專利名稱：持續(xù)釋放的藥學(xué)活性肽鹽及其生產(chǎn)的制作方法
背景技術(shù)：
發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及藥學(xué)活性多肽的藥物組合物，它可提供多肽的長時間持續(xù)釋放。
現(xiàn)有技術(shù)的描述根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)(WO98/25642)，要求專利保護(hù)的藥物制劑包含肽化合物及載體大分子的穩(wěn)定的水不溶性復(fù)合體，其中肽化合物(例如肽、多肽、蛋白質(zhì)、模擬肽及其類似物)優(yōu)選藥學(xué)活性肽化合物，所述載體大分子允許體內(nèi)施用復(fù)合體后可使肽化合物持續(xù)釋放。根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)，復(fù)合體可使藥學(xué)活性肽化合物在受試者體內(nèi)長時間(例如一個月)持續(xù)釋放。而且，在緊密穩(wěn)定的復(fù)合體中肽化合物及載體大分子的結(jié)合可使制劑中負(fù)荷有高濃度的肽化合物。
根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)發(fā)明的復(fù)合體是通過將肽化合物與載體大分子在一定條件下組合而形成，以形成基本上水不溶性復(fù)合物，例如，將載體大分子與肽化合物的水溶液混合直至復(fù)合體沉淀。
復(fù)合體可為固體形式(例如，膏、顆粒、粉末或凍干物)或者復(fù)合體的粉末形式可以很細(xì)地粉碎，以足可形成穩(wěn)定的懸浮液或半固體分散體。
在一個優(yōu)選的實施方案中，水不溶性復(fù)合體的肽化合物是LHRH類似物，更優(yōu)選地是LHRH拮抗物，載體大分子是陰離子聚合物，優(yōu)選地羧甲基纖維素鈉。所發(fā)明的復(fù)合體適于在體內(nèi)施用前進(jìn)行滅菌處理，如通過γ照射或電子束照射。通過給受試者施用所發(fā)明的含有LHRH類似物的組合物，提供了用LHRH類似物可治療的病癥之受試者的治療方法。
現(xiàn)有技術(shù)存在的問題生產(chǎn)要求專利保護(hù)的復(fù)合體必須制備相當(dāng)高濃度的肽化合物水溶液(5-25mg/ml)。由于許多肽化合物固有的聚集傾向，使用要求專利保護(hù)的生產(chǎn)程序不能確保在純水中可制備無聚集的溶液。取決于特定肽化合物的水溶性及用于制備該溶液的技術(shù)，水中濃縮的肽溶液可以是不聚集的，或者摻雜有多種濃度及不同類型的肽聚集體和沉淀。由于這種高濃度的肽溶液是制備要求專利保護(hù)的復(fù)合體的起始物質(zhì)，肽化合物在水中的溶解顯然是一個關(guān)鍵步驟。
通過將羧甲基纖維素鈉的水溶液以不同比例(0.1∶1至0.5∶1w/w)加入至這種未充分定義及表征的高濃度肽溶液，可自發(fā)地以非限定及不受控制的方式形成復(fù)合體或沉淀。通過過濾或離心收集沉淀，用水漂洗并干燥。然后將固態(tài)物質(zhì)用研缽及研棒研磨成粉狀。再通過分析確定肽化合物的含量。因為生產(chǎn)過程，故不能保證能以可再重復(fù)的及充分定義的方式形成化學(xué)計量的復(fù)合體。
此外，加入羧甲基纖維素鈉溶液(根據(jù)USP，其中含有6.5-9.5％的鈉)會引起顯著量的金屬離子，即鈉離子與肽化合物接觸。肽及蛋白質(zhì)在鹽存在時可能會沉淀。因此現(xiàn)有技術(shù)描述的復(fù)合體或沉淀是由于通過肽化合物與羧甲基纖維素自身的官能團(tuán)之間的相互作用而形成的，或僅僅是由于鈉離子的肽沉淀作用而形成的，或這兩個過程中未知的、不可控制的混合因素而形成的，對此尚不清楚。
