本發(fā)明涉及一種基于微流控紙芯片技術(shù)的茶多酚含量快速檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

多酚類(lèi)物質(zhì)因其潛在的健康促進(jìn)作用近年來(lái)引起研究者的廣泛關(guān)注，其總含量是諸多產(chǎn)品(如茶葉、紅酒、可可等)品質(zhì)檢定中的重要參數(shù)之一?；诟Ａ址语@色反應(yīng)的分光光度法是發(fā)展最早的多酚總量檢測(cè)方法，且由于其本身具有儀器設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便、測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)勢(shì)，是目前世界范圍內(nèi)最為廣泛采用的食品中多酚總量測(cè)定方法，也是我國(guó)茶多酚制品與茶葉中多酚總量的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定方法。

但是鑒于方法所涉及的磷鎢鉬酸-多酚氧化還原顯色體系反應(yīng)非常緩慢(文獻(xiàn)報(bào)道一般認(rèn)為反應(yīng)需30-90min達(dá)到較穩(wěn)定狀態(tài))，而常規(guī)分光光度檢測(cè)中對(duì)各待測(cè)樣品需逐個(gè)操作進(jìn)行光度法測(cè)定，為避免平行測(cè)定過(guò)程中各個(gè)反應(yīng)的顯色進(jìn)行程度差異造成測(cè)量誤差，目前的實(shí)際檢測(cè)均需等待顯色反應(yīng)完全結(jié)束后的穩(wěn)定狀態(tài)階段進(jìn)行(以保證待測(cè)溶液吸光度不再隨時(shí)間變化)。因此，目前一般文獻(xiàn)研究及實(shí)際實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中仍推薦顯色反應(yīng)2小時(shí)后進(jìn)行分光光度測(cè)定，整個(gè)測(cè)試過(guò)程耗時(shí)費(fèi)力。而且，福林酚反應(yīng)本身的動(dòng)力學(xué)特性決定了常規(guī)檢測(cè)方法在時(shí)間效率上的提高和進(jìn)步空間非常有限，新型的多酚含量快速檢測(cè)方法亟待開(kāi)發(fā)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明旨在解決現(xiàn)有茶多酚含量檢測(cè)中福林酚-茶多酚顯色反應(yīng)速度慢、試劑用量大、檢測(cè)耗時(shí)長(zhǎng)的問(wèn)題，提供一種新的茶多酚含量快速檢測(cè)方法。該方法具有操作方便、設(shè)備簡(jiǎn)單、試劑用量小、檢測(cè)時(shí)間短等顯著特點(diǎn)。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下：

一種基于微流控紙芯片技術(shù)的茶多酚含量快速檢測(cè)方法，所述方法包括以下步驟：

(1)采用區(qū)域選擇性表面改性技術(shù)在紙基底上制備設(shè)置有對(duì)稱(chēng)性親水通道網(wǎng)絡(luò)的微流控紙芯片，所述微流控紙芯片由疏水區(qū)和對(duì)稱(chēng)性親水通道網(wǎng)絡(luò)組成，所述疏水區(qū)完全包圍所述對(duì)稱(chēng)性親水通道網(wǎng)絡(luò)，所述對(duì)稱(chēng)性親水通道網(wǎng)絡(luò)包括中心區(qū)、環(huán)繞中心區(qū)的多條親水通道，每條親水通道的一端與中心區(qū)連通，遠(yuǎn)離中心區(qū)的一端設(shè)置反應(yīng)檢測(cè)區(qū)，所述多條親水通道長(zhǎng)度和寬度相等，并以中心區(qū)為對(duì)稱(chēng)點(diǎn)形成點(diǎn)對(duì)稱(chēng)；

所述親水通道為4條以上，優(yōu)選8～12條；

(2)在紙芯片的各個(gè)檢測(cè)區(qū)分別滴加0.5μL～3μL(優(yōu)選為1.5μL)的福林酚試劑(Folin-Ciocalteu試劑)，自然晾干后，用于下一步檢測(cè)；所述福林酚試劑為2N的福林酚母液稀釋5～20倍制得(優(yōu)選稀釋7倍)

