì)體重的作用引起，或者可以獨(dú)立于該作用。
藥物組合物
以下，應(yīng)理解關(guān)于藥物組合物中的一種或更多種本發(fā)明肽綴合物的內(nèi)容也涵蓋本發(fā)明肽綴合物的可藥用鹽或溶劑化物。
本發(fā)明的肽綴合物可配制成藥物組合物，其適于在有或沒(méi)有貯存的情況下施用， 并且所述藥物組合物通常包含治療有效量的至少一種本發(fā)明的綴合物和可藥用載體、賦形劑或載劑。
術(shù)語(yǔ)“可藥用載體”包括任何標(biāo)準(zhǔn)藥用載體。用于治療用途的可藥用載體是藥學(xué)領(lǐng)域公知的，并描述于例如"Remington' s PharmaceuticalSciences",第 17 版，Alfonso R. Gennaro (編),Mark Publishing Company,Easton,PA,USA, 1985 中。例如，可使用弱酸性或生理pH下的無(wú)菌鹽水和磷酸鹽緩沖鹽水。合適的pH緩沖劑可以是，例如磷酸鹽、檸檬酸鹽、醋酸鹽、三(羥甲基)氨基甲烷(TRIS)、N-三(羥甲基)甲基-3-氨基丙磺酸(TAPS)、 碳酸氫銨、二乙醇胺、組氨酸、精氨酸、賴氨酸或醋酸鹽(例如醋酸鈉)或者其混合物。該術(shù)語(yǔ)還涵蓋在美國(guó)藥典中所列的用于動(dòng)物(包括人)的任何載體試劑。
本發(fā)明的藥物組合物可采用單位劑型。在此類形式中，所述組合物被分成包含適當(dāng)量的一種或更多種活性組分的單位劑量。所述單位劑型可表現(xiàn)為經(jīng)包裝的制劑，所述包裝包含獨(dú)立量的制劑，例如，經(jīng)包裝的片劑、膠囊劑以及小瓶或安瓿瓶中的粉末劑。單位劑型還可本身為例如膠囊劑、扁囊劑或片劑，或者可以為適當(dāng)數(shù)目的任何這些經(jīng)包裝形式。單位劑型還可以以單劑量注射劑形式提供，例如采用包含液相(通常為水性)組合物的筆形裝置(pen device)的形式?？蓪⒔M合物配制成用于任何合適的施用途徑和手段?？伤幱幂d體或稀釋劑包括適于例如口服、intraviteral、經(jīng)直腸、經(jīng)陰道、經(jīng)鼻、局部、經(jīng)腸或腸胃外(包括皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、經(jīng)皮和透皮)施用或者通過(guò)吸入施用的制劑中使用的那些。制劑方便地以單位劑型存在，并可通過(guò)藥物制劑領(lǐng)域公知的任何方法來(lái)制備。
皮下或透皮施用模式可對(duì)本發(fā)明的肽綴合物尤其適用。
本發(fā)明的又一方面涉及用于遞送本發(fā)明藥物制劑的裝置、劑型和包裝。因此，在本文描述的穩(wěn)定的或保存的制劑或溶液中的至少一種肽綴合物或特定部分或變體可通過(guò)多種遞送方法(包括如本領(lǐng)域所公知的SC或頂注射；透皮、經(jīng)肺、經(jīng)粘膜、植入、滲透泵、藥筒 (cartridge)、微泵或其他技術(shù)人員所領(lǐng)會(huì)的方法)施用至根據(jù)本發(fā)明的患者。
本發(fā)明的又一方面涉及口服制劑和施用。用于口服的制劑可依賴于共同施用輔劑 (例如，間苯二酚和非離子型表面活性劑如聚氧乙烯油基醚和正十六烷基聚乙烯醚)以人為地提高腸壁的滲透性，以及共同施用酶抑制劑(例如，胰蛋白酶抑制劑、二異丙基氟磷酸 (DFF)和抑肽酶(trasylol))以抑制酶促降解。用于口服施用的固體型劑型的活性成分化合物可與至少一種添加劑混合，所述添加劑包括蔗糖、乳糖、纖維素、甘露醇、海藻糖、棉子糖、麥芽糖醇、葡聚糖、淀粉、瓊脂、精氨酸鹽/酯、幾丁質(zhì)、殼聚糖、果膠、黃蓍膠、阿拉伯膠、 明膠、膠原、酪蛋白、白蛋白、合成或半合成聚合物和甘油酯。這些劑型還可包含其他類型的添加劑，例如非活性稀釋劑、潤(rùn)滑劑(如硬脂酸鎂)、對(duì)羥基苯甲酸酯、防腐劑(如山梨酸、抗壞血酸、α-生育酚)、抗氧化劑(如半胱氨酸)、崩解劑、粘合劑、增稠劑、緩沖劑、甜味劑、 調(diào)味劑、香料，等。
MS
本發(fā)明上下文中使用的本發(fā)明肽綴合物的通常劑量為約0. 001至約100mg/kg體重/天，如約0. 01至約50mg/kg體重/天，例如約0. 05至約10mg/kg體重/天，以一個(gè)或更多個(gè)劑量施用，如I至3個(gè)劑量。如上文在一定程度上已指出的，施用的準(zhǔn)確劑量將尤其依賴于待治療疾病或異常的特性和嚴(yán)重程度；待治療對(duì)象的性別、年齡、體重和一般情況；正在接受或待接受治療的可能的其他伴發(fā)疾病或異常；以及醫(yī)藥領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其他因素。
聯(lián)合治療
如上述，應(yīng)理解下文中提及本發(fā)明的肽綴合物時(shí)也延伸至其可藥用鹽或溶劑化物以及包含多于一種不同本發(fā)明肽綴合物的組合物。
本發(fā)明的肽綴合物可作為聯(lián)合治療的一部分與用于治療所述疾病或異常(例如， 糖尿病、肥胖癥、代謝綜合征、血脂異?；蚋哐獕?的另一種活性藥劑一起施用，并且在這種情況下，可同時(shí)或分別給予兩種活性藥劑，例如作為同一藥物組合物或制劑的成分，或者作為分開的制劑。
因此，本發(fā)明的肽綴合物可與已知類型的抗糖尿病藥劑聯(lián)合使用，所述抗糖尿病藥劑包括但不限于二甲雙胍、磺酰脲、格列奈類(glinide)、DPP-1V抑制劑、格列酮類 (glitazone)或者胰島素或胰島素類似物。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽綴合物與胰島素或其類似物、DPP-1V抑制劑、磺酰脲或者二甲雙胍(特別是磺酰脲或二甲雙胍) 聯(lián)合施用以實(shí)現(xiàn)充分的血糖控制。在一個(gè)更加優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述肽綴合物與胰島素或胰島素類似物聯(lián)合施用以實(shí)現(xiàn)充分的血糖控制。適當(dāng)?shù)囊葝u素類似物的實(shí)例包括但不限于 Lantus 、Novorapid > Humalog 、Novomix 、Actraphane HM> Levemir Degludec 和Apidra 。在這一點(diǎn)上其他相關(guān)的抗糖尿病藥劑包括GLP-1受體激動(dòng)劑，如艾塞那肽 (exenatide) (Byetta ;毒蜥外泌肽-4)和利拉魯肽(Iiraglutide) (Victoza )。
本發(fā)明的肽綴合物還可以與已知類型的抗肥胖藥劑聯(lián)合使用，所述抗肥胖藥劑包括但不限于肽YY或其類似物、神經(jīng)肽Y(NPY)或其類似物、大麻素受體I拮抗劑 (cannabinoid receptorIantagonist)、脂肪酶抑制劑、人 prolslet 肽(HIP)、黑皮質(zhì)素受體4激動(dòng)劑(melanocortin receptor4agonist)或者黑色素濃集激素(melanin concentrating hormone)受體 I 拮抗劑。
本發(fā)明肽的綴合物還可以與已知類型的抗高血壓藥劑聯(lián)合使用，所述抗高血壓劑包括但不限于血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶抑制劑、血管緊張肽II受體阻斷劑、利尿劑、β -阻斷劑或鈣通道阻斷劑。
本發(fā)明的肽綴合物還可以與已知類型的抗血脂異常藥劑聯(lián)合施用，所述抗血脂異常藥劑包括但不限于他汀類(statin)、貝特類(fibrate)、煙酸類(niacin)和/或膽固醇吸收抑制劑。
本發(fā)明的肽綴合物還可以與已知類型的質(zhì)子泵抑制劑(即，具有藥理學(xué)活性的藥劑，如抑制劑H7K+-ATP酶)聯(lián)合使用，所述質(zhì)子泵抑制劑包括但不限于苯并咪唑衍生物型藥劑或咪唑并卩比卩定衍生物型藥劑，如Omeprazole 、Lansoprazole 、Dexlansoprazole 、 Esomeprazole 、Pantoprazole 、Rabeprazole 、Zolpidem 、Alpidem 、Sar ip idem 或 Necopidem 。
此外，本發(fā)明的肽綴合物還可以與已知類型的抗炎藥劑聯(lián)合施用，所述抗炎藥劑包括但不限于留體類和皮質(zhì)類固醇類，如倍氯米松、甲基潑尼松龍、倍他米松、潑尼松、地塞米松和氫化可的松；非留體類抗炎劑(NSAID)，如丙酸衍生物(例如，阿明洛芬、苯惡洛芬、布氯酸、卡洛芬、芬布芬、非諾洛芬、氟洛芬、氟比洛芬、布洛芬、吲哚 洛芬、酮洛芬、咪洛芬、萘普生、奧沙普秦、吡洛芬、普拉洛芬、舒洛芬、噻洛芬酸和硫惡洛芬)、醋酸衍生物(例如，吲哚美辛、阿西美辛、阿氯芬酸、環(huán)氯茚酸、雙氯芬酸、芬氯酸、芬克洛酸、吩噻唑酸、呋羅芬酸、異丁芬酸、伊索克酸、歐比那酸(oxpinac)、舒林酸、噻平酸、托美丁、齊多美辛和佐美酸)、芬那酸衍生物(例如，氟芬那酸、甲氯芬那酸、甲芬那酸、尼氟滅酸和托芬那酸)、聯(lián)苯羧酸衍生物(例如，二氟尼柳和氟苯沙酸)、昔康類(例如，伊索昔康、吡羅昔康、舒多昔康和替諾昔康)、水楊酸類(例如，乙酰水楊酸和柳氮磺吡啶)和吡唑啉酮類(例如，阿扎丙宗、 節(jié)哌立隆(bezpiperylon)、非潑拉酮、莫非保松、輕保泰松和苯基保泰松)；C0XII抑制劑如羅非昔布和塞來(lái)昔布；干擾素β制品(例如，干擾素β-la或干擾素β-lb);和某些其他化合物，如5-氨基水楊酸，以及其前藥和可藥用鹽。