將現(xiàn)有技術(shù)描述的肽制劑干燥及磨碎后懸浮于鹽水中，此步驟也可導(dǎo)致進(jìn)一步不合需要的、不受控制的相互作用過程。
發(fā)明概述本發(fā)明提供的藥物組合物包含穩(wěn)定的、充分定義的、化學(xué)計量的鹽，其中所述鹽分別由酸性或堿性肽化合物(像肽、多肽蛋白質(zhì)、模擬肽等)與離子型的、堿性的或酸性的載體大分子組成。體內(nèi)施用特定肽化合物的鹽后，可使肽化合物持續(xù)釋放。
離子載體大分子可以是陰離子聚合物，例如陰離子多元醇、其衍生物或其片段。
此外，離子載體大分子可以是陰離子多糖、其衍生物或其片段。優(yōu)選地，載體大分子是羧甲基纖維素。藥物組合物中的載體大分子可進(jìn)一步選自藻膠、藻酸、藻酸鈉、陰離子乙酸聚合物類、離子型丙烯酸聚合物或異丁烯酸聚合物類及共聚物、果膠、西黃蓍膠、黃原膠、陰離子carageenan衍生物、陰離子多聚半乳糖醛酸衍生物、硫酸化及磺酸化聚苯乙烯、淀粉乙醇酸鈉、其片段或其衍生物。
離子載體大分子也可以是白蛋白、明膠(A型或B型)、其片段或其衍生物。
陽離子聚合物也可以是多聚L-賴氨酸及其它堿性氨基酸的聚合物。
化合物中的肽是藥學(xué)活性肽化合物，可以是單價、二價或多價陽離子或陰離子多肽，其中多肽長為5至100個氨基酸，優(yōu)選地多肽長為5至20個氨基酸，更優(yōu)選地多肽長為8至12個氨基酸。更詳細(xì)地講，肽化合物是LHRH類似物，并且LHRH類似物是LHRH拮抗劑。例如LHRH類似物有西曲瑞利克斯(Cetrorelix)，Teverelix(Antarelix，Deghenghi等人，生物醫(yī)學(xué)及藥物療法(Biomed &Pharmacother)，1993，47，107)，Abarelix(Molineaux等人，分子泌尿科學(xué)(Molecular Urology)，1998，2，265)，Ganirelix(Nestor等人，醫(yī)學(xué)化學(xué)雜志(J.Med.Chem.)，1992，35，3942)，Azaline B，Antide，A-75998(Cannon等人，藥學(xué)科學(xué)雜志(J.Pharm.Sc.)，1995，84，953)，Detirelix(Andreyko等人，臨床內(nèi)分泌代謝雜志(J.Clin.Endocrinol.Metab.)，1992，74，399)，RS-68439，Ramorelix(Stoeckemann和Sandow，腫瘤研究與臨床腫瘤雜志(J.Cancer Res.Clin.Oncol.)，1993.119，457)，Nal-Glu。上面提及的LHRH類似物的結(jié)構(gòu)例如可在上面所引用的文獻(xiàn)及下列綜述中可查到Behre等人，GnRH拮抗物總覽，誘導(dǎo)排卵第二屆世界會議論文集，The Parthenon PublishingGroup Ltd，UK；Kutscher等人，Angew.Chem.1997，109，2240。
此外，進(jìn)一步描述了制備此類鹽的方法。
根據(jù)本發(fā)明，肽化合物的游離堿或游離酸是通過使用離子交換劑去掉反離子而制備的。同樣載體大分子的游離堿或游離酸也是通過使用離子交換劑去掉反離子而制備的。隨后，將新鮮制備的肽堿溶液或肽酸溶液的等價量分別與不含反離子的大分子載體溶液的等價量結(jié)合。例如，肽化合物與載體大分子之比(w/w)可以是1∶0.1，1∶0.213，1∶0.5，1∶2.13。在實施例1至4中描述了制備本發(fā)明的水不溶性復(fù)合體的條件及步驟的非限制性實例。
本方法可獲得充分定義的、化學(xué)計量的肽化合物與反離子大分子的純鹽。這些純鹽不摻雜有其它離子，既沒有陰離子(例如乙酸根)，也沒有陽離子(例如鈉離子)。