(3)分別取0.5μL～3.0μL(優(yōu)選為1.0μL)的空白溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測(cè)樣品溶液滴加至步驟(2)的紙芯片的不同檢測(cè)區(qū)中，室溫下放置，揮發(fā)至干，從而分別對(duì)應(yīng)得到空白檢測(cè)區(qū)、標(biāo)準(zhǔn)溶液檢測(cè)區(qū)和待測(cè)樣品檢測(cè)區(qū)；

所述空白溶液為去離子水；所述標(biāo)準(zhǔn)溶液為沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)物的水溶液，濃度范圍為5μg/ml～100μg/ml；

(4)將上述處理好的芯片水平放置，并在其中心區(qū)滴加10～50μL(優(yōu)選30μL)7.5％的Na₂CO₃水溶液，使其在紙纖維毛細(xì)管作用力的作用下通過(guò)親水通道自然流動(dòng)擴(kuò)散至各檢測(cè)區(qū)，進(jìn)行顯色反應(yīng)，顯色1-10min(優(yōu)選顯色時(shí)間為1min～5min)，進(jìn)行茶多酚半定量檢測(cè)或定量檢測(cè)；

所述半定量檢測(cè)為：通過(guò)肉眼觀察并對(duì)比待測(cè)樣品區(qū)與標(biāo)準(zhǔn)溶液檢測(cè)區(qū)的顏色強(qiáng)度差異，判斷待測(cè)樣品溶液茶多酚含量大致范圍，實(shí)現(xiàn)待測(cè)樣品溶液中茶多酚含量的半定量檢測(cè)。

所述定量檢測(cè)為：對(duì)顯色后的芯片進(jìn)行整體圖片采集，通過(guò)圖像處理軟件分析獲得各檢測(cè)區(qū)的顏色強(qiáng)度數(shù)據(jù)；將標(biāo)準(zhǔn)溶液檢測(cè)區(qū)和待測(cè)樣品檢測(cè)區(qū)的顏色強(qiáng)度分別扣除空白檢測(cè)區(qū)的顏色強(qiáng)度，依次得到各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的顏色強(qiáng)度和待測(cè)樣品溶液的顏色強(qiáng)度；

以標(biāo)準(zhǔn)溶液中沒(méi)食子酸濃度為橫坐標(biāo)、相應(yīng)檢測(cè)區(qū)顏色強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，繪制工作曲線(xiàn)并擬和得到標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程；由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程和待測(cè)樣品的顏色強(qiáng)度數(shù)據(jù)，計(jì)算得到待測(cè)樣品溶液中的多酚總量。

所述步驟(1)中，優(yōu)選所述紙基底為定性分析濾紙；

所述采用區(qū)域選擇性表面改性技術(shù)在紙基底上制備設(shè)置有對(duì)稱(chēng)性親水通道網(wǎng)絡(luò)的微流控紙芯片，所述區(qū)域選擇性表面改性技術(shù)可以為蠟印技術(shù)、化學(xué)試劑改性結(jié)合真空等離子體處理技術(shù)、改性結(jié)合紫外光降解技術(shù)、化學(xué)試劑改性結(jié)合電暈處理技術(shù)等，這些都是制備具有親疏水圖案的微流控紙芯片的公知技術(shù)。

所述反應(yīng)檢測(cè)區(qū)優(yōu)選為圓形，所述中心區(qū)優(yōu)選為圓形。

囿于本發(fā)明所涉反應(yīng)體系的特殊性，所述對(duì)稱(chēng)性親水通道網(wǎng)絡(luò)應(yīng)有較嚴(yán)格的限制：為減小測(cè)量誤差，同時(shí)保證顯色液快速充滿(mǎn)反應(yīng)檢測(cè)區(qū)，各反應(yīng)檢測(cè)區(qū)直徑限定在4mm～7mm之間，以5mm為佳；為確保親水通道能快速、同時(shí)將顯色液運(yùn)輸?shù)礁黠@色區(qū)，親水通道應(yīng)盡量縮短、寬度適當(dāng)增大，且各通道間參數(shù)嚴(yán)格一致。在8通道芯片中，通道長(zhǎng)度應(yīng)不大于5mm，優(yōu)選3mm寬度不小于0.5mm，優(yōu)選1mm芯片功能區(qū)整體直徑約為2.5cm。中心區(qū)的直徑為4mm。