也證明二甲基胍具有抗炎特性[參見(jiàn)Haffner等，Diabetes54 :1566-1572(2005)] 并且因此也可用于本發(fā)明。
每個(gè)所引用的出版物和專利申請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用并入本文。
以下實(shí)施例表明本發(fā)明的某些特定的實(shí)施方案。使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)進(jìn)行以下實(shí)施例， 所述標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)除非另有詳細(xì)說(shuō)明，否則是本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的或常規(guī)的。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅為說(shuō)明性目的并且目的不在于確定本發(fā)明的條件或范圍。同樣，不應(yīng)將它們解釋為以任何方式限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例
在實(shí)施例中所使用的縮寫包括
NMP N-甲基吡咯烷酮
DCM: 二氯甲烷
DMF :N，N-二甲基甲酰胺
HATU :2_ (7-氮雜-1H-苯并三唑-1-基)_1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯
DIPEA :二異丙基乙胺
EtOH:乙醇
Et2O:乙醚
Peg3 :8_氛基-3,6_ 二氧雜羊酸基
8Aoc 8-氨基辛?；?br> DBF :4-(2-氨乙基)_6_ 二苯并呋喃丙酰基
TFA:三氟乙酸
MeCN 乙腈
HPLC :高效液相色譜
MS :質(zhì)譜
IBMX :3-異丁基-1-甲基黃嘌呤
BSA:牛血清白蛋白
cAMP :環(huán)腺苷一磷酸
DMEM =Dulbecco 改良的 Eagle 培養(yǎng)基
FCS :胎牛血清
HEPES :N_2-羥乙基哌嗪-N' _2_乙磺酸
p-ERK :磷酸化細(xì)胞外調(diào)節(jié)激酶
PBS :磷酸鹽緩沖鹽水
Boc :叔丁氧羰基
NEP N-甲基吡咯烷酮
利拉魯肽[Arg34，Lys(十六?；?異 Glu) 26] GLP-1 (7-37)
實(shí)施例1:化合物的合成和肽的特性
材料和方法
除非另有說(shuō)明，否則以下使用的試劑和溶劑為市售標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室試劑或分析級(jí)，并且使用時(shí)沒(méi)有進(jìn)一步純化。
合成本發(fā)明肽綴合物的一般方案
使用標(biāo)準(zhǔn)Fmoc化學(xué)，用CEM Liberty肽合成儀進(jìn)行固相肽合成。使用前，在 NMP(IOml)中膨脹 TentaGel S Ram 樹脂(lg ;0. 25mmol/g)，并使用 DCM 和 NMP 在管和反應(yīng)容器之間轉(zhuǎn)移。在適當(dāng)處使用假脯氨酸(pseudoproline)(在肽合成期間用于盡可能減小聚集的二妝)，如 Fmoc-Phe-Thr (Ψ-Me, Me-pro) -OH 和 Fmoc-Asp-Ser (Ψ-Me, Me-pro) -0H, 并且形成Peg3、8Aoc和DBF接頭部分(參見(jiàn)上文)的非天然氨基酸以Fmoc保護(hù)氨基酸(SP， 分別為Fmoc-Peg3-0H、Fmoc-8Aoc-0H和Fmoc-DBF-OH)形式使用，之后對(duì)一般方案沒(méi)有任何改變。
偶聯(lián)
在CEM Discover 微波單元中，將 NMP/DMF/DCM(I I I ；0. 2M ；5ml)中的 Fmoc-氨基酸與 HATU/NMP(0. 5M ；2ml)和 DIPEA/NMP(2. OM ；lml) 一起添加至樹脂中。將偶聯(lián)混合物加熱至75°C 5分鐘，同時(shí)將氮?dú)庖詺馀菪问酵ㄟ^(guò)該混合物。隨后用NMP (4 X IOml) 洗滌該樹脂。
去保護(hù)
將哌啶/NMP(20% ；10ml)添加至樹脂中用于初始去保護(hù)，將該混合物微波加熱 (40 0C ;30秒)。排干反應(yīng)容器，添加第二份哌啶/NMP (20% ; 10ml)，再次加熱(75 °C ;3分鐘)。隨后用NMP (6 X IOml)洗滌該樹脂。
切割
用EtOH(3 X IOml)和Et2O (3 X IOml)洗滌樹脂，并且在室溫(r. t.)下干燥至恒重。 用TFA/乙二硫醇 (95/5，40ml，2小時(shí)；室溫)處理從樹脂上切割粗制肽。在減壓下除去大部分TFA，沉淀粗制肽并且用Et2O洗滌3次，然后在室溫下干燥至恒重。
純化和表征
利用配置有合適的柱和級(jí)分收集器的PerSeptive Biosystems VISION工作站通過(guò)制備型反相HPLC純化粗制肽至大于90%純度，使用緩沖液A (O. 1% TFA, aq.)和緩沖液 B (O.1 % TFA, 90 % MeCN, aq.)的梯度運(yùn)行。通過(guò)分析型HPLC和MS分析級(jí)分，合并相關(guān)級(jí)分并凍干。通過(guò)HPLC和MS表征終產(chǎn)物。
合成實(shí)施例
如上述，使用TentaGel S Ram 樹脂(O. 67g ;0· 23mmol/g)和 Fmoc 化學(xué)，用 CEM Liberty肽合成儀合成毒蜥外泌肽_4 (1-39)-Peg3_Peg3_[Glnl, Leul5]胃泌素17 (化合物 I)。使用 Fmoc-8-氛基-3,6_ 二氧雜辛酸和假腦氛酸 Fmoc-Phe-Thr (Ψ-Me,Me-Pro)-OH 和 Fmoc-Ser (tBu) -Ser (Ψ-Me, Me-Pro) -0H。
如上述，從樹脂上切割肽，以35ml/分鐘的緩沖液A(0.1 % TFA ；aq.)和緩沖液 B (O. 1% TFA ；90% MeCN ；aq.)之混合物的流速，用 Gemin1-NX 柱(5X25cm ;10 μ m ;C18)進(jìn)行純化。經(jīng)47分鐘用從20%至50%緩沖液B的線性梯度洗脫產(chǎn)物，通過(guò)級(jí)分收集器收集級(jí)分(9ml)。用分析型HPLC和MS分析相關(guān)的級(jí)分，合并并凍干以得到白色粉末(122mg)，通過(guò)分析型HPLC分析為具有58%的純度。
以4ml/ 分鐘的緩沖液 A (O. 1% TFA ；aq.)和緩沖液 B (O. 1% TFA, 90% MeCN ；aq.) 之混合物的流速，用Luna柱(I X 25cm ；5ym；C8)對(duì)產(chǎn)物再次進(jìn)行純化。經(jīng)47分鐘用從20% 至50%緩沖液B的線性梯度洗脫產(chǎn)物，通過(guò)級(jí)分收集器收集級(jí)分(2ml)。用分析型HPLC和 MS分析相關(guān)的級(jí)分，合并并凍干以得到白色粉末(63mg)，通過(guò)分析型HPLC分析為具有82% 的純度。
用TentaGel S Ram樹脂(O. 70g ;0. 23mmol/g)和其他與上述用于合成和切割相同的條件合成化合物I的另一部分。
以35ml/分鐘的緩沖液 A (O. 1% TFA ；aq.)和緩沖液 B (O. 1% TFA ；90% MeCN ；aq.) 之混合物的流速，用Gemin1-NX柱(5X 25cm ; 10 μ m ;C18)進(jìn)行純化。經(jīng)47分鐘用從20%至 50%緩沖液B的線性梯度洗脫產(chǎn)物，通過(guò)級(jí)分收集器收集級(jí)分(9ml)。用分析型HPLC和MS 分析相關(guān)的級(jí)分，合并并凍干以得到白色粉末(113mg)，通過(guò)分析型HPLC分析為具有57% 的純度。
以4ml/ 分鐘的緩沖液 A (O. 1% TFA ；aq.)和緩沖液 B (O. 1% TFA, 90% MeCN ；aq.) 之混合物的流速，用Luna柱(I X 25cm ；5ym；C8)再次對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行純化。經(jīng)47分鐘用從20% 至55%緩沖液B的線性梯度洗脫產(chǎn)物，通過(guò)級(jí)分收集器收集級(jí)分(2ml)。用分析型HPLC和 MS分析相關(guān)的級(jí)分，合并并凍干以得到白色粉末(29mg)，通過(guò)分析型HPLC分析為具有77% 的純度。