向受試者施用本發(fā)明的藥物組合物后，可使肽化合物在受試者體內(nèi)持續(xù)釋放。持續(xù)釋放的持續(xù)時間及程度取決于形成鹽的肽化合物及載體大分子的濃度。
實施例1按以下步驟制備西曲瑞利克斯∶CMC質(zhì)量比為1∶0.1，相當(dāng)于西曲瑞利克斯∶CMC之羧基的摩爾比為1∶0.48的西曲瑞利克斯-CMC-鹽冷凍干燥物。在40g水中溶解0.22gNa-CMC(低粘度級羧甲基纖維素，Hercules)，加入3g離子交換劑(Amberlite)。攪拌20分鐘后，用玻璃纖維濾器過濾除去離子交換劑。在23.4g水中溶解2.21g乙酸西曲瑞利克斯，加入74.6g 96％的乙醇(v/v)。加入20g離子交換劑(Amberlite)。攪拌20分鐘后，用玻璃纖維濾器過濾除去離子交換劑。將過濾后的西曲瑞利克斯堿溶液邊攪拌邊加入不含鈉的CMC溶液，產(chǎn)生澄清溶液。攪拌1小時后，該溶液在真空下?lián)]發(fā)去掉乙醇，產(chǎn)生分散體。最后將分散體冷凍及冷凍干燥。
實施例2按以下步驟制備西曲瑞利克斯∶CMC質(zhì)量比為1∶0.213，相當(dāng)于西曲瑞利克斯∶CMC之羧基的摩爾比為1∶1的西曲瑞利克斯-CMC-鹽冷凍干燥物。在40g水中溶解0.426gNa-CMC(低粘度級羧甲基纖維素，Hercules)，加入5g離子交換劑(Amberlite)。攪拌25分鐘后，用玻璃纖維濾器過濾除去離子交換劑。在23.4g水中溶解2.21g乙酸西曲瑞利克斯，加入74.6g 96％的乙醇(v/v)。加入20g離子交換劑(Amberlite)。攪拌20分鐘后，用玻璃纖維濾器過濾除去離子交換劑。將過濾后的西曲瑞利克斯堿溶液邊攪拌邊加入不含鈉的CMC溶液，產(chǎn)生澄清溶液。攪拌1小時后，該溶液在真空下?lián)]發(fā)去掉乙醇，產(chǎn)生分散體。最后將分散體冷凍及冷凍干燥。
實施例3按以下步驟制備西曲瑞利克斯∶CMC質(zhì)量比為1∶0.5，相當(dāng)于西曲瑞利克斯∶CMC之羧基的摩爾比為1∶2.41的西曲瑞利克斯-CMC-鹽冷凍干燥物。在200g水中溶解1.1gNa-CMC(低粘度級羧甲基纖維素，Hercules)，加入15g離子交換劑(Amberlite)。攪拌20分鐘后，用玻璃纖維濾器過濾除去離子交換劑。在23.4g水中溶解2.21g乙酸西曲瑞利克斯，加入74.6g 96％的乙醇(v/v)。加入20g離子交換劑(Amberlite)。攪拌20分鐘后，用玻璃纖維濾器過濾除去離子交換劑。將過濾后的西曲瑞利克斯堿溶液邊攪拌邊加入不含鈉的CMC溶液，形成溶液。攪拌1小時后，該溶液在真空下?lián)]發(fā)去掉乙醇，產(chǎn)生分散體。最后將分散體冷凍及冷凍干燥。
實施例4按以下步驟制備西曲瑞利克斯∶CMC質(zhì)量比為1∶2.13，相當(dāng)于西曲瑞利克斯∶CMC之羧基的摩爾比為1∶10的西曲瑞利克斯-CMC-鹽冷凍干燥物。在400g水中溶解4.26gNa-CMC(低粘度級羧甲基纖維素，Hercules)，加入50g離子交換劑(Amberlite)。攪拌25分鐘后，用玻璃纖維濾器過濾除去離子交換劑。在23.4g水中溶解2.21g乙酸西曲瑞利克斯，加入74.6g 96％的乙醇(v/v)。加入20g離子交換劑(Amberlite)。攪拌20分鐘后，用玻璃纖維濾器過濾除去離子交換劑。將過濾后的西曲瑞利克斯堿溶液邊攪拌邊加入不含鈉的CMC溶液，產(chǎn)生混濁的分散體。該分散體攪拌1小時后，在真空下?lián)]發(fā)去掉乙醇。最后將分散體冷凍及冷凍干燥。
實施例5用等滲的林格溶液確定不同組成的肽堿∶CMC酸形成的不含鈉的純CMC-鹽的溶解度。按照實施例1-4的步驟制備西曲瑞利克斯-CMC-鹽。此外，使用無逆流(flow-through)系統(tǒng)對西曲瑞利克斯從這些不含鈉的CMC-鹽體外釋放至林格溶液進(jìn)行168小時監(jiān)測。168小時后西曲瑞利克斯的釋放量用該體外監(jiān)測方法所用的西曲瑞利克斯劑量百分?jǐn)?shù)來表示。