備注說(shuō)明：由于芯片通道結(jié)構(gòu)具有對(duì)稱(chēng)性，所以顯色試劑從中心區(qū)處到達(dá)各樣品檢測(cè)區(qū)的距離或所需時(shí)間一致，從而可以保證檢測(cè)中所有反應(yīng)進(jìn)程一致。對(duì)于8通道芯片，在同一個(gè)芯片上共有8個(gè)檢測(cè)區(qū)，使用時(shí)，其中一個(gè)檢測(cè)區(qū)用于空白樣品對(duì)照；四個(gè)檢測(cè)區(qū)用于不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品的檢測(cè)，用于半定量檢測(cè)中作為顏色強(qiáng)度判定標(biāo)準(zhǔn)或在定量檢測(cè)中以其灰度數(shù)據(jù)繪制工作曲線(xiàn)；剩余三個(gè)檢測(cè)區(qū)用于待測(cè)樣品的檢測(cè)，可同時(shí)測(cè)定三個(gè)不同未知樣品或?qū)ν粋€(gè)樣品進(jìn)行三次平行測(cè)定。

作為本發(fā)明茶多酚含量快速檢測(cè)芯片構(gòu)型的進(jìn)一步改進(jìn)：所述親水通道網(wǎng)絡(luò)由中心區(qū)域和均勻地環(huán)繞中心區(qū)域的12條親水通道，以及通道末端的12個(gè)反應(yīng)檢測(cè)區(qū)構(gòu)成，用于同時(shí)進(jìn)行更多數(shù)量的樣品檢測(cè)。

所述親水通道網(wǎng)絡(luò)的結(jié)構(gòu)可以根據(jù)實(shí)際應(yīng)用進(jìn)行進(jìn)一步設(shè)計(jì)、改變。

所述步驟(2)中，所述福林酚紙芯片制得后，應(yīng)盡快進(jìn)行檢測(cè)，最好在2小時(shí)之內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)，不得長(zhǎng)時(shí)間存放。

所述步驟(3)中，待測(cè)樣品溶液為含有茶多酚的待測(cè)樣品。

所述步驟(4)中，定量檢測(cè)時(shí)，所述對(duì)顯色后的芯片進(jìn)行整體圖片采集，優(yōu)選采用掃描儀或者數(shù)碼相機(jī)、智能手機(jī)等拍照，獲得顯色后的芯片圖片；所述通過(guò)圖像處理軟件分析獲得各檢測(cè)區(qū)的顏色強(qiáng)度數(shù)據(jù)，所述圖像處理軟件優(yōu)選為Photoshop、ImageJ等軟件。