將來(lái)自第一合成(63mg;82%)和第二合成(29mg;77%)的產(chǎn)物合并，并且以4ml/ 分鐘的緩沖液A (O. 1% TFA ；aq.)和緩沖液B (O. 1% TFA ；90% MeCN ；aq.)之混合物的流速， 用Kromasil柱(I X 25cm ;10 μ m ;C8)再一次進(jìn)行純化。經(jīng)47分鐘用從25%至65%緩沖液 B的線性·梯度洗脫產(chǎn)物，通過(guò)級(jí)分收集器收集級(jí)分(2ml)。用分析型HPLC和MS分析相關(guān)的級(jí)分，合并并凍干以得到白色粉末(33mg)，通過(guò)分析型HPLC分析為具有94%純度。以MS 測(cè)得質(zhì)量為6553. 39Da(計(jì)算值6553. 06Da)。
如上述，使用TentaGel S Ram 樹脂(O. 55g ;0· 23mmol/g)和 Fmoc 化學(xué)，用 CEM Liberty肽合成儀合成毒蜥外泌肽_4 (1-28) -Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素6 (化合物33)。使用 Fmoc-8-氛基-3,6- 二氧雜辛酸和假腦氛酸 Fmoc-Phe-Thr (Ψ-Me, Me-Pro) -0H。
如上述，從樹脂上切割肽，以35ml/分鐘的緩沖液A(0.1 % TFA ；aq.)和緩沖液 B (O. 1% TFA ；90% MeCN ；aq.)之混合物的流速，用 Gemin1-NX 柱(5 X 25cm ; 10 μ m ;C18)進(jìn)行純化。經(jīng)47分鐘用從25%至55%緩沖液B的線性梯度洗脫產(chǎn)物，通過(guò)級(jí)分收集器收集級(jí)分(9ml)。用分析型HPLC和MS分析相關(guān)的級(jí)分，合并并凍干以得到白色粉末(70mg)，通過(guò)分析型HPLC分析為具有90%的純度。以MS測(cè)得質(zhì)量為4364. 08Da(計(jì)算值4364.1lDa)。
如上述，使用TentaGel S Ram 樹月旨(1. 15g ;0· 25mmol/g)和 Fmoc 化學(xué)，用 CEM Liberty 妝合成儀使用 Fmoc-Phe-Thr (Ψ-Μθ,Μθ-Ργο) -OH合成[Glu9, Leul4, Phe25, Tyrl3] 毒蜥外泌肽-4 (1-27)-[Leu4]胃泌素6 (化合物101)。在偶聯(lián)和去保護(hù)期間使用NEP替換 NMP0
如上述，從樹脂上切割肽，以35ml/分鐘的緩沖液A(0.1 % TFA ；aq.)和緩沖液 B(0. 1% TFA ；90% MeCN ；aq.)之混合物的流速，用 Gemin1-NX 柱(5X25cm ；10μ m ；C18)進(jìn)行純化。經(jīng)47分鐘用從20%至50%緩沖液B的線性梯度洗脫產(chǎn)物，通過(guò)級(jí)分收集器收集級(jí)分(9ml)。用分析型HPLC和MS分析相關(guān)的級(jí)分，合并并凍干以得到白色粉末(50mg)， 通過(guò)分析型HPLC進(jìn)行分析為具有85%的純度。以MS測(cè)得質(zhì)量為3952. 00. 08Da(計(jì)算值 3951. 97Da)。
如上述，使用TentaGel S Ram 樹月旨(1. 16g ;0· 23mmol/g)和 Fmoc 化學(xué)，用 CEM Liberty 肽合成儀合成 GLP-1 (7-36)-Peg3-Peg3-[Glnl，Leul5]胃泌素 17(化合物 42)。使用 Fmoc-8-氨基-3,6- 二氧雜辛酸和假腦氨酸 Fmoc-Ser (tBu) -Ser (Psi Me, Me Pro) -0H。
如上述，從樹脂上切割肽，以35ml/分鐘的緩沖液A(0.1 % TFA ；aq.)和緩沖液 B (O. 1% TFA ；90% MeCN ；aq.)之混合物的流速，用 Gemin1-NX 柱(5X25cm ;10 μ m ;C18)進(jìn)行純化。經(jīng)47分鐘用從25%至45%緩沖液B的線性梯度洗脫產(chǎn)物，通過(guò)級(jí)分收集器收集級(jí)分(9ml)。用分析型HPLC和MS分析相關(guān)的級(jí)分，合并并凍干以得到白色粉末(172mg)， 通過(guò)分析型HPLC進(jìn)行分析為具有86 %的純度。以MS測(cè)得質(zhì)量為5664. 72Da(計(jì)算值 5664. 70Da)。
如上述，使用TentaGel S Ram 樹脂(1. 30g ;0· 25mmol/g)和 Fmoc 化學(xué)，用 CEM Liberty 肽合成儀合成[Arg34, Lys (十六?；?異 Glu) 26] GLP-1 (7-37)-Peg3_Peg3-[Leu4] 胃泌素6(化合物107)。在偶聯(lián)和去保護(hù)期間使用NEP代替NMP。在?；幨褂?Fmoc-Lys (Dde) -OH 以及 Fmoc_8-氛基-3,6- 二氧雜辛酸和假腦氛酸 Fmoc-Phe-Thr (Ψ-Me, Me-Pro)-OH。
將連接固相的肽N末端使用DCM中的Boc20(330mg)和DIPEA (54 μ I)進(jìn)行Boc保護(hù)。隨后用水合肼/ΝΕΡ(4% ;2Χ 15分鐘)切除Dde保護(hù)基團(tuán)，用NEP(8X2分鐘)、DIEA/ NEP(10% ；5Χ5分鐘)和NEP(8X2分鐘)洗滌樹脂。使用Fmoc-Glu-OtBu和十六烷酸，如上述用CEMLiberty肽合成儀完成合成。在偶聯(lián)和去保護(hù)期間使用NEP代替NMP。
如上述，從樹脂上切割肽，以35ml/分鐘的緩沖液A(0.1 % TFA ；aq.)和緩沖液 B (O. 1% TFA ；90% MeCN ；aq.)之混合物的流速，用 Gemin1-NX 柱(5X25cm ;10 μ m ;C18)進(jìn)行純化。經(jīng)47分鐘用從30%至70%緩沖液B的線性梯度洗脫產(chǎn)物，通過(guò)級(jí)分收集器收集級(jí)分(9ml)。用分析型HPLC和MS分析相關(guān)的級(jí)分，合并并凍干以得到白色粉末(60mg)，通過(guò)分析型HPLC分析為具有88%的純度。以MS測(cè)得質(zhì)量為4819. %Da(計(jì)算值4819. 45Da)。
實(shí)施例2 :通過(guò)本發(fā)明的肽綴合物體外活化(EC5tl)GLP-1受體和胃泌素CCK-B受體
材料和方法
人GLP-1受體(GLP-1R)效力測(cè)定
使用來(lái)自Perkin-Elmer 的 FlashPlate cAMP 試劑盒，通過(guò)測(cè)量 GLP-1 (7-36)、毒蜥外泌肽-4(1-39)或測(cè)試的本發(fā)明綴合物刺激受體后誘導(dǎo)的cAMP來(lái)評(píng)估本發(fā)明肽綴合物的體外作用。簡(jiǎn)言之，將表達(dá)人GLP-1R的HEK293細(xì)胞(通過(guò)轉(zhuǎn)染GLP-1R的cDNA并且選擇穩(wěn)定克隆來(lái)產(chǎn)生的穩(wěn)定細(xì)胞系)以40，000個(gè)細(xì)胞/孔接種在包被了 O. 01%聚-L-賴氨酸的96微孔板上，并在100 μ I生長(zhǎng)培養(yǎng)基[DMEM，10% FCS，青霉素(100IU/ml)，鏈霉素 (100 μ g/ml)]中培養(yǎng)I天。在分析當(dāng)天,去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基,用200 μ I Tyrode緩沖液[Tyrode 鹽(9. 6g/l)，IOmM HEPES, pH7. 4]洗滌細(xì)胞I次。在37°C下在含有濃度遞增的測(cè)試化合物、100 μ M IBMX和O.1 % BSA 的100 μ I Tyrode緩沖液中孵育細(xì)胞15分鐘。通過(guò)添加 25 μ 10. 5Μ HCl終止反應(yīng)，并在冰上孵育60分鐘。進(jìn)一步的詳細(xì)方法參照W02008/152403。
CCK-B 受體(CCK-B R)效力測(cè)定
為了測(cè)試CCK-BR的結(jié)合和活化，我們以與產(chǎn)生hGLP_lR細(xì)胞系的(如上)類似的生產(chǎn)方法制備了表達(dá)人或小鼠CCK受體之一的穩(wěn)定細(xì)胞系。簡(jiǎn)言之，我們使用HEK293 細(xì)胞用于轉(zhuǎn)染全部克隆至轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pIRES-neo2dNGFR的人或小鼠CCK-A R或CCK-B R[hCCK-A R(基因同一性L19315)、hCCK-B R(NM_176875)、mCCK-A R(NM_009827)和 mCCK-B R(NM_007627)]的cDNA。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞，并使用質(zhì)粒用 Lipofectamin(Invitrogen)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。使用G418在生長(zhǎng)培養(yǎng)基(只有獲得和整合入cDNA 表達(dá)質(zhì)粒的細(xì)胞存活)中選擇穩(wěn)定表達(dá)CCK受體的細(xì)胞并繁殖。冷凍存活的細(xì)胞備用。