根據(jù)本發(fā)明的不含鈉的CMC-鹽的這些體外數(shù)據(jù)與根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)(WO/98/25642)將同樣質(zhì)量比的肽與CMC用Na-CMC生產(chǎn)的西曲瑞利克斯復(fù)合體進(jìn)行比較。
肽CMC-鹽中去掉鈉及乙酸根離子導(dǎo)致這類制劑的體外行為(即溶解度和體外釋放特性)明顯改善。
根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)的Na-CMC復(fù)合體在林格溶液中的溶解度很低，并且不能通過改變肽與Na-CMC的組分比而修飾。因此不能改善這類制劑中肽化合物的釋放動力學(xué)。
相反，根據(jù)本發(fā)明制備的肽化合物的不含鈉CMC-鹽中，鹽組分的質(zhì)量比與它們的體外行為具有明確的依賴關(guān)系。在制劑中，增加不含鈉CMC酸的百分比導(dǎo)致肽化合物在林格溶液中的溶解度明顯增加。這樣，可改善及控制從這些不含鈉CMC-鹽制劑中釋放的肽化合物的釋放動力學(xué)。因此，根據(jù)特定臨床應(yīng)用所希望的釋放動力學(xué)，可制備具有適當(dāng)釋放模式的CMC-鹽制劑。
結(jié)果如

圖1所示。
西曲瑞利克斯-CMC-鹽的絕對生物利用度在78％-111％的范圍內(nèi)，西曲瑞利克斯-Na-CMC復(fù)合體的生物利用度只有32％，這表明鈉離子對依現(xiàn)有技術(shù)制備的制劑的特性存在負(fù)面影響。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其包含藥學(xué)活性離子肽化合物與反離子載體大分子的水不溶性鹽。
2.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中藥學(xué)活性肽化合物為陽離子型，載體大分子為陰離子型。
3.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中藥學(xué)活性肽化合物為陰離子型，載體大分子為陽離子型。
4.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中水不溶性鹽的形成至少部分可額外通過藥學(xué)活性肽化合物與載體大分子間的氫鍵而介導(dǎo)。
5.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中水不溶性鹽的形成至少部分可額外通過藥學(xué)活性肽化合物與載體大分子間的疏水相互作用而介導(dǎo)。
6.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中藥物組合物施與受試者后，單劑水不溶性鹽對受試者可持續(xù)釋放至少一周的藥學(xué)活性肽。
7.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中在藥物組合物施與受試者后，單劑水不溶性鹽對受試者可持續(xù)釋放至少兩周的藥學(xué)活性肽。
8.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中藥物組合物施與受試者后，單劑水不溶性鹽對受試者可持續(xù)釋放至少三周的藥學(xué)活性肽。
9.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中藥物組合物施與受試者后，單劑水不溶性鹽對受試者可持續(xù)釋放至少四周的藥學(xué)活性肽。