本發(fā)明的檢測(cè)原理是：Na₂CO₃水溶液通過(guò)親水通道從中心區(qū)流到各檢測(cè)區(qū)，改變檢測(cè)區(qū)pH值，從而激活福林酚試劑與茶多酚的顯色反應(yīng)，根據(jù)該顯色反應(yīng)所呈現(xiàn)藍(lán)色的深淺可以進(jìn)行茶多酚含量的半定量和定量測(cè)定。本發(fā)明利用芯片構(gòu)型設(shè)計(jì)和芯片陣列反應(yīng)，親水通道的長(zhǎng)度和寬度完全相等，從而使得(1)Na₂CO₃溶液到達(dá)所有檢測(cè)區(qū)的時(shí)間完全一致，從而保證所有檢測(cè)區(qū)中的顯色反應(yīng)同時(shí)開(kāi)始，進(jìn)行平行顯色反應(yīng)；(2)利用掃描、拍照等手段對(duì)所有檢測(cè)區(qū)信號(hào)進(jìn)行同時(shí)掃描，進(jìn)行整體化的數(shù)據(jù)采集，獲得反應(yīng)時(shí)間高度一致的福林酚顯色-檢測(cè)陣列，從而可以在顯色反應(yīng)過(guò)程中的任意時(shí)間點(diǎn)實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確的比色測(cè)定，在任意相同的顯色反應(yīng)時(shí)間點(diǎn)，標(biāo)準(zhǔn)溶液的顏色和待測(cè)樣品的顏色均與濃度呈線(xiàn)性定量關(guān)系，因此不需要等待顯色反應(yīng)完全穩(wěn)定，在反應(yīng)持續(xù)動(dòng)態(tài)進(jìn)行的任意時(shí)間點(diǎn)，即可進(jìn)行定量檢測(cè)分析，解決了顯色反應(yīng)速率進(jìn)度本身對(duì)檢測(cè)過(guò)程的影響，消除檢測(cè)時(shí)間對(duì)定量結(jié)果的影響，大大縮短了檢測(cè)時(shí)間，實(shí)現(xiàn)茶多酚含量的快速檢測(cè)。本發(fā)明方法一般在顯色時(shí)間為1min～5min即可采集圖片獲取顏色強(qiáng)度數(shù)據(jù)，而常規(guī)方法每個(gè)顯色反應(yīng)均需要等待2小時(shí)以上才能檢測(cè)吸光度。

與現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)方法相比較，陣列化方法消除了反應(yīng)動(dòng)態(tài)進(jìn)行階段進(jìn)行檢測(cè)需要準(zhǔn)確把握樣品檢測(cè)“時(shí)機(jī)”的必要性，即使在反應(yīng)持續(xù)動(dòng)態(tài)發(fā)生的顯色初始階段，亦可獲得可靠的定量測(cè)定結(jié)果，使得檢測(cè)可以在任意時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行，大大縮短茶多酚總量測(cè)定所需時(shí)間并簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作，實(shí)現(xiàn)多酚總量的快速測(cè)定。

本發(fā)明具有如下技術(shù)優(yōu)勢(shì)：

1.本方法測(cè)定溶液中多酚含量不受反應(yīng)時(shí)間的影響，操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)快速；

2.測(cè)定過(guò)程不需要特殊設(shè)備，成本低，可隨時(shí)隨地檢測(cè)；

3.本發(fā)明可以實(shí)現(xiàn)茶多酚含量的定量和半定量檢測(cè)，且半定量檢測(cè)不需借助任何檢測(cè)設(shè)備，肉眼即可判定；

4.本發(fā)明推出一種新的檢測(cè)手段和平臺(tái)，采用廉價(jià)易得的紙芯片檢測(cè)手段替換目前文獻(xiàn)中報(bào)道的各種復(fù)雜昂貴的檢測(cè)儀器，使得多酚含量檢測(cè)可以實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)、快速、現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。

綜上所述，本發(fā)明旨在利用紙芯片具有的制備簡(jiǎn)單、易攜帶、試劑/試樣消耗量低、可多元檢測(cè)、操作簡(jiǎn)單、無(wú)需復(fù)雜昂貴的儀器設(shè)備等優(yōu)點(diǎn)，提供一種簡(jiǎn)單、快捷、廉價(jià)、易攜帶的能夠進(jìn)行茶多酚含量快速檢測(cè)的紙芯片方法。該方法能夠快速地半定量或者定量地測(cè)定樣品中茶多酚含量。