在分別穩(wěn)定表達(dá)人和小鼠CCK-B R(高親和性胃泌素受體)的HEK293細(xì)胞中通過(guò)測(cè)量p-ERK(使用AlphaScreen SureFire p_ERK測(cè)定)評(píng)估本發(fā)明肽綴合物的體外作用。 胃泌素受體效力測(cè)定(AlphaScreen SureFire p_ERK測(cè)定)如下進(jìn)行
第I天細(xì)胞接種
將所述表達(dá)CCK-B R的細(xì)胞以20，000個(gè)細(xì)胞/孔接種在包被了聚D-賴氨酸的96 孔板的100 μ I生長(zhǎng)培養(yǎng)基[DMEM,10% FCS，青霉素(100IU/ml)，鏈霉素(100 μ g/ml)]中。 將細(xì)胞在孵育器中(37°C，5% CO2)孵育2天。
第3天更換為無(wú)血清培養(yǎng)基
將生長(zhǎng)培養(yǎng)基更換為80 μ I無(wú)血清培養(yǎng)基[DMEM，青霉素(100IU/ml)，鏈霉素 (100 μ g/ml)]/孔，在孵育器中(37°C，5% CO2)繼續(xù)孵育細(xì)胞19小時(shí)。
第4天肽綴合物刺激和AlphaScreen SureFire p-ERK測(cè)定
1. 19小時(shí)后，加入含有5種不同濃度肽綴合物之一的20 μ I無(wú)血清培養(yǎng)基(每個(gè)濃度一式三份進(jìn)行)，在室 溫下孵育細(xì)胞5分鐘。
2.立刻將板翻轉(zhuǎn)以丟棄刺激培養(yǎng)基，每孔加入60μ I IX裂解緩沖液(來(lái)自 SureFire測(cè)定試劑盒)。
3.將板在板振動(dòng)器上搖動(dòng)5分鐘,然后置于冰上。
4. SureFire P-ERK 測(cè)定將 4 μ I 各上清液轉(zhuǎn)移至 384 孔 proxiplate (Perkin Elmer)。
5.將各4μ I的兩個(gè)對(duì)照裂解物(未受刺激的和刺激的)添加至proxiplate, — 式兩份。
6.將60份反應(yīng)緩沖液、10份活化緩沖液、I份受體珠和I份供體珠混合(反應(yīng)緩沖液+活化緩沖液+珠)。在proxiplate的每孔加入7 μ I上述反應(yīng)緩沖液+活化緩沖液 +珠，在添加至孔之前，將混合物小心重懸。
7.在暗箱中在22°C孵育器中孵育板2小時(shí)。
8.使用適當(dāng)?shù)拈喿x程序(Perkin-Elmer)用Envision 光發(fā)射閱板器 (Perkin-Elmer)分析板。
在上述測(cè)定中測(cè)試本發(fā)明的肽綴合物(即，人GLP-1R活化效力、人CCK-B R活化效力和小鼠CCK-B R活化效力)。
人GLP-1 (7-36)和毒蜥外泌肽_4 (1-39)在人GLP-1受體(hGLP_lR)活性效力測(cè)定中用作陽(yáng)性對(duì)照，h[Glnl，Leu15]胃泌素17和CCK-8 (由CCK的C末端8個(gè)活性氨基酸殘基組成)在人CCK-B受體(hCCK-B R)效力測(cè)定和小鼠CCK-B受體(mCCK_B R)測(cè)定中用作陽(yáng)性對(duì)照。
在本發(fā)明CCK受體活化研究中，h[Glnl，Leul5]胃泌素17 (具有序列H QGPffLEEEEEAYGffLDF-NH2)用作對(duì)照化合物。谷氨酰胺(Gln)殘基可在一定程度上重排為 PyroGlu，但沒(méi)有失去受體結(jié)合活性。
結(jié)果(EC5tl值,單位為mol/1)總結(jié)于下表1、Ia和2中。
表1.本發(fā)明化合物(肽綴合物)在活化hGLP-lR、hCCK-B R和mCCK_B R中的體外效力(EC50, mol/1) ο
化 合物號(hào) ~33~" ..........37........肽綴合物參·外 a1.4(1-39)-Peg3-Peg3-[Gln1 ,Leul 5胃法素!.7hGLP-1 R EC50 5.68x10"1l} TTiiirir^ Ilixiirc~hCCK-B R EC50 1,90x10'3 Βδχ 35~~ 2.59x1 Ct'~mCCK-B R EC50 5.40x10'3 ~ 7.15x1 ~~ 7.31x10'" ^ 38GLP-1 {7-36)-K-[Gln1 ,Leul 5] f 泌素-178.42x10—17.73x1 Ci1.14x10—z39GLP-1 (7-36)-AAA-[Gln1.Leu 15] f 泌素 Π 一1.14x10'!C1.88x10'*5.41x10.a40GLP-1 f/-36)-SKK-[Gln1 ,Leul 5] f 泌素 171.16x10—w1.56x10's5.86x1 Oj5 ~41GLP-1 i7-36>-Peg3-SKK-[Gln1 ,Leul 5] f 泌素 I 9.26x10'°—"8.76χ θ'95.1 Ixfcr3—42GLP-1 (7-36)-Peg3-Peg3-[Gtn1 .Leu 15] f 泌素} 77.78x1 Om8.20x1 Oy5.83x10"43GLP-1 {7-36)-8Aoc-SKK-[Gln1 .Leu 15] f 泌素 17islxio^5.19x10'5aisxio"544GLP-1 (7-36)-DBF-SKK-[Gln1 ,Leul 5] 'f 泌素 | J1.37x1 O^i2.57x10'38.69x10'845GLP-1 (7-36)-8Aoc-8Aoc-[Gln1 .Leu15] f 泌素 171.22x10'*131.28x1 ~7.14x10^對(duì)眞GLP-1 ￠7-36)1.mxw''11時(shí)照毒外》狀...4(1-39)ImxW7tl對(duì)照h[Gln1.Leu15pt|:l74.69x1 Ojs1,82x16'5對(duì)照CCK-86.1x1 Ο**1.63x10-
表Ia.本發(fā)明化合物(肽綴合物)在活化hGLP-lR、hCCK_B R和mCCK-B R中的體外效力(EC50, mol/1) ο
力(EC50
權(quán)利要求
1.具有式I的肽綴合物 R1-Z-L-Y-R2(I)其中R1為H、Cy烷基、乙?；?、甲?；?、苯甲?；蛉阴；?；R2 為 OH 或 NH2 ；Z包含具有以下序列的毒蜥外泌肽-4(1-39)序列或其類似物Za His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-1le-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-P ro-SerL是任選的接頭部分；以及Y包含具有以下序列的胃泌素17序列或其類似物YaGln-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ala-Tyr-Gly-Trp-Y15-Asp-Phe 其中 Y15 選自 Leu、Nle、Phe 和 Thr。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽綴合物，其中(i)相對(duì)于所述毒蜥外泌肽_4的序列，Za在多至10個(gè)位置上具有替換和/或包含I 至12個(gè)氨基酸的C末端截短；和/或( )相對(duì)于所述胃泌素17的序列，Ya相對(duì)于所述胃泌素17的序列在多至5個(gè)位置上具有替換和/或包含I至13個(gè)氨基酸的N末端截短。