10.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中藥學(xué)活性肽化合物是單價、二價或多價陽離子肽或陰離子肽。
11.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中肽化合物是單價、二價或多價兩性肽。
12.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中肽長度為5至100個氨基酸。
13.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中肽長度為5至20個氨基酸。
14.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中肽長度為8至12個氨基酸。
15.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中載體大分子是陰離子聚合物。
16.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中載體大分子是兩性聚合物。
17.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中載體大分子是陰離子多元醇、其衍生物或其片段。
18.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中載體大分子是陰離子多糖、其衍生物或其片段、或其藥學(xué)可接受的鹽。
19.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中載體大分子是羧甲基纖維素。
20.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中載體大分子分別選自藻膠、藻酸、藻酸鈉、陰離子乙酸酯聚合物類、離子型丙烯酸或異丁烯酸聚合物類及共聚物類、果膠、西黃蓍膠、黃原膠、陰離子carageenan衍生物、陰離子聚半乳糖醛酸衍生物、硫酸化及磺化聚苯乙烯、淀粉乙醇酸鈉、其片段或其衍生物。
21.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中離子型載體大分子選自白蛋白、A型明膠、B型明膠、其片段或其衍生物。
22.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中離子型載體為象多聚L-賴氨酸的陽離子大分子及其它堿性氨基酸聚合物。
23.權(quán)利要求1的藥物組合物，其是干固體。
24.權(quán)利要求1的藥物組合物，其是液體懸液或半固體分散體。
25.一種包含水不溶性鹽的藥物組合物，其中水不溶性鹽基本是由藥學(xué)活性肽化合物及載體大分子組成。
26.權(quán)利要求25的藥物組合物，其包含LHRH類似物與載體大分子的水不溶性鹽。
27.權(quán)利要求26的藥物組合物，其包含LHRH拮抗物與載體大分子的水不溶性鹽。
28.權(quán)利要求25的藥物組合物，其中肽-CMC-鹽之肽∶CMC的質(zhì)量比范圍為1∶0.006至1∶40，優(yōu)選地范圍為1∶0.04至1∶14，更優(yōu)選地范圍為1∶0.1至1∶5，尤其是1∶0.1至1∶3的范圍。
29.權(quán)利要求26的藥物組合物，其中肽-CMC-鹽之肽∶CMC的質(zhì)量比范圍為1∶0.006至1∶40，優(yōu)選地范圍為1∶0.04至1∶14，更優(yōu)選地范圍為1∶0.1至1∶5，尤其是1∶0.1至1∶3的范圍。
30.權(quán)利要求27的藥物組合物，其中肽-CMC-鹽之肽∶CMC的質(zhì)量比范圍為1∶0.006至1∶40，優(yōu)選地范圍為1∶0.04至1∶14，更優(yōu)選地范圍為1∶0.1至1∶5，尤其是在1∶0.1至1∶3的范圍內(nèi)。