本發(fā)明提供一種以微流控紙芯片技術(shù)為基礎(chǔ)的茶多酚快速檢測(cè)方法。本方法將顯色反應(yīng)和光度法檢測(cè)過(guò)程移植到微流控芯片中進(jìn)行，利用微流控紙芯片的對(duì)稱(chēng)性多通道檢測(cè)陣列，進(jìn)行平行顯色反應(yīng)和整體化的數(shù)據(jù)采集，實(shí)現(xiàn)顯色劑從芯片中心流動(dòng)到達(dá)各檢測(cè)點(diǎn)并與待測(cè)組分反應(yīng)這整個(gè)過(guò)程在時(shí)間上的高度一致；再配合拍照或掃描等圖像整體采集手段，從根本上實(shí)現(xiàn)批量、同步的平行反應(yīng)操作，在福林酚-茶多酚反應(yīng)的顯色初始動(dòng)態(tài)階段，即可獲得可靠的定量測(cè)定結(jié)果，大大縮短了檢測(cè)所需時(shí)間；同時(shí)由于采用微流控芯片技術(shù)，試劑用量的大幅度減少，也顯著降低了檢測(cè)成本。

附圖說(shuō)明

圖1具有對(duì)稱(chēng)性通道構(gòu)型的微流控紙芯片結(jié)構(gòu)示意圖。

圖2利用微流控紙芯片技術(shù)快速檢測(cè)茶多酚含量的過(guò)程流程圖。

圖3不同顯色時(shí)間條件下標(biāo)準(zhǔn)溶液顯色信號(hào)響應(yīng)圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明方法做進(jìn)一步說(shuō)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于此。

實(shí)施例1

對(duì)稱(chēng)性通道構(gòu)型的微流控紙芯片結(jié)構(gòu)示意圖如圖1所示，

圖1中，虛線(xiàn)方框代表芯片邊緣；黑色實(shí)線(xiàn)條代表具有疏水性質(zhì)的通道壁，黑色實(shí)線(xiàn)以外和虛線(xiàn)方框之間的部分全部為疏水區(qū)，包圍黑色實(shí)現(xiàn)中間的對(duì)稱(chēng)性親水通道網(wǎng)絡(luò)。圖1中，1～8所在圓形區(qū)域?yàn)榉磻?yīng)檢測(cè)區(qū)；與反應(yīng)各檢測(cè)區(qū)直接相連的條形區(qū)域?yàn)樾酒H水通道；各通道在芯片中央交匯，交匯點(diǎn)即為中心區(qū)，由記號(hào)O指示；各檢測(cè)區(qū)到O點(diǎn)的距離均嚴(yán)格相等。通道的長(zhǎng)度為3mm，寬度為1mm，反應(yīng)檢測(cè)區(qū)的直徑為5mm，8條親水通道環(huán)繞中心區(qū)，以中心區(qū)為對(duì)稱(chēng)點(diǎn)形成點(diǎn)對(duì)稱(chēng)。

圖1為8通道芯片，使用時(shí)，其中一個(gè)檢測(cè)區(qū)用于空白樣品對(duì)照；四個(gè)檢測(cè)區(qū)用于不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品的檢測(cè)，用于半定量檢測(cè)中作為顏色強(qiáng)度判定標(biāo)準(zhǔn)或在定量檢測(cè)中以其灰度數(shù)據(jù)繪制工作曲線(xiàn)；剩余三個(gè)檢測(cè)區(qū)用于待測(cè)樣品的檢測(cè)，可同時(shí)測(cè)定三個(gè)不同未知樣品或?qū)ν粋€(gè)樣品進(jìn)行三次平行測(cè)定.

圖2利用微流控紙芯片技術(shù)快速檢測(cè)茶多酚含量的過(guò)程流程圖。

圖2中，A為具有對(duì)稱(chēng)性親水通道網(wǎng)絡(luò)的微流控紙芯片，對(duì)稱(chēng)性親水通道網(wǎng)絡(luò)由1～8的檢測(cè)區(qū)和O標(biāo)記的中心區(qū)以及連接檢測(cè)區(qū)和中心區(qū)的親水通道組成，由疏水區(qū)包圍形成對(duì)稱(chēng)性親水通道網(wǎng)絡(luò)。

在A的8個(gè)檢測(cè)區(qū)中滴加福林酚試劑，揮干后得到可用于茶多酚樣品檢測(cè)的紙芯片，如B所示。

在B的檢測(cè)區(qū)滴加空白溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測(cè)樣品溶液，揮發(fā)至干，進(jìn)樣后的芯片如C所示；