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的肽綴合物，其中 Za是具有式IIa的肽序列His-Z2-Z3-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Z9-Z10-Zll-Z12-Z13-Z14-Glu-Z16-Z17-Z18-Z19 -Z20-Z21-Z22-Z23-Z24-Z25-Z26-Z27-Z28-Z29-Z30-Z31-Z32-Z33-Z34-Z35-Z36-Z37-Z38-Z39(IIa)其中Z2 選自 Gly、Ala、Ser、Aib、Thr、Leu 和 lie ;Z3選自Glu和Asp ；Z9選自Asp和Glu ；ZlO 選自 Leu, Val, Ile 和 Ala ；Zll 選自 Ser 和 Aib ；Z12 選自 Ser、Gin、Arg、Cys> Lys> Glu 和 Orn ；Z13 選自 Arg、Ser、Gin、Tyr 和 Glu ；Z14 選自 Gly、Cys> Phe> Tyr> Trp> Lys> Met> Leu、Nle 和 lie ;Z16 選自 Asp、Gly、Aib、Glu、Lys 和 Cys ；Z17 選自 Glu、Cys> Lys> Ser 和 Gln ；Z18 選自 Ala 和 Aib ；Z19 選自 Val、Leu、Ile 和 Ala ；Z20 選自 Arg、Lys、Cys、Orn 和 Glu ；Z21 選自 Leu 和 Glu ；Z22 選自 Phe 和 Ala ；Z23 選自 lie 和 Leu ；Z24 選自 Glu、Cys、Lys、Ala 和 Arg ；Z25 選自 Trp、Cys、Lys 和 Phe ；Z26 選自 Leu 和 lie ；Z27 選自 lie、Val、Gin、Lys、Cys、Arg 和 Orn ；Z28 選自 Asn、Ser、Asp、Aib、Gin、Lys、Cys、Arg、Tyr> bAla、Glu、Orn 和 Leu,或缺失； Z29選自Gly、Aib和bAla,或缺失；Z30 選自 Gly、Cys、Lys 和 Arg,或缺失；Z31選自Pro、Ser和Asp,或缺失；Z32選自Ser和Lys，或缺失；Z33為Ser，或缺失；Z34選自Gly和Lys，或缺失；Z35為Ala，或缺失；Z36為Pro，或缺失；Z37為Pro，或缺失；Z38為Pro，或缺失；Z39為Ser，或缺失；L為具有式lib的肽序列 Ll-L2-L3-L4(IIb)其中L1 選自 Ser、Ala、Lys、Orn、bAla、8Aoc、DBF、Peg3、Cys 和 Gin,或缺失；L2 選自 Ser、Ala、Lys、Orn、bAla、8Aoc、DBF、Peg3、Cys 和 Gin,或缺失；L3 選自 Ser、Ala、Lys、Orn、bAla、8Aoc、DBF、Peg3、Cys 和 Gin,或缺失；L4 選自 Ser、Ala、Lys、Orn、bAla、8Aoc、DBF、Peg3、Cys 和 Gin,或缺失；之為具有式lie的肽序列Yl-Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Y9-Y10-Yll-Y12-Y13-Y14-Y15-Asp-Y17(IIc)其中Y1為Gln，或缺失；Y2為Gly，或缺失；Y3為Pro，或缺失；Y4為Trp，或缺失；Y5為L(zhǎng)eu,或缺失；Y6為Glu，或缺失；Y7為Glu，或缺失；Y8為Glu，或缺失；Y9為Glu，或缺失；Y10為Glu，或缺失；Y11為Ala，或缺失；Y12選自Ala和Tyr，或缺失；Y13選自Gly和Ala，或缺失；Y14 選自 Trp, PheUNal 和 Met ；Y15 選自 Leu、Nle、Phe 和 Thr ；以及 Y17選自Phe和3-(3-吡啶基)_丙氨酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的肽綴合物其中Za是具有式IIIa的肽序列His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Z9-Leu-Ser-Z12-Z13-Z14-Glu-Z16-Glu-Ala-Va 1-Z20-Leu-Phe-1le-Z24-Z25-Leu-Z27-Z28(IIIa)其中Z9選自Asp和Glu ；Z12 選自 Lys > Arg 和 Orn ；Z13 選自 Gln 和 Tyr ；Z14 選自 Met 和 Leu ；Z16 選自 Glu、Cys 和 Lys ；Z20 選自 Arg、Lys 和 Orn ；Z24 選自 Lys 和 Glu ；Z25 選自 Trp、Lys、Cys 和 Phe ；Z27 選自 Lys、Arg 和 Orn ；Z28選自Asn和Asp,或缺失；L是具有式IIIb的肽序列 L1-L2-L3-L4 (IIIb)其中LI 選自 Peg3、Gin、Cys> Lys 和 Orn,或缺失；L2 選自 Peg3、Gin、Cys> Lys 和 Orn,或缺失；L3 選自 Peg3、Gin、Cys> Lys 和 Orn,或缺失；L4 選自 Peg3、Gin、Cys> Lys 和 Orn,或缺失；Ya是具有式IIIc的肽序列 Y12-Y13-Y14-Y15-Asp-Y17 (IIIc)其中Y12選自Tyr和Ala，或缺失；Y13選自Gly和Ala，或缺失；Y14 選自 Trp、INal 和 Phe ；Y15 選自 Leu、Nle、Thr 和 Phe ；以及 Y17選自Phe和3-(3-吡啶基)_丙氨酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的肽綴合物，其中 Za是具有式IVa的肽序列His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Z9-Leu-Ser-Z12-Gln-Met-Glu-Z16-Glu-Ala-Va1-Arg-Leu-Phe-1Ie-Glu-Trp-Leu-Z27-Z28(IVa)其中Z9選自Glu和Asp ；Z12 選自 Lys 和 Orn ；Z16 選自 Glu 和 Lys ；Z27 選自 Lys 和 Orn ；Z28選自Asn和Asp,或缺失；L是具有式IVb的肽序列 L1-L2-L3-L4(IVb)其中LI 選自 Peg3、Gin、Cys> Lys 和 Orn,或缺失；L2 選自 Peg3、Gin、Cys> Lys 和 Orn,或缺失；L3 選自 Peg3、Gin、Cys> Lys 和 Orn,或缺失；L4 選自 Peg3、Gin、Cys> Lys 和 Orn,或缺失；Ya是具有式IVc的肽序列 Y12-Y13-Trp-Leu-Asp-Phe (IVc)其中Y12為Tyr，或缺失；以及 Y13為Gly，或缺失。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的肽綴合物，其中 Za為具有式Va的肽序列His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Z9-Leu-Ser-Z12-Tyr-Leu-Glu-Z16-Glu-Ala-Va1-Arg-Leu-Phe-1Ie-Glu-Phe-Leu-Z27-Z28(Va)其中Z9選自Glu和Asp ；Z12 選自 Lys 和 Orn ；Z16 選自 Glu 和 Lys ；Z27 選自 Lys 和 Orn ；Z28選自Asn和Asp,或缺失；L為具有式Vb的肽序列 L1-L2-L3-L4(Vb)其中LI 選自 Peg3、Gin、Cys> Lys 和 Orn,或缺失；L2 選自 Peg3、Gin、Cys> Lys 和 Orn,或缺失；L3 選自 Peg3、Gin、Cys> Lys 和 Orn,或缺失；L4 選自 Peg3、Gin、Cys> Lys 和 Orn,或缺失；Ya為具有式Vc的肽序列 Y12-Y13-Trp-Leu-Asp-Phe(Vc)其中Y12為Tyr，或缺失；以及Y13為Gly，或缺失。
7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的肽綴合物，其中式I的所述肽序列包含一個(gè)或更多個(gè)分子內(nèi)橋。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的肽綴合物，其中所述分子內(nèi)橋在兩個(gè)氨基酸殘基的側(cè)鏈之間形成，所述兩個(gè)氨基酸殘基被式I的線性氨基酸序列中的3個(gè)氨基酸分隔開。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的肽綴合物，其中所述分子內(nèi)橋在殘基對(duì)X和x+3、x+4或x+5 的側(cè)鏈之間形成。
10.根據(jù)權(quán)利要求7至9中任一項(xiàng)所述的肽綴合物，其中所述分子內(nèi)橋?yàn)閮?nèi)酰胺環(huán)。
11.根據(jù)權(quán)利要求7至10中任一項(xiàng)所述的肽綴合物，其中所述分子內(nèi)橋涉及殘基對(duì)，其中Z12 為 Lys 并且 Z16 為 Glu ；Z12 為 Glu 并且 Z16 為 Lys ；Z16 為 Glu 并且 Z20 為 Lys ；Z16 為 Lys 并且 Z20 為 Glu ；Z20 為 Glu 并且 Z24 為 Lys ；Z20 為 Lys 并且 Z24 為 Glu。
12.根據(jù)權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)所述的肽綴合物，其中Za與天然毒蜥外泌肽_4有至少75%的同一性，例如至少80、85、90或95%的同一性。
13.根據(jù)權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)所述的肽綴合物，其中Ya與天然胃泌素有至少70% 的同一性，例如至少75、80、85、90或95%的同一性。