31.權(quán)利要求27的藥物組合物，其中LHRH拮抗物是西曲瑞利克斯。
32.權(quán)利要求30的藥物組合物，其中肽是西曲瑞利克斯。
33.權(quán)利要求30的藥物組合物，其中肽鹽是西曲瑞利克斯∶CMC的質(zhì)量比為1∶0.1的西曲瑞利克斯-CMC-鹽。
34.權(quán)利要求30的藥物組合物，其中肽鹽是西曲瑞利克斯∶CMC的質(zhì)量比為1∶0.213的西曲瑞利克斯-CMC-鹽。
35.權(quán)利要求30的藥物組合物，其中肽鹽是西曲瑞利克斯∶CMC的質(zhì)量比為1∶0.5的西曲瑞利克斯-CMC-鹽。
36.權(quán)利要求30的藥物組合物，其中肽鹽是西曲瑞利克斯∶CMC的質(zhì)量比為1∶2.13的西曲瑞利克斯-CMC-鹽。
37.一種制備包含肽化合物及載體大分子的藥物制劑的方法；通過去掉反離子形成兩種化合物的自由離子；在一定條件下結(jié)合離子型肽化合物及離子型載體大分子，使得形成肽化合物與載體大分子的水不溶性鹽；以及制備包含水不溶性鹽的藥物制劑。
38.權(quán)利要求37的方法，其中在結(jié)合以形成肽化合物與載體大分子的水不溶性鹽之前，離子型肽化合物溶液和載體大分子溶液是新鮮制備的。
39.權(quán)利要求37的方法，其中離子型肽化合物溶液與載體大分子溶液結(jié)合以形成肽化合物及載體大分子的水不溶性鹽。
40.權(quán)利要求37的方法，進(jìn)一步包括用γ照射或電子束照射滅菌水不溶性鹽。
41.權(quán)利要求37的方法，其中用無菌步驟形成水不溶性鹽。
42.權(quán)利要求37的方法，其中肽化合物是陽離子型的且載體大分子是陰離子型的。
43.權(quán)利要求37的方法，其中肽化合物是陰離子型的且載體大分子是陽離子型的。
44.權(quán)利要求37的方法，其中肽化合物是單價、二價或多價陽離子肽或陰離子肽。
45.權(quán)利要求37的方法，其中肽化合物是單價、二價或多價兩性肽。
46.權(quán)利要求37的方法，其中肽化合物是LHRH類似物。
47.權(quán)利要求46的方法，其中LHRH類似物是LHRH拮抗物。
48.權(quán)利要求47的方法，其中LHRH拮抗物是西曲瑞利克斯。
49.權(quán)利要求47的方法，其中LHRH拮抗物是Teverelix。
50.權(quán)利要求47的方法，其中LHRH拮抗物是Abarelix。
51.權(quán)利要求47的方法，其中LHRH拮抗物是GanirelixRS-26306。
52.權(quán)利要求47的方法，其中LHRH拮抗物是Azaline B。
53.權(quán)利要求47的方法，其中LHRH拮抗物是Antide ORF-23541。
54.權(quán)利要求47的方法，其中LHRH拮抗物是A-75998。
55.權(quán)利要求47的方法，其中LHRH拮抗物是Detirelix RS-68439。
56.權(quán)利要求47的方法，其中LHRH拮抗物是RamorelixHOE-2013。
57.權(quán)利要求47的方法，其中LHRH拮抗物是Nal-GluORF-21234。
全文摘要
持續(xù)釋放的藥物組合物包含藥學(xué)活性離子肽與反離子載體大分子的水不溶性鹽。肽可以是LHRH拮抗物(如西曲瑞利克斯),大分子可以是陰離子多糖(如羧甲基纖維素)。使用離子交換劑分別將肽及載體大分子去掉反離子,形成游離的肽/大分子離子,從而制備鹽。然后將這些游離的肽及大分子離子結(jié)合形成水不溶性肽－大分子鹽。
文檔編號A61K9/14GK1343129SQ00804817
公開日2002年4月3日 申請日期2000年1月29日 優(yōu)先權(quán)日1999年2月8日
發(fā)明者H·保爾, W·狄格, W·薩利喬迪斯, M·達(dá)姆 申請人:贊塔里斯股份公司