在C的中心區(qū)滴加Na₂CO₃水溶液，如圖中D所示，碳酸鈉水溶液在紙纖維毛細(xì)管作用力的作用下通過(guò)親水通道自然流動(dòng)擴(kuò)散至各檢測(cè)區(qū)，如圖中E所示，同步進(jìn)行顯色反應(yīng)，如圖中F所示，顯色后的紙芯片圖像如圖中G所示。

茶湯中茶多酚含量(記為X₁)的半定量和定量快速測(cè)定：

1)溶液配制：待測(cè)樣品為某綠茶按1：50的茶、水比沖泡的茶湯(記為X₁)，將原茶湯樣品用去離子水稀釋50倍后作為待測(cè)液；準(zhǔn)備去離子水作為空白溶液；配制濃度為10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml和75μg/ml的沒(méi)食子酸水溶液作為標(biāo)準(zhǔn)溶液；用2N福林酚母液稀釋7倍配制福林酚試劑，配制7.5％Na₂CO₃水溶液。

2)芯片準(zhǔn)備：在米字形通道紙芯片的各個(gè)檢測(cè)區(qū)內(nèi)分別加入1.5μL福林酚試劑，空氣中靜置待水分揮干。

3)進(jìn)樣：在上述帶有福林酚試劑的紙芯片的1號(hào)檢測(cè)區(qū)內(nèi)加入空白溶液、2～5號(hào)檢測(cè)區(qū)內(nèi)各加入標(biāo)準(zhǔn)溶液、6～8號(hào)檢測(cè)區(qū)內(nèi)加入待測(cè)液。所述各檢測(cè)區(qū)內(nèi)加入溶液的體積均為1.0μL。進(jìn)樣后的芯片在空氣中放置待水分揮干。

4)反應(yīng)：在上述進(jìn)樣后的紙芯片的中心區(qū)滴加30μL Na₂CO₃水溶液，在毛細(xì)管力的作用下，溶液分別從八個(gè)通道逐漸流動(dòng)到檢測(cè)區(qū)，激活顯色反應(yīng)。

5)濃度測(cè)定：

①半定量測(cè)定：顯色反應(yīng)約1min后，通過(guò)肉眼觀測(cè)并對(duì)比，判定待測(cè)樣品檢測(cè)區(qū)的顏色強(qiáng)度大于25μg/ml、小于50μg/ml檢測(cè)區(qū)的顏色強(qiáng)度，結(jié)合前述茶湯與待測(cè)液的濃度倍數(shù)關(guān)系，換算得到茶湯樣品的茶多酚含量情況為：1.25mg/ml<X1<2.50mg/ml。

②定量測(cè)定：顯色反應(yīng)約3min后，將芯片置于掃描儀的原稿臺(tái)上掃描，掃描存儲(chǔ)為圖片格式。在Photoshop軟件中打開(kāi)掃描所得圖片，并依次讀取各檢測(cè)區(qū)的灰度數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)如下表1所示：

表1

表中1號(hào)檢測(cè)區(qū)灰度數(shù)據(jù)代表芯片的灰度背景值，各檢測(cè)區(qū)灰度扣除背景值后，為實(shí)際灰度信號(hào)。以2～5號(hào)實(shí)際灰度值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)繪制工作曲線(xiàn)，線(xiàn)性擬合公式為y＝0.4352x+3.7375(R²＝0.9948)。將6～8號(hào)各實(shí)際灰度帶入公式，計(jì)算得相應(yīng)茶多酚濃度依次為29.54，26.31，27.19μg/ml，平均值為27.68μg/ml。檢測(cè)結(jié)果與常規(guī)分光光度法檢測(cè)結(jié)果(29.84μg/ml)具有良好的一致性。

結(jié)合茶湯與檢測(cè)樣品之間的稀釋倍數(shù)，實(shí)際測(cè)得原待測(cè)茶湯中茶多酚濃度X₁＝1.38mg/ml。

實(shí)施例2

為了檢驗(yàn)本發(fā)明檢測(cè)方法的可靠性及其檢測(cè)結(jié)果與顯色反應(yīng)進(jìn)程的無(wú)關(guān)性特點(diǎn)，發(fā)明人在發(fā)明過(guò)程中還對(duì)顯色反應(yīng)時(shí)間等條件進(jìn)行了考察，具體實(shí)驗(yàn)如下：