14.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的肽綴合物，其中所述式I的肽具有以下序列或者其可藥用鹽或溶劑化物毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽4 (61-39)-Peg3-Peg3-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， 1-39)-[Glnl，Leul5]胃泌素 17，1-39)-K-[Glnl，Leul5]胃泌素 17，1-39)-AAA-[Glnl，Leul5]胃泌素 17，1-39)-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17，1-39)-Peg3-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， 1-39)-8Aoc-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， 1-39)-DBF-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， 1-39)-8Aoc-8Aoc-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， 1-39)-[Leu4]胃泌素 6，1-39)-K-[Leu4]胃泌素 6，1-39)-AAA-[Leu4]胃泌素 6，1-39)-SKK-[Leu4]胃泌素 6， l-39)-Peg3-SKK-[Leu4]胃泌素 6， l-39)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6， l-39)-8Aoc-SKK-[Leu4]胃泌素 6，1-39)-DBF-SKK-[Leu4]胃泌素 6， l-39)-8Aoc-8Aoc-[Leu4]胃泌素 6，1-28)-[Glnl, Leul5]胃泌素 17，-28)-K-「GinI，Leu15 胃泌素 17，毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽4 ( 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_4 毒蜥外泌肽_41-28)-AAA-[Glnl，Leul5]胃泌素 17，1-28)-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17，1-28)-Peg3-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， 1-28)-Peg3-Peg3-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， 1-28)-8Aoc-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， 1-28)-DBF-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， 1-28)-8Aoc-8Aoc-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， 1-28)-[Leu4]胃泌素 6，-28)-K-[Leu4]胃泌素 6，1-28)-AAA-[Leu4]胃泌素 6，1-28)-SKK-[Leu4]胃泌素 6， l-28)-Peg3-SKK-[Leu4]胃泌素 6， l-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6， l-28)-8Aoc-SKK-[Leu4]胃泌素 6，1-28)-DBF-SKK-[Leu4]胃泌素 6， l-28)-8Aoc-8Aoc-[Leu4]胃泌素 6。
15.根據(jù)權(quán)利要求1至11所述的肽綴合物，其中所述式I的肽具有以下序列或者其可藥用鹽或溶劑化物毒蜥外泌肽-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu3]胃泌素 5毒蜥外泌肽 _4 (1-28)-Peg3_Peg3-[Alal, Leu4]胃泌素 6毒蜥外泌肽-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Ala2，Leu4]胃泌素 6毒蜥外泌肽-4(l-27)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6毒蜥外泌肽-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu2]胃泌素 4[Leul4]毒蜥外泌肽-4 (1-28)-Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素 6[Orn12]毒蜥外泌肽-4 (1-28)-Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素 6
毒蜥外泌肽-4 (1-28)-Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素 6[Phe25]毒蜥外泌肽-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6[Asp28]毒蜥外泌肽-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6[Tyrl3]毒蜥外泌肽 4 (1-28)-Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素 6
毒蜥外泌肽-4 (1-28)-Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素 6毒蜥外泌肽-4(l-28)-Peg3-[Leu4]胃泌素6毒蜥外泌肽-4(l-28)-[Leu4]胃泌素6毒蜥外泌肽-4(l-27)-[Leu4](胃泌素11毒蜥外泌肽-4(l-27)-Peg3-[Leu4]胃泌素6毒蜥外泌肽-4(l-27)-Peg3-[Leu3]胃泌素5毒蜥外泌肽-4(l-26)-Peg3-[Leu3]胃泌素5毒蜥外泌肽-4(l-27)-Peg3-[Leu2]胃泌素4[Tyrl3, Leul4]毒蜥外泌肽-4 (1-27)-Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素 8Tyrl3, Phe25]毒蜥外泌肽-4 (1-27)-Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素 6[Leul4, Phe25]毒蜥外泌肽-4 (1-27)-Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素 6Tyrl3, Leul4, Phe25]毒蜥外泌肽-4 (1-27)-Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素 6側(cè)鏈-環(huán)([Lysl2，Glul6]毒蜥外泌肽-4(1-28)-Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素 6側(cè)鏈-環(huán)([Glul6, Lys20]毒蜥外泌肽-4 (1-28)-Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素 6側(cè)鏈-環(huán)([Lys20，Glu24]毒蜥外泌肽-4 (1-28)-Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素 6[Lysl6]毒蜥外泌肽-4 (1-28)-Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素 6毒蜥外泌肽-4(l-28)-Peg3-K-Peg3-[Leu4]胃泌素 6毒蜥外泌肽-4(l-28)-[Thr4]胃泌素6毒蜥外泌肽-4(l-28)-[Phe4]胃泌素6[Leul4]毒蜥外泌肽-4(l-28)-[lNal3，Leu4]胃泌素 6[Leul4]毒蜥外泌肽-4 (1-28)-[Nle4]胃泌素6[Leul4]毒蜥外泌肽 _4 (1-28) _[Leu4, [3- (3-Pyridyl) -Ala] 6]胃泌素 6 [Glu9, Leul4, Phe25, Tyrl3]毒蜥外泌肽-4 (1-27)-Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素 6 [Leul4, Phe25, Tyrl3]毒蜥外泌肽-4 (1-27)-Peg3_Peg3-[Leu4，Phe3]胃泌素 6 [Glu9, Leul4, Phe25, Tyrl3]毒蜥外泌肽-4 (1-27) -Peg3_Peg3-[Leu4，Phe3]胃泌素 6 [Arg27, Leul4, Phe25, Tyrl3]毒蜥外泌肽-4 (1-27)-Peg3_[Leu4]胃泌素 6 [Argl2, 27，Leul4, Lysl6, Phe25, Tyrl3]毒蜥外泌肽-4 (1-27) -Peg3_[Leu4]胃泌素 6 [Argl2, 27，Leul4, Lys20, Phe25, Tyrl3]毒蜥外泌肽-4 (1-27) -Peg3_[Leu4]胃泌素 6 [Argl2, 27，Leul4, Lys24, Phe25, Tyrl3]毒蜥外泌肽-4 (1-27) -Peg3_[Leu4]胃泌素 6 [Argl2, Leul4, Phe25, Tyrl3]毒蜥外泌肽-4 (1-27)-Peg3_[Leu4]胃泌素 6丨_[Leu2]胃泌素4 -Peg3-[Leu2]胃泌素 4 -0rn-Peg3- [Leu2]胃泌素 4 -Peg3-0rn- [Leu2]胃泌素 4 -Orn-Orn- [Leu2]胃泌素 4 -[Leu4]胃泌素.6 -Peg3-[Leu4]胃泌素 6 -0 rn-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 -Peg3-0rn- [Leu4]胃泌素 6 -Orn-Orn- [Leu4]胃泌素 6。[Gu9,Leul4，Phe25，Tyr3]毒蜥外泌肽-4 (1-27[Gu9,Leul4，Phe25，Tyr3]毒蜥外泌肽-4 (1-27[Gu9,Leul4，Phe25，Tyr3]毒蜥外泌肽-4 (1-27[Gu9,Leul4，Phe25，Tyr3]毒蜥外泌肽-4 (1-27[Gu9,Leul4，Phe25，Tyr3]毒蜥外泌肽-4 (1-27[Gu9,Leul4，Phe25，Tyr3]毒蜥外泌肽-4 (1-27[Gu9,Leul4，Phe25，Tyr3]毒蜥外泌肽-4 (1-27[Gu9,Leul4，Phe25，Tyr3]毒蜥外泌肽-4 (1-27[Gu9,Leul4，Phe25，Tyr3]毒蜥外泌肽-4 (1-27[Gu9,Leul4，Phe25，Tyr3]毒蜥外泌肽-4 (1-27
16.具有式VI的肽綴合物R1-X-L-Y-R2(VI)其中R1為H、Cy烷基、乙?；⒓柞；?、苯甲?；蛉阴；?；R2 為 OH 或 NH2 ；X包含具有以下序列的GLP-1 (7-36)序列或其類似物Xa，His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-AIa-Lys-Glu-Phe-1le-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-ArgL是包含多至4個(gè)天然或非天然氨基酸或者其組合的接頭，或者缺失；Y包含具有以下序列的胃泌素-17序列或其類似物YaGln-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ala-Tyr-Gly-Trp-Y15-Asp-Phe 其中 Y15 選自 Leu、Nle、Phe 和 Thr。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的肽綴合物，其中(i)相對(duì)于所述GLP-1的序列，Xa在多至5個(gè)位置上具有替換和/或包含I至2個(gè)氨基酸的C末端截短；和/或( )相對(duì)于所述胃泌素17的序列，Ya相對(duì)于所述胃泌素17的序列在多至5個(gè)位置上具有替換和/或包含I至13個(gè)氨基酸的N末端截短。
18.根據(jù)權(quán)利要求16至17中任一項(xiàng)所述的肽綴合物，其中 Xa為具有式VIIa的肽序列His-X8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-X26-Glu-Phe-1le-Ala-Trp-Leu-Val-X34-Gly-X36(VIIa)其中X8 選自 Ala、Aib 和 Gly ；X26選自Arg和Lys X34選自Arg和Lys X36選自Arg和Lys L為具有式VIIb的肽序列 L1-L2-L3-L4 (VIIb)其中LI 選自 Ser、Ala、Lys> Orn> bAla、8Aoc、DBF、Peg3、Cys> Gin,或缺失 L2 選自 Ser> Ala、Lys> Orn> bAla、8Aoc、DBF、Peg3、Cys> Gin,或缺失 L3 選自 Ser> Ala、Lys> Orn> bAla、8Aoc、DBF、Peg3、Cys> Gin,或缺失 L4 選自 Ser> Ala、Lys> Orn> bAla、8Aoc、DBF、Peg3、Cys> Gin,或缺失 Ya為具有式VIIc的肽序列Yl-Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Y9-Y10-Yll-Y12-Y13-Y14-Y15-Asp-Y17(VI Ic)其中Yl為Gln，或缺失 Y2為Gly，或缺失 Y3為Pro，或缺失 Y4為Trp，或缺失 Y5為L(zhǎng)eu,或缺失 Y6為Glu，或缺失 Y7為Glu，或缺失 Y8為Glu，或缺失 Y9為Glu，或缺失 YlO為Glu，或缺失；Yll為Ala，或缺失；Y12選自Ala、Tyr，或缺失；Y13選自Gly、Ala，或缺失；Y14 選自 Trp、Phe、INal 和 Met ；Y15 選自 Leu、Nle、Phe 和 Thr ；以及 Y17選自Phe和3-(3-吡啶基)_丙氨酸。
19.根據(jù)權(quán)利要求16至18中任一項(xiàng)所述的肽綴合物，其中Xa為具有式VIIIa的肽序列His-X8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Al a-X26-Glu-Phe-1le-Ala-Trp-Leu-Val-X34-Gly-X36(VIIla)其中X8 選自 Ala、Aib 和 Gly ；X26 選自 Arg 和 Lys ；X34 選自 Arg 和 Lys ；X36 選自 Arg 和 Lys ；L為具有式VIIIb的肽序列 L1-L2-L3-L4(VII I b)其中LI 選自 Peg3、Orn> Cys> Lys> Gln,或缺失；L2 選自 Ser、Ala、Orn> Cys、Lys> Gln,或缺失；L3 選自 Lys、Ala、Cys> Orn> Gin,或缺失；L4 選自 Lys、Orn> Ala、Peg3、Cys> Lys> Gin,或缺失；Ya為具有式VIIIc的肽序列 Y12-Y13-Y14-Y15-Asp-Phe (VIIIc)其中Y12選自Tyr、Ala，或缺失；Y13選自Gly、Ala，或缺失；Y14選自Trp和Phe ；以及 Y15 選自 Leu、Thr 和 Phe。
20.根據(jù)權(quán)利要求16至19中任一項(xiàng)所述的肽綴合物，其中 Xa為具有式IXa的肽序列His-X8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Al a-X26-Glu-Phe-1le-Ala-Trp-Leu-Val-X34-Gly-X36(IXa)其中X8 選自 Ala、Aib 和 Gly ；X26 選自 Arg 和 Lys ；X34 選自 Arg 和 Lys ；X36 選自 Arg 和 Lys ；L為具有式IXb的肽序列 L1-L2-L3(IXb)其中LI 選自 Peg3、Gin、Cys、Lys 和 Orn,或缺失 L2 選自 Peg3、Gin、Cys、Lys 和 Orn,或缺失 L3 選自 Peg3、Gin、Cys、Lys 和 Orn,或缺失 L4 選自 Peg3、Gin、Cys、Lys 和 Orn,或缺失 Ya為具有式IXc的肽序列 Y12-Y13-Trp-Leu-Asp-Phe (IXc)其中Y12為Tyr，或缺失；以及 Y13為Gly，或缺失。
21.根據(jù)權(quán)利要求16至20中任一項(xiàng)所述的肽綴合物，其中Xa與天然毒蜥外泌肽_4有至少85%的同一性，例如至少90、95、97、98、99或99. 5%的同一性。
22.根據(jù)權(quán)利要求16至21中任一項(xiàng)所述的肽綴合物，其中至少一個(gè)Lys或Cys還與親脂取代基綴合。
23.根據(jù)權(quán)利要求16至21中任一項(xiàng)所述的肽綴合物，其中所述式VI的肽具有以下序列或者其可藥用鹽或溶劑化物3)-[Glnl, Leul5]胃泌素 17，3)-K-[Glnl, Leu15]胃泌素 17，5)-AAA-[Glnl，Leu15]胃泌素 17，5)-SKK-[Glnl，Leu15]胃泌素 17，3)-Peg3-SKK-[Glnl, Leu15]胃泌素 17，3)-Peg3-Peg3-[Glnl, Leul5]胃泌素 17，3)-8Aoc-SKK-[Glnl, Leu15]胃泌素 17，5)-DBF-SKK-[Glnl，Leu15]胃泌素 17，3)-8Aoc-8Aoc-[Glnl, Leul5]胃泌素 17，3)-[Leu4]胃泌素 6,3)-K-[Leu4]胃泌素 6，3) -AAA- [Leu4]胃泌素 6,3)-SKK-[Leu4]胃泌素 6，3)-Peg3-SKK-[Leu4]胃泌素 6，3) -Peg3-Peg3- [Leu4]胃泌素 6,3)-8Aoc-SKK-[Leu4]胃泌素 6，3) -DBF-SKK- [Leu4]胃泌素 6 5)-8Aoc_8Aoc-[Leu4]胃泌素 6，[Aib8, Arg34]GLP-1 (7-37)-Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素 6 [Arg34] GLP-1 (7-37) -Peg3_Peg3- [Leu4]胃泌素 6。