條件篩選實(shí)驗(yàn)1：分別配置濃度為0μg/ml，10μg/ml，25μg/ml，50μg/ml，75μg/ml，100μg/ml，150μg/ml，200μg/m的沒(méi)食子酸水溶液，在同一片8通道芯片中，進(jìn)行上述水溶液的在不同顯色反應(yīng)時(shí)間條件下的信號(hào)掃描測(cè)定，分別在顯色反應(yīng)開(kāi)始后的1min，2min，3min，5min，8min，10min，12min，15min，18min，20min，25min，30min，60min，90min測(cè)定灰度值并繪制工作曲線(xiàn)?？鄢瞻讬z測(cè)區(qū)灰度值后的實(shí)際灰度信號(hào)結(jié)果如圖3所示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：1)顯色反應(yīng)1min后，檢測(cè)信號(hào)已顯示出良好的線(xiàn)性，可用于進(jìn)行定量測(cè)定；2)由于空白檢測(cè)區(qū)顏色在空氣中會(huì)緩慢加深，同一檢測(cè)區(qū)的信號(hào)值隨著反應(yīng)時(shí)間的增加有逐步減小的趨勢(shì)，但檢測(cè)信號(hào)在顯色反應(yīng)開(kāi)始的10min內(nèi)信號(hào)基本穩(wěn)定，且該時(shí)間段內(nèi)任意時(shí)間所測(cè)數(shù)據(jù)在10～200μg/ml范圍內(nèi)均顯示出良好的線(xiàn)性，均適宜于定量檢測(cè)應(yīng)用；但是隨著時(shí)間的進(jìn)一步增加，尤其是顯色進(jìn)行20min后，各檢測(cè)區(qū)的灰度信號(hào)值(特別是高濃度樣品的信號(hào)值)有較為明顯的降低，這直接導(dǎo)致了方法檢測(cè)靈敏度的降低及線(xiàn)性范圍的縮小，故為非最佳檢測(cè)條件。以75μg/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液作為待測(cè)溶液模擬定量檢測(cè)，在1min，3min，5min時(shí)所測(cè)得的濃度值分別為77.59μg/ml，80.59μg/ml和83.45μg/ml檢測(cè)誤差分別占真實(shí)濃度的3.5％，7.5％，和11.3％。

綜合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果并結(jié)合實(shí)際檢測(cè)需求，顯色反應(yīng)開(kāi)始后的1～10min可實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確定量測(cè)定，顯色反應(yīng)開(kāi)始后1～5min為檢測(cè)的最佳時(shí)間窗口。

實(shí)施例3

本發(fā)明所建立的方法不僅可用于測(cè)定茶多酚的水溶液，對(duì)于含有機(jī)溶劑的茶多酚溶液同樣可以實(shí)現(xiàn)快速測(cè)定。為檢驗(yàn)這一點(diǎn)，發(fā)明人按照中國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的茶葉中茶多酚提取方法(GB/T 8313-2008)制備茶多酚的甲醇提取液，該溶液稀釋50倍后，在稀釋液中加入20μg/ml濃度的沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)物，進(jìn)行回收率測(cè)定實(shí)驗(yàn)。

按照實(shí)施例1方法操作，顯色3min進(jìn)行檢測(cè)，使用3片不同芯片測(cè)得的沒(méi)食子酸加入量分別為21.6μg/ml，16.2μg/ml和19.4μg/ml，對(duì)應(yīng)的檢測(cè)回收率數(shù)值分別為108％，81％和92％，顯示出該方法具有良好的可靠性。

需要指出的是，以上列舉的僅是本發(fā)明的具體實(shí)施例。顯然，本發(fā)明不限于以上實(shí)施例，還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開(kāi)的內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。