24.根據(jù)權(quán)利要求16至22中任一項(xiàng)所述的肽綴合物，其中所述式VI的肽具有以下序列或者其可藥用鹽或溶劑化物[Lys (十六酰基-異 Glu) 34] GLP-1 (7-37) -Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素 6，GLP-17-36GLP-17-36GLP-17-36GLP-17-36GLP-17-36GLP-17-36GLP-17-36GLP-17-36GLP-17-36GLP-17-36GLP-17-36GLP-17-36GLP-17-36GLP-17-36GLP-17-36GLP-17-36GLP-17-36GLP-17-36[Arg34, Lys (十六酰基-異 Glu) 26] GLP-1 (7-37) -Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素 6[Arg26, 34，Lys (十六?；?異 Glu) 36]GLP-1 (7-37) -Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素 6[Lys (十六酰基-異 Glu) 26] GLP-1 (7-37) -Peg3_Peg3- [Leu4]胃泌素 6[Arg26，34，Gly8，Lys(十六?；?異 Glu)36]GLP-l (7-37)-Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素6[Aib8，Arg34, Lys (十六?；?異 Glu) 26]GLP_1 (7-37)-Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素 6。
25.根據(jù)權(quán)利要求1至24所述的肽綴合物或者其可藥用鹽或溶劑化物，其用作藥物。
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的肽綴合物或者其可藥用鹽或溶劑化物，其用作在有此需要的對(duì)象中治療選自以下的疾病或異常的藥物1型糖尿病、2型糖尿病、糖尿病前期、胰島素抗性綜合征、葡萄糖耐量降低(IGT)、與血液葡萄糖水平升高相關(guān)的疾病狀況、高血糖癥、 高血壓、致動(dòng)脈粥樣化血脂異常、動(dòng)脈硬化(例如動(dòng)脈粥樣硬化)、冠心病、外周動(dòng)脈疾病、 中風(fēng)、微血管病、胃病、代謝綜合征、癌癥(例如結(jié)腸癌)、炎性腸病(IBD)和腸易激綜合征 (IBS)。
27.根據(jù)權(quán)利要求25所述的肽綴合物或者其可藥用鹽或溶劑化物，其用作在有此需要的對(duì)象中誘導(dǎo)胰島新生的藥物。
28.根據(jù)權(quán)利要求25所述的肽綴合物或者其可藥用鹽或溶劑化物，其用作在有此需要的對(duì)象中預(yù)防胰島中細(xì)胞凋亡的藥物。
29.根據(jù)權(quán)利要求25至28中任一項(xiàng)所述的肽綴合物或者其可藥用鹽或溶劑化物，其中所述對(duì)象為人。
30.在有此需要的對(duì)象中治療選自以下的疾病或異常的方法1型糖尿病、2型糖尿病、 糖尿病前期、胰島素抗性綜合征、葡萄糖耐量降低(IGT)、與血液葡萄糖水平升高相關(guān)的疾病狀況、高血糖癥、高血壓、致動(dòng)脈粥樣化血脂異常、動(dòng)脈硬化(例如動(dòng)脈粥樣硬化)、冠心病、外周動(dòng)脈疾病、中風(fēng)、微血管病、胃病、代謝綜合征、癌癥(例如結(jié)腸癌)、炎性腸病(IBD) 和腸易激綜合征(IBS)，所述方法包括向所述對(duì)象施用治療有效量的權(quán)利要求1至29所述的肽綴合物或者其可藥用鹽或溶劑化物。
31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中所述對(duì)象為人。
32.藥物組合物，其包含權(quán)利要求1至29所述的肽綴合物或者其可藥用鹽或溶劑化物， 以及可藥用載體、賦形劑或載劑。
33.根據(jù)權(quán)利要求32所述的藥物組合物，其用于預(yù)防體重增加或促進(jìn)體重降低。
34.根據(jù)權(quán)利要求1至29中任一項(xiàng)所述的化合物，其用于改善循環(huán)葡萄糖水平、葡萄糖耐量和/或循環(huán)膽固醇水平，降低循環(huán)LDL水平，和/或提高HDL/LDL比率的方法中。
35.根據(jù)權(quán)利要求1至29中任一項(xiàng)所述的化合物，其用于治療由體重超重引起或以其為特征的病癥的方法中，例如治療和/或預(yù)防肥胖癥、病態(tài)肥胖、肥胖相關(guān)炎癥、肥胖相關(guān)膽囊病、肥胖引起的睡眠呼吸暫停、代謝綜合征、糖尿病前期，所述方法包括向所述對(duì)象施用治療有效量的權(quán)利要求1至29中任一項(xiàng)所述的肽綴合物或者其可藥用鹽或溶劑化物。
36.根據(jù)權(quán)利要求1至29中任一項(xiàng)所述的化合物在有此需要的個(gè)體中預(yù)防體重增加或促進(jìn)體重降低的用途。
37.根據(jù)權(quán)利要求1至29中任一項(xiàng)所述的化合物在對(duì)有此需要的個(gè)體改善循環(huán)葡萄糖水平、葡萄糖耐量和/或循環(huán)膽固醇水平，降低循環(huán)LDL水平和/或提高HDL/LDL比率的方法中的用途。
38.根據(jù)權(quán)利要求1至37中任一項(xiàng)所述的化合物、用途或方法，其中所述化合物作為聯(lián)合治療的一部分與用于治療糖尿病、肥胖癥、血脂異?；蚋哐獕旱乃巹┮黄鹗┯谩?br> 39.根據(jù)權(quán)利要求38所述的化合物、用途或方法，其中用于治療糖尿病的所述藥劑為二甲雙胍、磺酰脲、格列奈類、DPP-1V抑制劑、格列酮類、胰島素或胰島素類似物。
40.根據(jù)權(quán)利要求38所述的化合物、用途或方法，其中用于治療肥胖癥的所述藥劑為胰高血糖素樣肽受體I激動(dòng)劑、肽YY或其類似物、大麻素受體I拮抗劑、脂肪酶抑制劑、黑皮質(zhì)素受體4激動(dòng)劑或黑色素濃集激素受體I拮抗劑。
41.根據(jù)權(quán)利要求38所述的化合物、用途或方法，其中用于治療高血壓的所述藥劑為血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶抑制劑、血管緊張肽II受體阻斷劑、利尿劑、β -阻斷劑或鈣通道阻斷劑。
42.根據(jù)權(quán)利要求38所述的化合物、用途或方法，其中用于治療血脂異常的所述藥劑為他汀類、貝特類、煙酸類和/或膽固醇吸收抑制劑。
43.以合成方式制造權(quán)利要求1至24中任一項(xiàng)所述的肽綴合物的方法。
44.以重組方式制造權(quán)利要求1至24中任一項(xiàng)所述的肽綴合物的方法。
45.根據(jù)權(quán)利要求1至24中任一項(xiàng)所述的化合物在對(duì)有此需要的個(gè)體改善循環(huán)葡萄糖水平、葡萄糖耐量和/或循環(huán)膽固醇水平，降低循環(huán)LDL水平和/或提高HDL/LDL比率之方法中的用途，其中使用藥物假期劑量方案。
46.用于制造根據(jù)上述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的化合物的方法。
47.藥物組合物，其包含權(quán)利要求1至29所述的肽綴合物或者其可藥用鹽或溶劑化物與一種或更多種權(quán)利要求1至29所述的肽綴合物或者其可藥用鹽或溶劑化物以及可藥用載體、賦形劑或載劑相組合。
48.包含至少一種根據(jù)權(quán)利要求1至29所述的肽綴合物或者其可藥用鹽或溶劑化物的裝置，其用于將所述肽綴合物遞送至對(duì)象。
49.包含至少一種根據(jù)權(quán)利要求1至29所述的肽綴合物或者其可藥用鹽或溶劑化物的藥盒，其還包含包裝或使用說(shuō)明。
全文摘要
本發(fā)明尤其涉及某些肽綴合物和所述綴合物在治療多種疾病或異常(包括糖尿病(1型和/或2型)和糖尿病相關(guān)疾病或異常)中的用途。
文檔編號(hào)C07K14/595GK103003300SQ201180027138
公開日2013年3月27日 申請(qǐng)日期2011年4月27日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月27日
發(fā)明者特賴因·斯科夫隆德·呂厄·內(nèi)魯普, 托爾文·奧斯特爾隆德, 雅各布·林德·托爾博爾格, 克爾德·福斯格勞, 烏爾麗卡·莫滕松, 瑪麗安娜·布羅爾松, 卡米拉·羅爾斯特德 申請(qǐng)人:西蘭制藥公司